本发明涉及一种分离氨基酸的方法，具体涉及一种从大蒜中提取分离s-allylcysteine的方法，属于s-烯丙基半胱氨酸分离提取技术领域。
背景技术
目前，在大蒜多种含硫有机化合物之中，s-allylcysteine(s-烯丙基半胱氨酸)被看作是大蒜的主要功效成分，与蒜酶分别独立的存在于大蒜的鳞茎中，捣碎后这两种物质相互接触，迅速发生分解反应。目前采用水高温热回流提取易将原料中大量淀粉提取出来而严重影响后续的分离和用水低温热回流提取提取率低。因此采用用一般方法无法从大蒜中提取到s-allylcysteine(s-烯丙基半胱氨酸)。
因此，如何研制一种能够有效地从大蒜中提取到s-allylcysteine的方法是本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明提供了一种能够有效地从大蒜中提取到s-allylcysteine的方法。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种从大蒜中提取分离s-allylcysteine的方法，包括以下步骤：
步骤(1)：取新鲜大蒜剥去外皮，灭菌，干燥，粉碎，获得物料a备用；
步骤(2)：称取物料a于反应容器中，采用25-45％的酒精浸泡物料a，浸泡30-60min，超声，抽滤获得滤饼及滤液a；
步骤(3)：将步骤(2)中获得的滤饼采用25-45％的酒精超声提取，抽滤，获得滤饼及滤液b；
步骤(4)：将滤液a及滤液b混合，过滤，浓缩，调节ph值为1.5-2.5，洗涤洗脱，浓缩，获得物料b；
步骤(5)：将步骤(4)中的物料b溶解，析晶，抽滤，获得析晶物；
步骤(6)：将步骤(5)中的析晶物溶解，析晶纯化，抽滤，获得滤饼；将滤饼干燥，粉碎，获得s-allylcysteine。
本发明的有益效果：本发明中采用低浓度酒精超声提取，解决用水高温热回流提取易将原料中大量淀粉提取出来而严重影响后续的分离和用水低温热回流提取提取率低的不足，低浓度酒精超声提取仅在50℃左右提取，淀粉不易提出，且因结合超声提取的能力使有效成分提取率增高。因此，本发明采用的提取方法提高了提取率，还提高了反应效率。
优选地，步骤(1)中所述灭菌温度为126-130℃，所述灭菌时间为60-90min。
本发明中采用将新鲜大蒜进行高温处理，使其鲜大蒜中具有特殊生物活性、且极易于酶解的蒜氨酸转化为具有稳定性能、且保持特殊生物活性的s-allylcysteine。
优选地，步骤(1)中所述干燥时间为90-95℃，所述干燥时间为6.0-7.0h。
优选地，步骤(2)中所述酒精与物料a的质量比为15-20：1。
优选地，步骤(3)中所述超声时间为30-45min，所述超声温度为40-60℃。
优选地，步骤(4)中将混合后的滤液，先采用陶瓷膜过滤，再采用1000d-3000d超滤膜过滤，滤液减压浓缩至无醇味获得浓缩液，浓缩液中加水稀释后采用稀盐酸调节ph值为1.5-2.5，上lsi001树脂柱，用无离子水洗涤，用氨水溶液洗脱，减压浓缩至稠膏状，获得物料b。该方案中氨水溶液的浓度优选为0.2mol/l-0.3mol/l；稀盐酸的摩尔浓度为20mol/l-40mol/l；浓缩液中加水量为浓缩液的一倍量；浓缩液质量与水的质量比为1：1。
本发明中采用小分子量超滤膜过滤来代替酒精醇沉或澄清剂沉淀来有效的除去提取物中大分子量的杂质如蛋白质、多糖和鞣质等，减少操作过程的步骤及损耗，使滤液更有利于后续有效成分的分离。
本发明中采用离子交换树脂柱lsi001进行吸附交换，用水洗涤除杂，用稀氨水溶液洗脱出高纯度的s-allylcysteine成分，分离操作过程简单，产率高，成本低的优点。
优选地，所述步骤(5)中采用质量浓度为85％-95％的酒精加热溶解。
优选地，所述步骤(6)中采用质量浓度为85％-95％的酒精析晶纯化。
优选地，步骤(6)中所述干燥温度为55-60℃，所述干燥时间为2-3h。
优选地，所述步骤(6)中将步骤(5)中的析晶物采用乙醇溶解。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种从大蒜中提取分离s-allylcysteine的方法。
1、采用先将新鲜大蒜进行高温处理，使其鲜大蒜中具有特殊生物活性、且极易于酶解的蒜氨酸转化为具有稳定性能、且保持特殊生物活性的s-allylcysteine。
2、采用低浓度酒精超声提取，解决用水高温热回流提取易将原料中大量淀粉提取出来而严重影响后续的分离和用水低温热回流提取提取率低的不足，低浓度酒精超声提取仅在50℃左右提取，淀粉不易提出，且因超声提取的特殊能力使有效成分提取率增高；
3、采用小分子量超滤膜过滤来代替酒精醇沉或澄清剂沉淀来有效的除去提取物中大分子量的杂质如蛋白质、多糖和鞣质等，减少操作过程的步骤及损耗，使滤液更有利于后续有效成分的分离；
4、采用经过大量实验优选的离子交换树脂柱lsi001进行吸附交换，用水洗涤除杂，用稀氨水溶液洗脱出高纯度的s-allylcysteine成分来替代葡聚糖凝胶树脂柱分离，葡聚糖凝胶树脂柱分离操作过程繁琐，产率低，成本高，而离子交换树脂柱具有分离操作过程简单，产率高，成本低的优点。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
从大蒜中提取分离s-allylcysteine的方法，包括以下步骤：步骤(1)：取新鲜大蒜剥去外皮，放入高压灭菌器中，在126℃下蒸60min后取出，放入鼓风干燥箱中在90℃下干燥6h后取出，自然放凉，用粉碎机粉碎成20目筛的物料a备用；
步骤(2)：称取5kg物料a于烧杯中，加入75l25％的酒精用于浸泡物料a，浸泡30min，在超声提取器中在40℃下超声提取45min，抽滤获得滤饼及滤液a；
步骤(3)：将步骤(2)中获得的滤饼采用50l25％的酒精在40℃下超声提取30min，抽滤，获得滤饼及滤液b；
步骤(4)：将滤液a及滤液b混合，先采用陶瓷膜过滤，再采用1000d超滤膜过滤，滤液减压浓缩至无醇味，加入160l的蒸馏水稀释，采用稀盐酸调节ph值为1.5，按1.0bv/h流速上lsi001树脂柱，按1.5bv/h流速用无离子水洗涤，按1.5bv/h流速用0.2mol/l稀氨水溶液洗脱，洗脱液在65℃下减压浓缩至稠膏状的物料b；
步骤(5)：将步骤(4)中的物料b采用95％的酒精加热溶解，将溶解后的混合液置于冰箱冷藏室中静置析晶，抽滤，获得析晶物；
步骤(6)：将步骤(5)中的析晶物采用95％的乙醇溶解，析晶纯化2次，抽滤，获得滤饼；将滤饼在55℃下干燥1h，粉碎成20目筛，获得s-allylcysteine42.16g。(含量≥95％)
实施例2
从大蒜中提取分离s-allylcysteine的方法，包括以下步骤：步骤(1)：取新鲜大蒜剥去外皮，放入高压灭菌器中，在130℃下蒸90min后取出，放入鼓风干燥箱中在95℃下干燥6.5h后取出，自然放凉，用粉碎机粉碎成20目筛的物料a备用；
步骤(2)：称取50kg物料a于烧杯中，加入900l35％的酒精用于浸泡物料a，浸泡45min，在超声提取器中在40℃下超声提取60min，抽滤获得滤饼及滤液a；
步骤(3)：将步骤(2)中获得的滤饼采用650l35％的酒精在50℃下超声提取45min，抽滤，获得滤饼及滤液b；
步骤(4)：将滤液a及滤液b混合，先采用陶瓷膜过滤，再采用2000d超滤膜过滤，滤液减压浓缩至无醇味，加入950l的蒸馏水稀释，采用稀盐酸调节ph值为2.0，按1.0bv/h流速上lsi001树脂柱，按1.5bv/h流速用无离子水洗涤，按1.5bv/h流速用0.25mol/l稀氨水溶液洗脱，洗脱液在65℃下减压浓缩至稠膏状的物料b；
步骤(5)：将步骤(4)中的物料b采用95％的酒精加热溶解，将溶解后的混合液置于冰箱冷藏室中静置析晶，抽滤，获得析晶物；
步骤(6)：将步骤(5)中的析晶物采用95％的乙醇溶解，析晶纯化2次，抽滤，获得滤饼；将滤饼在60℃下干燥1h，粉碎成20目筛，获得s-allylcysteine产品605g。
实施例3
从大蒜中提取分离s-allylcysteine的方法，包括以下步骤：步骤(1)：取新鲜大蒜剥去外皮，放入高压灭菌器中，在130℃下蒸90min后取出，放入鼓风干燥箱中在95℃下干燥7h后取出，自然放凉，用粉碎机粉碎成20目筛的物料a备用；
步骤(2)：称取100kg物料a于烧杯中，加入2000l45％的酒精用于浸泡物料a，浸泡60min，在超声提取器中在60℃下超声提取60min，抽滤获得滤饼及滤液a；
步骤(3)：将步骤(2)中获得的滤饼采用1500l45％的酒精在60℃下超声提取45min，抽滤，获得滤饼及滤液b；
步骤(4)：将滤液a及滤液b混合，先采用陶瓷膜过滤，再采用1000d超滤膜过滤，滤液减压浓缩至无醇味，加入2000l的蒸馏水稀释，采用稀盐酸调节ph值为2.5，按1.0bv/h流速上lsi001树脂柱，按1.5bv/h流速用无离子水洗涤，按1.5bv/h流速用0.3mol/l稀氨水溶液洗脱，洗脱液在65摄氏度下减压浓缩至稠膏状的物料b；
步骤(5)：将步骤(4)中的物料b采用95％的酒精加热溶解，将溶解后的混合液置于冰箱冷藏室中静置析晶，抽滤，获得析晶物；
步骤(6)：将步骤(5)中的析晶物采用95％的乙醇溶解，析晶纯化2次，抽滤，获得滤饼；将滤饼在55℃下干燥1h，粉碎成20目筛，获得s-allylcysteine产品1021g。
采用本发明中的提取方法获得的s-allylcysteine(s-烯丙基半胱氨酸)()产品，s-allylcysteine产品中s-allylcysteine含量大于等于95％。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。