本发明涉及药物合成领域，具体而言，涉及一种帕瑞肽的制备方法。
背景技术：
帕瑞肽是由瑞士诺华制药公司(novartispharmaag)研制的一种“孤儿药”，于2012年4月25日首次由欧盟药品监管当局按照罕见病的相关法规批准上市，商品名signifor，2012年12月14日获得了美国fda批准，用于治疗肾上腺皮质机能亢进和治疗不能通过手术治疗的库欣病(cushing’sdisease)，之后陆续在48个国家获准上市。其结构式为
帕瑞肽是一种多受体靶向生长激素(somatostatin，sst)类似物抑制剂类似物，能够高亲和力结合5种促生长素抑制素受体(sstreceptor，sstr)亚型中的4种(sst1、sst2、sst3、sst5)，通过与生长抑素受体结合发挥其药理作用。
现有技术中，帕瑞肽的合成主流方法是固相合成方法，例如按经典的fmoc/tbu策略，以sasrinresin树脂或wang树脂，固相缩合得环[(2r)-2-苯甘氨酰-d-色氨酰-l-(n-叔丁氧羰基)赖氨酰-o-苄基-l-酪氨酰-l-苯丙氨酰-(4r)-4-[(2-氨基乙基)氨基甲酰氧基]-l-脯氨酰]肽。然而，固相法存在这样几个普遍问题，如需特殊设备，粗肽纯度低，需特殊纯化设备，成本较高等。相比之下，液相合成最大的优势是目标产物的纯度很高，这主要依赖于中间体的纯化。但如何合理的设计合成路线以得到较高的产率，以及如何避免多肽环合时消旋化程度高的问题仍有待解决。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种帕瑞肽的制备方法，其合成路线设计合理，操作简便，通过液相合成的方式，能够得到产率高、纯度高的帕瑞肽，并解决了现有技术中消旋化程度高的问题。
本发明的实施例如下：
一种帕瑞肽的制备方法，其包括：
将化合物i和化合物ii缩合后，氢化去保护，得到中间体i；
将中间体i与化合物iii缩合后，在碱性条件下水解，得到中间体ii；
将中间体ii分子内缩合关环得到中间体iii；
将中间体iii在酸性条件下水解；
其中，化合物i的结构式为
式中，r1为可通过酸性水解脱除的氨基保护基，优选地，r1选自boc、meoc、etoc、dmb、pmb中的任一种；r2选自c1～c4烷基；r3为可通过氢化还原脱除的氨基保护基，优选地，r3选自bn、cbz中的任一种；r4为可通过碱性水解脱除的氨基保护基，优选地，r4选自fmoc、tfa、pht中的任一种。
本发明实施例的有益效果是：
本发明实施例提供了一种帕瑞肽的制备方法，其制备得到了化合物i～iii三个理化性质稳定的多肽片段，并以上述三个多肽片段为原料，通过液相反应合成了帕瑞肽。该制备方法的路线设计合理，采用多肽片段汇聚式合成策略，节省时间，提高效率，消旋化程度低、总收率高，有利于产业化生产。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例的一种帕瑞肽的制备方法进行具体说明。
本发明实施例提供了一种帕瑞肽的制备方法，其包括：
s1.将化合物i和化合物ii缩合后，氢化去保护，得到中间体i。
s2.将中间体i与化合物iii缩合后，在碱性条件下水解，得到中间体ii。
s3.将中间体ii分子内缩合关环得到中间体iii。
s4.将中间体iii在酸性条件下水解。
其中，化合物i的结构式为
式中，r1为可通过酸性水解脱除的氨基保护基，优选地，r1选自boc、meoc、etoc、dmb、pmb中的任一种；r2选自c1～c4烷基；r3为可通过氢化还原脱除的氨基保护基，优选地，r3选自bn、cbz中的任一种；r4为可通过碱性水解脱除的氨基保护基，优选地，r4选自fmoc、tfa、pht中的任一种。
在本发明实施例中，发明人采用了化合物i～iii三个理化性质稳定的多肽片段对帕瑞肽进行合成。通过对不同氨基保护基的选择，以及引入、脱除时机上的把握，精心地安排了各个片段的缩合顺序，从而较高产率，较高纯度地合成了帕瑞肽。例如，在中间体i和化合物iii缩合后，由于保护基团的合理安排，通过一步碱性水解，即可同时脱除氨基和羧基上的保护基，裸露出后续缩合闭环所需的氨基和羧基。又例如，在与化合物iii进行缩合之前，发明人大量采用了可以通过氢化脱去的氨基保护基对氨基进行保护，氢化反应转化率高，后处理方便，有助于提高产率。而在引入化合物iii之后，为了避免氢化反应将化合物iii中的苄基脱去影响产率，发明人又转而采用了其它类型的氨基保护基。同时，由于先引入基团对后引入基团在电性、位阻上的影响不可预期，发明人在该合成路线的设计上付出了大量的创造性劳动。
进一步地，在化合物i和化合物ii的缩合反应中，化合物i和化合物ii的摩尔比为1：1.8～2.2。化合物ii的合成相对简单，通过添加过量化合物ii来保证化合物i的反应完全，有利于减少时间、金钱成本。优选地，化合物i和化合物ii的缩合是在nmm、hobt和dic的活化下进行的，其中，化合物i、nmm、hobt和dic的摩尔比为1：1.2～3.2：1.2～2.5：2.5～7。发明人经过创造性劳动发现，按照上述用料比进行缩合反应，反应的效率较高，化合物i的转化率较高。
基于同样的目的，在中间体i和化合物iii的缩合反应中，中间体i和化合物iii的摩尔比为1：1.2～1.5，通过添加过量化合物iii来保证化合物i的反应完全。进一步地，中间体i和化合物iii的缩合是在nmm、hobt和tbtu的活化下进行的，其中，中间体i、nmm、hobt和tbtu的摩尔比为1：2.5～3.0：2.5～3.0：2.5～3.0。发明人经过创造性劳动发现，按照上述用料比进行缩合反应，反应的效率较高，中间体i的转化率较高。
中间体ii的分子内缩合关环是在hatu、hobt和edipa的活化下进行的，其中，中间体ii、hatu、hobt和edipa的摩尔比为1：2.5～3.0：2～2.5：2.3～2.8。发明人经过创造性劳动发现，按照上述用料比进行缩合反应，反应的效率较高，能够以较高产率完成关环。
进一步地，在本发明实施例中，化合物i的制备方法如下：
将原料i-a和原料i-b缩合，并通过氢化去保护，得到前体i；将前体i与原料i-c缩合，并通过氢化去保护后得到化合物i。
其中，原料i-a的结构式为
进一步地，在本发明实施例中，化合物ii的制备方法如下：
将原料ii-a、原料ii-b和cdi反应，并通过碱性水解，得到化合物ii；其中，原料ii-a的结构式为
其中，原料ii-a为氨基、羧基保护后的羟基脯氨酸，原料ii-b为氨基保护后的乙二胺，均为商业可得或通过商业可得原料经过简单衍生后得到的，原料来源广泛，廉价易得。
进一步地，在本发明实施例中，化合物iii的制备方法如下：
将原料iii-a和l-苯丙氨酸缩合，得到化合物iii；其中，原料iii-a的结构式为
其中，原料iii-a为氨基、羟基保护后的l-酪氨酸衍生物，l-苯丙氨酸可用l-苯丙氨酸盐酸盐替代，以上原料同样是具有广泛的来源，廉价易得，适合实现规模化生产。
进一步地，在上述反应中，通过氢化对r3基团的脱除是在5％～10％的pd/c催化下，氢气氛围中进行的。通过酸性水解对r1基团的脱除是在hcl、tfa等酸试剂的存在下进行的。通过碱性水解对r2、r4基团的脱除是在naoh、二乙胺、哌啶、环己胺等碱试剂的存在下进行的。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供了一种前体i的制备方法，其包括：
s1.制取n-苄氧羰基-d-色氨酸-n-叔丁氧基羰基-l-赖氨酸甲酯，其反应式为
具体制备方法如下：
将原料i-a(n-cbz-d-色氨酸，13.53g，40.0mmol)和hobt(5.97g，44.2mmol)溶于200mlthf中，溶液无色透明。室温下分别加入原料i-b(ne-boc-l-赖氨酸甲酯盐酸盐，11.90g，40.0mmol)以及nmm(8.11g，80.2mmol)，搅拌30min后冷却至0℃，加入edci(7.94g，51.1mmol)，搅拌1h后置于室温下反应，tlc监测反应完全，停止反应。向反应液中加入纯化水洗100ml×2次，有白色固体析出，加入乙酸乙酯萃取100ml×2次，合并乙酸乙酯层，经纯化水洗、饱和氯化钠溶液洗、无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂后，滤液减压蒸除溶剂得34.80g白色固体粗品。将粗品精制，40℃真空干燥4h得n-苄氧羰基-d-色氨酸-n-叔丁氧基羰基-l-赖氨酸甲酯(白色粉末，16.51g，产率71.0％，纯度99.44％)。
s2.制取前体i(d-色氨酸-n-叔丁氧基羰基-赖氨酸甲酯)，其反应式为
具体制备方法如下：
在250ml的氢化釜里，加入n-苄氧羰基-d-色氨酸-n-叔丁氧基羰基-l-赖氨酸甲酯(13.0g，22.4mmol)，溶于100ml的无水异丙醇中，加入2.0g催化剂10％pd/c，室温下氢化反应至完全后停止反应。加适量硅藻土滤除催化剂，滤液减压蒸除溶剂得10.21g类白色固体，真空干燥后得前体i(白色固体，9.80g，产率97.8％，纯度90.76％)。
实施例2
本实施例提供了一种化合物i的制备方法，其包括：
s1.制取n-苄氧羰基-l-苯甘氨酸-d-色氨酸-n-叔丁氧基羰基-l-赖氨酸甲酯，其反应式为
具体制备方法如下：
在500ml的单口瓶中加入前体i(d-色氨酸-n-叔丁氧基羰基-赖氨酸甲酯，10.21g，22.8mmol)，溶于100ml的无水四氢呋喃中，加入原料i-c(n-苄氧羰基-l-苯甘氨酸，9.62g，33.7mmol)、nmm(4.61g，45.6mmol)、hobt(3.40g，25.1mmol)，将反应液冷却至0℃，搅拌30min后，缓慢滴加dic(3.17g，25.1mmol)，滴毕保持0℃搅拌30min，置于室温下反应。tlc监测反应完全，停止反应。向反应液中加入纯化水100ml洗涤，乙酸乙酯萃取50ml×3次，合并乙酸乙酯层，依次用5％碳酸氢钠溶液洗、纯化水洗、饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥。抽滤、滤液浓缩得11.42g淡黄色粉末粗品。将粗品精制、40℃真空干燥4h，得n-苄氧羰基-l-苯甘氨酸-d-色氨酸-n-叔丁氧基羰基-l-赖氨酸甲酯(白色粉末，8.55g，产率52.6％，纯度97.81％)。
s2.制取化合物i(l-苯甘氨酸-d-色氨酸-n-叔丁氧基羰基-l-赖氨酸甲酯)，其反应式为
具体制备方法如下：
在500ml的氢化釜里，加入n-苄氧羰基-l-苯甘氨酸-d-色氨酸-n-叔丁氧基羰基-l-赖氨酸甲酯(23.4g，32.8mmol)，溶于260ml的无水异丙醇中，加入2.6g催化剂10％pd/c，室温下氢化反应至完全，停止反应。加适量硅藻土滤除催化剂，滤液减压蒸除溶剂，真空干燥后得化合物i(白色固体，17.9g，产率94.2％，纯度99.13％)。
化合物i的表征如下：
hplc方法：a相：0.1％tfa溶液、b相：0.1％tfaacn溶液；梯度：30min内从20％至80％b；波长：265nm；流速1.0ml/min；t：35℃；出峰时间t＝26.04min。esi-ms:[m+h](m/z):566.3、[m+na](m/z):588.3、[m-boc](m/z):466.6。
实施例3
本实施例提供了一种化合物ii的制备方法，其包括：
s1.制备反式-4-(n-叔丁氧羰基-乙二氨基)甲酰氧基-n-苄氧羰基-脯氨酸甲酯，其反应式为
具体制备方法如下：
在氮气保护、冰浴下，将原料ii-a(反式-4-羟基-n-苄氧羰基-脯氨酸甲酯，5.58g，20.0mmol)在50ml无水二氯甲烷中搅拌至溶解。用50ml无水二氯甲烷溶解cdi(3.89g，24.0mmol)，再将其滴入原料ii-a的溶液中。滴加后反应液在室温下搅拌反应，tlc监测原料ii-a已完全反应。用40ml无水二氯甲烷溶解原料ii-b(n-boc-乙二胺，3.84g，24.0mmol)，冰浴、缓慢滴入反应液中。滴完后加入dmap(2.44g，20.0mmol)的20ml无水二氯甲烷溶液。室温搅拌。反应液用100ml水洗，分层。有机相以50ml×6的0.1m盐酸洗涤、饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥。抽滤、浓缩后得油状粗品9.97g。经冻干得白色固体，异辛烷打浆，抽滤，40℃真空干燥，得反式-4-(n-叔丁氧羰基-乙二氨基)甲酰氧基-n-苄氧羰基-脯氨酸甲酯(白色固体，8.24g，产率88.5％，纯度95％)。
s2.制备化合物ii(反式-4-(n-叔丁氧羰基-乙二氨基)甲酰氧基-n-苄氧羰基-脯氨酸)，其反应式为
具体制备方法如下：
将反式-4-(n-叔丁氧羰基-乙二氨基)甲酰氧基-n-苄氧羰基-脯氨酸甲酯(4.65g，10.0mmol)用40ml甲醇、40ml四氢呋喃的混合溶剂溶解后，0℃下缓慢滴加1n氢氧化钠水溶液。室温搅拌。tlc监测反应完全后停止搅拌，用10％柠檬酸调节反应液ph值至2～3，浓缩。浓缩物用醋酸异丙酯和水溶解、分层。对水相再用醋酸异丙酯萃取后合并有机相，依次用饱和氯化钠溶液洗涤、以无水硫酸钠干燥。抽滤、浓缩得白色絮状固体，常温真空干燥后得到化合物ii(4.13g，产率91.5％，纯度93％)。
化合物ii的表征如下：
hplc方法：a相：0.1％tfa溶液、b相：0.1％acn溶液；梯度：30min内从20％至80％b；波长：265nm；流速1.0ml/min；t：35℃；出峰时间t＝15.15min。esi-ms:[m+h](m/z):451.9、[m-c4h9](m/z):396.0、[m-boc](m/z):352.1。
实施例4
本实施例提供一种化合物iii(n-fmoc-o-苄基酪氨酸-l-苯丙氨酸)的制备方法，其反应式为
具体制备方法如下：
室温下500ml的单口瓶中分别加入l-苯丙氨酸盐酸盐(5.1g，25.3mmol)、原料iii-a(n-芴甲氧羰基-o-苄基-l-酪氨酸，9.87g，20.0mmol)，溶于200mlthf中，加入hobt(6.76g，50.0mmol)，nmm(8.11g，80.2mmol)，搅拌30min后冷却至0℃，加入edci(7.94g，51.1mmol)，搅拌1h后置于室温下反应，tlc监测反应完全，停止反应。向反应液中加入纯净水洗200ml×2次，有白色固体析出，加入乙酸乙酯萃取100ml×3次，合并乙酸乙酯层，经纯化水洗、饱和氯化钠溶液洗、无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂后，滤液减压蒸除溶剂得白色固体粗品。将粗品精制，40℃真空干燥得化合物iii(白色粉末，11.1g，产率86.5％，纯度95％)。
化合物iii的表征如下：
hplc方法：a相：0.1％tfa溶液、b相：0.1％tfaacn溶液；梯度：30min内从20％至80％b；波长：265nm；流速1.0ml/min；t：35℃；出峰时间t＝18.47min。esi-ms:[m+h](m/z):640.72、[m+na](m/z):663.72.0、[m-fmoc](m/z):418.2。
实施例5
本实施例提供一种中间体i(反式-4-(n-叔丁氧羰基-乙二氨基)甲酰氧基-脯氨酸-l-苯甘氨酸-d-色氨酸-(n-叔丁氧羰基-乙二氨基)-l-赖氨酸甲酯)的制备方法，包括：
s1.制备反式-4-(n-叔丁氧羰基-乙二氨基)甲酰氧基-n-苄氧羰基-脯氨酸-l-苯甘氨酸-d-色氨酸-(n-叔丁氧羰基-乙二氨基)-l-赖氨酸甲酯，其反应式为
具体制备方法如下：
250ml单口瓶中加入化合物i(l-苯甘氨酸-d-色氨酸-n-叔丁氧基羰基-l-赖氨酸甲酯，1.65g，2.85mmol)和化合物ii(反式-4-(n-叔丁氧羰基-乙二氨基)甲酰氧基-n-苄氧羰基-脯氨酸，2.5g，5.54mmol)，溶于50ml无水thf中，0℃搅拌10min。-5℃下加入nmm(0.41g，4.06mmol)、hobt(0.43g，3.18mmol)、dici(1.21g，9.6mmol)，保持-5℃反应，tlc监测至反应完全，停止反应。向反应液中滴加50ml纯净水，有浅黄色物体析出，滴毕，加入5％柠檬酸溶液搅拌，抽滤，滤饼经纯化水洗、正庚烷洗，收集滤饼，真空干燥得反式-4-(n-叔丁氧羰基-乙二氨基)甲酰氧基-n-苄氧羰基-脯氨酸-l-苯甘氨酸-d-色氨酸-(n-叔丁氧羰基-乙二氨基)-l-赖氨酸甲酯(白色固体，2.17g，产率75.1％，纯度93％)。
s2.制备中间体i，其反应式为
具体制备方法如下：
500ml的氢化釜里，加入反式-4-(n-叔丁氧羰基-乙二氨基)甲酰氧基-n-苄氧羰基-脯氨酸-l-苯甘氨酸-d-色氨酸-(n-叔丁氧羰基-乙二氨基)-l-赖氨酸甲酯(2.0g，1.97mmol)，溶于100ml的无水甲醇中，加入0.4g催化剂10％pd/c，室温下氢化反应4h，停止反应。滤除催化剂，向滤液中加入100g冰水，有沉淀析出，收集沉淀物并以纯化水洗涤，干燥得中间体i(灰色固体，1.59g，产率91.9％，纯度95％)。
中间体i的表征如下：
hplc方法：hypersilbdsc18,4.6×200mm,5μm；a相：0.1％tfa水溶液、b相：0.1％tfaacn；梯度：40min内20％至80％b；波长：220nm；流速：1ml/min；温度：35℃；出峰时间t＝30.10min。esi-ms:[m+h](m/z):1347.3、[m+na](m/z):1368.9、[m-boc](m/z):1246.9。
实施例6
本实施例提供一种中间体ii(o-苄基酪氨酸-l-苯丙氨酸-反式-4-(n-叔丁氧羰基-乙二氨基)甲酰氧基脯氨酸-l-苯甘氨酸-d-色氨酸-(n-叔丁氧羰基乙二氨基)-l-赖氨酸)的制备方法，包括：
s1.制备n-fmoc-o-苄基酪氨酸-l-苯丙氨酸-反式-4-(n-叔丁氧羰基-乙二氨基)甲酰氧基脯氨酸-l-苯甘氨酸-d-色氨酸-(n-叔丁氧羰基乙二氨基)-l-赖氨酸甲酯，其反应式为
具体制备方法如下：
250ml单口瓶中加入中间体i(反式-4-(n-叔丁氧羰基-乙二氨基)甲酰氧基-脯氨酸-l-苯甘氨酸-d-色氨酸-(n-叔丁氧羰基-乙二氨基)-l-赖氨酸甲酯，3.5g，3.98mmol)和化合物iii(n-fmoc-o-苄基酪氨酸-l-苯丙氨酸，3.5g，5.46mmol)，溶于50ml无水四氢呋喃中，控温5℃，缓慢加入hobt(1.49g，11.0mmol)、tbtu(3.53g，11.0mmol)以及nmm(1.12g，11.0mmol)，室温搅拌反应6h。tlc监测直至中间体i反应完全，停止反应。反应液减压浓缩至干，加入乙酸乙酯100ml溶解后，经5％碳酸氢钠水溶液洗涤100ml×3次、5％柠檬酸水溶液100ml×3次、饱和氯化钠溶液洗涤、无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂后，滤液减压浓缩至干，甲醇重结晶，得n-fmoc-o-苄基酪氨酸-l-苯丙氨酸-反式-4-(n-叔丁氧羰基-乙二氨基)甲酰氧基脯氨酸-l-苯甘氨酸-d-色氨酸-(n-叔丁氧羰基乙二氨基)-l-赖氨酸甲酯(白色固体，3.0g，产率50.3％，纯度97％)。
s2.制备中间体ii，其反应式为
具体制备方法如下：
250ml单口瓶中加入n-fmoc-o-苄基酪氨酸-l-苯丙氨酸-反式-4-(n-叔丁氧羰基-乙二氨基)甲酰氧基脯氨酸-l-苯甘氨酸-d-色氨酸-(n-叔丁氧羰基乙二氨基)-l-赖氨酸甲酯(2.04g，1.36mmol)，溶于30ml的无水四氢呋喃中，0℃下搅拌30min。-5℃下加入氢氧化钠，控温搅拌反应2h，hplc监测反应完全后终止反应。向反应液中加入50ml纯净水稀释、乙酸乙酯萃取50ml×2次，合并乙酸乙酯层，经饱和氯化钠溶液洗涤、无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压蒸除溶剂后得白色蜡状固体2.72g。将白色粗品精制，40℃真空干燥4h后得中间体ii(灰白色粉末，1.71g，产率99.3％，纯度75.9％)。
中间体ii的表征如下：
hplc方法：hypersilbdsc18,4.6×200mm,5μm；a相：0.1％tfa水溶液、b相：0.1％tfaacn；梯度：30min内60％至100％b；波长λ：220nm；流速：1ml/min；温度：35℃；出峰时间t＝12.64min。esi-ms:[m+h](m/z):1365.6、[m+na](m/z):1388.9、[m-boc](m/z):1264.6。
实施例7
本实施例提供一种中间体iii(环[(2r)-2-苯甘氨酰-d-色氨酰-l-(n-叔丁氧羰基)赖氨酰-o-苄基-l-酪氨酰-l-苯丙氨酰-(4r)-4-[(2-氨基乙基)氨基甲酰氧基]-l-脯氨酰]肽)的制备方法，其反应式为
具体制备方法如下：
250ml单口瓶中加入中间体ii(o-苄基酪氨酸-l-苯丙氨酸-反式-4-(n-叔丁氧羰基-乙二氨基)甲酰氧基脯氨酸-l-苯甘氨酸-d-色氨酸-(n-叔丁氧羰基乙二氨基)-l-赖氨酸，0.83g，0.66mmol)，溶于20mldmf中，冰浴下搅拌10min。-5℃下加入edipa(0.21g，1.62mmol)、hobt(0.2g，1.48mmol)以及hatu(0.7g，1.84mmol)，保持-5℃反应，tlc监测直至中间体ii反应完全，停止反应。向反应液中滴加20ml纯净水，有黄色固体析出，滴毕后抽滤，滤饼经纯净水洗、正庚烷洗，收集滤饼，真空干燥4h后得中间体iii(黄色粉末，0.62g，0.50mmol，产率75.3％，纯度74.8％)。
中间体iii的表征如下：
hplc方法：hypersilbdsc18,4.6×200mm,5μm；a相：0.1％tfa水溶液、b相：0.1％tfaacn；梯度：30min内60％至100％b；波长λ：220nm；流速:1ml/min；温度：35℃；出峰时间t＝28min。esi-ms:[m+h](m/z):1347.3、[m+na](m/z):1368.9、[m-boc](m/z):1246.9。
实施例8
一种帕瑞肽的制备方法，其反应式为
具体制备方法如下：
50ml单口瓶中加入中间体iii(环[(2r)-2-苯甘氨酰-d-色氨酰-l-(n-叔丁氧羰基)赖氨酰-o-苄基-l-酪氨酰-l-苯丙氨酰-(4r)-4-[(2-氨基乙基)氨基甲酰氧基]-l-脯氨酰]肽，0.5g，0.40mmol)，溶于10ml无水二氯甲烷中，冰浴下滴加5ml三氟乙酸，搅拌反应1h，停止反应。反应液减压蒸除溶剂，滴加5ml乙醚，有灰白色固体析出，抽滤，收集滤饼，真空干燥后得帕瑞肽(灰褐色固体，0.4g，0.38mmol，产率95.0％，纯度68.4％)。
帕瑞肽表征如下：
hplc方法：hypersilbdsc18,4.6×200mm,5μm；a相：0.1％tfa水溶液、b相：0.1％tfaacn；梯度：30min内从31％至41％b；波长λ：220nm；流速1ml/min；温度：35℃；出峰时间t＝22.9min。esi-ms:[m+h](m/z):1046.9、[m+na](m/z):1068.9、[m/2+h](m/z):524.1。
综上所述，本发明实施例提供了一种帕瑞肽的制备方法，其制备得到了化合物i～iii三个理化性质稳定的多肽片段，并以上述三个多肽片段为原料，通过液相反应合成了帕瑞肽。该制备方法的路线设计合理，采用多肽片段汇聚式合成策略，节省时间，提高效率，消旋化程度低、总收率高，有利于产业化生产。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。