银杏内酯B氮杂环衍生物及其盐的制备及药用用途的制作方法

本发明属医药技术领域，涉及银杏内酯b氮杂环衍生物及其盐及其制备方法和药用用途。本发明以银杏内酯b为母体，经结构修饰，引入含氮杂环结构，制成银杏内酯b氮杂环衍生物，以及银杏内酯b氮杂环衍生物相应的盐，达到改善水溶性，增强疗效的目的。

背景技术：

银杏作为药用植物由来已久，早在公元1000年左右，我国民间就使用银杏叶治疗哮喘与支气管炎。随着药物提取工艺标准化和药理作用活性研究的深入，世界各国，特别是德国、法国等欧洲国家已将银杏提取物(gbe)广泛用于治疗呼吸系统、心脑血管系统等疾病。

银杏内酯b(ginkgolideb,gb)是从银杏叶中提取的一种六环笼状结构的二萜化合物，是迄今发现的最强的血小板活化因子(paf)拮抗剂，研究显示，它直接参与血栓形成，可刺激冠状动脉和脑动脉，引起它们的收缩、痉挛，导致心肌和脑组织缺血。近年研究还发现，银杏内酯b有较强的抗炎作用，在炎症反应中，中性白细胞膜磷脂经活化磷脂酶a2作用，水解成花生四烯酸(aa)。花生四烯酸在5-脂氧酶(5-lo)的作用下进一步代谢为白三烯(lts)和羟基二十碳四烯酸(hetes)等与炎症介质相关的重要产物，同时，磷脂酶a2的活化需要细胞内钙参与，银杏内酯b具有影响大鼠中性白细胞花生四烯酸代谢酶及细胞内游离钙的作用，其抗炎作用可能与其抑制中性白细胞溶酶体酶的释放、超氧阴离子的产生以及细胞内钙水平的升高有关。但实践显示，作为天然产物，银杏内酯b的结构刚性较强，存在水溶性和生物利用度均较差的缺陷，致使其药效的充分发挥受到限制，影响了临床应用效果。

基于现有技术的现状，本申请的发明人通过对银杏内酯b的结构进行化学修饰，在10-位羟基上引入水溶性的含氮杂环基团，获得一类新的银杏内酯b含氮杂环衍生物及其相应的盐类化合物，其能提高药物水溶性，克服银杏内酯b水溶性差的不利因素。

技术实现要素：

本发明的目的是基于现有技术的现状，提供一类银杏内酯b氮杂环衍生物及其盐及其制备方法和药用用途。本发明在银杏内酯b结构中引入氮杂环的衍生物，其结构特征为，式1所示的在银杏内酯b的10位羟基上连接有含氮杂环的衍生物，

其中y为ch或者n，即杂环为三氮唑环或者四氮唑环；连接10位氧原子和氮杂环碳原子之间的l为含0-10个碳原子的各种连接链，包括烃基连接链，或者链中插入氮、氧等原子的连接链；g为h，1-4个碳原子的烃基，氰基，羧基，烷氧酰基，或者氨酰基以及烷基取代的氨酰基。

本发明的进一步目的是提供银杏内酯b氮杂环衍生物与各种有机碱或者无机碱形成的盐，即式1所示化合物中氮杂环上的-nh-，可与各种无机碱或者有机碱制备成盐；无机碱盐可选自各类钠，钾，钙和镁盐，但不局限于这些盐；有机碱盐选自各类胺盐以及碱性氨基酸盐，但不局限于这些盐；

本发明的再一个目的是同时提供式1所示化合物的制备方法，其可以通过式2所示方法制备获得：

式2中，i是指在合适的溶剂中，碱性催化条件下，各类含有炔基(y为ch)，或者氰基(y为n)的卤代烃，与银杏内酯b通过醚键缩合，获得式2中所示的中间体；

其中，卤代烃包括氯代、溴代和碘代烃，l为含0-10个碳原子的各种连接链，包括烃基连接链，或者链中插入氮、氧等原子的连接链；

y为ch或者n原子；

g为h，1-4个碳原子的烃基，氰基，羧基，烷氧酰基，或者氨酰基以及烷基取代的氨酰基；

溶剂选自二氯甲烷，氯仿，thf，丙酮，乙腈，dmf等；

碱性催化剂选自碳酸氢钠，碳酸钠，碳酸钾，碳酸铯等无机碱，以及三乙胺，吡咯烷，哌嗪等有机碱；

反应温度控制在25-110度之间；

ii是指式2中所示中间体，在适当的溶剂中，有催化剂或者无催化剂条件下，与叠氮化合物发生1,3-偶极环加成反应，生成含氮杂环，获得式1化合物，即含有氮杂环的银杏内酯b衍生物；

其中，催化剂选自氯化锌，氯化铁，氯化铝，氯化锡等，且不限于以上试剂；

溶剂选自水，甲醇，乙醇，正丁醇，乙二醇，或者乙二醇单甲醚等，且不限于以上溶剂。

本发明提供了式1所示化合物及其盐的药用用途，经实验证实，式1化合物及其盐具有显著的血小板活化因子(paf)拮抗作用，可用于制备预防及治疗缺血性中风、心绞痛、心肺梗塞、脑血栓形成、以及炎症、哮喘等与血小板活化因子相关的疾病的预防及临床治疗的药物，能达到改善水溶性，增强疗效的目的。

附图说明

图1显示了实施例1，实施例8-16不同浓度(102,103和104nm)对血小板聚集的抑制活性。

图2显示了化合物实施例15的1h-nmr谱(400mhz,dmso-d6)。

图3显示了化合物实施例15的质谱esi-ms(m/e):505(m-na+)。

具体实施方式

实施例1、10-o-(氰基甲基)银杏内酯b

银杏内酯b424mg(1.0mmol)溶于30ml氯仿中，依次加入溴代乙腈240mg(2.0mmol)，ki332mg(2.0mmol)，三乙胺1ml，加热回流2小时后，结束反应。后处理，母液浓缩，残留物柱层析，分得淡黄色固体240mg，收率52％。¹h-nmr(dmso-d6,400mhz):1.03(s,9h,t-bu),1.11(d,j＝8hz,3h,14-me),1.70(dd,1h,8-h),1.81(ddd,1h,7α-h),2.12(dd,1h,7β-h),2.81(q,j＝8hz,1h,14-h),4.02(m,1h,1-h),4.57(d,1h,2-h),4.82(d,1h,j＝16hz,10-ch2-),4.91(d,1h,j＝16hz,10-ch2-),5.28(s,1h,10-h),5.31(d,1h,1-oh),5.77(d,1h,6-h),6.15(s,1h,12-h),6.43(s,1h,3-oh).lcms(m/z):464(m+h⁺)。

实施例2、10-o-(1-氰基乙基)银杏内酯b

银杏内酯b424mg(1.0mmol)溶于30ml氯仿中，依次加入1-溴代丙腈266mg(2.0mmol)，ki332mg(2.0mmol)，三乙胺1ml，加热回流至结束反应。后处理，母液浓缩，残留物柱层析，分得黄色固体340mg，收率71％。¹h-nmr(dmso-d6,400mhz):1.05(s,9h,t-bu),1.13(d,j＝8hz,3h,14-me),1.72(dd,1h,8-h),1.81(ddd,1h,7α-h),1.91(d,3h,j＝5hz,10-chch3),2.10(dd,1h,7β-h),2.82(q,j＝8hz,1h,14-h),4.04(m,1h,1-h),4.58(d,1h,2-h),4.83(q,1h,j＝5hz,10-ch-),5.29(s,1h,10-h),5.30(d,1h,1-oh),5.77(d,1h,6-h),6.15(s,1h,12-h),6.43(s,1h,3-oh).lc-ms(m/z):478(m+h⁺)。

实施例3、10-o-(3-氰基烯丙基)银杏内酯b

银杏内酯b424mg(1.0mmol)溶于30ml氯仿中，依次加入4-溴代-2-丁烯腈290mg(2.0mmol)，ki332mg(2.0mmol)，三乙胺1ml，加热回流至结束反应。后处理，母液浓缩，残留物柱层析，分得淡黄色固体368mg，收率75％。¹h-nmr(dmso-d6,400mhz):1.04(s,9h,t-bu),1.11(d,j＝8hz,3h,14-me),1.70(dd,1h,8-h),1.81(ddd,1h,7α-h),2.12(dd,1h,7β-h),2.81(q,j＝8hz,1h,14-h),4.02(m,1h,1-h),4.57(d,1h,2-h),4.78(m,2h,10-ch2-),5.28(s,1h,10-h),5.31(d,1h,1-oh),5.51(d,j＝16hz,1h,10-ch＝),5.77(d,1h,6-h),6.15(s,1h,12-h),6.43(s,1h,3-oh),6.64(d,j＝16hz,1h,10-ch＝).lc-ms(m/z):490(m+h⁺)。

实施例4、10-o-(氰基甲氧基乙基)银杏内酯b

银杏内酯b424mg(1.0mmol)溶于30ml氯仿中，依次加入2-溴乙氧基乙腈326mg(2.0mmol)，ki332mg(2.0mmol)，三乙胺1ml，加热回流至结束反应。后处理，母液浓缩，残留物柱层析，分得淡黄色固体238mg，收率47％。¹h-nmr(dmso-d6,400mhz):1.06(s,9h,t-bu),1.10(d,j＝8hz,3h,14-me),1.70(dd,1h,8-h),1.81(ddd,1h,7α-h),2.12(dd,1h,7β-h),2.81(q,j＝8hz,1h,14-h),3.55(m,4h,-ch2ch2-),4.02(m,1h,1-h),4.57(d,1h,2-h),4.84(d,1h,j＝16hz,10-ch2-),4.90(d,1h,j＝16hz,10-ch2-),5.28(s,1h,10-h),5.31(d,1h,1-oh),5.77(d,1h,6-h),6.15(s,1h,12-h),6.43(s,1h,3-oh).lc-ms(m/z):508(m+h⁺)。

实施例5、10-o-(炔丙基)银杏内酯b

银杏内酯b424mg(1.0mmol)溶于30ml氯仿中，依次加入氯代丙炔222mg(3.0mmol)，ki332mg(2.0mmol)，三乙胺1ml，加热回流至反应结束。后处理，母液浓缩，残留物柱层析，分得淡黄色固体210mg，收率45％。¹h-nmr(dmso-d6,400mhz):1.04(s,9h,t-bu),1.12(d,j＝8hz,3h,14-me),1.70(dd,1h,8-h),1.81(ddd,1h,7α-h),2.12(dd,1h,7β-h),2.81(q,j＝8hz,1h,14-h),3.28(s,1h,≡ch),3.91(m,2h,10-ch2-),4.02(m,1h,1-h),4.57(d,1h,2-h),,5.28(s,1h,10-h),5.31(d,1h,1-oh),5.77(d,1h,6-h),6.15(s,1h,12-h),6.43(s,1h,3-oh).lc-ms(m/z):463(m+h⁺)。

实施例6、10-o-(4-炔-2-烯戊基)银杏内酯b

银杏内酯b424mg(1.0mmol)溶于30ml氯仿中，依次加入氯代乙腈戊-3-烯-1-炔300mg(3.0mmol)，ki332mg(2.0mmol)，三乙胺1ml，加热回流至结束反应。后处理，母液浓缩，残留物柱层析，分得黄色固体188mg，收率38％。¹h-nmr(dmso-d6,400mhz):1.02(s,9h,t-bu),1.10(d,j＝8hz,3h,14-me),1.70(dd,1h,8-h),1.81(ddd,1h,7α-h),2.12(dd,1h,7β-h),2.81(q,j＝8hz,1h,14-h),3.25(s,1h,≡ch),3.94(m,2h,10-ch2-),4.02(m,1h,1-h),4.57(d,1h,2-h),5.28(s,1h,10-h),5.31(d,1h,1-oh),5.64(m,1h,10-ch＝),5.77(d,1h,6-h),6.15(s,1h,12-h),6.19(d,j＝15hz,10-ch＝),6.43(s,1h,3-oh).lcms(m/z):489(m+h⁺)。

实施例7、10-o-(炔丙氧基乙基)银杏内酯b

银杏内酯b424mg(1.0mmol)溶于30ml氯仿中，依次加入溴乙氧基丙炔324mg(2.0mmol)，ki332mg(2.0mmol)，三乙胺1ml，加热回流至结束反应。后处理，母液浓缩，残留物柱层析，分得黄色固体212mg，收率42％。¹h-nmr(dmso-d6,400mhz):1.03(s,9h,t-bu),1.11(d,j＝8hz,3h,14-me),1.70(dd,1h,8-h),1.81(ddd,1h,7α-h),2.12(dd,1h,7β-h),2.81(q,j＝8hz,1h,14-h),3.28(s,1h,≡ch),3.54(m,4h,10-ch2ch2-),3.91(m,2h,10-ch2-),4.02(m,1h,1-h),4.57(d,1h,2-h),,5.28(s,1h,10-h),5.31(d,1h,1-oh),5.77(d,1h,6-h),6.15(s,1h,12-h),6.43(s,1h,3-oh).lcms(m/z):507(m+h⁺)。

实施例8、10-o-[5-(1h-四氮唑)甲基]银杏内酯b

取实施例1化合物50mg(0.11mmol)于10ml水中，加入2ml乙二醇溶清，依次加入叠氮化钠10mg(0.15mmol)，氯化锡21mg(0.11mmol)，加热搅拌48小时后，加入2滴浓盐酸，减压蒸除溶剂，残留物水洗，过滤得白色固体46mg，收率82％。¹h-nmr(dmso-d6,400mhz):1.01(s,9h,t-bu),1.12(d,j＝8hz,3h,14-me),1.74(dd,1h,8-h),1.90(ddd,1h,7α-h),2.13(dd,1h,7β-h),2.85(q,j＝8hz,1h,14-h),4.15(d,1h,1-h),4.64(d,1h,2-h),5.14(d,1h,j＝16hz,10-ch2-),5.36(d,1h,1-oh),5.41(s,1h,10-h),5.56(d,1h,j＝16hz,10-ch2-),5.78(d,1h,6-h),6.22(s,1h,12-h),6.48(s,1h,3-oh).lc-ms(m/z):507(m+h⁺)。

实施例9、10-o-{1-[5-(1h-四氮唑)]乙基}银杏内酯b

取实施例2化合物53mg(0.11mmol)于10ml水中，加入2ml乙二醇溶清，依次加入叠氮化钠10mg(0.15mmol)，氯化锡21mg(0.11mmol)，加热搅拌48小时后，加入2滴浓盐酸，减压蒸除溶剂，残留物水洗，过滤得白色固体43mg，收率75％。¹h-nmr(dmso-d6,400mhz):1.02(s,9h,t-bu),1.10(d,j＝8hz,3h,14-me),1.70(dd,1h,8-h),1.81(ddd,1h,7α-h),2.03(d,3h,j＝5hz,10-chch3),2.12(dd,1h,7β-h),2.81(q,j＝8hz,1h,14-h),4.02(m,1h,1-h),4.57(d,1h,2-h),5.28(s,1h,10-h),5.31(d,1h,1-oh),5.58(q,1h,j＝5hz,10-ch-),5.77(d,1h,6-h),6.15(s,1h,12-h),6.43(s,1h,3-oh).lc-ms(m/z):521(m+h⁺)。

实施例10、10-o-{3-[5-(1h-四氮唑)]烯丙基}银杏内酯b

取实施例3化合物54mg(0.11mmol)于10ml水中，加入2ml乙二醇溶清，依次加入叠氮化钠10mg(0.15mmol)，氯化锡21mg(0.11mmol)，加热搅拌48小时后，加入2滴浓盐酸，减压蒸除溶剂，残留物水洗，过滤得白色固体36mg，收率62％。¹h-nmr(dmso-d6,400mhz):1.03(s,9h,t-bu),1.11(d,j＝8hz,3h,14-me),1.70(dd,1h,8-h),1.81(ddd,1h,7α-h),2.12(dd,1h,7β-h),2.81(q,j＝8hz,1h,14-h),4.02(m,1h,1-h),4.57(d,1h,2-h),4.61(m,2h,10-ch2-),5.28(s,1h,10-h),5.31(d,1h,1-oh),5.77(d,1h,6-h),5.91(m,j＝16hz,1h,10-ch＝),6.15(s,1h,12-h),6.43(s,1h,3-oh),6.73(d,j＝16hz,1h,10-ch＝).lc-ms(m/z):533(m+h⁺)。

实施例11、10-o-{2-[5-(1h-四氮唑)甲氧基]乙基}银杏内酯b

取实施例4化合物56mg(0.11mmol)于10ml水中，加入2ml乙二醇溶清，依次加入叠氮化钠10mg(0.15mmol)，氯化锡21mg(0.11mmol)，加热搅拌48小时后，加入2滴浓盐酸，减压蒸除溶剂，残留物水洗，过滤得白色固体40mg，收率66％。¹h-nmr(dmso-d6,400mhz):1.03(s,9h,t-bu),1.11(d,j＝8hz,3h,14-me),1.70(dd,1h,8-h),1.81(ddd,1h,7α-h),2.12(dd,1h,7β-h),2.81(q,j＝8hz,1h,14-h),3.55(m,4h,-ch2ch2-),4.02(m,1h,1-h),4.57(d,1h,2-h),5.28(s,1h,10-h),5.31(d,1h,1-oh),5.34(d,1h,j＝16hz,10-ch2-),5.56(d,1h,j＝16hz,10-ch2-),5.77(d,1h,6-h),6.15(s,1h,12-h),6.43(s,1h,3-oh).lc-ms(m/z):551(m+h⁺)。

实施例12、10-o-[5-(1h-三氮唑)甲基]银杏内酯b

取实施例5化合物51mg(0.11mmol)于10ml水中，加入2ml乙二醇溶清，依次加入叠氮化钠10mg(0.15mmol)，氯化亚铜15mg(0.15mmol)，加热搅拌48小时后，加入2滴浓盐酸，减压蒸除溶剂，残留物水洗，过滤得白色固体48mg，收率86％。¹h-nmr(dmso-d6,400mhz):1.01(s,9h,t-bu),1.12(d,j＝8hz,3h,14-me),1.74(dd,1h,8-h),1.90(ddd,1h,7α-h),2.13(dd,1h,7β-h),2.85(q,j＝8hz,1h,14-h),4.15(d,1h,1-h),4.64(d,1h,2-h),5.10(d,1h,j＝16hz,10-ch2-),5.36(d,1h,1-oh),5.41(s,1h,10-h),5.46(d,1h,j＝16hz,10-ch2-),5.78(d,1h,6-h),6.22(s,1h,12-h),6.48(s,1h,3-oh),7.41(s,1h,唑环-h).lc-ms(m/z):506(m+h⁺)。

实施例13、10-o-{3-[5-(1h-三氮唑)]烯丙基}银杏内酯b

取实施例6化合物54mg(0.11mmol)于10ml水中，加入2ml乙二醇溶清，依次加入叠氮化钠10mg(0.15mmol)，氯化亚铜15mg(0.15mmol)，加热搅拌48小时后，加入2滴浓盐酸，减压蒸除溶剂，残留物水洗，过滤得白色固体44mg，收率75％。¹h-nmr(dmso-d6,400mhz):1.03(s,9h,t-bu),1.11(d,j＝8hz,3h,14-me),1.70(dd,1h,8-h),1.81(ddd,1h,7α-h),2.12(dd,1h,7β-h),2.81(q,j＝8hz,1h,14-h),4.02(m,1h,1-h),4.57(d,1h,2-h),4.61(m,2h,10-ch2-),5.28(s,1h,10-h),5.31(d,1h,1-oh),5.77(d,1h,6-h),5.86(m,j＝16hz,1h,10-ch＝),6.15(s,1h,12-h),6.43(s,1h,3-oh),6.65(d,j＝16hz,1h,10-ch＝),7.28(s,1h,唑环-h).lc-ms(m/z):532(m+h⁺)。

实施例14、10-o-{2-[5-(1h-三氮唑)甲氧基]乙基}银杏内酯b

取实施例7化合物56mg(0.11mmol)于10ml水中，加入2ml乙二醇溶清，依次加入叠氮化钠10mg(0.15mmol)，氯化亚铜15mg(0.15mmol)，加热搅拌48小时后，加入2滴浓盐酸，减压蒸除溶剂，残留物水洗，过滤得白色固体47mg，收率78％。¹h-nmr(dmso-d6,400mhz):1.03(s,9h,t-bu),1.11(d,j＝8hz,3h,14-me),1.70(dd,1h,8-h),1.81(ddd,1h,7α-h),2.12(dd,1h,7β-h),2.81(q,j＝8hz,1h,14-h),3.55(m,4h,-ch2ch2-),4.02(m,1h,1-h),4.57(d,1h,2-h),5.28(s,1h,10-h),5.31(d,1h,1-oh),5.35(d,1h,j＝16hz,10-ch2-),5.51(d,1h,j＝16hz,10-ch2-),5.77(d,1h,6-h),6.15(s,1h,12-h),6.43(s,1h,3-oh),7.34(s,1h,唑环-h).lc-ms(m/z):550(m+h⁺)。

实施例15、10-o-[5-(1h-四氮唑)甲基]银杏内酯b钠盐

10-o-[5-(1h-四氮唑)甲基]银杏内酯b(实施例8)200mg(0.40mmol)溶于2ml无水乙醇中，滴加等摩尔量的na2co3的甲醇溶液(46mg于5ml)，室温搅拌1小时后，加入等体积的无水乙醚，放置过夜，析出固体，得产物175mg，收率83％。

实施例16、10-o-[5-(1h-四氮唑)甲基]银杏内酯b赖氨酸盐

10-o-[5-(1h-四氮唑)甲基]银杏内酯b(实施例8)200mg(0.40mmol)溶于2ml无水乙醇中，滴加等摩尔量的赖氨酸的甲醇溶液，室温搅拌2小时后，减压蒸除溶剂，加入10ml乙醚洗涤，过滤得淡黄色固体245mg，收率93％。

实施例17、体外活性测试

实验方法：新西兰白兔戊巴比妥钠(2％，2ml/kg)麻醉，腹主动脉穿刺取血约40ml。离心1000rpm/min×10min取上清为prp，剩余血液离心4000rpm/min×10min取上清为ppp；空白对照组：100ulprp+100ul生理盐水；药物组：100ulprp+100ul0.05％dmso溶解的不同浓度的药物(10²，10³和10⁴nm)，银杏内酯b为阳性对照组，温育5min后，加入2ulpaf(10×终浓度为145nm)；血小板聚集仪测试聚集率，每个样品重复三组，得到的聚集率除以空白对照组的平均值，得到校正值，进行比较；

结果显示：各组均表现出血小板聚集抑制活性，抑制程度并随着药物浓度的增加而增强(如图1所示)。

实施例18、化合物体内活性测试实验

实验方法：sd大鼠用水合氯醛以400mg/kg的剂量麻醉后，于正中切开腹壁，分离下腔静脉，并于左肾静脉下方预置缝合线以备结扎用，各药物组由尾静脉注射，以等容量生理盐水为阴性对照，阿司匹林为阳性对照(给药量均为20mg/kg)。给药10分钟后结扎下腔静脉，关闭腹腔；

结扎后4h重新打开腹腔，于结扎处下方2cm处夹闭血管，同时夹闭该部分的主要静脉侧枝并用注射器吸尽静脉内残余血液，纵剖血管，观察是否有无血栓形成；若有血栓形成，则于烤箱内60℃烘20分钟称其干重，记录血栓形成动物数及血栓干重，结果如表1所示；

表1.化合物实施例15sd大鼠体内的抗血栓活性