本发明涉及细胞检测技术领域，尤其涉及一种检测细胞分泌功能的方法。
背景技术：
细胞分泌具体为动物细胞和植物细胞将在粗面内质网上合成而又非内质网组成部分的蛋白和脂通过小泡运输的方式经过高尔基体的进一步加工和分选运送到细胞内相应结构、细胞质膜以及细胞外的过程称为细胞的分泌。现有技术中的检测细胞分泌的方法，在检测过程中，极易引起细胞改变，从而使得检测准确度降低。为此，我们提出了一种检测细胞分泌功能的方法。
技术实现要素：
本发明提出了一种检测细胞分泌功能的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
本发明提出了一种检测细胞分泌功能的方法，包括如下步骤：
s1：选择待测细胞，将待测细胞置于无菌放置室内，且需向无菌放置室内添加第一细胞培养液，在待测细胞处于对数分裂期时，弃掉第一细胞培养液；
s2：将待测细胞取出，用缓冲液对待测细胞冲洗三次，然后加入第二细胞培养液，再次对细胞进行培养，且培养时间为48-54h，分别依次取不同培养时间的细胞培养液350-450μl与600-800μl无水乙醇混合于离心管中，然后进行离心处理，且离心时间为6-9min，弃上清液，得到沉淀于离心管底部的细胞分泌蛋白，然后对细胞分泌蛋白进行干燥后，且干燥后使用丙酮对细胞分泌蛋白进行固定5-8min，得到细胞分泌蛋白液；
s3：将s2中得到的细胞分泌蛋白液再次置于细胞培养板上，并向细胞培养板上置入第一细胞培养液，且第一细胞培养液需漫过细胞分泌蛋白液，然后将其进行均匀混合，混合完成后，再次向其中添加特异性引物组，并在30-36摄氏度的条件下对细胞分泌蛋白液进行培养；
s4：每隔2h对细胞培养板上的第一细胞培养液进行收取，且至少提取五组数据，并测量每组第一细胞培养液中细胞分泌物的含量，形成数据，然后对多组数据进行整合、处理以及对比，并记录在案，即完成细胞分泌功能的检测。
优选的，在s2中的缓冲液具体为无水枸橼酸、磷酸氢二钠以及蒸馏水的混合液，且无水枸橼酸、磷酸氢二钠以及蒸馏水的摩尔质量比为1：1：10。
优选的，在s4中对细胞分泌物的处理具体为：利用细胞检测试剂盒进行细胞分泌物含量的测试。
优选的，所述细胞检测试剂盒内含有探针，且探针如下：
探针1：3’acactctttctctacacgaggctcttcggatat5’，
探针2：3’agactctgtctctacacgaggctctatcgagat5’，
探针3：3’agatacgaagagcggtccagcaggaatggcgag5’。
优选的，在s3中的特异性引物组具体为：
引物序列p1：aggtacgtaccgactgatc,
引物序列p2：atgtatgcactgacatata，
引物序列p3：acgtctatctcgagtacag，
引物序列p4：aatgatatgccgacgatcga。
优选的，所述第一细胞培养液具体为细胞因子lif、细胞因子bfgf、血小板生成素以及白介素-3的混合物，且细胞因子lif、细胞因子bfgf、血小板生成素以及白介素-3的摩尔质量比为3：3：1：0.2。
优选的，所述第二细胞培养液具体为骨形成蛋白-4、成血管生长因子、碱性成纤维生长因子以及b27添加剂的混合物，且骨形成蛋白-4、成血管生长因子、碱性成纤维生长因子以及b27添加剂的摩尔质量比为2：1：1：0.1。
本发明提出的一种检测细胞分泌功能的方法，有益效果在于：该检测细胞分泌功能的方法在对细胞分泌功能进行检测时，通过对待测细胞的处理，能够保证细胞在检测中，不发生改变，能够提高检测的准确度，且排除了细胞数量对检测结果的干扰，结果更客观，符合现在发现的需求。
具体实施方式
下面结合具体实施例来对本发明做进一步说明。
实施例1
本发明提出了一种检测细胞分泌功能的方法，包括如下步骤：
s1：选择待测细胞，将待测细胞置于无菌放置室内，且需向无菌放置室内添加第一细胞培养液，在待测细胞处于对数分裂期时，弃掉第一细胞培养液；
s2：将待测细胞取出，用缓冲液对待测细胞冲洗三次，然后加入第二细胞培养液，再次对细胞进行培养，且培养时间为48h，分别依次取不同培养时间的细胞培养液350μl与600μl无水乙醇混合于离心管中，然后进行离心处理，且离心时间为6min，弃上清液，得到沉淀于离心管底部的细胞分泌蛋白，然后对细胞分泌蛋白进行干燥后，且干燥后使用丙酮对细胞分泌蛋白进行固定5min，得到细胞分泌蛋白液；
s3：将s2中得到的细胞分泌蛋白液再次置于细胞培养板上，并向细胞培养板上置入第一细胞培养液，且第一细胞培养液需漫过细胞分泌蛋白液，然后将其进行均匀混合，混合完成后，再次向其中添加特异性引物组，并在30摄氏度的条件下对细胞分泌蛋白液进行培养；
s4：每隔2h对细胞培养板上的第一细胞培养液进行收取，且至少提取五组数据，并测量每组第一细胞培养液中细胞分泌物的含量，形成数据，然后对多组数据进行整合、处理以及对比，并记录在案，即完成细胞分泌功能的检测。
在s2中的缓冲液具体为无水枸橼酸、磷酸氢二钠以及蒸馏水的混合液，且无水枸橼酸、磷酸氢二钠以及蒸馏水的摩尔质量比为1：1：10。
在s4中对细胞分泌物的处理具体为：利用细胞检测试剂盒进行细胞分泌物含量的测试。
所述细胞检测试剂盒内含有探针，且探针如下：
探针1：3’acactctttctctacacgaggctcttcggatat5’，
探针2：3’agactctgtctctacacgaggctctatcgagat5’，
探针3：3’agatacgaagagcggtccagcaggaatggcgag5’。
在s3中的特异性引物组具体为：
引物序列p1：aggtacgtaccgactgatc,
引物序列p2：atgtatgcactgacatata，
引物序列p3：acgtctatctcgagtacag，
引物序列p4：aatgatatgccgacgatcga。
所述第一细胞培养液具体为细胞因子lif、细胞因子bfgf、血小板生成素以及白介素-3的混合物，且细胞因子lif、细胞因子bfgf、血小板生成素以及白介素-3的摩尔质量比为3：3：1：0.2。
所述第二细胞培养液具体为骨形成蛋白-4、成血管生长因子、碱性成纤维生长因子以及b27添加剂的混合物，且骨形成蛋白-4、成血管生长因子、碱性成纤维生长因子以及b27添加剂的摩尔质量比为2：1：1：0.1。
实施例2
本发明提出了一种检测细胞分泌功能的方法，包括如下步骤：
s1：选择待测细胞，将待测细胞置于无菌放置室内，且需向无菌放置室内添加第一细胞培养液，在待测细胞处于对数分裂期时，弃掉第一细胞培养液；
s2：将待测细胞取出，用缓冲液对待测细胞冲洗三次，然后加入第二细胞培养液，再次对细胞进行培养，且培养时间为50h，分别依次取不同培养时间的细胞培养液380μl与650μl无水乙醇混合于离心管中，然后进行离心处理，且离心时间为7min，弃上清液，得到沉淀于离心管底部的细胞分泌蛋白，然后对细胞分泌蛋白进行干燥后，且干燥后使用丙酮对细胞分泌蛋白进行固定6min，得到细胞分泌蛋白液；
s3：将s2中得到的细胞分泌蛋白液再次置于细胞培养板上，并向细胞培养板上置入第一细胞培养液，且第一细胞培养液需漫过细胞分泌蛋白液，然后将其进行均匀混合，混合完成后，再次向其中添加特异性引物组，并在32摄氏度的条件下对细胞分泌蛋白液进行培养；
s4：每隔2h对细胞培养板上的第一细胞培养液进行收取，且至少提取五组数据，并测量每组第一细胞培养液中细胞分泌物的含量，形成数据，然后对多组数据进行整合、处理以及对比，并记录在案，即完成细胞分泌功能的检测。
在s2中的缓冲液具体为无水枸橼酸、磷酸氢二钠以及蒸馏水的混合液，且无水枸橼酸、磷酸氢二钠以及蒸馏水的摩尔质量比为1：1：10。
在s4中对细胞分泌物的处理具体为：利用细胞检测试剂盒进行细胞分泌物含量的测试。
所述细胞检测试剂盒内含有探针，且探针如下：
探针1：3’acactctttctctacacgaggctcttcggatat5’，
探针2：3’agactctgtctctacacgaggctctatcgagat5’，
探针3：3’agatacgaagagcggtccagcaggaatggcgag5’。
在s3中的特异性引物组具体为：
引物序列p1：aggtacgtaccgactgatc,
引物序列p2：atgtatgcactgacatata，
引物序列p3：acgtctatctcgagtacag，
引物序列p4：aatgatatgccgacgatcga。
所述第一细胞培养液具体为细胞因子lif、细胞因子bfgf、血小板生成素以及白介素-3的混合物，且细胞因子lif、细胞因子bfgf、血小板生成素以及白介素-3的摩尔质量比为3：3：1：0.2。
所述第二细胞培养液具体为骨形成蛋白-4、成血管生长因子、碱性成纤维生长因子以及b27添加剂的混合物，且骨形成蛋白-4、成血管生长因子、碱性成纤维生长因子以及b27添加剂的摩尔质量比为2：1：1：0.1。
实施例3
本发明提出了一种检测细胞分泌功能的方法，包括如下步骤：
s1：选择待测细胞，将待测细胞置于无菌放置室内，且需向无菌放置室内添加第一细胞培养液，在待测细胞处于对数分裂期时，弃掉第一细胞培养液；
s2：将待测细胞取出，用缓冲液对待测细胞冲洗三次，然后加入第二细胞培养液，再次对细胞进行培养，且培养时间为52h，分别依次取不同培养时间的细胞培养液420μl与750μl无水乙醇混合于离心管中，然后进行离心处理，且离心时间为8min，弃上清液，得到沉淀于离心管底部的细胞分泌蛋白，然后对细胞分泌蛋白进行干燥后，且干燥后使用丙酮对细胞分泌蛋白进行固定7min，得到细胞分泌蛋白液；
s3：将s2中得到的细胞分泌蛋白液再次置于细胞培养板上，并向细胞培养板上置入第一细胞培养液，且第一细胞培养液需漫过细胞分泌蛋白液，然后将其进行均匀混合，混合完成后，再次向其中添加特异性引物组，并在34摄氏度的条件下对细胞分泌蛋白液进行培养；
s4：每隔2h对细胞培养板上的第一细胞培养液进行收取，且至少提取五组数据，并测量每组第一细胞培养液中细胞分泌物的含量，形成数据，然后对多组数据进行整合、处理以及对比，并记录在案，即完成细胞分泌功能的检测。
在s2中的缓冲液具体为无水枸橼酸、磷酸氢二钠以及蒸馏水的混合液，且无水枸橼酸、磷酸氢二钠以及蒸馏水的摩尔质量比为1：1：10。
在s4中对细胞分泌物的处理具体为：利用细胞检测试剂盒进行细胞分泌物含量的测试。
所述细胞检测试剂盒内含有探针，且探针如下：
探针1：3’acactctttctctacacgaggctcttcggatat5’，
探针2：3’agactctgtctctacacgaggctctatcgagat5’，
探针3：3’agatacgaagagcggtccagcaggaatggcgag5’。
在s3中的特异性引物组具体为：
引物序列p1：aggtacgtaccgactgatc,
引物序列p2：atgtatgcactgacatata，
引物序列p3：acgtctatctcgagtacag，
引物序列p4：aatgatatgccgacgatcga。
所述第一细胞培养液具体为细胞因子lif、细胞因子bfgf、血小板生成素以及白介素-3的混合物，且细胞因子lif、细胞因子bfgf、血小板生成素以及白介素-3的摩尔质量比为3：3：1：0.2。
所述第二细胞培养液具体为骨形成蛋白-4、成血管生长因子、碱性成纤维生长因子以及b27添加剂的混合物，且骨形成蛋白-4、成血管生长因子、碱性成纤维生长因子以及b27添加剂的摩尔质量比为2：1：1：0.1。
实施例4
本发明提出了一种检测细胞分泌功能的方法，包括如下步骤：
s1：选择待测细胞，将待测细胞置于无菌放置室内，且需向无菌放置室内添加第一细胞培养液，在待测细胞处于对数分裂期时，弃掉第一细胞培养液；
s2：将待测细胞取出，用缓冲液对待测细胞冲洗三次，然后加入第二细胞培养液，再次对细胞进行培养，且培养时间为54h，分别依次取不同培养时间的细胞培养液450μl与800μl无水乙醇混合于离心管中，然后进行离心处理，且离心时间为9min，弃上清液，得到沉淀于离心管底部的细胞分泌蛋白，然后对细胞分泌蛋白进行干燥后，且干燥后使用丙酮对细胞分泌蛋白进行固定8min，得到细胞分泌蛋白液；
s3：将s2中得到的细胞分泌蛋白液再次置于细胞培养板上，并向细胞培养板上置入第一细胞培养液，且第一细胞培养液需漫过细胞分泌蛋白液，然后将其进行均匀混合，混合完成后，再次向其中添加特异性引物组，并在36摄氏度的条件下对细胞分泌蛋白液进行培养；
s4：每隔2h对细胞培养板上的第一细胞培养液进行收取，且至少提取五组数据，并测量每组第一细胞培养液中细胞分泌物的含量，形成数据，然后对多组数据进行整合、处理以及对比，并记录在案，即完成细胞分泌功能的检测。
在s2中的缓冲液具体为无水枸橼酸、磷酸氢二钠以及蒸馏水的混合液，且无水枸橼酸、磷酸氢二钠以及蒸馏水的摩尔质量比为1：1：10。
在s4中对细胞分泌物的处理具体为：利用细胞检测试剂盒进行细胞分泌物含量的测试。
所述细胞检测试剂盒内含有探针，且探针如下：
探针1：3’acactctttctctacacgaggctcttcggatat5’，
探针2：3’agactctgtctctacacgaggctctatcgagat5’，
探针3：3’agatacgaagagcggtccagcaggaatggcgag5’。
在s3中的特异性引物组具体为：
引物序列p1：aggtacgtaccgactgatc,
引物序列p2：atgtatgcactgacatata，
引物序列p3：acgtctatctcgagtacag，
引物序列p4：aatgatatgccgacgatcga。
所述第一细胞培养液具体为细胞因子lif、细胞因子bfgf、血小板生成素以及白介素-3的混合物，且细胞因子lif、细胞因子bfgf、血小板生成素以及白介素-3的摩尔质量比为3：3：1：0.2。
所述第二细胞培养液具体为骨形成蛋白-4、成血管生长因子、碱性成纤维生长因子以及b27添加剂的混合物，且骨形成蛋白-4、成血管生长因子、碱性成纤维生长因子以及b27添加剂的摩尔质量比为2：1：1：0.1。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。