本发明涉及中药材有效成分提取技术领域，尤其涉及一种从藤五加茎皮中分离出茋类有效成分的方法。
背景技术：
藤五加（acanthopanaxleucorrhizus）属五加属多年生落叶小灌木，是我国特有的民间药用植物，主要分布于陕西、甘肃、云贵、长江中下游等地。其药用部位主要为根皮和茎皮，具有祛风湿、通经络、强艋骨等功效，主治风湿痹痛、拘挛麻木、腰膝酸软、半身不遂、跌打损伤、水肿、皮肤温痒、阴囊湿肿等症。藤五加茎皮的主要药效成分为茋类、黄酮、苯丙素、萜类、木脂素、香豆素、多糖等类成分。研究发现，从藤五加茎皮中分离出的部分茋类成分对smmc-7721（人肝癌细胞）、hl-60（人早幼粒白血病细胞）和mcf-7（人乳腺癌细胞）等具有不同程度的选择性抑制作用，极少数茋类成分经过结构修饰后可作为有开发前景的抗肿瘤药物的先导物。但由于大多数茋类化合物在自然界中含量低、难以分离和结构鉴定，限制了对其系统研究和开发。
目前，对于茋类成分的分离方法主要是传统的溶剂辅助各种色谱法（如硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、制备薄层色谱、ods、sephadexlh-20柱色谱及hplc等方法），但都不同程度地存在着工艺复杂、周期长、溶剂消耗量大、提取率低、纯度不高等缺点。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是提供一种快捷、高效的从藤五加茎皮中分离出茋类有效成分的方法。
为解决上述问题，本发明所述的一种从藤五加茎皮中分离出茋类有效成分的方法，包括以下步骤：
⑴将新鲜的藤五加茎皮晾干、粉碎、过40~60目筛后，经微波提取、减压浓缩，得到粗提物；
⑵将所述粗取物依次用其质量3~4倍体积的石油醚、乙酸乙酯分别萃取3~4次，直至萃取液变为无色后，将乙酸乙酯萃取液合并，经减压蒸干得待分离样品；
⑶将所述待分离样品用混合溶剂按1000mg:50ml的比例超声溶解后得到样品溶液；
⑷经tlc筛选、分析型hsccc优选，将正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水按照5:4:7:5的体积比加入到分液漏斗中，充分振荡均匀后静置过夜，待两相体系平衡后，上相为固定相，下相为流动相，即得制备型hsccc两相溶剂体系；
⑸将所述固定相和所述流动相分别超声脱气15min后，依次泵入到制备型逆流色谱仪的多层螺旋管中，再注入所述样品溶液进行纯化分离；
⑹按色谱图依次收集到7个色谱峰组分，将7个组分分别经减压浓缩、真空干燥后，得到7种茋类化合物；所述7种茋类化合物分别为4-羟基-11,12,13-三甲氧基二苯并[b,f]噁庚英、异丹叶大黄素、3,4′,5-三甲氧基-(e)-二苯乙烯、2′,3,4′,5-四羟基-(e)-二苯乙烯、3′-异戊烯基-(e)-白藜芦醇、3,4′,5-三羟基-2′-甲氧基-(e)-二苯乙烯和2-(3′-羟基-5′-甲氧基苯)-4-羟基苯并呋喃。
所述步骤⑴中微波提取的条件是指提取溶剂为体积浓度为75%~95%乙醇、液固比为10~20ml/g、搅拌转速为600~700rpm、提取温度为55~65℃、微波功率为650~750w、提取时间为15~20min、提取次数为2~3次。
所述步骤⑴中的减压浓缩条件是指压力为0.05~0.06mpa，温度为40~50℃，转速为100~150rpm。
所述步骤⑵中的减压蒸干条件是指压力为0.04~0.05mpa，温度为30~40℃，转速为80~100rpm。
所述步骤⑶中的混合溶剂是指将正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水按照5:4:7:5的体积配比加入到分液漏斗中，充分振荡均匀后静置过夜，待两相体系平衡后，分成两相，然后将上相溶剂和下相溶剂等体积混合而得。
所述步骤⑶中的超声溶解条件是指超声频率为40khz，温度为40℃，超声时间为5min。
所述步骤⑸中的纯化分离条件是指温度为25℃、螺旋管转速为800~900rpm、检测波长为325nm，注样流速为1.5~2.0ml/min，一次进样量为160mg。
所述步骤⑹中的减压浓缩条件是指压力为0.03~0.05mpa，温度为30~50℃，转速为80~150rpm。
所述步骤⑹中的真空干燥条件是指压力为0.05~0.06mpa，温度为30~50℃，干燥时间2~10h。
本发明与现有技术相比具有以下优点：
1、本发明与传统的溶剂提取技术相比：在微波作用下，茋类成分能被选择性地加热，并从植物基体中渗出，从而可快速高效地实现茋类成分与基体的分离，有效地提高了提取率和纯度。
2、本发明与传统的色谱分离技术相比：采用hsccc纯化法，同一溶剂体系可重复使用，分离量大，重现性好；同时不需要固体载体，避免了因不可逆吸附而引起的被分离物质损失、失活、变性、拖尾等问题，提高了有效成分的回收率，非常适合于中草药有效成分对照品的制备。
3、本发明实现了藤五加茎皮中茋类成分的提取分离、纯化制备一体化，mae粗提液浓缩后可直接进入hsccc分离纯化，大大减少了中间操作环节，降低了劳动强度和有效成分的损失，缩短了分离时间，提高了分离效率。
4、本发明集微波提取和高效逆流色谱纯化制备一体化，操作简单易行、提取量大、重现性好，所得7种茋类化合物的纯度均高于98.0%。
具体实施方式
实施例1一种从藤五加茎皮中分离出茋类有效成分的方法，包括以下步骤：
⑴将300g新鲜的藤五加茎皮晾干、粉碎、过40目筛后，得到藤五加茎皮粉，该藤五加茎皮粉中按液固比为10ml/g加入体积浓度为75%乙醇，放入搅拌子磁子，置于微波提取仪中，在搅拌转速为600rpm、提取温度为60℃、微波功率为700w、提取时间为15min、提取次数为2次的条件下进行经微波提取，得到提取液；提取液于压力为0.05mpa、温度为40℃、转速为100rpm进行减压浓缩，得到粗提物。
⑵将粗取物依次用其质量3倍体积的石油醚、乙酸乙酯分别萃取3次，直至萃取液变为无色后，将乙酸乙酯萃取液合并，于压力为0.04mpa、温度为30℃、转速为80rpm的条件下经减压蒸干得待分离样品4.20g，得率为藤五加干燥茎皮质量的1.40%。
⑶将待分离样品用混合溶剂按1000mg:50ml的比例在超声频率为40khz、温度为40℃的条件下超声溶解，5min后得到20mg/ml的样品溶液。
其中：混合溶剂是指将正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水按照5:4:7:5的体积配比加入到分液漏斗中，充分振荡均匀后静置过夜，待两相体系平衡后，分成两相，然后将上相溶剂和下相溶剂等体积混合而得。
⑷经tlc筛选、分析型hsccc优选，将正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水按照5:4:7:5的体积比加入到分液漏斗中，充分振荡均匀后静置过夜，待两相体系平衡后，上相为固定相，下相为流动相，即得制备型hsccc两相溶剂体系。
⑸将固定相和流动相分别超声脱气15min后，依次泵入到制备型逆流色谱仪的多层螺旋管中，再注入样品溶液进行纯化分离。
具体过程：将固定相以6.0ml/min的流速泵入到制备型逆流色谱仪的多层螺旋管中，当螺旋柱完全充满后，开启恒温循环装置使温度保持在25℃，启动检测器和hsccc主机，缓缓正向旋转（fwd）调节螺旋管转速为900rpm，再以2.0ml/min的流速泵入流动相至螺旋管尾端有流动相流出为止。当系统达到动力学平衡后（基线稳定后），再以2.0ml/min的流速将样品溶液通过进样阀注入螺旋管中进行分离。检测波长为325nm，一次进样量为160mg。
⑹样品溶液注入分离螺旋管约45min后，色谱峰开始出现，并按色谱图依次收集到7个色谱峰组分，耗时3.0h。将7个组分在压力为0.03mpa、温度为30℃、转速为80rpm的条件下经减压浓缩得到浓缩物，该浓缩物在压力为0.05mpa、温度为30℃的条件下经真空干燥10h后，得到6种固体粉末和1种黄色油状物共7种茋类化合物。
经nmr、ms、ir和uv解析，确证7种茋类化合物分别为4-羟基-11,12,13-三甲氧基二苯并[b,f]噁庚英（4-hydroxy-11,12,13-trimethoxyldibenz[b,f]oxepin）、异丹叶大黄素（isorhapontigenin）、3,4′,5-三甲氧基-(e)-二苯乙烯（3,4′,5-trimethoxy-(e)-stilbene）、2′,3,4′,5-四羟基-(e)-二苯乙烯（2′,3,4′,5-tetrahydroxy-(e)-stilbene）、3′-异戊烯基-(e)-白藜芦醇（3′-isopentenyl-(e)-resveratrol）、3,4′,5-三羟基-2′-甲氧基-(e)-二苯乙烯（3,4′,5-trihydroxy-2′-methoxy-(e)-stilbene）和2-(3′-羟基-5′-甲氧基苯)-4-羟基苯并呋喃（2-(3′-hydroxy-5′-methoxyphenyl)-4-hydroxybenzofuran），并依次命名为zcⅰ、zcⅱ、zcⅲ、zcⅳ、zcⅴ、zcⅵ和zcⅶ。
经过对hsccc分离柱4次连续进样，累计进样量640mg，总耗时15.5h。
通过hplc分析纯度：7个组分的质量和纯度依次为zcⅰ（9.23mg，98.6%）、zcⅱ（23.01mg，99.2%）、zcⅲ（13.62mg，99.5%）、zcⅳ（6.18mg，99.3%）、zcⅴ（7.14mg，98.1%）、zcⅵ（14.25mg，99.4%）和zcⅶ（8.61mg，98.7%），纯度均在98.0%以上。
实施例2一种从藤五加茎皮中分离出茋类有效成分的方法，包括以下步骤：
⑴将500g新鲜的藤五加茎皮晾干、粉碎、过50目筛后，得到藤五加茎皮粉，该藤五加茎皮粉中按液固比为15ml/g加入体积浓度为80%乙醇，放入搅拌子磁子，置于微波提取仪中，在搅拌转速为650rpm、提取温度为60℃、微波功率为650w、提取时间为20min、提取次数为3次的条件下进行经微波提取，得到提取液；提取液于压力为0.06mpa、温度为50℃、转速为150rpm进行减压浓缩，得到粗提物。
⑵将粗取物依次用其质量4倍体积的石油醚、乙酸乙酯分别萃取3次，直至萃取液变为无色后，将乙酸乙酯萃取液合并，于压力为0.05mpa、温度为40℃、转速为100rpm的条件下经减压蒸干得待分离样品7.10g，得率为藤五加干燥茎皮质量的1.42%。
⑶将待分离样品用混合溶剂按1000mg:50ml的比例在超声频率为40khz、温度为40℃的条件下超声溶解，5min后得到样品溶液。
其中：混合溶剂同实施例1。
⑷制备型hsccc两相溶剂体系同实施例1。
⑸将固定相和流动相分别超声脱气15min后，依次泵入到制备型逆流色谱仪的多层螺旋管中，再注入样品溶液进行纯化分离。
具体过程：将固定相以6.0ml/min的流速泵入到制备型逆流色谱仪的多层螺旋管中，当螺旋柱完全充满后，开启恒温循环装置使温度保持在25℃，启动检测器和hsccc主机，缓缓正向旋转（fwd）调节螺旋管转速为900rpm，再以2.0ml/min的流速泵入流动相至螺旋管尾端有流动相流出为止。当系统达到动力学平衡后（基线稳定后），再以1.5ml/min的流速将样品溶液通过进样阀注入螺旋管中进行分离。检测波长为325nm，一次进样量为160mg。
⑹样品溶液注入分离螺旋管约45min后，色谱峰开始出现，并按色谱图依次收集到7个色谱峰组分，耗时3.5h。将7个组分在压力为0.05mpa、温度为50℃、转速为150rpm的条件下经减压浓缩得到浓缩物，该浓缩物在压力为0.06mpa、温度为50℃的条件下经真空干燥2h后，得到6种固体粉末和1种黄色油状物共计7种茋类化合物。
经过对hsccc分离柱4次连续进样，累计进样量640mg，总耗时17.5h。
通过hplc分析纯度：7个组分的质量和纯度依次为zcⅰ（9.47mg，98.3%）、zcⅱ（23.46mg，98.6%）、zcⅲ（13.10mg，99.3%）、zcⅳ（6.25mg，99.6%）、zcⅴ（7.31mg，98.5%）、zcⅵ（13.43mg，98.7%）和zcⅶ（9.45mg，98.1%），纯度均在98.0%以上。
实施例3一种从藤五加茎皮中分离出茋类有效成分的方法，包括以下步骤：
⑴将400g新鲜的藤五加茎皮晾干、粉碎、过60目筛后，得到藤五加茎皮粉，该藤五加茎皮粉中按液固比为20ml/g加入体积浓度为95%乙醇，放入搅拌子磁子，置于微波提取仪中，在搅拌转速为700rpm、提取温度为65℃、微波功率为750w、提取时间为20min、提取次数为3次的条件下进行经微波提取，得到提取液；提取液于压力为0.055mpa、温度为45℃、转速为125rpm进行减压浓缩，得到粗提物。
⑵将粗取物依次用其质量3倍体积的石油醚、乙酸乙酯分别萃取4次，直至萃取液变为无色后，将乙酸乙酯萃取液合并，于压力为0.045mpa、温度为35℃、转速为90rpm的条件下经减压蒸干得待分离样品5.50g，得率为藤五加干燥茎皮质量的1.38%。
⑶将待分离样品用混合溶剂按1000mg:50ml的比例在超声频率为40khz、温度为40℃的条件下超声溶解，5min后得到样品溶液。
其中：混合溶剂同实施例1。
⑷制备型hsccc两相溶剂体系同实施例1。
⑸将固定相和流动相分别超声脱气15min后，依次泵入到制备型逆流色谱仪的多层螺旋管中，再注入样品溶液进行纯化分离。
具体过程：将固定相以6.0ml/min的流速泵入到制备型逆流色谱仪的多层螺旋管中，当螺旋柱完全充满后，开启恒温循环装置使温度保持在25℃，启动检测器和hsccc主机，缓缓正向旋转（fwd）调节螺旋管转速为800rpm，再以2.0ml/min的流速泵入流动相至螺旋管尾端有流动相流出为止。当系统达到动力学平衡后（基线稳定后），再以2.0ml/min的流速将样品溶液通过进样阀注入螺旋管中进行分离。检测波长为325nm，一次进样量为160mg。
⑹样品溶液注入分离螺旋管约45min后，色谱峰开始出现，并按色谱图依次收集到7个色谱峰组分，耗时3.2h。将7个组分在压力为0.04mpa、温度为40℃、转速为100rpm的条件下经减压浓缩得到浓缩物，该浓缩物在压力为0.055mpa、温度为40℃的条件下经真空干燥6h后，得到6种固体粉末和1种黄色油状物共计7种茋类化合物。
经过对hsccc分离柱4次连续进样，累计进样量640mg，总耗时16.0h。
通过hplc分析纯度：7个组分的质量和纯度依次为zcⅰ（9.21mg，99.1%）、zcⅱ（22.65mg，98.4%）、zcⅲ（14.02mg，98.6%）、zcⅳ（6.36mg，98.9%）、zcⅴ（7.05mg，98.5%）、zcⅵ（14.32mg，98.6%）和zcⅶ（8.51mg，99.2%），纯度均在98.0%以上。
实施例4一种从藤五加茎皮中分离出茋类有效成分的方法，包括以下步骤：
⑴将350g新鲜的藤五加茎皮晾干、粉碎、过40目筛后，得到藤五加茎皮粉，该藤五加茎皮粉中按液固比为10ml/g加入体积浓度为90%乙醇，放入搅拌子磁子，置于微波提取仪中，在搅拌转速为650rpm、提取温度为55℃、微波功率为750w、提取时间为15min、提取次数为2次的条件下进行经微波提取，得到提取液；提取液于压力为0.05mpa、温度为40℃、转速为100rpm进行减压浓缩，得到粗提物。
⑵将粗取物依次用其质量4倍体积的石油醚、乙酸乙酯分别萃取4次，直至萃取液变为无色后，将乙酸乙酯萃取液合并，于压力为0.04mpa、温度为30℃、转速为85rpm的条件下经减压蒸干得待分离样品4.69g，得率为藤五加干燥茎皮质量的1.34%。
⑶将待分离样品用混合溶剂按1000mg:50ml的比例在超声频率为40khz、温度为40℃的条件下超声溶解，5min后得到样品溶液。
其中：混合溶剂同实施例1。
⑷制备型hsccc两相溶剂体系同实施例1。
⑸将固定相和流动相分别超声脱气15min后，依次泵入到制备型逆流色谱仪的多层螺旋管中，再注入样品溶液进行纯化分离。
具体过程：将固定相以6.0ml/min的流速泵入到制备型逆流色谱仪的多层螺旋管中，当螺旋柱完全充满后，开启恒温循环装置使温度保持在25℃，启动检测器和hsccc主机，缓缓正向旋转（fwd）调节螺旋管转速为850rpm，再以2.0ml/min的流速泵入流动相至螺旋管尾端有流动相流出为止。当系统达到动力学平衡后（基线稳定后），再以1.8ml/min的流速将样品溶液通过进样阀注入螺旋管中进行分离。检测波长为325nm，一次进样量为160mg。
⑹样品溶液注入分离螺旋管约45min后，色谱峰开始出现，并按色谱图依次收集到7个色谱峰组分，耗时3.6h。将7个组分在压力为0.03mpa、温度为30℃、转速为90rpm的条件下经减压浓缩得到浓缩物，该浓缩物在压力为0.05mpa、温度为30℃的条件下经真空干燥10h后，得到6种固体粉末和1种黄色油状物共计7种茋类化合物。
经过对hsccc分离柱4次连续进样，累计进样量640mg，总耗时17.2h。
通过hplc分析纯度：7个组分的质量和纯度依次为zcⅰ（9.18mg，98.6%）、zcⅱ（22.37mg，98.9%）、zcⅲ（13.96mg，98.5%）、zcⅳ（6.14mg，99.2%）、zcⅴ（7.08mg，98.3%）、zcⅵ（14.22mg，98.7%）和zcⅶ（8.24mg，99.1%），纯度均在98.0%以上。
实施例5一种从藤五加茎皮中分离出茋类有效成分的方法，包括以下步骤：
⑴将300g新鲜的藤五加茎皮晾干、粉碎、过40目筛后，得到藤五加茎皮粉，该藤五加茎皮粉中按液固比为15ml/g加入体积浓度为80%乙醇，放入搅拌子磁子，置于微波提取仪中，在搅拌转速为700rpm、提取温度为65℃、微波功率为650w、提取时间为15min、提取次数为3次的条件下进行经微波提取，得到提取液；提取液于压力为0.06mpa、温度为50℃、转速为150rpm进行减压浓缩，得到粗提物。
⑵将粗取物依次用其质量3倍体积的石油醚、乙酸乙酯分别萃取4次，直至萃取液变为无色后，将乙酸乙酯萃取液合并，于压力为0.05mpa、温度为40℃、转速为100rpm的条件下经减压蒸干得待分离样品4.23g，得率为藤五加干燥茎皮质量的1.41%。
⑶将待分离样品用混合溶剂按1000mg:50ml的比例在超声频率为40khz、温度为40℃的条件下超声溶解，5min后得到样品溶液。
其中：混合溶剂同实施例1。
⑷制备型hsccc两相溶剂体系同实施例1。
⑸将固定相和流动相分别超声脱气15min后，依次泵入到制备型逆流色谱仪的多层螺旋管中，再注入样品溶液进行纯化分离。
具体过程：将固定相以6.0ml/min的流速泵入到制备型逆流色谱仪的多层螺旋管中，当螺旋柱完全充满后，开启恒温循环装置使温度保持在25℃，启动检测器和hsccc主机，缓缓正向旋转（fwd）调节螺旋管转速为900rpm，再以2.0ml/min的流速泵入流动相至螺旋管尾端有流动相流出为止。当系统达到动力学平衡后（基线稳定后），再以1.5ml/min的流速将样品溶液通过进样阀注入螺旋管中进行分离。检测波长为325nm，一次进样量为160mg。
⑹样品溶液注入分离螺旋管约45min后，色谱峰开始出现，并按色谱图依次收集到7个色谱峰组分，耗时3.5h。将7个组分在压力为0.05mpa、温度为50℃、转速为95rpm的条件下经减压浓缩得到浓缩物，该浓缩物在压力为0.06mpa、温度为50℃的条件下经真空干燥2h后，得到6种固体粉末和1种黄色油状物共计7种茋类化合物。
经过对hsccc分离柱4次连续进样，累计进样量640mg，总耗时17.0h。
通过hplc分析纯度：7个组分的质量和纯度依次为zcⅰ（9.15mg，98.5%）、zcⅱ（22.41mg，99.2%）、zcⅲ（13.84mg，98.4%）、zcⅳ（6.09mg，99.0%）、zcⅴ（7.12mg，98.5%）、zcⅵ（14.51mg，98.8%）和zcⅶ（8.13mg，99.4%），纯度均在98.0%以上。
实施例6一种从藤五加茎皮中分离出茋类有效成分的方法，包括以下步骤：
⑴将400g新鲜的藤五加茎皮晾干、粉碎、过50目筛后，得到藤五加茎皮粉，该藤五加茎皮粉中按液固比为20ml/g加入体积浓度为80%乙醇，放入搅拌子磁子，置于微波提取仪中，在搅拌转速为700rpm、提取温度为60℃、微波功率为650w、提取时间为20min、提取次数为3次的条件下进行经微波提取，得到提取液；提取液于压力为0.055mpa、温度为45℃、转速为130rpm进行减压浓缩，得到粗提物。
⑵将粗取物依次用其质量3倍体积的石油醚、乙酸乙酯分别萃取3次，直至萃取液变为无色后，将乙酸乙酯萃取液合并，于压力为0.045mpa、温度为35℃、转速为90rpm的条件下经减压蒸干得待分离样品5.54g，得率为藤五加干燥茎皮质量的1.39%。
⑶将待分离样品用混合溶剂按1000mg:50ml的比例在超声频率为40khz、温度为40℃的条件下超声溶解，5min后得到样品溶液。
其中：混合溶剂同实施例1。
⑷制备型hsccc两相溶剂体系同实施例1。
⑸将固定相和流动相分别超声脱气15min后，依次泵入到制备型逆流色谱仪的多层螺旋管中，再注入样品溶液进行纯化分离。
具体过程：将固定相以6.0ml/min的流速泵入到制备型逆流色谱仪的多层螺旋管中，当螺旋柱完全充满后，开启恒温循环装置使温度保持在25℃，启动检测器和hsccc主机，缓缓正向旋转（fwd）调节螺旋管转速为900rpm，再以2.0ml/min的流速泵入流动相至螺旋管尾端有流动相流出为止。当系统达到动力学平衡后（基线稳定后），再以2.0ml/min的流速将样品溶液通过进样阀注入螺旋管中进行分离。检测波长为325nm，一次进样量为160mg。
⑹样品溶液注入分离螺旋管约45min后，色谱峰开始出现，并按色谱图依次收集到7个色谱峰组分，耗时3.1h。将7个组分在压力为0.04mpa、温度为40℃、转速为100rpm的条件下经减压浓缩得到浓缩物，该浓缩物在压力为0.055mpa、温度为40℃的条件下经真空干燥6h后，得到6种固体粉末和1种黄色油状物共计7种茋类化合物。
经过对hsccc分离柱4次连续进样，累计进样量640mg，总耗时15.0h。
通过hplc分析纯度：7个组分的质量和纯度依次为zcⅰ（9.32mg，98.3%）、zcⅱ（22.45mg，99.0%）、zcⅲ（13.67mg，98.2%）、zcⅳ（6.05mg，98.9%）、zcⅴ（7.24mg，98.7%）、zcⅵ（14.38mg，98.7%）和zcⅶ（8.24mg，99.2%），纯度均在98.0%以上。
实施例7一种从藤五加茎皮中分离出茋类有效成分的方法，包括以下步骤：
⑴将500g新鲜的藤五加茎皮晾干、粉碎、过60目筛后，得到藤五加茎皮粉，该藤五加茎皮粉中按液固比为20ml/g加入体积浓度为95%乙醇，放入搅拌子磁子，置于微波提取仪中，在搅拌转速为700rpm、提取温度为55℃、微波功率为650w、提取时间为15min、提取次数为3次的条件下进行经微波提取，得到提取液；提取液于压力为0.05mpa、温度为40℃、转速为100rpm进行减压浓缩，得到粗提物。
⑵将粗取物依次用其质量4倍体积的石油醚、乙酸乙酯分别萃取4次，直至萃取液变为无色后，将乙酸乙酯萃取液合并，于压力为0.04mpa、温度为30℃、转速为80rpm的条件下经减压蒸干得待分离样品7.14g，得率为藤五加干燥茎皮质量的1.43%。
⑶将待分离样品用混合溶剂按1000mg:50ml的比例在超声频率为40khz、温度为40℃的条件下超声溶解，5min后得到样品溶液。
其中：混合溶剂同实施例1。
⑷制备型hsccc两相溶剂体系同实施例1。
⑸将固定相和流动相分别超声脱气15min后，依次泵入到制备型逆流色谱仪的多层螺旋管中，再注入样品溶液进行纯化分离。
具体过程：将固定相以6.0ml/min的流速泵入到制备型逆流色谱仪的多层螺旋管中，当螺旋柱完全充满后，开启恒温循环装置使温度保持在25℃，启动检测器和hsccc主机，缓缓正向旋转（fwd）调节螺旋管转速为900rpm，再以2.0ml/min的流速泵入流动相至螺旋管尾端有流动相流出为止。当系统达到动力学平衡后（基线稳定后），再以2.0ml/min的流速将样品溶液通过进样阀注入螺旋管中进行分离。检测波长为325nm，一次进样量为160mg。
⑹样品溶液注入分离螺旋管约45min后，色谱峰开始出现，并按色谱图依次收集到7个色谱峰组分，耗时3.2h。将7个组分在压力为0.03mpa、温度为30℃、转速为80rpm的条件下经减压浓缩得到浓缩物，该浓缩物在压力为0.05mpa、温度为30℃的条件下经真空干燥10h后，得到6种固体粉末和1种黄色油状物共计7种茋类化合物。
经过对hsccc分离柱4次连续进样，累计进样量640mg，总耗时15.5h。
通过hplc分析纯度：7个组分的质量和纯度依次为zcⅰ（9.45mg，98.5%）、zcⅱ（22.48mg，98.6%）、zcⅲ（13.71mg，98.1%）、zcⅳ（6.01mg，99.1%）、zcⅴ（7.23mg，98.5%）、zcⅵ（14.24mg，99.0%）和zcⅶ（8.17mg，99.3%），纯度均在98.0%以上。
实施例8一种从藤五加茎皮中分离出茋类有效成分的方法，包括以下步骤：
⑴将300g新鲜的藤五加茎皮晾干、粉碎、过60目筛后，得到藤五加茎皮粉，该藤五加茎皮粉中按液固比为20ml/g加入体积浓度为75%乙醇，在搅拌转速为700rpm、提取温度为60℃、微波功率为700w、提取时间为18min、提取次数为23次的条件下进行经微波提取，得到提取液；提取液于压力为0.06mpa、温度为50℃、转速为150rpm进行减压浓缩，得到粗提物。
⑵将粗取物依次用其质量3.5倍体积的石油醚、乙酸乙酯分别萃取4次，直至萃取液变为无色后，将乙酸乙酯萃取液合并，于压力为0.05mpa、温度为40℃、转速为100rpm的条件下经减压蒸干得待分离样品4.35g，得率为藤五加干燥茎皮质量的1.45%。
⑶将待分离样品用混合溶剂按1000mg:50ml的比例在超声频率为40khz、温度为40℃的条件下超声溶解，5min后得到样品溶液。
其中：混合溶剂同实施例1。
⑷制备型hsccc两相溶剂体系同实施例1。
⑸将固定相和流动相分别超声脱气15min后，依次泵入到制备型逆流色谱仪的多层螺旋管中，再注入样品溶液进行纯化分离。
具体过程：将固定相以6.0ml/min的流速泵入到制备型逆流色谱仪的多层螺旋管中，当螺旋柱完全充满后，开启恒温循环装置使温度保持在25℃，启动检测器和hsccc主机，缓缓正向旋转（fwd）调节螺旋管转速为900rpm，再以2.0ml/min的流速泵入流动相至螺旋管尾端有流动相流出为止。当系统达到动力学平衡后（基线稳定后），再以2.0ml/min的流速将样品溶液通过进样阀注入螺旋管中进行分离。检测波长为325nm，一次进样量为160mg。
⑹样品溶液注入分离螺旋管约45min后，色谱峰开始出现，并按色谱图依次收集到7个色谱峰组分，耗时3.0h。将7个组分在压力为0.05mpa、温度为50℃、转速为150rpm的条件下经减压浓缩得到浓缩物，该浓缩物在压力为0.06mpa、温度为50℃的条件下经真空干燥2h后，得到6种固体粉末和1种黄色油状物共计7种茋类化合物。
经过对hsccc分离柱4次连续进样，累计进样量640mg，总耗时15.2h。
通过hplc分析纯度：7个组分的质量和纯度依次为zcⅰ（9.44mg，98.6%）、zcⅱ（22.45mg，98.7%）、zcⅲ（13.68mg，98.3%）、zcⅳ（6.11mg，99.0%）、zcⅴ（7.18mg，98.6%）、zcⅵ（14.27mg，98.9%）和zcⅶ（8.22mg，99.8%），纯度均在98.0%以上。