与粒细胞集落刺激因子受体相关的方法和组合物与流程

相关申请的交叉引用

本申请要求2011年11月18日递交的美国临时申请第61/561510号和2011年11月14日递交的美国临时申请第61/559660号的权益，每个申请的标题为“与粒细胞集落刺激因子受体相关的方法和组合物(methodsandcompositionsassociatedwiththegranulocytecolony-stimulatingfactorreceptor)”，其内容在此通过引用以其整体并入本文。

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发明领域

公开了化学和医学领域的组合物和方法。一些公开的实施方案为调节粒细胞集落刺激因子受体(gcfr)活性的组合物。一些公开的实施方案为调节粒细胞集落刺激因子受体(gcfr)活性的化合物的应用或鉴定方法。一些公开的实施方案包括使用化合物治疗某些与粒细胞集落刺激因子受体(gcfr)相关的病症如造血性或神经性病症。

发明背景

粒细胞集落刺激因子(gcsf)是一种具多功能活性的造血生长因子。作为一种糖蛋白，gcsf在骨髓粒细胞前体的成熟、增殖、分化和功能活化过程以及骨髓成熟粒细胞中起着重要的调节功能。当出现骨髓功能障碍时，其能增加白细胞产生。重组dna技术使得能够克隆负责gcsf的基因，以及开发能用于治疗多种人造血性疾病和病症如中性粒细胞减少症和造血干细胞移植的药品。

人gcsf(hgcsf)蛋白具有19.6kda的分子量，并通过与人gcsf受体(hgcsfr)结合发挥其生物学功能，所述受体为具有大的胞外区的单次跨膜蛋白，其由免疫球蛋白样(ig样)结构域、细胞因子受体同源物(crh)结构域和3个纤连蛋白iii型结构域组成。gcsf与受体的胞外ig样结构域和crh结构域的结合引起受体发生hgcsf/hgcsfr为2:2化学计量的同源二聚化(tamadat,etal.2006homodimericcross-overstructureofthehumangcsfreceptorsignalingcomplex.pnas103:3135-3140)。二聚化引起细胞内janus酪氨酸激酶信号转导物和转录(jak-stat)类型信号转导级联激活物的活化。造血因子受体从胞外区至胞内级联的信号转导传递被认为是通过tm结构域中受体二聚物的构象改变进行。已证明可在不存在天然配体epo下，通过tm结构域的突变激活二聚化红细胞生成素(epo)受体(一种调节红细胞产生的造血生长因子)(lux,etal.2006activeconformationoftheerythropoietinreceptor:randomandcycteine-scanningmutagenesisoftheextracellularjuxtamembraneandtransmembranedomains.jbc281:7002-7011)。由于受体组成性激活，hgcsfr的tm结构域突变的患者患有慢性中性粒细胞增多症(ploi,etal.2009anactivatingmutationinthecsf3rgeneinducesahereditarychronicneutrophilia.jem206:1701-1707)。

天然配体的经生物工程改造的epo和gcsf靶向结合位点的开发已获得成功，而基于蛋白的血小板生成素(tpo)药物的开发由于针对内源性tpo的抗体产生的药物相关的增加而失败。基于肽的tpo模拟分子——罗米司亭(romiplostim)，最近获得了fda许可，尽管药物相关的抗体开发的风险需在较长时期的应用中加以监测。致力于发现靶向相同位点的小分子的探索取得的成果不多。伊屈泼帕(eltrombopag)是fda许可的造血生长因子领域的第一种用于治疗血小板减少的小分子药物。与罗米司亭(其与内源性tpo竞争tpo受体的相同结合位点)不同，伊屈泼帕最可能通过与tm结构域相互作用而激活tpo受体，并因此，其活性应加上内源性tpo的活性的。伊屈泼帕显示需要组氨酸-499的独特的物种特异性的tpo受体激活，并且部分激活其中tm结构域中半胱氨酸残基突变为组氨酸的小鼠gcsf受体(erickson-millerc,etal.2004speciesspecificityandreceptordomaininteractionofsmallmoleculetporeceptoragonists.ash2004sandiego,poster)。已报导了能激活tpo受体的几类化合物。例如，wo2004/033433、wo2007/062078、wo2006/047344、wo01/89457、wo2009/103218、us7,026,334、wo2005/014561、wo2005/007651、wo2006/033005、wo2007/004038、wo2007/036769和wo2007/054783。

已鉴定了选择性激活小鼠gcsf受体的小分子。(tians-s,etal.1998asmall,nonpeptidylmimicsofgranulocyte-colony-stimulatingfactor.science281:257-259)。据报导，该分子不与gcsf直接竞争，尽管其似乎结合小鼠gcsf受体的胞外区。(doyleml,etal.2003selectivebindingandoligomerizationofthemurinegcsfreceptorbyalowmolecularweight,nonpeptidylligand.jbc278:9426-9434)。已报导了一类小分子能激活小鼠和人gcsf受体，且未提出其作用位点(kusanok,etal.2004apotentialtherapeuticroleforsmallnonpeptidylcompoundsthatmimichumangcsf.blood103:836-842；tokizawam,etal.2004imidazolederivativesoftheirsalts.us6,737,434)。

发明概述

公开了调节粒细胞集落刺激因子受体(gcfr)活性的组合物。公开了调节粒细胞集落刺激因子受体(gcfr)活性的化合物的应用方法及其鉴定方法。公开了其他实施方案，包括使用化合物治疗某些病症，如造血性或神经性病症。

一些实施方案包括式(i)、(ii)、(iii)或(iv)的化合物、其互变异构体，或其药学可接受的盐：

其中：

r¹选自氢、or⁶、no2、cn、nr⁶r⁷、co2r⁶、c(＝o)nr⁶r⁷、so3r⁶、so2nr⁶r⁸、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c2-c6烯基、任意取代的c2-c6炔基、任意取代的c1-c6杂烷基、任意取代的c3-c6环烷基、任意取代的c3-c6环烯基、任意取代的c2-c6杂环基、任意取代的芳基烷基、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r²和r³独立地选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c2-c6烯基、任意取代的c2-c6炔基、任意取代的c1-c6杂烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c3-c8环烯基、任意取代的c1-c6杂环、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r⁴选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c2-c6烯基、任意取代的c2-c6炔基、任意取代的c1-c6杂烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c3-c8环烯基、任意取代的c1-c6杂环、任意取代的芳基、任意取代的杂芳基、任意取代的芳基烷基、任意取代的芳基烯基、任意取代的芳基炔基和任意取代的杂芳基烷基；

r⁵选自氢、卤素、no2、cn、cf3、or⁶、co2r⁶、c(＝o)nr⁶r⁷、so3r⁶和so2nr⁶r⁸、任意取代的芳基、任意取代的c1-c6烷基和任意取代的c1-c6杂烷基；

r⁶选自氢、任意取代的c1-c6烷基、c1-c6杂烷基、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r⁷选自氢、c(＝o)r⁸、c(＝o)nhr⁸、任意取代的c1-c6烷基和任意取代的c1-c6杂烷基；或者-nr⁶r⁷为通过氮环连接的任意取代的非芳香族杂环；

r⁸选自氢、任意取代的c1-c6烷基和任意取代的c1-c6杂烷基；

r⁹选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c2-c6烯基、任意取代的c2-c6炔基、任意取代的c1-c6杂烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c3-c8环烯基、任意取代的c1-c6杂环、任意取代的杂芳基、任意取代的芳基烷基、任意取代的芳基烯基、任意取代的芳基炔基、任意取代的杂芳基烷基、任意取代的杂芳基烯基和任意取代的杂芳基炔基；

q选自nr⁶、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c1-c6杂烷基和任意取代的非芳香族杂环；

l¹选自nh和chr²；

w选自o(氧)和nh；

x为n(氮)或cr²；

y选自任意取代的c1-c6烷基、c2-c6烯基、任意取代的c1-c6杂烷基、任意取代的c1-c6杂烯基、任意取代的苯烯基和任意取代的杂环基烯基；

z为o(氧)或s(硫)；

n为1、2或3；并且

条件是如果式i和iii中r²为甲基、r⁴为苯基、l¹为nh，并且q为n-ph-r¹，则式i和iii的r¹不选自卤素、烷基、取代的烷基、羧酸和羧酸酯。

在一些实施方案中，化合物为gcsf受体激动剂。

在一些实施方案中，化合物为gcsf受体部分激动剂。

一些实施方案包括包含本文提供的化合物和药学可接受的赋形剂的药物组合物。

一些实施方案包括治疗造血性或神经性病症的方法，包括将有效量的本文提供的化合物给与有需要的对象。

在一些实施方案中，所述病症选自粒细胞减少症、中性粒细胞减少症、肌萎缩性侧索硬化、多发性硬化、多发性营养失调和脊椎损伤。

在一些实施方案中，给予化合物与另外的治疗方案联合。在一些实施方案中，所述另外的治疗方案选自化疗、骨髓移植和放疗。

一些实施方案包括治疗造血性或神经性病症的方法，包括将有效量的式(v)或(vi)化合物或其药学可接受的盐给予有需要的对象，其中式(v)或(vi)具有结构：

其中：

r¹⁰选自任意取代的c1-c12烷基、任意取代的c1-c12杂烷基、任意取代的c2-c12杂烯基、任意取代的c2-c12杂炔基、任意取代的c1-c12环烷基；任意取代的c1-c6杂环烷基、任意取代的杂芳基烷基、任意取代的芳基杂烷基、任意取代的杂芳基杂烷基、or¹⁴、sr¹⁴和nr⁸r¹⁴；

r¹¹选自氢、卤素、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c1-c6杂烷基、任意取代的c3-c8环烷基和任意取代的c1-c6杂环；

r¹²选自任意取代的c1-c6杂烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c1-c6杂环、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r¹³选自氢、卤素、任意取代的c1-c8烷基、任意取代的c1-c8杂烷基、任意取代的c2-c8杂烯基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c1-c6杂环烷基、or¹⁴、sr¹⁴和nr⁸r¹⁴；

r¹⁴选自任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

v选自ch＝ch、n＝ch、ch＝n、nh、o(氧)和s(硫)；并且

n为1、2或3。

在一些此类实施方案中，病症选自粒细胞减少症、中性粒细胞减少症、肌萎缩性侧索硬化、多发性硬化、多发性营养失调和脊椎损伤。

在一些实施方案中，化合物给药与另外的治疗方案结合。在一些实施方案中，所述另外的治疗方案选自化疗、骨髓移植和放疗。

一些实施方案包括鉴定治疗化合物的方法，包括：使靶细胞与包含gcsf受体激动剂的测试化合物接触，其中所述靶细胞包含突变型gcsf受体蛋白；以及确定测试化合物是否显著改变靶细胞中突变型gcsf受体的活性水平。一些此类实施方案还包括将靶细胞中突变型gcsf受体的活性水平和接触测试化合物的细胞中野生型gcsf受体蛋白的活性水平比较。一些此类实施方案还包括确定接触测试化合物的靶细胞中突变型gcsf受体的活性水平是否小于接触测试化合物的细胞中野生型gcsf受体蛋白的活性水平。

在一些实施方案中，突变型gcsf受体蛋白在蛋白的跨膜结构域中包含突变，或在靠近蛋白的跨膜结构域处包含突变。在一些此类实施方案中，突变选自对应于人gcsf受体蛋白的his-627处的残基的取代，和对应于小鼠gcsf受体蛋白的asp-602处的残基的取代。

在一些实施方案中，突变型gcsf受体包括突变型人gcsf受体。

在一些实施方案中，细胞包括哺乳动物细胞。在一些实施方案中，细胞包括人细胞。在一些实施方案中，细胞不为血细胞。

在非限制性的多个方面，本申请提供了以下示例性实施方案：

实施方案1.式(i)、(ii)、(iii)或(iv)的化合物、其互变异构体，或其药学可接受的盐：

其中：

r¹选自氢、or⁶、no2、cn、nr⁶r⁷、co2r⁶、c(＝o)nr⁶r⁷、so3r⁶、so2nr⁶r⁸、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c2-c6烯基、任意取代的c2-c6炔基、任意取代的c1-c6杂烷基、任意取代的c3-c6环烷基、任意取代的c3-c6环烯基、任意取代的c2-c6杂环基、任意取代的芳基烷基、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r²和r³独立地选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c2-c6烯基、任意取代的c2-c6炔基、任意取代的c1-c6杂烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c3-c8环烯基、任意取代的c1-c6杂环、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r⁴选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c2-c6烯基、任意取代的c2-c6炔基、任意取代的c1-c6杂烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c3-c8环烯基、任意取代的c1-c6杂环、任意取代的芳基、任意取代的杂芳基、任意取代的芳基烷基、任意取代的芳基烯基、任意取代的芳基炔基和任意取代的杂芳基烷基；

r⁵选自氢、卤素、no2、cn、cf3、or⁶、co2r⁶、c(＝o)nr⁶r⁷、so3r⁶和so2nr⁶r⁸、任意取代的芳基、任意取代的c1-c6烷基和任意取代的c1-c6杂烷基；

r⁶选自氢、任意取代的c1-c6烷基、c1-c6杂烷基、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r⁷选自氢、c(＝o)r⁸、c(＝o)nhr⁸、任意取代的c1-c6烷基和任意取代的c1-c6杂烷基；或者-nr⁶r⁷为通过氮环连接的任意取代的非芳香族杂环；

r⁸选自氢、任意取代的c1-c6烷基和任意取代的c1-c6杂烷基；

r⁹选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c2-c6烯基、任意取代的c2-c6炔基、任意取代的c1-c6杂烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c3-c8环烯基、任意取代的c1-c6杂环、任意取代的杂芳基、任意取代的芳基烷基、任意取代的芳基烯基、任意取代的芳基炔基、任意取代的杂芳基烷基、任意取代的杂芳基烯基和任意取代的杂芳基炔基；

q选自nr⁶、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c1-c6杂烷基和任意取代的非芳香族杂环；

l¹选自nh和chr²；

w选自o(氧)和nh；

x为n(氮)或cr²；

y选自任意取代的c1-c6烷基、c2-c6烯基、任意取代的c1-c6杂烷基、任意取代的c1-c6杂烯基、任意取代的苯烯基和任意取代的杂环基烯基；

z为o(氧)或s(硫)；

n为1、2或3；并且

附带条件为如果式i和iii中的r²为甲基、r⁴为苯基、l¹为nh，且q为n-ph-r¹，则式i和iii的r¹不选自卤素、烷基、取代的烷基、羧酸和羧酸酯。

实施方案2.如实施方案1所述的化合物、其互变异构体或其药学可接受的盐，所述化合物具有式(ia)的结构：

其中：

r¹选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c6环烷基、任意取代的c3-c6环烯基、任意取代的c2-c6杂环基、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r²和r³独立地选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c1-c6杂环、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r⁴选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c3-c8环烯基、任意取代的c1-c6杂环、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

q选自任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c8环烷基和任意取代的非芳香族杂环；并且

z为o(氧)或s(硫)。

实施方案3.如实施方案2所述的化合物，其中：

r¹选自氢和任意取代的c1-c6烷基；

r²和r³独立地选自氢和任意取代的c1-c6烷基；

r⁴选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

q选自任意取代的c1-c6烷基和任意取代的c3-c8环烷基；并且

z为o(氧)。

实施方案4.如实施方案3所述的化合物，其中：

r¹选自氢和任意取代的c1-c3烷基；

r²和r³独立地选自氢和任意取代的c1-c3烷基；

r⁴选自任意取代的c1-c6烷基和任意取代的芳基；并且

q选自任意取代的c1-c3烷基和任意取代的c3-c3环烷基。

实施方案5.如实施方案4所述的化合物，其中：

r¹为氢；

r²和r³独立地为任意取代的c1-c3烷基；

r⁴为任意取代的苯基；并且

q为任意取代的c1-c3烷基。

实施方案6.如实施方案1所述的化合物，其互变异构体或其药学可接受的盐，所述化合物具有式(iia)或(iib)的结构：

其中：

r³选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c1-c6杂环、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r⁴选自任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c1-c6杂环基、任意取代的芳基、任意取代的杂芳基、任意取代的芳基烷基和任意取代的杂芳基烷基；并且

r⁹选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c1-c6杂环基、任意取代的杂芳基、任意取代的芳基烷基和任意取代的杂芳基烷基。

实施方案7.如实施方案6所述的化合物，其中：

r³选自氢和任意取代的c1-c3烷基；

r⁴选自任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c8环烷基和任意取代的芳基；并且

r⁹选自任意取代的c1-c6烷基、任意取代的芳基烷基、任意取代的芳基烯基、任意取代的芳基炔基和任意取代的杂芳基烷基。

实施方案8.如实施方案7所述的化合物，其中：

r³为任意取代的c1-c3烷基；

r⁴选自任意取代的c1-c4烷基和任意取代的芳基；并且

r⁹选自任意取代的c1-c3烷基、任意取代的芳基烷基、任意取代的芳基烯基和任意取代的芳基炔基。

实施方案9.如实施方案1所述的化合物、其互变异构体或其药学可接受的盐，所述化合物具有式(iiia)的结构：

其中：

r¹选自氢、or⁶、nr⁶r⁷、co2r⁶、c(＝o)nr⁶r⁷、任意取代的c2-c6杂环基、任意取代的芳基烷基、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r²选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r⁴选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的芳基、任意取代的杂芳基、任意取代的芳基烷基和任意取代的杂芳基烷基；

r⁵选自氢、卤素、cn、cf3、or⁶、任意取代的芳基和任意取代的c1-c6烷基；

r⁶选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r⁷选自氢、c(＝o)r⁸、c(＝o)nhr⁸和任意取代的c1-c6烷基；或者-nr⁶r⁷为通过氮环连接的任意取代的非芳香族杂环；

r⁸选自氢和任意取代的c1-c6烷基；

q选自nr⁶、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c8环烷基和任意取代的非芳香族杂环基；

z为o(氧)或s(硫)；并且

n为1或2。

实施方案10.如实施方案9所述的化合物，其中：

r¹选自氢、or⁶、nr⁶r⁷、co2r⁶、c(＝o)nr⁶r⁷、任意取代的c2-c6杂环基、任意取代的芳基烷基、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r²选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r⁴选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的芳基、任意取代的杂芳基、任意取代的芳基烷基和任意取代的杂芳基烷基；

r⁵选自氢、卤素、cn、cf3、or⁶、任意取代的芳基和任意取代的c1-c6烷基；

r⁶选自氢和任意取代的c1-c6烷基；

r⁷选自氢、c(＝o)r⁸、c(＝o)nhr⁸和任意取代的c1-c6烷基；

r⁸选自氢和任意取代的c1-c6烷基；

q选自nr⁶、任意取代的c1-c4烷基、任意取代的c3-c6环烷基和任意取代的非芳香族杂环基；

z为o(氧)；并且

n为1。

实施方案11.如实施方案10所述的化合物，其中：

r¹选自氢、or⁶、nr⁶r⁷、c(＝o)nr⁶r⁷、任意取代的芳基烷基和任意取代的杂芳基；

r²选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r⁴为任意取代的芳基；

r⁵选自氢、氯、cn,cf3、or⁶、任意取代的芳基和任意取代的c1-c6烷基；

r⁶选自氢和任意取代的c1-c3烷基；

r⁷选自氢、c(＝o)r⁸、c(＝o)nhr⁸和任意取代的c1-c3烷基；

r⁸选自氢和任意取代的c1-c3烷基；并且

q选自任意取代的c1-c3烷基、任意取代的c3-c6环烷基和任意取代的非芳香族杂环基。

实施方案12.如实施方案1所述的化合物、其互变异构体或其药学可接受的盐，所述化合物具有式(iva)或(ivb)的结构：

其中：

r⁴选自任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c1-c6杂环基、任意取代的芳基、任意取代的杂芳基、任意取代的芳基烷基和任意取代的杂芳基烷基；

r⁵选自卤素、cn、cf3、or⁶、任意取代的芳基和任意取代的c1-c6烷基；

r⁶选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；并且

r⁹选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c1-c6杂环基、任意取代的杂芳基、任意取代的芳基烷基和任意取代的杂芳基烷基。

实施方案13.如实施方案12所述的化合物，其中

r⁴选自任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c8环烷基和任意取代的芳基；

r⁵选自氯、cn、cf3、or⁶、任意取代的芳基和任意取代的c1-c6烷基；

r⁶选自氢和任意取代的c1-c3烷基；

r⁹选自任意取代的c1-c6烷基、任意取代的芳基烷基、任意取代的芳基烯基、任意取代的芳基炔基和任意取代的杂芳基烷基，并且

n为1或2。

实施方案14.如实施方案13所述的化合物，其中：

r⁴选自任意取代的c1-c4烷基和任意取代的芳基；

r⁵选自氯、cn、cf3和任意取代的c1-c3烷基；

r⁹选自任意取代的c1-c3烷基、任意取代的芳基烷基、任意取代的芳基烯基和任意取代的芳基炔基；并且

n为1。

实施方案15.如实施方案1-14中任一项所述的化合物，其中，除非另有说明，标示为“任意取代的”基团被各自且独立地选自以下的一个或多个基团任意取代：c1-c6烷基、c2-c6烯基、c2-c6炔基、c1-c6杂烷基、c1-c6卤代烷基、c3-c6环烷基、芳基、芳基烷基、烯基o-、芳基烷基o-芳基烷基nh-烯基o-、环烷基c(＝o)-、芳基c(＝o)-、芳基c(＝o)nh-、芳基nhc(＝o)-、芳基(ch2)0-3o(ch2)0-3-、ho(ch2)1-3nh-、ho(ch2)1-3o-、ho(ch2)1-3-、ho(ch2)1-3o(ch2)1-3-、-c(＝o)nhnh2、杂芳基、非芳香族杂环、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、烷基硫、芳基硫、氰基、卤素、氧代、o-氨甲酰基、n-氨甲酰基、o-硫代氨甲酰基、n-硫代氨甲酰基、c-氨基、n-氨基、s-磺酰胺基、n-磺酰胺基、c-羧基、o-羧基、硝基和氨基。

实施方案16.如实施方案1-15中任一项所述的化合物，其中所述化合物为gcsf受体激动剂。

实施方案17.如实施方案1-15中任一项所述的化合物，其中所述化合物为gcsf受体部分激动剂。

实施方案18.药物组合物，其包含实施方案1-15中任一项所述的化合物和药学可接受的赋形剂。

实施方案19.治疗造血性或神经性病症的方法，包括将有效量的实施方案1-15中任一项所述的化合物给予有需要的对象。

实施方案20.如实施方案19所述的方法，其中所述病症选自粒细胞减少症、中性粒细胞减少症、肌萎缩性侧索硬化、多发性硬化、多发性营养失调和脊椎损伤。

实施方案21.如实施方案19所述的方法，其中给予所述化合物与另外的治疗方案联合。

实施方案22.如实施方案21所述的方法，其中所述另外的治疗方案选自化疗、骨髓移植和放疗。

实施方案23.治疗造血性或神经性病症的方法，包括将有效量的式(v)或(vi)的化合物或其药学可接受的盐给予有需要的对象，其中式(v)或(vi)具有结构：

其中：

r¹⁰选自任意取代的c1-c12烷基、任意取代的c1-c12杂烷基、任意取代的c2-c12杂烯基、任意取代的c2-c12杂炔基、任意取代的c1-c12环烷基、任意取代的c1-c6杂环烷基、任意取代的杂芳基烷基、任意取代的芳基杂烷基、任意取代的杂芳基杂烷基、or¹⁴、sr¹⁴和nr⁸r¹⁴；

r¹¹选自氢、卤素、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c1-c6杂烷基、任意取代的c3-c8环烷基和任意取代的c1-c6杂环；

r¹²选自任意取代的c1-c6杂烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c1-c6杂环、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r¹³选自氢、卤素、任意取代的c1-c8烷基、任意取代的c1-c8杂烷基、任意取代的c2-c8杂烯基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c1-c6杂环烷基、or¹⁴、sr¹⁴和nr⁸r¹⁴；

r¹⁴选自任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

v选自ch＝ch、n＝ch、ch＝n、nh、o(氧)和s(硫)；并且

n为1、2或3。

实施方案24.如实施方案23所述的方法，其中所述病症选自粒细胞减少症、中性粒细胞减少症、肌萎缩性侧索硬化、多发性硬化、多发性营养失调和脊椎损伤。

实施方案25.如实施方案23所述的方法，其中给予所述化合物与另外的治疗方案联合。

实施方案26.如实施方案25所述的方法，其中所述另外的治疗方案选自化疗、骨髓移植和放疗。

实施方案27.鉴定治疗化合物的方法，包括：

使靶细胞与包含gcsf受体激动剂的测试化合物接触，其中所述靶细胞包含突变型gcsf受体蛋白；和

测定所述测试化合物是否显著改变所述靶细胞中所述突变型gcsf受体的活性水平。

实施方案28.如实施方案27所述的方法，还包括将所述靶细胞中所述突变型gcsf受体的活性水平与接触了所述测试化合物的细胞中野生型gcsf受体蛋白的活性水平比较。

实施方案29.如实施方案28所述的方法，还包括测定接触了所述测试化合物的靶细胞中所述突变型gcsf受体的活性水平是否小于接触了所述化合物的细胞中野生型gcsf受体蛋白的活性水平。

实施方案30.如实施方案27所述的方法，其中所述突变型gcsf受体蛋白在所述蛋白的跨膜结构域包含突变，或在靠近所述蛋白的跨膜结构域处包含突变。

实施方案31.如实施方案30所述的方法，其中所述突变选自对应于人gcsf受体蛋白的his-627的残基处的取代，和对应于小鼠gcsf受体蛋白的asp-602的残基处的取代。

实施方案32.如实施方案27所述的方法，其中所述突变型gcsf受体包括突变型人gcsf受体。

实施方案33.如实施方案27所述的方法，其中所述细胞包括哺乳动物细胞。

实施方案34.如实施方案27所述的方法，其中所述细胞包括人细胞。

实施方案35.如实施方案27所述的方法，其中所述细胞不为血细胞。

实施方案36.化合物、其互变异构体或其药学可接受的盐，所述化合物具有结构：

附图说明

图1a是以stat3应答报告构建物转染并以多种浓度的rhgcsf、化合物x或对照处理的hepg2细胞中的相对荧光素酶活性的图。图1b是以stat5应答报告构建物转染并以多种浓度的rhgcsf、化合物x或对照处理的hek293细胞中的荧光素酶活性的图。平均rlu(一式双份)±sd。

图2a和图2b是以stat5应答报告构建物以及hgcsfr、htpor或hepor表达载体构建物转染，并以rhgcsf、化合物x或对照处理的hek293细胞中的相对荧光素酶活性的图。均值(一式三份)±sd。

图3a是以rhgcsf或化合物x处理的utp-hgcsfr稳定细胞生存力的相对荧光素酶活性的图。图3b和图3c描绘了以rhgcsf或化合物x处理的utp-hgcsfr稳定细胞中stat5磷酸化(上图)或stat3磷酸化(下图)的诱导倍数的图。均值(一式双份)±sd。

图4是显示以多种浓度的rhgcsf、化合物x或rhgcsf和化合物x处理的cd34+人骨髓细胞中cd15的相对表达的图。

图5是来自不同物种的gcsfr的跨膜结构域的氨基酸序列的示意性比较。化合物x在表达人和猴gcsfr，但非小鼠、豚鼠和兔受体的细胞中具有活性。

图6a和6b是以多种浓度的rhgcsf、化合物x或对照处理，并以多种表达载体转染的细胞中的相对stat3应答荧光素酶报告子活性的图。图6a：左图：hgcsfr；右图：hgcsfr-h627n。图6b：左图：mgcsfr；右图：mgcsfr-n607h。

图7是显示utp-hgcsfr细胞中化合物x与hgcsfr的变构结合的图。化合物x未取代[¹²⁵i]rhgcsf，并且[¹²⁵i]rhgcsf的结合以浓度依赖性方式增强。

发明的详细描述

一些实施方案包括调节粒细胞集落刺激因子受体(gcfr)活性的组合物，及调节粒细胞集落刺激因子受体(gcfr)活性的化合物的应用或鉴定方法。一些实施方案包括使用化合物治疗某些病症如造血性或神经性病症。

某些实施方案包括式(i)、(ii)、(iii)或(iv)的化合物、其互变异构体或其药学可接受的盐：

其中：

r¹选自氢、or⁶、no2、cn、nr⁶r⁷、co2r⁶、c(＝o)nr⁶r⁷、so3r⁶、so2nr⁶r⁸、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c2-c6烯基、任意取代的c2-c6炔基、任意取代的c1-c6杂烷基、任意取代的c3-c6环烷基、任意取代的c3-c6环烯基、任意取代的c2-c6杂环基、任意取代的芳基烷基、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r²和r³独立地选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c2-c6烯基、任意取代的c2-c6炔基、任意取代的c1-c6杂烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c3-c8环烯基、任意取代的c1-c6杂环、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r⁴选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c2-c6烯基、任意取代的c2-c6炔基、任意取代的c1-c6杂烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c3-c8环烯基、任意取代的c1-c6杂环、任意取代的芳基、任意取代的杂芳基、任意取代的芳基烷基、任意取代的芳基烯基、任意取代的芳基炔基和任意取代的杂芳基烷基；

r⁵选自氢、卤素、no2、cn、cf3、or⁶、co2r⁶、c(＝o)nr⁶r⁷、so3r⁶和so2nr⁶r⁸、任意取代的芳基、任意取代的c1-c6烷基和任意取代的c1-c6杂烷基；

r⁶选自氢、任意取代的c1-c6烷基、c1-c6杂烷基、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r⁷选自氢、c(＝o)r⁸、c(＝o)nhr⁸、任意取代的c1-c6烷基和任意取代的c1-c6杂烷基；或者-nr⁶r⁷为通过氮环连接的任意取代的非芳香族杂环；

r⁸选自氢、任意取代的c1-c6烷基和任意取代的c1-c6杂烷基；

r⁹选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c2-c6烯基、任意取代的c2-c6炔基、任意取代的c1-c6杂烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c3-c8环烯基、任意取代的c1-c6杂环、任意取代的杂芳基、任意取代的芳基烷基、任意取代的芳基烯基、任意取代的芳基炔基、任意取代的杂芳基烷基、任意取代的杂芳基烯基和任意取代的杂芳基炔基；

q选自nr⁶、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c1-c6杂烷基和任意取代的非芳香族杂环；

l¹选自nh和chr²；

w选自o(氧)和nh；

x为n(氮)或cr²；

y选自任意取代的c1-c6烷基、c2-c6烯基、任意取代的c1-c6杂烷基、任意取代的c1-c6杂烯基、任意取代的苯烯基和任意取代的杂环基烯基；

z为o(氧)或s(硫)；

n为1、2或3；并且

条件是如果式i和iii中r²为甲基、r⁴为苯基、l¹为nh，并且q为n-ph-r¹，则式i和iii的r¹不选自卤素、烷基、取代的烷基、羧酸和羧酸酯。

某些实施方案包括治疗造血性或神经性病症的方法，包括将有效量的式(v)或(vi)的化合物或其药学可接受的盐给予有需要的对象，其中式(v)或(vi)具有结构：

其中：

r¹⁰选自任意取代的c1-c12烷基、任意取代的c1-c12杂烷基、任意取代的c2-c12杂烯基、任意取代的c2-c12杂炔基、任意取代的c1-c12环烷基；任意取代的c1-c6杂环烷基、任意取代的杂芳基烷基、任意取代的芳基杂烷基、任意取代的杂芳基杂烷基、or¹⁴、sr¹⁴和nr⁸r¹⁴；

r¹¹选自氢、卤素、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c1-c6杂烷基、任意取代的c3-c8环烷基和任意取代的c1-c6杂环；

r¹²选自任意取代的c1-c6杂烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c1-c6杂环、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r¹³选自氢、卤素、任意取代的c1-c8烷基、任意取代的c1-c8杂烷基、任意取代的c2-c8杂烯基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c1-c6杂环烷基、or¹⁴、sr和nr⁸r¹⁴；

r¹⁴选自任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

v选自ch＝ch、n＝ch、ch＝n、nh、o(氧)和s(硫)；并且

n为1、2或3。

在某些实施方案中，式i、ii、iii,、iv、v和vi的化合物为gcsfr激动剂。在一些此类实施方案中，式i、ii、iii、iv、v和vi的化合物为hgcsfr激动剂。

本文提供的化合物可以具有多种功能。例如，在某些实施方案中，式i、ii、iii、iv、v和vi的化合物为gcsfr部分激动剂。在一些此类实施方案中，式i、ii、iii、iv、v和vi的化合物为hgcsfr部分激动剂。在某些实施方案中，提供了选择性gcsfr调节剂。在某些实施方案中，提供了选择性gcsf受体激动剂。在某些实施方案中，提供了选择性gcsfr部分激动剂。在某些实施方案中，提供了选择性gcsf受体结合化合物。在某些实施方案中，选择性gcsfr调节剂为针对gcsf受体的激动剂、部分激动剂和/或拮抗剂。

定义

除非提供了明确的定义，联合本文描述的分析化学、合成有机化学和医学和药物化学使用的术语及其实验方案和技术为本领域已知的那些。标准化学符号与此类符号所代表的全称可互换使用。因此，例如，术语“氢”和“h”应当理解为具有相同的含义。标准技术可用于化学合成、化学分析、药物制备、配制和递送及治疗患者。标准技术可用于重组dna、寡核苷酸合成和组织培养及转化(例如，电穿孔、脂质转染)。例如，可根据厂商说明书使用试剂盒进行反应和纯化技术，或按本领域或本文所述常规完成。一般可根据本领域熟知的以及各种通用的和本说明书全篇中引用和论述的更具体的参考文献中描述的常规方法进行前述技术和方案。参见例如，sambrooketal.molecularcloning:alaboratorymanual(2ded.,coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor,n.y.(1989))，其通过引用以其整体并入本文，用于任何目的。

术语“选择性结合化合物”指选择性结合一种或多种靶标的任何部分的化合物。

术语“结合位点选择性hgcsfr激活剂”指在tm结构域处或其附近选择性结合hgcsf受体的化合物。

术语“选择性结合”指选择性结合化合物以比其结合非靶标受体更大的亲和力结合靶标受体的能力。在某些实施方案中，选择性结合指以针对非靶标的亲和力的至少10、50、100、250、500或1000倍的亲和力结合靶标。

术语“靶标受体”指能被选择性结合化合物结合的受体或受体的一部分。在某些实施方案中，靶标受体为hgcsf受体。

术语“调节剂”指能改变活性的化合物。例如，相比无调节剂存在时活性的大小，调节剂能引起某活性大小增加或减少。在某些实施方案中，调节剂为抑制剂，其减少一种或多种活性的大小。在某些实施方案中，抑制剂完全阻止一种或多种生物活性。在某些实施方案中，调节剂为激活剂，其增加至少一种活性的大小。在某些实施方案中，调节剂的存在引起调节剂不存在时不发生的活性。

术语“选择性调节剂”指选择性调节靶标活性的化合物。

术语“选择性hgcsfr调节剂”指选择性调节hgcsfr活性的化合物。术语选择性hgcsfr调节剂包括但不限于“hgcsf模拟物”，其指存在时引起类似的gcsf活性的化合物。

术语“选择性调节”指选择性调节剂调节靶标活性的程度大于其调节非靶标活性的能力。

术语“靶标活性”指能被选择性调节剂调节的生物活性。某些示例性靶标活性包括但不限于结合亲和力、信号转导、酶活性、前体细胞增殖和/或分化、白细胞生成以及疾病或疾病状况症状的缓解。

术语“gcsf活性”指由gcsf存在直接或间接产生的生物活性。示例性gcsf活性包括但不限于前体细胞增殖和/或分化产生白细胞；造血；胶质细胞的生长和/或发育；神经细胞修复；和粒细胞减少症的缓解。

术语“受体介导的活性”指由配体与受体结合直接或间接产生的任何生物活性。

术语“激动剂”指这样的化合物：其存在导致的受体生物活性与由受体的天然存在的配体的存在所产生的生物活性相同。

术语“部分激动剂”指这样的化合物：其存在导致的受体生物活性与由受体天然存在的配体的存在所产生的生物活性类型相同、但量级更低。

术语“拮抗剂”指这样的化合物：其存在导致受体的生物活性大小减低。在某些实施方案中，拮抗剂的存在导致受体的生物活性完全抑制。

术语“烷基”指分支的或未分支的完全饱和的无环脂肪族烃基。烷基可为支链或直链。烷基可为取代的或未取代的。烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基等，其中每中均可以是任意取代的。

在某些实施方案中，烷基包含1-20个碳原子(无论何时其在本文中出现时，数值范围如“1-20”指给定范围中的每个整数；例如“1-20个碳原子”指烷基可包含仅1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子等，多达包括20个碳原子，尽管术语“烷基”还包括未指定碳原子的数值范围的情形)。烷基可被指定为“c1-c6烷基”或类似指定。仅通过实例，“c1-c4烷基”指具有1个、2个、3个或4个碳原子的烷基，例如，烷基选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基。

本文所用的术语“烯基”指含有至少一个碳-碳双键的2-20个碳原子的单价直链或支链脂肪族烃基，包括但不限于1-丙烯基、2-丙烯基、2-甲基-l-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基等。在某些实施方案中，烯基包含2-20个碳原子(无论何时其在本文中出现时，数值范围如“2-20”指给定范围中的每个整数；例如“2-20个碳原子”指烯基可包含仅2个碳原子、3个碳原子等，多达包括20个碳原子，尽管术语“烯基”还包括未指定碳原子的数值范围的情形)。烯基可被指定为“c2-c6烯基”或类似指定。仅通过实例，“c2-c4烯基”指具有2个、3个或4个碳原子的烯基，例如，烯基选自乙烯基、丙烯基和丁烯基。

本文所用的术语“炔基”指含有至少1个碳-碳三键的2-20个碳原子的单价直链或支链脂肪族烃基，包括但不限于1-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基等。在某些实施方案中，炔基包含2-20个碳原子(无论何时其在本文中出现时，数值范围如“2-20”指给定范围中的每个整数；例如“2-20个碳原子”指炔基可包含仅2个碳原子、3个碳原子等，多达包括20个碳原子，尽管术语“炔基”还包括未指定碳原子的数值范围的情形)。炔基可被指定为“c2-c6炔基”或类似指定。仅通过实例，“c2-c4炔基”指具有2个、3个或4个碳原子的烯基，例如，烯基选自乙炔基、丙炔基和丁炔基。

本文所用的术语“环烷基”指具有3-20个碳原子的饱和脂肪族环体系基团。环烷基指单环和多环饱和脂肪族环体系，包括但不限于环丙基、环戊基、环己基、环庚基、二环[4.4.0]癸烷基、二环[2.2.1]庚烷基、金刚烷基、降冰片基(norbornyl)等。在某些实施方案中，环烷基包含3-20个碳原子(无论何时其在本文中出现时，数值范围如“3-20”指给定范围中的每个整数；例如“3-20个碳原子”指环烷基可包含仅3个碳原子等，多达包括20个碳原子，尽管术语“环烷基”还包括未指定碳原子的数值范围的情形)。环烷基可被指定为“c3-c7环烷基”或类似指定。仅通过实例，“c3-c6环烷基”指具有2个、3个、4个、5个或6个碳原子的烯基，例如环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基和环己基。

本文所用的术语“环烯基”指环中具有至少一个碳-碳双键的具有3-20个碳原子的脂肪族环体系基团。环烯基指单环和多环不饱和脂肪族环体系，包括但不限于环丙烯基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基、二环[3.1.0]己基、降冰片烯基、1,1’-二环戊烯基等。在某些实施方案中，环烯基包含3-20个碳原子(无论何时其在本文中出现时，数值范围如“3-20”指给定范围中的每个整数；例如“3-20个碳原子”指环烯基可包含仅3个碳原子等，多达包括20个碳原子，尽管术语“环烯基”还包括未指定碳原子的数值范围的情形)。环烯基可被指定为“c3-c7环烯基”或类似指定。仅通过实例，“c3-c3环烯基”指具有2个、3个、4个、5个或6个碳原子的烯基，例如，环烷基选自环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基和环己烯基。

术语“杂烷基”指包含烷基和一个或多个杂原子的基团。某些杂烷基为酰烷基，其中一个或多个杂原子位于烷基链中。杂烷基的实例包括但不限于ch3c(＝o)ch2-、ch3c(＝o)ch2ch2-、ch3ch2c(＝o)ch2ch2-、ch3c(＝o)ch2ch2ch2-、ch3och2ch2-、ch3nhch2-等。

本文所用的术语“烷氧基”指通过--o--连接与母体分子共价结合的直链或支链烷基。烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基等。烷氧基可被指定为“c1-c6烷氧基”或类似指定。仅通过实例，“c1-c4烷氧基”指具有1个、2个、3个或4个碳原子的烷基，例如烷氧基选自甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。

术语“烯烃”指c＝c键。

本文所用的术语“亚烷基氨基”指含有至少一个碳-氮双键的1-20个碳原子基团，其中所述基团通过氮与主要基团相连，包括但不限于亚甲基氨基、亚乙基氨基、甲基亚乙基氨基、亚丙基氨基、1-甲基亚丙基氨基、2-甲基亚丙基氨基、亚丁基氨基、1-甲基亚丁基氨基、2-甲基亚丁基氨基、环亚丙基氨基、环亚丁基氨基、环亚戊基氨基、环亚己基氨基等。

术语“碳环”指包含共价闭环的基团，其中形成环的每个原子为碳原子。碳环可由3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或多于9个碳原子形成。碳环可以是任意取代的。

术语“杂环”指包含共价闭环的基团，其中形成环的至少1个原子为杂原子。杂环可由3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或多于9个碳原子形成。那些原子的任何数目可为杂原子(即，杂环可包含1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或多于9个杂原子)。在包含2个或更多个杂原子的杂环中，那2个或更多个杂原子可彼此相同或不同。杂环可以是任意取代的。与杂环的结合可位于杂原子处，或通过碳原子结合。例如，可通过苯环型环的碳来结合苯并稠合衍生物。杂环的实例包括但不限于以下：

其中d、e、f和g独立地表示杂原子。d、e、f和g中的每个可彼此相同或不同。

术语“杂原子”指除碳或氢外的原子。杂原子通常独立地选自氧、硫、氮和磷，但不限于那些原子。在其中存在2个或更多个杂原子的实施方案中，2个或更多个杂原子可都为彼此相同的，或2个或更多个杂原子中的一些或所有可各自与其他的不同。

术语“芳香族的”指包含具有非定域化的π-电子系统的共价闭环的基团。芳香族环可由5个、6个、7个、8个、9个或多于9个原子形成。芳香族类可为任意取代的。芳基的实例包括但不限于苯基、萘基、菲基、蒽基、四氢萘基(tetralinyl)、芴基、茚基和二氢茚基。术语芳香族的包括例如，苯环型基团，其通过成环的碳原子中的一个连接，且任意携带选自以下的一个或多个取代基：芳基、杂芳基、环烷基、非芳香族杂环、卤素、羟基、氨基、氰基、硝基、烷基氨基、酰基、c1-6烷氧基、c1-6烷基、c1-6羟基烷基、c1-6氨基烷基、c1-6烷基氨基、烷基亚磺基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、氨磺酰基或三氟甲基。在某些实施方案中，芳基在对位、间位和/或邻位中的一个或多个位置处被取代。包含取代的芳基的实例包括但不限于苯基、3-卤代苯基、4-卤代苯基、3-羟基苯基、4-羟基苯基、3-氨基苯基、4-氨基苯基、3-甲基苯基、4-甲基苯基、3-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、4-三氟甲氧基苯基、3-氰基苯基、4-氰基苯基、二甲基苯基、萘基、羟基萘基、羟基甲基苯基、(三氟甲基)苯基、烷氧基苯基、4-吗啉-4-基苯基、4-吡啶-1-基苯基、4-吡唑基苯基、4-三唑基苯基和4-(2-氧吡啶-1-基)苯基。

术语“芳基”指其中形成环的每个原子均为碳原子的芳基。芳环可由5个、6个、7个、8个、9个或多于9个原子形成。芳基可以是任意取代的。

术语“杂芳基”指其中形成芳环的至少一个原子为杂原子的芳基。杂芳基环可由3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或多于9个原子形成。杂芳基可以是任意取代的。杂芳基的实例包括但不限于包含1个氧或硫原子或者多达4个氮原子，或1个氧或硫原子与多达2个氮原子的组合的芳香族c3-8杂环基团，以及其取代的及苯并稠合衍生物和吡啶并稠合衍生物，例如，通过成环碳原子中的一个连接的衍生物。在某些实施方案中，杂芳基被一个或多个取代基任意取代，所述取代基独立地选自卤素、羟基、氨基、氰基、硝基、烷基氨基、酰基、c1-6-烷氧基、c1-6-烷基、c1-6-羟基烷基、c1-6-氨基烷基、c1-6-烷基氨基、烷基亚磺基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、氨磺酰基或三氟甲基。杂芳基的实例包括但不限于以下的未取代的和单或双取代衍生物：呋喃、苯并呋喃、噻吩、苯并噻吩、吡咯、吡啶、吲哚、恶唑、苯并恶唑、异恶唑、苯异恶唑、噻唑、苯并噻唑、异噻唑、咪唑、苯并咪唑、吡唑、吲唑、四唑、喹啉、异喹啉、哒嗪、嘧啶、嘌呤和吡嗪、呋咱、1,2,3-恶二唑、1,2,3-噻二唑、1,2,4-噻二唑、三唑、苯并三唑、蝶啶、吩恶唑(phenoxazole)、恶二唑、苯并吡唑、喹嗪、噌啉、酞嗪、喹唑啉和喹喔啉。在一些实施方案中，取代基为卤素、羟基、氰基、o-c1-6-烷基、c1-6-烷基、羟基-c1-6-烷基和氨基-c1-6-烷基。

术语“非芳香族环”指包含不具有非定域化的π-电子系统的共价闭环的基团。

术语“非芳香族杂环”指包含其中一个或多个成环原子为杂原子的非芳香族环的基团。非芳香族杂环可由3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或多于9个原子形成。非芳香族杂环可以为任意取代的。在某些实施方案中，非芳香族杂环包含一个或多个羰基或硫代羰基，如含氧和硫的基团。非芳香族杂环的实例包括但不限于内酰胺、内酯、环亚胺、环硫亚胺、环氨基甲酸酯、四氢噻喃、4h-吡喃、四氢吡喃、哌啶、1,3-二氧杂芑、1,3-二氧己环、1,4-二氧杂芑、1,4-二氧己环、哌嗪、1,3--氧硫杂环己烷(1,3-oxathiane)、1,4-氧硫杂环己二烯(1,4-oxathiin)、1,4-氧硫杂环己烷、四氢-l,4-噻嗪、2h-1,2-恶嗪、马来酰亚胺、琥珀酰亚胺、巴比妥酸,、硫巴比妥酸、二氧哌嗪、乙内酰脲、二氢尿嘧啶、吗啉、三恶烷、六氢-l,3,5-三嗪、四氢噻吩、四氢呋喃、吡咯啉、吡咯烷、吡咯烷酮、吡咯烷二酮(pyrrolidione)、吡唑啉、吡唑烷、咪唑啉、咪唑烷、1,3-间二氧杂环戊烯(1,3-dioxole)、1,3-二氧戊环、1,3-二硫杂环戊二烯(1,3-dithiole)、1,3-二硫戊环、异恶唑啉、异恶唑烷、恶唑啉、恶唑烷、恶唑烷酮、噻唑啉、噻唑烷和1,3-恶噻烷。

术语“芳基烷基”指包含与烷基结合的芳基的基团。

术语“芳基烯基”指包含与烯基结合的芳基的基团。

术语“芳基炔基”指包含与炔基结合的芳基的基团。

术语“杂芳基烷基”指包含与烷基结合的杂芳基的基团。

术语“杂芳基烯基”指包含与烯基结合的杂芳基的基团。

术语“杂芳基炔基”指包含与炔基结合的杂芳基的基团。

术语“碳环烷基”指包含碳环环烷基环的基团。碳环烷基环可由3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或多于9个碳原子形成。碳环烷基可以是任意取代的。

术语“环”指任何共价闭合结构。环包括例如，碳环类(例如，芳基和环烷基)、杂环类(例如，杂芳基和非芳香族杂环)、芳香族类(例如，芳基和杂芳基)，以及非芳香族类(例如，环烷基和非芳香族杂环)。环可以是任意取代的。环可形成环体系的一部分。

术语“环体系”指单环或两个或更多个环，其中，如果存在两个或更多个环，则两个或更多个环是融合的。术语“融合的”指其中两个或更多个环共用一个或多个键的结构。

如本文所用，术语“连接形成环”指这样的情形：其中与单个原子或最终自己结合的多个原子结合的两个原子，各自与连接基团结合，以便产生的结构形成环。该产生的环包含连接形成环的两个原子、先前连接那些原子的原子(或多个原子)和连接臂。例如，如果以下的a和e“连接形成环”：则产生的环包含a、e、它们连接的c(碳)或n(氮)，以及连接基团。除非另外指出，连接基团可为任何长度，且可以为任意取代的。参照以上实例，产生的结构包括但不限于：

等。

在某些实施方案中，一起形成环的两个取代基不直接与相同的原子结合。例如，如果以下的a和e连接形成环：则产生的环包含a、e、已经连接a和e的2个原子，以及连接基团。产生的结构的实例包括但不限于：

等。

在某些实施方案中，一起形成环的原子被3个或更多个原子分开。例如，如果以下的a和e连接形成环：

则产生的环包含a、e、已经连接a和e的3个原子，以及连接基团。产生的结构的实例包括但不限于：

等。

如本文所用，术语“一起形成键”指这样的情形：其中两个邻近原子的取代基为空(null)，邻近原子间的键成为双键。例如，如果以下的a和e“一起形成键”则产生的结构为：

术语“空”指结构中不存在基团。例如，在结构中，其中在某些情形下，x为n(氮)，如果x为n(氮)，则r’或r”中的一个为空，意指仅3个基团与n(氮)结合。

独自出现取代基“r”且无数字标示指取代基选自烷基、环烷基、芳基、杂芳基(通过碳环键合)和非芳香族杂环(通过碳环键合)。

术语“o-羧基”指由式rc(＝o)o-组成的基团。

术语“c-羧基”指由式-c(＝o)or组成的基团。

术语“乙酰基”指由式-c(＝o)ch3组成的基团。

术语“三卤代甲烷磺酰基”指由式x3cs(＝o)2-组成的基团，其中x为卤素。

术语“氰基”指由式-cn组成的基团。

术语“异氰酰基”指由式-nco组成的基团。

术语“硫代氰酰基”指由式-cns组成的基团。

术语“异硫代氰酰基”指由式-ncs组成的基团。

术语“磺酰基”指由式-s(＝o)-r组成的基团。

术语“s-磺酰胺基”指由式-s(＝o)2nr组成的基团。

术语“n-磺酰胺基”指由式rs(＝o)2nh-组成的基团。

术语“三卤代甲烷磺酰胺基”指由式x3cs(＝o)2nr-组成的基团。

术语“o-氨甲酰基”指由式-oc(＝o)-nr组成的基团。

术语“n-氨甲酰基”指由式roc(＝o)nh-组成的基团。

术语“o-硫代氨甲酰基”指由式-oc(＝s)-nr组成的基团。

术语“n-硫代氨甲酰基”指由式roc(＝s)nh-组成的基团。

术语“c-氨基”指由式-c(＝o)-nr2组成的基团。

术语“n-氨基”指由式rc(＝o)nh-组成的基团。

术语“氧代”指由式＝o组成的基团。

本文所用的术语“酮”和“羰基”指c＝o。

本文所用的术语“硫代羰基”指c＝s。

术语“酯”指具有式-(r)n-c(＝o)or'的化学基团，其中r和r'独立地选自烷基、环烷基、芳基、杂芳基(通过碳环键合)，以及非芳香族杂环(通过碳环键合)，其中n为0或1。

术语“酰胺基”指具有式-(r)n-c(＝o)nhr'或-(r)n-nhc(＝o)r'的化学基团，其中r选自烷基、环烷基、芳基、杂芳基(通过碳环键合)，以及杂脂环类(通过碳环键合)，其中n为0或1，并且r'选自氢、烷基、环烷基、芳基、杂芳基(通过碳环键合)，以及杂脂环类(通过碳环键合)，其中n为0或1。在某些实施方案中，酰胺基可为氨基酸或肽。

术语“氨基”指具有式-nhr'r"的化学基团，其中r'和r"各自独立地选自氢、烷基、环烷基、芳基、杂芳基(通过碳环键合)和杂脂肪类(通过碳环键合)。

术语“胺”、“羟基”和“羧基”包括已酯化或酰胺化的此类基团。用于实现酯化和酰胺化的方案和特定基团为本领域技术人员熟知，且可容易地在参考文献中找到，如greeneandwuts,protectivegroupsinorganicsynthesis,3^rded.,johnwiley&sons,newyork,ny,1999，其以其整体并入本文中。

除非另有所指，术语“任意取代的”指其中0个、1个或多于1个氢原子被各自且独立地选自以下的一个或多个基团取代的基团：烷基、烯基、环烯基、炔基、杂烷基、卤代烷基、环烷基、芳基、芳基烷基、烯基o-、芳基烷基o-、芳基烷基nh-、烯基o-、环烷基c(＝o)-、芳基c(＝o)-、芳基c(＝o)nh-、芳基nhc(＝o)-、芳基(ch2)0-30(ch2)0-3-,-cooh、ho(ch2)1-3nh-、ho(ch2)1-3o-、ho(ch2)1-3-、ho(ch2)1-3o(ch2)1-3-、-c(＝o)nhnh2、杂芳基、非芳香族杂环、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、烷基硫、芳基硫、氰基、卤素、羰基、氧代、硫代羰基、o-氨甲酰基、n-氨甲酰基、o-硫代氨甲酰基、n-硫代氨甲酰基、c-氨基、n-氨基、s-磺酰胺基、n-磺酰胺基、c-羧基、o-羧基、异氰酰基、硫代氰酰基、异硫代氰酰基、硝基、甲硅烷基、三卤代甲烷磺酰基和氨基，包括单取代和双取代的氨基，以及氨基的保护性衍生物。此类保护性衍生物(和可形成此类保护性衍生物的保护性基团)为本领域技术人员已知，且可在参考文献中找到，如greeneandwuts,同上。当基团含有氮或硫时，氧作为取代基还包括氧化物，例如吡啶-n-氧化物、噻喃亚砜和硫代吡喃-s,s-二氧化物。在其中两个或更多个氢原子被取代的实施方案中，取代基可一起形成环。

术语“异构体”包括但不限于立体异构体、几何异构体、对映体异构体、互变异构体和光学异构体。

在整个说明书中，本领域技术人员可选择基团及其取代基以提供稳定的基团和化合物。

术语“载体”指促进另一化合物并入细胞或组织中的化合物。例如，二甲亚砜(dmso)是用于增加某些有机化合物并入细胞或组织中的常用载体。

术语“药剂”指能在患者中诱导所需治疗效果的化合物或组合物。在某些实施方案中，药剂包含活性剂，其为诱导所需治疗效果的试剂。在某些实施方案中，药剂包含前药。在某些实施方案中，药剂包含非活性成分，如载体、赋形剂等。

术语“治疗有效量”指足以获得所需治疗效果的药剂量。

术语“前药”指在体内从较少活性形式转化成对应的较多活性形式的药剂。

术语“药学可接受的”指在将配制的化合物给予患者时不显著消除化合物的生物活性、药理学活性和/或其他性能的化合物制剂。在某些实施方案中，药学可接受的制剂不对患者造成显著性刺激。

术语“共给药”指给予患者多于一种药剂。在某些实施方案中，共给予的药剂以其单一剂量形式一起给药。在某些实施方案中，共给予的药剂分开给药。在某些实施方案中，共给予的药剂同时给药。在某些实施方案中，共给予的药剂在不同的时间给药。

术语“患者”包括人和动物对象。

术语“基本上纯的”指目标物质(例如化合物)是存在的主要物质(即，基于摩尔，其比组合物中任何其他的单独物质更为丰富)。在某些实施方案中，基本上纯的部分为这样的成分：其中目标物质组成所有存在物质的至少约50％(基于摩尔)。在某些实施方案中，基本上纯的成分组成组合物中所有存在物质的约80％、85％、90％、95％或99％以上。在某些实施方案中，目标物质被纯化至基本上同质(组合物中的污染物质不能通过常规检测方法检测到)，其中组合物基本上由单一物质组成。

术语“组织选择性”指化合物在一种组织中调节的生物活性比其在另一组织中调节的生物活性程度更大或更小的能力。不同组织中的生物活性可为相同的，或者它们可为不同的。不同组织中的生物活性可由相同类型的靶标受体介导。例如，在某些实施方案中，组织选择性化合物可在一种组织中调节受体介导的生物活性，而在另一组织类型中不能调节受体介导的生物活性，或调节的程度较小。

术语“监测”指观察效应或无任何效应。在某些实施方案中，在使那些细胞与本实施方案的化合物接触后监测细胞。可监测的效应的实例包括但不限于细胞表型、细胞增殖、受体活性或受体和已知能结合该受体的化合物间的相互作用的改变。

术语“细胞表型”指物理或生物特征。构成表型的特征实例包括但不限于细胞大小、细胞增殖、细胞分化、细胞存活、细胞凋亡(细胞死亡)或代谢性营养物的利用(例如，葡萄糖摄取)。可使用本领域已知的技术容易地监测细胞表型的某些变化或无变化。

术语“细胞增殖”指细胞分裂速率。在某些实施方案中，细胞原位位于生物体中。在某些实施方案中，细胞体外生长在容器中。本领域技术人员可定量容器中生长的细胞数目(例如，通过使用显微镜对限定区域中的细胞计数或通过使用测量合适培养基中的细胞密度的实验室装置)。本领域技术人员可通过两次或更多次测定细胞数目计算细胞增殖。

术语“接触”指使两种或更多种物质靠的足够近，以便它们能相互作用。在某些实施方案中，接触可在容器如试管、陪替氏培养皿等中完成。在某些实施方案中，接触可在另外的物质存在下进行。在某些实施方案中，接触可在细胞存在下进行。在某些此类实施方案中，接触的一种或多种物质可在细胞内。细胞可为活的或可为死的。细胞可以是或不是完整的。

在某些实施方案中，提供了对应于本文提供的化合物中的任何一种的盐。在某些实施方案中，提供了对应于选择性gcsfr调节剂的盐。在某些实施方案中，提供了对应于选择性gcsf受体结合剂的盐。在某些实施方案中，盐通过使化合物与酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等反应获得。在某些实施方案中，盐通过使化合物与碱反应形成盐获得，如铵盐、碱金属盐如钠盐或钾盐、碱土金属盐如钙盐或镁盐、有机碱(如胆碱、二环己基胺、n-甲基-d-葡糖胺、三(羟基甲基)甲基胺、4-(2-羟基乙基)-吗啉、1-(2-羟基乙基)-吡咯烷、乙醇胺)的盐，以及氨基酸如精氨酸、赖氨酸的盐等。在某些实施方案中，盐通过使游离酸形式的选择性hgf调节剂或选择性gcsfr结合剂与多摩尔当量的碱反应获得，如二钠、二乙醇胺等。

在某些实施方案中，对应于本实施方案的化合物的盐选自乙酸盐、铵盐、苯磺酸盐、苯酸盐、重碳酸盐、重硫酸盐、重酒石酸盐、硼酸盐、溴化物、乙二胺四乙酸钙、樟脑磺酸盐(camsylate)、碳酸盐、氯化物、胆碱酸盐(cholinate)、克拉维酸盐、柠檬酸盐、二盐酸化物、二磷酸盐、乙二胺四乙酸盐、乙二磺酸盐、依托酸盐(estolate)、乙磺酸盐(esylate)、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、乙醇酰砷酸盐、己基间苯二酚盐(hexylresorcinate)、哈巴胺盐(hydrabanine)、氢溴酸盐、盐酸盐、羟基萘甲酸酯、碘化物、羟乙磺酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、月硅酸盐、镁盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、半乳糖二酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、n-甲基葡糖胺、草酸盐、双羟萘酸盐(embonate)、棕榈酸盐、泛酸盐、磷酸盐、聚半乳糖醛酸盐、钾盐、水杨酸盐、钠盐、硬脂酸盐、次乙酸盐(subaceatate)、琥珀酸盐、硫酸盐、单宁酸盐、酒石酸盐、茶氯酸盐(teoclate)、甲苯磺酸盐、三乙基碘化物(triethiodide)、氨基丁三醇、三甲基铵盐和戊酸盐。

在某些实施方案中，本实施方案化合物的一个或多个碳原子被硅取代。参见例如wo03/037905a1；tackeandzilch,endeavour,newseries,10,191-197(1986)；bainsandtacke,curr.opin.drugdiscovdevel.jul:6(4):526-43(2003)，其均通过引用以其整体并入本文中。在某些实施方案中，包含一个或多个硅原子的化合物具有某些所需的性质，包括但不限于与无碳原子被硅原子取代的相同的化合物相比时，在患者中较大的稳定性和/或较长的半衰期。

某些化合物

某些实施方案包括式(i)、(ii)、(iii)或(iv)的化合物、其互变异构体或其药学可接受的盐，：

其中：

r¹选自氢、or⁶、no2、cn、nr⁶r⁷、co2r⁶、c(＝o)nr⁶r⁷、so3r⁶、so2nr⁶r⁸、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c2-c6烯基、任意取代的c2-c6炔基、任意取代的c1-c6杂烷基、任意取代的c3-c6环烷基、任意取代的c3-c6环烯基、任意取代的c2-c6杂环基、任意取代的芳基烷基、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r²和r³独立地选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c2-c6烯基、任意取代的c2-c6炔基、任意取代的c1-c6杂烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c3-c8环烯基、任意取代的c1-c6杂环、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r⁴选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c2-c6烯基、任意取代的c2-c6炔基、任意取代的c1-c6杂烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c3-c8环烯基、任意取代的c1-c6杂环、任意取代的芳基、任意取代的杂芳基、任意取代的芳基烷基、任意取代的芳基烯基、任意取代的芳基炔基和任意取代的杂芳基烷基；

r⁵选自氢、卤素、no2、cn、cf3、or⁶、co2r⁶、c(＝o)nr⁶r⁷、so3r⁶和so2nr⁶r⁸、任意取代的芳基、任意取代的c1-c6烷基和任意取代的c1-c6杂烷基；

r⁶选自氢、任意取代的c1-c6烷基、c1-c6杂烷基、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r⁷选自氢、c(＝o)r⁸、c(＝o)nhr⁸、任意取代的c1-c6烷基和任意取代的c1-c6杂烷基；或者-nr⁶r⁷为通过氮环连接的任意取代的非芳香族杂环；

r⁸选自氢、任意取代的c1-c6烷基和任意取代的c1-c6杂烷基；

r⁹选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c2-c6烯基、任意取代的c2-c6炔基、任意取代的c1-c6杂烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c3-c8环烯基、任意取代的c1-c6杂环、任意取代的杂芳基、任意取代的芳基烷基、任意取代的芳基烯基、任意取代的芳基炔基、任意取代的杂芳基烷基、任意取代的杂芳基烯基和任意取代的杂芳基炔基；

q选自nr⁶、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c1-c6杂烷基和任意取代的非芳香族杂环；

l¹选自nh和chr²；

w选自o(氧)和nh；

x为n(氮)或cr²；

y选自任意取代的c1-c6烷基、c2-c6烯基、任意取代的c1-c6杂烷基、任意取代的c1-c6杂烯基、任意取代的苯烯基和任意取代的杂环基烯基；

z为o(氧)或s(硫)；

n为1、2或3；并且

条件是如果式i和iii中r²为甲基、r⁴为苯基、l¹为nh，且q为n-ph-r¹，则式i和iii的r¹不选自卤素、烷基、取代的烷基、羧酸和羧酸酯。

某些实施方案包括具有式(ia)的结构的化合物、其互变异构体或其药学可接受的盐：

其中：

r¹选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c6环烷基、任意取代的c3-c6环烯基、任意取代的c2-c6杂环基、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r²和r³独立地选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c1-c6杂环、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r⁴选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c3-c8环烯基、任意取代的c1-c6杂环、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

q选自任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c8环烷基和任意取代的非芳香族杂环；并且

z为o(氧)或s(硫)。

权利要求2的化合物，其中：

r¹选自氢和任意取代的c1-c6烷基；

r²和r³独立地选自氢和任意取代的c1-c6烷基；

r⁴选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

q选自任意取代的c1-c6烷基和任意取代的c3-c8环烷基；并且

z为o(氧)。

权利要求3的化合物，其中：

r¹选自氢和任意取代的c1-c3烷基；

r²和r³独立地选自氢和任意取代的c1-c3烷基；

r⁴选自任意取代的c1-c6烷基和任意取代的芳基；并且

q选自任意取代的c1-c3烷基和任意取代的c3-c3环烷基。

权利要求4的化合物，其中：

r¹为氢；

r²和r³独立地为任意取代的c1-c3烷基；

r⁴为任意取代的苯基；并且

q为任意取代的c1-c3烷基。

某些实施方案包括具有式(iia)或(iib)的结构的化合物、其互变异构体或其药学可接受的盐：

其中：

r³选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c1-c6杂环、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r⁴选自任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c1-c6杂环基、任意取代的芳基、任意取代的杂芳基、任意取代的芳基烷基和任意取代的杂芳基烷基；并且

r⁹选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c1-c6杂环基、任意取代的杂芳基、任意取代的芳基烷基和任意取代的杂芳基烷基。

权利要求6的化合物，其中：

r³选自氢和任意取代的c1-c3烷基；

r⁴选自任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c8环烷基和任意取代的芳基；并且

r⁹选自任意取代的c1-c6烷基、任意取代的芳基烷基、任意取代的芳基烯基、任意取代的芳基炔基和任意取代的杂芳基烷基。

在某些实施方案中，r³为任意取代的c1-c3烷基；

r⁴选自任意取代的c1-c4烷基和任意取代的芳基；并且

r⁹选自任意取代的c1-c3烷基、任意取代的芳基烷基、任意取代的芳基烯基和任意取代的芳基炔基。

某些实施方案包括具有式(iiia)的结构的化合物、其互变异构体或其药学可接受的盐：

其中：

r¹选自氢、or⁶、nr⁶r⁷、co2r⁶、c(＝o)nr⁶r⁷、任意取代的c2-c6杂环基、任意取代的芳基烷基、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r²选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r⁴选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的芳基、任意取代的杂芳基、任意取代的芳基烷基和任意取代的杂芳基烷基；

r⁵选自氢、卤素、cn、cf3、or⁶、任意取代的芳基和任意取代的c1-c6烷基；

r⁶选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r⁷选自氢、c(＝o)r⁸、c(＝o)nhr⁸和任意取代的c1-c6烷基；或者-nr⁶r⁷为通过氮环连接的任意取代的非芳香族杂环；

r⁸选自氢和任意取代的c1-c6烷基；

q选自nr⁶、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c8环烷基和任意取代的非芳香族杂环基；

z为o(氧)或s(硫)；并且

n为1或2。

在某些实施方案中，其中r¹选自氢、or⁶、nr⁶r⁷、co2r⁶、c(＝o)nr⁶r⁷、任意取代的c2-c6杂环基、任意取代的芳基烷基、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r²选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r⁴选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的芳基、任意取代的杂芳基、任意取代的芳基烷基和任意取代的杂芳基烷基；

r⁵选自氢、卤素、cn、cf3、or⁶、任意取代的芳基和任意取代的c1-c6烷基；

r⁶选自氢和任意取代的c1-c6烷基；

r⁷选自氢、c(＝o)r⁸、c(＝o)nhr⁸和任意取代的c1-c6烷基；

r⁸选自氢和任意取代的c1-c6烷基；

q选自nr⁶、任意取代的c1-c4烷基、任意取代的c3-c6环烷基和任意取代的非芳香族杂环基；

z为o(氧)；并且

n为1。

在某些实施方案中，r¹选自氢、or⁶、nr⁶r⁷、c(＝o)nr⁶r⁷、任意取代的芳基烷基和任意取代的杂芳基；

r²选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r⁴为任意取代的芳基；

r⁵选自氢、氯、cn、cf3、or⁶、任意取代的芳基和任意取代的c1-c6烷基；

r⁶选自氢和任意取代的c1-c3烷基；

r⁷选自氢、c(＝o)r⁸、c(＝o)nhr⁸和任意取代的c1-c3烷基；

r⁸选自氢和任意取代的c1-c3烷基；并且

q选自任意取代的c1-c3烷基、任意取代的c3-c6环烷基和任意取代的非芳香族杂环基。

某些实施方案包括具有式(iva)或(ivb)的结构的化合物、其互变异构体或其药学可接受的盐：

其中：

r⁴选自任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c1-c6杂环基、任意取代的芳基、任意取代的杂芳基、任意取代的芳基烷基和任意取代的杂芳基烷基；

r⁵选自卤素、cn、cf3、or⁶、任意取代的芳基和任意取代的c1-c6烷基；

r⁶选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；并且

r⁹选自氢、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c1-c6杂环基、任意取代的杂芳基、任意取代的芳基烷基和任意取代的杂芳基烷基。

在某些实施方案中，r⁴选自任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c3-c8环烷基和任意取代的芳基；

r⁵选自氯、cn、cf3、or⁶、任意取代的芳基和任意取代的c1-c6烷基；

r⁶选自氢和任意取代的c1-c3烷基；

r⁹选自任意取代的c1-c6烷基、任意取代的芳基烷基、任意取代的芳基烯基、任意取代的芳基炔基和任意取代的杂芳基烷基，并且

n为1或2。

在某些实施方案中，r⁴选自任意取代的c1-c4烷基和任意取代的芳基；

r⁵选自氯、cn、cf3和任意取代的c1-c3烷基；

r⁹选自任意取代的c1-c3烷基、任意取代的芳基烷基、任意取代的芳基烯基和任意取代的芳基炔基；并且

n为1。

在某些实施方案中，除非另有说明，标示为“任意取代的”基团被各自且独立地选自以下的一个或多个基团任意取代：c1-c6烷基、c2-c6烯基、c2-c6炔基、c1-c6杂烷基、c1-c6卤代烷基、c3-c6环烷基、芳基、芳基烷基、烯基o-、芳基烷基o-、芳基烷基nh-、烯基o-、环烷基c(＝o)-、芳基c(＝o)-、芳基c(＝o)nh-、芳基nhc(＝o)-、芳基(ch2)0-3o(ch2)0-3-、ho(ch2)1-3nh-、ho(ch2)1-3o-、ho(ch2)1-3-、ho(ch2)1-3o(ch2)1-3-、-c(＝o)nhnh2、杂芳基、非芳香族杂环、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、烷基硫、芳基硫、氰基、卤素、氧代、o-氨甲酰基、n-氨甲酰基、o-硫代氨甲酰基、n-硫代氨甲酰基、c-氨基、n-氨基、s-磺酰胺基、n-磺酰胺基、c-羧基、o-羧基、硝基和氨基。

某些实施方案包括化合物治疗造血性或神经性病症的用途，包括将有效量的式(v)或(vi)化合物或其药学可接受的盐给予有需要的对象，其中式(v)或(vi)具有结构：

其中：

r¹⁰选自任意取代的c1-c12烷基、任意取代的c1-c12杂烷基、任意取代的c2-c12杂烯基、任意取代的c2-c12杂炔基、任意取代的c1-c12环烷基；任意取代的c1-c6杂环烷基、任意取代的杂芳基烷基、任意取代的芳基杂烷基、任意取代的杂芳基杂烷基、or¹⁴、sr¹⁴和nr⁸r¹⁴；

r¹¹选自氢、卤素、任意取代的c1-c6烷基、任意取代的c1-c6杂烷基、任意取代的c3-c8环烷基和任意取代的c1-c6杂环；

r¹²选自任意取代的c1-c6杂烷基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c1-c6杂环、任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

r¹³选自氢、卤素、任意取代的c1-c8烷基、任意取代的c1-c8杂烷基、任意取代的c2-c8杂烯基、任意取代的c3-c8环烷基、任意取代的c1-c6杂环烷基、or¹⁴、sr¹⁴和nr⁸r¹⁴；

r¹⁴选自任意取代的芳基和任意取代的杂芳基；

v选自ch＝ch、n＝ch、ch＝n、nh、o(氧)和s(硫)；并且

n为1、2或3。

在某些实施方案中，如本文所公开的化合物可以互变异构体形式存在。所有互变异构体形式均试图包括在本文所公开的化合物的范围内。同样地，当化合物含有双键时，存在顺式和反式类型的异构体形式的化合物的可能性。本文包括纯形式的以及顺式和反式异构体混合的顺式和反式异构体。因此，本文提及的化合物包括所有前述的异构体形式，除非上下文另有明确规定。

在某些实施方案中，式(i)的化合物可存在一种或多种互变异构体形式。例如，式(i)的化合物可存在以下所示的互变异构体形式或其药学可接受的盐：

在某些实施方案中，式(ii)的化合物可存在一种或多种互变异构体形式。例如，式(ii)的化合物可存在以下所示的互变异构体形式或其药学可接受的盐：

其中w可为nh；且w¹可为n(氮)。

在某些实施方案中，式(iii)的化合物可存在一种或多种互变异构体形式。例如，式(iii)的化合物可存在以下所示的互变异构体形式或其药学可接受的盐：

在某些实施方案中，式(iv)的化合物可存在一种或多种互变异构体形式。例如，式(iv)的化合物可存在以下所示的互变异构体形式或其药学可接受的盐：

其中w可为nh；并且w¹可为n(氮)。

某些合成方法

方案i

方案i的方法描述了式iii中描述的通用结构3的化合物的常规合成，其中r可为烷基或杂烷基衍生物。在乙酸酐中以三乙基原酸酯处理通用结构1的吲哚酮衍生物提供通用结构2的中间物。然后将通用结构2的中间物与酰肼缩合，以产生通用结构3的化合物。

方案ii

方案ii的方法描述了式ii的化合物的常规合成。在标准条件下将结构4的化合物重氮化，然后与结构5的酮酯偶合，以提供结构6的腙中间物。结构6的中间物酮酯与肼的缩合反应提供最终的结构7的化合物。可选地，可直接从结构8的化合物与结构4的重氮化的化合物的偶合反应获得结构7的化合物。

方案iii

方案iii描述了式v和vi的化合物的常规合成。可通过结构9的酸衍生物和结构10的2-氨基噻唑衍生物间简单的酰胺基形成反应，经活化或不经活化，制备结构11的化合物。

本领域技术人员认可可使用类似的合成方案来合成本文提供的化合物。本领域技术人员认可可使用其他的合成方案合成本文提供的化合物。

某些药剂

在某些实施方案中，选择性的gcsfr调节剂或其药学可接受的盐、酯、酰胺和/或前药，单独地或与一种或多种药学可接受的载体组合，形成药剂。用于配制和给予本实施方案的化合物的技术可参见，例如"remington'spharmaceuticalsciences,"mackpublishingco.,easton,pa,18thedition,1990，其通过引用以其整体并入本文。

在某些实施方案中，使用已知的技术制备包含一种或多种本实施方案的化合物的药剂，所述技术包括但不限于混合、溶解、粒化、糖衣丸制作、磨细、乳化、封装、包埋(entrapping)或压片方法。

在某些实施方案中，包含一种或多种本实施方案的化合物的药剂为液体(例如，悬浮液、酏剂和/或溶液)。在某些此类实施方案中，使用本领域已知的成分制备包含一种或多种本实施方案的化合物的液体药剂，所述成分包括但不限于水、乙二醇、油、醇类、风味剂、防腐剂和着色剂。

在某些实施方案中，包含一种或多种本实施方案的化合物的药剂为固体(例如，粉剂、片剂和/或胶囊)。在某些此类实施方案中，使用本领域已知的成分制备包含一种或多种本实施方案的化合物的固体药剂，所述成分包括但不限于淀粉、糖、稀释剂、成粒剂、润滑油、粘合剂和崩解剂。

在某些实施方案中，将包含一种或多种本实施方案的化合物的药剂配制为长效(depot)制剂。某些此类长效制剂通常比非长效制剂作用更长久。在某些实施方案中，此类制剂通过埋植(例如皮下或肌肉内)或通过肌肉内注射给药。在某些实施方案中，使用合适的聚合物质或疏水性物质(例如于可接受油中的乳剂)或离子交换树脂制备长效制剂，或配制为微溶性衍生物，例如，配制为微溶性盐。

在某些实施方案中，包含一种或多种本实施方案的化合物的药剂包含递送系统。递送系统的实例包括但不限于脂质体和乳剂。某些递送系统可用于制备某些药剂，包括包含疏水性化合物的那些。在某些实施方案中，使用了某些有机溶剂如二甲基亚砜。

在某些实施方案中，包含一种或多种本实施方案的化合物的药剂包含一种或多种设计为将药剂递送至特定组织或细胞类型的组织特异性递送分子。例如，在某些实施方案中，药剂包含涂覆有组织特异性抗体的脂质体。

在某些实施方案中，包含一种或多种本实施方案的化合物的药剂包含共溶剂系统。某些此类共溶剂系统包括，例如苄醇、非极性表面活性剂、可与水混溶的有机聚合物和水相。在某些实施方案中，此类共溶剂系统可用于疏水性化合物。此类共溶剂系统的非限制性实例为vpd共溶剂系统，其为包含3％w/v苄醇、8％w/v的非极性表面活性剂聚山梨醇酯80^tm和65％w/v聚乙二醇300的纯乙醇溶液。此类共溶剂系统的比例可在相当的范围内变化，而不显著改变其溶解性和毒性特征。此外，共溶剂组分的特性可发生变化：例如，可使用除聚山梨醇酯80^tm外的其他表面活性剂；聚乙二醇的级份大小可发生变化；其他的生物相容性聚合物可代替聚乙二醇，例如聚乙烯吡咯烷酮；并且其他的糖或多糖可代替葡萄糖。

在某些实施方案中，包含一种或多种本实施方案的化合物的药剂包含缓释系统。此类缓释系统的非限制性实例为固体疏水性聚合物的半渗透性基质。在某些实施方案中，基于其化学性质，缓释系统可在一定的小时、天、周或月时段内释放化合物。

用于本实施方案药剂的某些化合物可提供为具有药学相容的抗衡离子的药学可接受的盐。可以多种酸形成药学相容性盐，所述酸包括但不限于盐酸、硫酸、乙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸等。

在某些实施方案中，包含一种或多种本实施方案的化合物的药剂包含治疗有效量的活性成分。在某些实施方案中，治疗有效量足以预防、减轻或改善疾病症状，或延长治疗对象的存活。确定治疗有效量也在本领域技术人员的能力范围内。

在某些实施方案中，将包含一种或多种本实施方案的化合物的药剂配制为前药。在某些实施方案中，前药是有用的，因为它们相比相应的活性形式易于给药。例如，在某些情形下，前药可相比相应的活性形式更容易为生物可用(例如通过经口给药)。在某些情形下，前药相比相应的活性形式，可具有改善的溶解性。在某些实施方案中，前药为酯。在某些实施方案中，此类前药相比相应的活性形式具有更少的水溶性。在某些实施方案中，此类前药具有优良的跨细胞膜运输性，其中水溶性不利于迁移。在某些实施方案中，此类前药中的酯被代谢水解为羧酸。在某些情形下，含有化合物的羧酸是相应的活性形式。在某些实施方案中，前药包含结合酸性基团的短肽(聚氨基酸)。在某些此类实施方案中，肽代谢形成相应的活性形式。

在某些实施方案中，包含一种或多种本实施方案的化合物的药剂可用于治疗哺乳动物，且尤其是人患者疾病或病症。合适的给药途径包括但不限于经口、直肠、经粘膜、肠道、肠内、局部、栓剂、通过吸入剂、鞘内、心室内、腹膜内、鼻内、眼内和肠胃外(例如，静脉内、肌肉内、髓内和皮下)。在某些实施方案中，通过鞘内给予药物来获得局部暴露而非全身暴露。例如，可在预期效应区域(例如，在肾脏或心脏区域)直接注射药剂.

在某些实施方案中，包含一种或多种本实施方案的化合物的药剂以剂量单位形式给药(例如，片剂、胶囊、大药丸等)。在某些实施方案中，此类剂量单位包含约1μg/kg体重至约50mg/kg体重剂量的选择性hgf调节剂。在某些实施方案中，此类剂量单位包含约2μg/kg体重至约25mg/kg体重剂量的选择性hgf调节剂。在某些实施方案中，此类剂量单位包含约10μg/kg体重至约5mg/kg体重剂量的选择性hgf调节剂。在某些实施方案中，药剂根据需要给药，一天一次、一天两次、一天三次或一天四次或更多次。本领域技术人员认可特定剂量、频率和给药持续时间取决于多种因素，包括但不限于所需的生物活性、患者状况和对药剂的耐受性。

在某些实施方案中，包含本实施方案化合物的药剂制备用于经口给药。在某些此类实施方案中，通过将一种或多种本实施方案的化合物与一种或多种药学可接受的载体组合配制药剂。某些此类载体允许本实施方案的化合物配制为用于由患者口服的片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊、液体、凝胶、糖浆剂、浆剂、悬浮剂等。在某些实施方案中，通过将一种或多种本实施方案的化合物与一种或多种固体赋形剂混合获得用于经口应用的药剂。合适的赋形剂包括但不限于填充剂，如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露糖或山梨醇；纤维素制剂，如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、土豆淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、羧基甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮(pvp)。在某些实施方案中，此类混合物被任意研磨，且可任意添加助剂。在某些实施方案中，形成了药剂以获得片剂或糖衣丸核。在某些实施方案中，添加了崩解剂(例如，交联的聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或海藻酸或其盐，如海藻酸钠)。

在某些实施方案中，为糖衣丸核提供包衣。在某些此类实施方案中，可使用浓缩的糖溶液，其可任选地含有阿拉伯胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆凝胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液，以及合适的有机溶剂或溶剂混合物。可将染料或颜料添加至片剂或糖衣丸包衣。

在某些实施方案中，用于经口给药的药剂为由明胶制成的推入配合(push-fit)式胶囊。某些此类推入配合式胶囊包含一种或多种本实施方案的化合物，其与一种或多种填充剂如乳糖、粘合剂如淀粉，和/或润滑剂如滑石或硬脂酸镁，以及任选地稳定剂混合。在某些实施方案中，用于经口给药的药剂为由明胶和塑化剂如甘油或山梨醇制成的软的、密封胶囊。在某些软胶囊中，一种或多种本实施方案的化合物溶于或悬浮于合适的液体如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇中。另外，可添加稳定剂。

在某些实施方案中，制备了药剂用于含服给药。某些此类药剂为以常规方式配制的片剂或锭剂。

在某些实施方案中，制备了药剂用于通过注射给药(例如，静脉内、皮下、肌肉内等)。在某些此类实施方案中，药剂包含载体，并配制在水溶液如水或生理相容的缓冲液如hanks's溶液、林格氏溶液或生理盐水缓冲液中。在某些实施方案中，包含有其他成分(例如，有助于溶解性或用作防腐剂的成分)。在某些实施方案中，使用合适的液态载体、悬浮剂等制备可注射悬浮剂。用于注射的某些药剂以单位剂量形式提供，例如，在安瓶或多剂量容器中。用于注射的某些药剂为于油性或含水媒介物中的悬浮剂、溶液或乳剂，且可含有配制试剂如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。某些适合用于注射药剂的溶剂包括但不限于亲脂性溶剂和脂肪油如芝麻油、合成的脂肪酸酯如油酸乙酯或甘油三酯，以及脂质体。含水的注射悬浮液可含有增加悬浮液粘度的物质，如羧甲基纤维素钠、山梨醇或葡聚糖。任选地，此类悬浮液还可含有合适的稳定剂或增加化合物溶解度的试剂，以允许制备高度浓缩的溶液。

在某些实施方案中，制备了药剂用于经粘膜给药。在某些此类实施方案中，在制剂中使用了适于待渗透的屏障的渗透剂。此类渗透剂通常为本领域已知。

在某些实施方案中，制备了药剂用于通过吸入给药。某些用于吸入的此类药剂以加压包装或喷雾器中的气雾喷雾剂形式制备。某些此类药剂包含推进剂，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体。在某些使用加压气雾剂的实施方案中，可以用能递送确定量的阀门确定剂量单位。在某些实施方案中，可配制用于吸入器或吹入器中的胶囊和盒。某些此类制剂包含本实施方案化合物与合适的粉剂基质如乳糖或淀粉的粉剂混合物。

在某些实施方案中，制备了药剂用于直肠给药，如栓剂或保留灌肠。某些此类药剂包含已知成分，如可可油和/或其他甘油酯。

在某些实施方案中，制备了药剂用于局部给药。某些此类药剂包含温和的补水基质，如软膏剂或或霜剂。示例性的合适软膏剂基质包括但不限于凡士林油、凡士林油加挥发性硅酮、羊毛脂和油包水乳剂如eucerin^tm，其可从beiersdorf(cincinnati,ohio)获得。示例性的合适霜剂基质包括但不限于nivea^tm霜(其可从beiersdorf(cincinnati,ohio)获得)、冷霜(usp)、purposecream^tm(其可从johnson&johnson(newbrunswick,newjersey)获得)、亲水软膏(usp)和lubriderm^tm(其可从pfizer(morrisplains,newjersey)获得)。

在某些实施方案中，可根据具体患者的状况选择本实施方案药剂的剂型、给药途径和剂量。(例如，参见fingletal.1975,"thepharmacologicalbasisoftherapeutics",ch.1p.1，其通过引用以其整体并入本文)。在某些实施方案中，药剂作为单一剂量给药。在某些实施方案中，药剂作为系列的两次或更多次剂量在一天或多天中给药。

在某些实施方案中，将确立的人剂量的约0.1％-500％、5％-200％、10％-100％、15％-85％、25％-75％或40％-60％的本实施方案的药剂给予患者。如果没有确立人剂量，可从ed50或id50值，或源于体外或体内研究的其他合适的值推断出合适的人剂量。

在某些实施方案中，患者的日剂量方案包括0.1mg-2000mg、5mg-1500mg、10mg-1000mg、20mg-500mg、30mg-200mg或40mg-100mg的本实施方案的化合物的经口剂量。在某些实施方案中，作为单次的日剂量给予日剂量方案。在某些实施方案中，作为2次、3次、4次或多于4次剂量给予日剂量方案。

在某些实施方案中，通过连续静脉输注给予本实施方案的药剂。在某些此类实施方案中，每天给予0.1mg-500mg的本实施方案组合物。

在某些实施方案中，在连续治疗时段内给予本实施方案的药剂。例如，可在一定的天、周、月或年时段内给予本实施方案的药剂。

可调整剂量的量、给药间隔和治疗持续时间以获得所需效果。在某些实施方案中，调整了剂量的量和给药间隔以在患者中维持所需的化合物浓度。例如，在某些实施方案中，调整了剂量的量和给药间隔以提供足以获得所需效果的量的本实施方案的化合物的血浆浓度。在某些此类实施方案中，血浆浓度维持在最小有效浓度(mec)以上。在某些实施方案中，以所设计的这样的剂量方案给予本实施方案的药剂：维持mec以上的浓度持续10-90％的时间、30-90％的时间，或50-90％的时间。

在局部给予药剂的某些实施方案中，调整了剂量方案以获得本实施方案化合物的所需的局部浓度。

在某些实施方案中，可在包装或分配装置中提供药剂，所述包装或分配装置含有一种或多种包含活性成分的单位剂量形式。例如，包装可包含金属或塑料薄膜，如泡罩包装。包装或分配装置可附有给药说明书。包装或分配装置还可附有与容器相关的、管理药物生产、使用或销售的政府机构规定形式的通知，所述通知反映了用于人用或兽用给药的药物形式的机构许可。例如，此类通知可以是美国食品和药物管理局针对处方药的许可标记，或许可的产品说明。配制在相容的药物载体中的包含本实施方案化合物的组合物还可制备、放置于合适的容器中，并标记用于治疗指定的病症。

在某些实施方案中，药剂在使用前可为粉剂形式，用于用合适的媒介物如无菌无热原的水复原。

某些组合疗法

在某些实施方案中，一种或多种本实施方案的药剂与一种或多种其他药剂共给药。在某些实施方案中，设计了此类一种或多种其他药剂，以治疗与一种或多种本实施方案的药剂相同的疾病或病症。在某些实施方案中，设计了此类一种或多种其他药剂，以治疗与一种或多种本实施方案的药剂不同的疾病或病症。在某些实施方案中，设计了此类一种或多种其他药剂，以治疗一种或多种本实施方案的药剂的不需要的效应。在某些实施方案中，一种或多种本实施方案的药剂与另一药剂共给药，以治疗所述其他药剂的不需要的效应。在某些实施方案中，一种或多种本实施方案的药剂与一种或多种其他药剂同时给药。在某些实施方案中，一种或多种本实施方案的药剂与一种或多种其他药剂在不同的时间给药。在某些实施方案中，将一种或多种本实施方案的药剂与一种或多种其他药剂一起制备于单一制剂中。在某些实施方案中，分开制备一种或多种本实施方案的药剂与一种或多种其他药剂。

可以与本实施方案的药剂共给药的药剂的实例包括但不限于抗癌治疗，包括但不限于化疗和放疗；皮质类固醇，包括但不限于强的松；免疫球蛋白，包括但不限于静脉内免疫球蛋白(ivig)；止痛剂(例如，乙酰胺酚)；抗炎剂，包括但不限于非甾体类抗炎药(例如，布洛芬、cox-1抑制剂和cox-2抑制剂)；水杨酸盐；抗生素；抗病毒剂；抗真菌剂；抗糖尿病剂(例如，双胍类、葡糖苷酶抑制剂、胰岛素、磺酰基脲和噻唑烷二酮)；肾上腺素改性剂；利尿剂；激素(例如，同化类固醇、雄激素、雌激素、降钙素、孕酮、生长激素抑制素和甲状腺激素)；免疫调节剂；肌肉松弛剂；抗组胺；骨质疏松剂(例如，二磷酸盐、降钙素和雌激素)；前列腺素、抗肿瘤剂；心理治疗剂；镇静剂；毒橡树或毒漆树产品；抗体；和疫苗。

在一些实施方案中，本文提供的化合物可与另外的治疗方案组合给药。在一些此类实施方案中，另外的治疗方案可包括化疗、骨髓移植和放疗。在某些实施方案中，本文提供的化合物可组合收获的外周血祖细胞和/或联合造血干细胞移植给予对象。此类给药可在此类收获之前、期间和/或之后完成。

某些适应症

某些实施方案包括治疗或改善病症如造血性或神经性病症的方法。一些此类方法可包括将有效量的本文提供的化合物给予有需要的对象。可以本文提供过的化合物治疗的病症的实例包括粒细胞减少症、中性粒细胞减少症、肌萎缩性侧索硬化、多发性硬化、多发性营养失调、神经系统损伤如脊椎损伤和创伤或中风引起的损伤。在某些实施方案中，病症可包括粒细胞减少症。粒细胞减少症可由化疗、放疗、骨髓移植失败，和/或再生障碍性贫血引起。

在某些实施方案中，本文提供的化合物可用于促进胶质细胞的生长和/或发育。此类胶质细胞可修复神经细胞。在某些实施方案中，本文提供的化合物可用于治疗心理病症，包括但不限于认知性病症。

在某些实施方案中，本文提供的化合物可用于治疗与造血、红细胞生成、粒细胞生成、血小板生成和骨髓细胞生成功能异常相关的病症。此类病症的实例包括贫血、中性粒细胞减少症、血小板减少、心血管病症、免疫/自身免疫病症、癌症、传染性病症或疾病，以及神经性病症。在一些实施方案中，本文提供的化合物可与用于调节造血、红细胞生成、粒细胞生成、血小板生成和骨髓细胞生成的另外的药剂一起给药。

某些鉴定化合物的方法

本文提供的方法的一些实施方案包括鉴定治疗化合物。一些此类治疗化合物包括刺激粒细胞生成的化合物如gcsfr激动剂。一些实施方案包括鉴定选择性调节gcsfr活性的化合物。在一些实施方案中，治疗化合物包括相比野生型gcsfr蛋白，在突变型gcsfr蛋白存在下具有减少的活性的化合物。在一些此类实施方案中，突变型gcsfr在gcsfr蛋白的跨膜结构域中包含突变，或在靠近gcsfr蛋白的跨膜结构域处包含突变。

鉴定治疗化合物的一些方法包括使靶细胞与包含gcsf受体激动剂的测试化合物接触，其中所述靶细胞包含突变型gcsf受体蛋白；以及确定测试化合物是否显著改变了靶细胞中突变型gcsf受体的活性水平。一些实施方案还包括将靶细胞中突变型gcsf受体的活性水平与测试化合物接触的细胞中野生型gcsf受体蛋白的活性水平比较。一些实施方案还包括确定与测试化合物接触的靶细胞中突变型gcsf受体的活性水平是否小于与测试化合物接触的细胞中野生型gcsf受体蛋白的活性水平。在一些实施方案中，细胞包括哺乳动物细胞。在一些实施方案中，细胞包括人细胞。在一些实施方案中，细胞不为血细胞。

在一些实施方案中，突变型gcsf受体蛋白在蛋白的跨膜结构域中包含突变，或在靠近蛋白的跨膜结构域处包含突变。突变可包括取代、缺失或插入。在一些此类实施方案中，突变可包括对应于人gcsf受体蛋白的his-627的残基处的取代，和对应于小鼠gcsf受体蛋白的asp-602的残基处的取代。在一些实施方案中，突变型gcsfr包括对应于靠近多肽的tm结构域残基的残基处的取代，例如，取代的残基可为来自gcsfr多肽的tm结构域的不多于1、2、3、4、5、6、7、8,9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29和30个连续残基。在一些实施方案中，突变型gcsf受体包括突变型人gcsf受体。示例性的人gcsf受体蛋白的多肽序列(seqidno:01)显示在表1中。

表1

在鉴定治疗化合物的更多的方法中，使细胞与测试化合物接触，并测定gcsfr的活性水平。在一些实施方案中，将与测试化合物接触的细胞中gcsfr的活性水平与未接触测试化合物的细胞中gcsfr的活性水平比较。在一些实施方案中，相比未与测试化合物接触的细胞中gcsfr的活性，与测试化合物接触的细胞中gcsfr的活性的增加指示测试化合物激活gcsfr。可通过本领域熟知的多种方法测量gcsfr的活性水平。

鉴定选择性调节gcsfr活性的化合物一些实施方案，可包括鉴定相比突变型tpo受体(tpor)，增加野生型tpor的活性的化合物。在一些实施方案中，突变型tpor包括对应于人tpor多肽的his-499的残基处的取代。在一些实施方案中，化合物增加人tpor而非小鼠tpor或猴tpor的活性。

在某些实施方案中，采用了利用荧光素酶报告子检测筛选小分子化合物文库的方法来鉴定结合位点选择性hgcsfr激活化合物。在某些实施方案中，化合物文库包含小分子化合物，其通过需要人tpor(htpor)tm结构域的组氨酸-499激活tpor，或选择性激活htpor但非小鼠和猴tpo受体。在某些实施方案中，使用[¹²⁵i]-rhgcsf竞争性结合、细胞增殖和骨髓细胞分化检测表征小分子结合位点选择性hgcsfr激活化合物。

实施例

实施例1

4-氨基-4-氧代丁酸n’-(1-苯基-1-(1-(3,5-二甲氧基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)甲基)酰肼(化合物101)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲氧基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原苯甲酸三乙酯和4-氨基-4-氧代丁酸酰肼制备化合物101。¹hnmr(400mhz,meod)7.62(m,3h),7.44(m,2h),6.92(m,2h),6.62(m,3h),5.98(m,1h),3.82(m,6h),2.28(m,2h),2.20(m,2h)。mw＝554,lc-ms(m+1)＝554.98。

实施例2

4-氨基-4-氧代丁酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)戊基)酰肼(化合物102)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原戊酸三乙酯和4-氨基-4-氧代丁酸酰肼制备化合物102。¹hnmr(400mhz,meod)7.53(d,j＝7.5,1h),7.38(d,j＝7.5,1h),7.18(s,1h),7.05(s,1h),6.94(s,1h),2.95(m,2h),2.62(s,4h),2.42(m,6h),1.73(m,2h),1.65(m,2h),1.05(t,j＝8.0,3h)。mw＝502,lc-ms(m+1)＝502.99。

实施例3

4-氨基-4-氧代丁酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)丁基)酰肼(化合物103)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原丁酸三乙酯和4-氨基-4-氧代丁酸酰肼制备化合物103。¹hnmr(400mhz,meod)7.52(d,j＝7.5,1h),7.36(d,j＝7.5,1h),7.16(s,1h),7.02(s,2h),6.91(s,1h),2.89(m,2h),2.62(s,4h),2.39(s,6h),1.78(m,2h),1.19(t,j＝7.0,3h)。mw＝488,lc-ms(m+1)＝488.95。

实施例4

环戊烷羧酸n'-(1-苯基-1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)甲基)酰肼(化合物104)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原苯甲酸三乙酯和环戊基羧酸酰肼制备化合物10。mw＝519,lc-ms(m+1)＝519.98。

实施例5

3-乙酰氨基丙酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物105)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和3-乙酰氨基丙酸酰肼制备化合物105。¹hnmr(400mhz,meod)7.66(d,j＝7.5,1h),7.35(d,j＝7.5,1h),7.16(s,1h),7.02(s,2h),6.92(s,1h),3.50(m,2h),2.55(s,5h),2.40(s,6h),1.95(s,3h)。mw＝474,lc-ms(m+1)＝475.01。

实施例6

4-氨基丁酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物106)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和4-氨基丁酸酰肼制备化合物106。

实施例7

(5-氨基-1-四唑)乙酸n’-(1-苯基-1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)甲基)酰肼(化合物107)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原苯甲酸三乙酯和2-(5-氨基-1-四唑)乙酸酰肼制备化合物107。mw＝548,lc-ms(m+1)＝549.01。

实施例8

(1-四唑)乙酸n'-(1-苯基-1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)甲基)酰肼(化合物108)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原苯甲酸三乙酯和1-四唑乙酸酰肼制备化合物108。mw＝533,lc-ms(m+1)＝533.96。

实施例9

(±)-(1-苄基-2-氧代-5-吡咯烷)羧酸n’-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物109)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和(1-苄基-2-氧代-4-吡咯烷)羧酸酰肼制备化合物109。mw＝562,lc-ms(m+1)＝563.05。

实施例10

4-氨基-4-氧代丁酸n'-(1-(1-(3-甲氧基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物110)

根据方案i中描述的程序从1-(3-甲氧基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和4-氨基-4-氧代丁酸酰肼制备化合物110。¹hnmr(400mhz,meod)7.67(m,1h),7.50(m,1h),7.35(m,1h),7.06(m,1h),6.98(m,3h),3.85(m,3h),2.60(m,7h)。mw＝462,lc-ms(m+1)＝463.02。

实施例11

4-氨基-4-氧代丁酸n'-(1-(1-(3,5-二甲氧基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物111)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲氧基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和4-氨基-4-氧代丁酸酰肼制备化合物111。¹hnmr(400mhz,meod)7.59(m,1h),7.35(m,1h),7.03(m,1h),6.60(m,3h),3.83(m,3h),2.62(m,7h)。mw＝492,lc-ms(m+1)＝492.99。

实施例12

4-二甲基氨基-4-氧代丁酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物112)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和4-二甲基氨基-4-氧代丁酸酰肼制备化合物112。¹hnmr(400mhz,meod)7.65(d,j＝7.5,1h),7.34(d,j＝7.5,1h),7.14(s,1h),7.01(s,2h),6.92(s,1h),3.08(s,3h),2.95(s,3h),2.77(m,2h),2.63(m,2h),2.57(s,3h),2.39(s,6h)。mw＝488,lc-ms(m+1)＝489.07。

实施例13

4-羟基环己基-1-羧酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物113)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和4-羟基环己基羧酸酰肼制备化合物113。mw＝487,lc-ms(m+1)＝487.99。

实施例14

5-羟基-5-氧代戊酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物114)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和5-羟基-5-氧代戊酸酰肼制备化合物114。mw＝475,lc-ms(m+1)＝475.98。

实施例15

3-氨基-3-氧代丙酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物115)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和3-氨基-3-氧代丙酸酰肼制备化合物115。mw＝446,lc-ms(m+1)＝446.89。

实施例16

(±)-(2-氧代-3-哌啶)羧酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物116)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和2-氧代哌啶羧酸酰肼制备化合物116。mw＝486,lc-ms(m+1)＝486.98。

实施例17

4-氨基-4-氧代丁酸n'-(1-苯基-1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚3(z)-亚基)甲基)酰肼(化合物117)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原苯甲酸三乙酯和4-氨基-4-氧代丁酸酰肼制备化合物117。¹hnmr(400mhz,meod)7.63(m,3h),7.45(d,j＝7.5),7.17(s,1h),7.05(s,1h),6.90(d,j＝7.5,1h),6.84(s,1h),5.98(s,1h),2.41(s,6h),2.27(m,2h),2.21(m,2h)。mw＝522,lc-ms(m+1)＝523.02。

实施例18

3-(1-吡唑)丙酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物118)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和3-(1-吡唑)丙酸酰肼制备化合物118。mw＝483,lc-ms(m+1)＝484.01。

实施例19

4-羟基-4-氧代丁酸n'-(1-(1-(4-甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物119)

根据方案i中描述的程序从1-(4-甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和琥珀酸单酰肼制备化合物119。¹hnmr(400mhz,meod)7.66(m,1h),7.42(m,2h),7.35(m,1h),7.30(m,2h),6.92(m,1h),2.67(m,2h),2.61(m,2h),2.58(m,3h),2.46(m,3h)。mw＝447,lc-ms(m+1)＝447.97。

实施例20

4-氨基-4-氧代丁酸n'-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)甲基酰肼(化合物120)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原羧酸三乙酯和4-氨基-4-氧代丁酸酰肼制备化合物120。¹hnmr(400mhz,meod)7.58(m,1h),7.31(m.1h),7.15(s,1h),7.04(s,2h),6.90(s,1h),2.61(m,4h),2.41(s,6h)。mw＝446,lc-ms(m+1)＝446.96。

实施例21

4-氨基-4-氧代丁酸n'-(1-(1-(4-甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物121)

根据方案i中描述的程序从1-(4-甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和4-氨基-4-氧代丁酸酰肼制备化合物121。¹hnmr(400mhz,meod)7.66(d,j＝7.5,1h),7.42(d,j＝7.5,2h),7.35(d,j＝7.5,1h),7.28(d,j＝7.5,2h),6.93(s,1h),2.62(m,4h),2.57(s,3h),2.46(s,3h)。mw＝446,lc-ms(m+1)＝446.96。

实施例22

环丙基羧酸n'-(1-(1-(3-甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物122)

根据方案i中描述的程序从1-(3-甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和环丙基羧酸酰肼制备化合物122。¹hnmr(400mhz,meod)7.66(m,1h),7.46(m,1h),7.34(m,2h),7.22(m,2h),6.92(s,1h),2.55(s,3h),2.43(s,3h),1.71(m,1h),0.95(m,4h)。mw＝415,lc-ms(m+1)＝415.99。

实施例23

4-羟基丁酸n'-(1-苯基-1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)甲基)酰肼(化合物123)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原苯甲酸三乙酯和4-羟基丁酸酰肼制备化合物123。mw＝509,lc-ms(m+1)＝509.99。

实施例24

环丙基羧酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)-l-(2-呋喃基)甲基)酰肼(化合物124)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原-(2-呋喃)羧酸三乙酯和环丙基羧酸酰肼制备化合物124。

实施例25

环丙基羧酸n'-(1-(1-(4-甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物125)

根据方案i中描述的程序从1-(4-甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和环丙基羧酸酰肼制备化合物125。¹hnmr(400mhz,meod)7.65(d,j＝7.5,1h),7.42(d,j＝7.5,2h),7.35(d,j＝7.5,1h),7.28(d,j＝7.5,2h),6.92(s,1h),2.55(s,3h),2.45(s,3h),1.71(m,1h),0.95(m,4h)。mw＝415,lc-ms(m+1)＝415.99。

实施例26

4-羟基丁酸n'-(1-(1-(3-三氟甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物126)

根据方案i中描述的程序从1-(3-三氟甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和4-羟基丁酸酰肼制备化合物126。mw＝487,lc-ms(m+1)＝487.99。

实施例27

丁酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物127)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和丁酸酰肼制备化合物127。mw＝431,lc-ms(m+1)＝431.98。

实施例28

4-氨基-4-氧代丁酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物128)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和4-氨基-4-氧代丁酸酰肼制备化合物128。mw＝460,lc-ms(m+1)＝461.00。

实施例29

4-苯基氨基-4-氧代丁酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物129)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和4-苯基氨基-4-氧代丁酸酰肼制备化合物129。mw＝536,lc-ms(m+1)＝537.06。

实施例30

4-羟基丁酸n'-(1-(1-(4-甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物130)

根据方案i中描述的程序从1-(4-甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和4-羟基丁酸酰肼制备化合物130。mw＝433,lc-ms(m+1)＝433.94。

实施例31

4-羟基丁酸n'-(1-(1-(3-甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物131)

根据方案i中描述的程序从1-(3-甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和4-羟基丁酸酰肼制备化合物131。mw＝433,lc-ms(m+1)＝433.94。

实施例32

环丙基羧酸n'-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)甲基酰肼(化合物132)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原羧酸三乙酯和环丙基羧酸酰肼制备化合物132。

实施例33

3-甲氧基丙酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物133)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和3-甲氧基丙酸酰肼制备化合物133。mw＝447,lc-ms(m+1)＝447.98。

实施例34

3-吲哚乙酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物134)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和3-吲哚乙酸酰肼制备化合物134。mw＝518,lc-ms(m+1)＝519.04。

实施例35

4-羟基丁酸n'-(1-(1-苯基-2-氧代-6-甲氧基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物135)

根据方案i中描述的程序从1-苯基-6-甲氧基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和4-羟基丁酸酰肼制备化合物135。mw＝381,lc-ms(m+1)＝382.00。

实施例36

4-羟基丁酸n'-(1-(1-苯基-2-氧代-6-甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物136)

根据方案i中描述的程序从1-苯基-6-甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和4-羟基丁酸酰肼制备化合物136。mw＝365,lc-ms(m+1)＝366.01。

实施例37

4-羟基戊酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物137)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和4-羟基戊酸酰肼制备化合物137。mw＝461,lc-ms(m+1)＝461.94。

实施例38

3-羟基丙酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物138)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和3-羟基丙酸酰肼制备化合物138。mw＝433,lc-ms(m+1)＝433.94。

实施例39

4-羟基丁酸n'-(1-(1-苯基-2-氧代-6-氰基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物139)

根据方案i中描述的程序从1-苯基-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和4-羟基丁酸酰肼制备化合物139。mw＝376,lc-ms(m+1)＝377.01。

实施例40

4-羟基丁酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)丙基)酰肼(化合物140)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原丙酸三乙酯和4-羟基丁酸酰肼制备化合物140。mw＝461,lc-ms(m+1)＝461.94。

实施例41

氨基羧酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)丙基)酰肼(化合物141)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原丙酸三乙酯和1-氨基羧酸酰肼制备化合物141。mw＝418,lc-ms(m+1)＝418.96。

实施例42

4-羟基丁酸n'-(1-(1-苯基-2-氧代-6-氯-l,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物142)

根据方案i中描述的程序从1-苯基-6-氯-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和4-羟基丁酸酰肼制备化合物142。

实施例43

氨基羧酸n'-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)甲基酰肼(化合物143)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原羧酸三乙酯和1-氨基羧酸酰肼制备化合物143。mw＝390,lc-ms(m+1)＝390.97。

实施例44

4-羟基丁酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物144)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和4-羟基丁酸酰肼制备化合物144。mw＝447,lc-ms(m+1)＝447.91。

实施例45

3-二甲基氨基丙酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物145)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和3-二甲基氨基丙酸酰肼制备化合物145。mw＝460,lc-ms(m+1)＝461.00。

实施例46

2-氰基乙酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物146)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和氰基乙酸酰肼制备化合物146。mw＝428,lc-ms(m+1)＝428.95。

实施例47

(±)-3-羟基丁酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物147)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和3-羟基丁酸酰肼制备化合物147。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)11.55(s,1h),10.56(s,1h),7.70(d,j＝8.0,1h),7.38(d,j＝8.0,1h),7.12(s,1h),7.06(s,1h),6.89(s,1h),4.88(d,j＝8.0,1h),4.39(t,j＝5.0and8.0,1h),4.05(m,2h),2.58(s,3h),2.49(s,6h),2.32(d,j＝8.0,3h)。

实施例48

环丙基羧酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物148)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和环丙基羧酸酰肼制备化合物148。mw＝429,lc-ms(m+1)＝429.89。

实施例49

氨基硫羧酸n'-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)甲基酰肼(化合物149)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原羧酸三乙酯和1-氨基硫羧酸酰肼制备化合物149。mw＝420,lc-ms(m+1)＝420.92。

实施例50

乙酸n'-(1-(1-苯基-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物150)

根据方案i中描述的程序从1-苯基-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和乙酸酰肼制备化合物150。

实施例51

(±)-2-羟基丙酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物151)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和2-羟基丙酸酰肼制备化合物151。mw＝433,lc-ms(m+1)＝433.94。

实施例52

2-羟基乙酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物152)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和2-羟基乙酸酰肼制备化合物152。mw＝419,lc-ms(m+1)＝419.97。

实施例53

3-乙氧基-3-氧代丙酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物153)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和3-乙氧基-3-氧代丙酸酰肼制备化合物153。mw＝475,lc-ms(m+1)＝475.91。

实施例54

氨基羧酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物154)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和1-氨基羧酸酰肼制备化合物154。mw＝404,lc-ms(m+1)＝404.93。

实施例55

乙酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-苯基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物155)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-苯基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和乙酸酰肼制备化合物155。

实施例56

2-(4-羟基苯基)乙酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物156)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和4-羟基苯基乙酸酰肼制备化合物156。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)11.55(s,1h),10.69(s,1h),9.30(s,1h),7.64(d,j＝8.0,1h),7.33(d,j＝8.0,5h),7.13(s,1h),7.11(s,1h),7.02(s,2h),6.88(s,1h),6.72(d,j＝8.0,2h),3.45(s,2h),2.44(s,3h),2.34(s,6h)。

实施例57

丙酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物157)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和丙酸酰肼制备化合物157。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)11.50(s,1h),10.49(s,1h),7.68(d,j＝8.0,1h),7.36(d,j＝8.0,3h),7.13(s,1h),7.04(s,2h),6.89(s,1h),2.45(s,3h),2.34(s,6h),2.25(dd,j＝5.0和8.0,2h),1.10(dd,j＝5.0和8.0,3h)。

实施例58

乙酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物158)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和乙酸酰肼制备化合物158。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)11.50(s,1h),10.51(s,1h),7.68(d,j＝8.0,1h),7.38(d,j＝8.0,3h),7.12(s,1h),7.04(s,2h),6.89(s,1h),2.44(s,3h),2.34(s,6h),1.99(s,3h)。

实施例59

脲乙酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)-1-苯基甲基)酰肼(化合物159)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原苯甲酸三乙酯和2-(氨基乙酰氨基)乙酸酰肼制备化合物159。mw＝523,lc-ms(m+1)＝523.97。

实施例60

1-(2-氰基乙基)-3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-4-(2-羟基-3-(2-(2,6-二甲基苯基)-乙基)苯基亚肼基)吡唑(化合物160)

根据方案ii中描述的程序从2-羟基-3-(2-(2,6-二甲基苯基)乙基)苯胺、乙酰乙酸乙酯和2-氰基乙基肼制备化合物160。

实施例61

1-(3-羟基丙基)-3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-4-(2-羟基-3-(2-(2,6-二甲基苯基)-乙基)苯基亚肼基)吡唑(化合物161)

根据方案ii中描述的程序从2-羟基-3-(2-(2,6-二甲基苯基)乙基)苯胺、乙酰乙酸乙酯和3-羟基丙基-1-肼制备化合物161.

实施例62

1-(2-羟基乙基)-3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-4-(2-羟基-3-(2-(2,5-二甲基苯基)-乙基)苯基亚肼基)吡唑(化合物162)

根据方案ii中描述的程序从2-羟基-3-(2-(2,5-二甲基苯基)乙基)苯胺、乙酰乙酸乙酯和2-羟基乙基-1-肼制备化合物162。

实施例63

1-(4-羟基丁基)-3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-4-(2-羟基-3-(2(e)-(2-甲基苯基)-乙烯基)苯基亚肼基)吡唑(化合物163)

根据方案ii中描述的程序从2-羟基-3-(2(e)-(2-甲基苯基)乙烯基)苯胺、乙酰乙酸乙酯和4-羟基丁基肼制备化合物163。mw＝406,lc-ms(m+1)＝407.02。

实施例64

1-(3-羟基丙基)-3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-4-(2-羟基-3-(2-(2,5-二甲基苯基)-乙基)苯基亚肼基)吡唑(化合物164)

根据方案ii中描述的程序从2-羟基-3-(2-(2,5-二甲基苯基)乙基)苯胺、乙酰乙酸乙酯和3-羟基丙基-1-肼制备化合物164。

实施例65

1-(4-羟基丁基)-3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-4-(2-羟基-3-(2-(2,6-二甲基苯基)-乙炔基)苯基亚肼基)吡唑(化合物165)

根据方案ii中描述的程序从2-羟基-3-(2-(2,6-二甲基苯基)乙炔基)苯胺、乙酰乙酸乙酯和4-羟基丁基-1-肼制备化合物165。

实施例66

1-(2-氰基乙基)-3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-4-(2-羟基-3-(2-(2,5-二甲基苯基)-乙基)苯基亚肼基)吡唑(化合物166)

根据方案ii中描述的程序从2-羟基-3-(2-(2,5-二甲基苯基)乙基)苯胺、乙酰乙酸乙酯和2-氰基乙基-1-肼制备化合物166。

实施例67

1-(4-羟基丁基)-3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-4-(2-羟基-3-(2-(2-甲基苯基)-乙基)苯基亚肼基)吡唑(化合物167)

根据方案ii中描述的程序从2-羟基-3-(2-(2-甲基苯基)乙基)苯胺、乙酰乙酸乙酯和4-羟基丁基-1-肼制备化合物167。

实施例68

1-苄基-3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-4-(2-羟基-3-(2-(2,6-二甲基苯基)-乙基)苯基亚肼基)吡唑(化合物168)

根据方案ii中描述的程序从2-羟基-3-(2-(2,6-二甲基苯基)乙基)苯胺、乙酰乙酸乙酯和苄基肼制备化合物168。

实施例69

1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-2,3-二氢-3-(2-羟基-4-羟基甲基苯基亚肼基)-6-三氟甲基吲哚(化合物169)

根据与方案ii中描述的类似的程序从2-羟基-4-羟基甲基苯胺和1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮制备化合物169。

实施例70

1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-2,3-二氢-3-(2-羟基-3-羟基甲基苯基亚肼基)-6-三氟甲基吲哚(化合物170)

根据与方案ii中描述的类似的程序从2-羟基-3-羟基甲基苯胺和1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮制备化合物170。

实施例71

4-(4,5-二氢-4-(1-羟基-2-萘基亚肼基)-3-甲基-5-氧代-吡唑)苯甲酸(化合物171)

根据方案ii中描述的程序从1-羟基-2-氨基萘、乙酰乙酸乙酯和4-羟基羰基苯肼制备化合物171。

实施例72

4,5-二氢-1-(4-羟基甲基苯基)-4-(1-羟基-2-萘基亚肼基)-3-甲基吡唑-5-酮(化合物172)

根据方案ii中描述的程序从1-羟基-2-氨基萘、乙酰乙酸乙酯和4-羟基甲基苯肼制备化合物172。

实施例73

4,5-二氢-1-(4-(2-氰基乙基)苯基)-4-(1-羟基-2-萘基亚肼基)-3-甲基吡唑-5-酮(化合物173)

根据方案ii中描述的程序从1-羟基-2-氨基萘、乙酰乙酸乙酯和4-(2-氰基乙基)苯肼制备化合物173。

实施例74

4-羟基丁酸n'-(1-(5-氯-1-苯基-2-氧代-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物174)

根据方案i中描述的程序从1-苯基-5-氯-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和4-羟基丁酸酰肼制备化合物174。

实施例75

甲基2-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-2-氧代-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-3(z)-亚基)乙基)氨基乙酸盐(酯)(化合物175)

根据方案i中描述的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-6-三氟甲基-1,2-二氢吲哚-2-酮、原乙酸三乙酯和甲基氨基乙酸盐(酯)制备化合物175。mw＝418,lc-ms(m+1)＝418.96。

实施例76

乙酸n'-(1-(1-(3,5-二甲基苯基)-5-氧代-3-甲基-4,5-二氢吡唑-4(z)-亚基)乙基)酰肼(化合物176)

根据与方案i中描述的类似的程序从1-(3,5-二甲基苯基)-3-甲基吡唑-5-酮、原乙酸三乙酯和乙酸酰肼制备化合物176。

实施例77—某些检测

在某些实施方案中，可使用检测确定本实施方案化合物的gcsfr调节活性水平。在某些实施方案中，包括选择性突变的gcsfr的检测可用于确定化合物与tm结构域的相互作用。在某些实施方案中，包括来自不同于人的物种的gcsfr的检测可用于测量化合物活性(例如，小鼠或猴)。

细胞增殖检测

在一些实施方案中，在体外增殖检测中使用细胞系来测试化合物，所述细胞系内源性地或者通过稳定或瞬时转染表达gcsfr、并且其生长可依赖于gcsf。通过对细胞计数或通过采用测量atp产生作为细胞生长标志的检测确定化合物对细胞增殖的活性。

报告子检测

在一些实施方案中，在报告子检测中使用内源性地或者通过稳定或瞬时转染表达gcsfr的细胞系测试化合物。以gcsf应答报告子(如荧光素酶)稳定地或瞬时地转染这些细胞，并通过测量细胞中报告子的量确定化合物的活性。

分化检测

在一些实施方案中，在纯化的人cd34+骨髓细胞中测试化合物。向细胞中加入化合物后，经流式细胞术，通过分析与这些通路相关的基因的表达，或通过测量这些通路特异性的细胞(例如，红细胞或粒细胞)的集落形成，测量表达造血、红细胞生成、粒细胞生成、血小板生成或骨髓细胞生成标志物的细胞的数目。在一些实施方案中，在来自除人外的其他物种(例如，小鼠或猴)的骨髓细胞中测试化合物。

实施例78—荧光素酶报告子检测

人gcsf受体(hgcsfr)检测

使用荧光素酶报告子检测鉴定激活hgcsfr的化合物。以含有位于cmv启动子下游的hgcsfrcdna的hgcsfr表达质粒，和含有位于最小胸苷激酶启动子上游的gcsf应答元件的荧光素酶报告质粒，瞬时转染人细胞系(例如mcf-7乳腺癌细胞、hepg2肝癌细胞或hek293肾细胞)。对于荧光素酶报告子检测，将细胞接种于96孔微量滴定板的含有10％胎牛血清(fbs)的eagle's最低必需培养基(emem)中。第二天，使用fugene6转染试剂(roche,indianapolis,in)，根据厂商说明书，将hgcsfr表达质粒和荧光素酶报告质粒瞬时转染至细胞中。接下来一天，以含有1％fbs和10μμ氯化锌的培养基替换该培养基。在第四天，将含有重组hgcsf(rhgcsf)(以200ng/ml的最大浓度)或测试化合物(以10μμ的最大浓度)的培养基加入至细胞，采用一式双份。6小时后，从细胞移除培养物，并以含洗涤剂的缓冲液溶解细胞。测量细胞抽提物中的荧光素酶活性，以确定转录激活水平。将含有荧光素的缓冲液加入至96孔板的每个孔中，并使用光度计测量荧光素酶活性。

突变型hgcsfr或小鼠gcsfr(mgcsfr)检测

使用荧光素酶报告子检测确定化合物激活突变型hgcsfr、mgcsfr或突变型mgcsfr的能力。以如下3种gcsfr表达质粒中的1种瞬时转染人细胞系(例如mcf-7乳腺癌细胞、hepg2肝癌细胞或hek293肾细胞)：1)含有hgcsfrcdna的hgcsfr表达质粒，其中编码hgcsfrtm结构域中的组氨酸-627的核苷酸改变为编码天冬酰胺，所述天冬酰胺在组氨酸-627的类似位置作为小鼠gcsfrtm的天冬酰胺-602存在；2)含有位于cmv启动子下游的mgcsfrcdna的mgcsfr表达质粒；3)含有mgcsfrcdna的mgcsfr表达质粒，其中编码mgcsfrtm结构域中的天冬酰胺-602的核苷酸改变为编码组氨酸。对于荧光素酶报告子检测，将细胞接种于96孔微量滴定板的含有10％胎牛血清(fbs)的eagle's最低必需培养基(emem)中。第二天，使用fugene6转染试剂(roche,indianapolis,in)，根据厂商说明书，将3种gcsfr表达质粒中的1种和荧光素酶报告质粒瞬时转染至细胞中。接下来一天，以含有1％fbs和10μμ氯化锌的培养基替换该培养基。第四天，将含有rhgcsf(以200ng/ml的最大浓度)或测试化合物(以10μμ的最大浓度)的培养基加入至细胞，采用一式双份。6小时后，从细胞去除培养基，并以含洗涤剂的缓冲液溶解细胞。测量细胞抽提物中的荧光素酶活性，以确定转录激活水平。将含有荧光素的缓冲液加入至96孔板的每个孔中，并使用光度计测量荧光素酶活性。

实施例79—细胞增殖检测

使用vialight^tmplus试剂盒(cambrex)或atplite试剂盒(roche)进行的增殖检测被用于确定化合物对细胞生长的活性。以hgcsfr表达质粒稳定转染ut-7人白血病细胞系(komatsun,nakauchih,miwaa,ishiharat,eguchim,moroim,okadam,satoy,wadah,yawatay,sudat,miuray:establishmentandcharacterizationofahumanleukemiccelllinewithmegakaryocytefeatures:dependencyongranulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactor,interleukin3,orerythropoietinforgrowthandsurvival.cancerres51:341,1991)。鉴定表达hgcsfr的稳定克隆(ut7-hpg细胞)，并培养和维持在含有10％fbs、rhgm-csf和g418的培养基中。对于检测，使ut7-hpg细胞缺乏rhgm-csf过夜，并接种在96孔板的含有10％fbs和10μμ锌的培养基中。将含有rhgcsf(以200ng/ml的最大浓度)或测试化合物(以10μμ的最大浓度)的培养基加入至细胞，采用一式双份。48小时后，使用vialight^tmplus试剂盒，根据厂商的方案，测量细胞增殖。以含洗涤剂的缓冲液溶解细胞10分钟，然后加入atp监测试剂以产生发光信号。信号测量为细胞抽提物中的相对光度单位，以确定细胞增殖水平。

实施例80—[¹²⁵i]-rhgcsf竞争性结合检测

使用竞争性结合检测来确定化合物对重组人gcsf(rhgcsf)与hgcsfr结合的活性。对于该检测，使ut7-hpg细胞在含有2％fbs的培养基中缺乏rhgm-csf4小时，并接种于96-孔v-底板的含有2％fbs、10μμ锌和0.1％叠氮化钠的培养基中。将含有rhgcsf(以200ng/ml的最大浓度)或测试化合物(以10μμ的最大浓度)的培养基加入至细胞，采用一式双份。室温下1小时后，将含有至0.05nm终浓度的[125i]标记的rhgcsf(nex-426,perkinelmer)的培养基加入至细胞，并将细胞在室温下于摇床上孵育2小时。用冷的磷酸盐缓冲盐水将细胞洗涤两次，并用含有tritonx-100的缓冲液溶解细胞。将溶解产物转移至闪烁瓶，加入闪烁液，并在闪烁计数器中测量小瓶中的放射量(每分钟计数)。

实施例81—骨髓细胞分化检测

使用人骨髓粒细胞分化检测来确定rhgcsf或测试化合物诱导人骨髓cd34⁺细胞分化为cd15阳性(cd15⁺)粒细胞的能力。来自cambrex的纯化的正常人骨髓cd34⁺细胞被用于该检测。以含有10％胎牛血清(fbs)、0.5ng/ml干细胞因子(scf)，有或无0.1ng/mlrhgcsf的培养基将细胞培养3天。洗涤细胞，并接种于12孔板的含有10％fbs和0.5ng/mlscf的培养基中。加入rhgcsf(以100ng/ml的最大浓度)和测试化合物(以1μμ的最大浓度)，采用一式双份，并将细胞培养另外的7天。以抗cd15抗体或同种型对照对细胞染色，并通过流式细胞术分析。活性测量为cd15⁺细胞百分比，并表示为最大rhgcsf响应百分比。从化合物的剂量反应曲线确定ec50，并通过与100ng/mlrhgcsf比较计算效率。另外，以rhgcsf或化合物孵育7天后，使用atplite^tm试剂盒测量rhgcsf或测试化合物对cd34⁺细胞生长的效应。

实施例82—人gcsfr激动剂

gcsf是一种调控中性粒细胞的细胞因子。gcsf作用于同型二聚体受体(gcsfr)，以刺激粒细胞前体细胞的增殖，并诱导其生存和分化为中性粒细胞。重组人gcsf(rhgcsf)被成功用于减轻重度慢性中性粒细胞减少症和化疗引起的或与造血性干细胞移植相关的中性粒细胞减少症。小分子经口gcsfr激动剂可为当前的可注射rhgcsf治疗提供更安全和更方便的选择。发现了一系列新的非肽基小分子，例如先导化合物x，其选择性激活人gcsfr(hgcsfr)功能，并可在中性粒细胞减少症治疗中提供重大的革新。

方法

荧光素酶报告子检测：以hgcsfr、htpor、hepor、小鼠gcsfr或突变型受体的表达载体以及stat3应答或stat5应答的荧光素酶报告子瞬时转染hepg2或hek293细胞。在溶解和荧光素酶测量前，以媒介物、rhgcsfrhtpo(r&dsystems)、rhepo或化合物x将细胞处理6小时。

hgcsfr稳定细胞系utp-hgcsfr的产生：以含有新霉素抗性基因的hgcsfr表达载体转染ut7亲本细胞，并通过对g418的抗性鉴定克隆。鉴定了响应hgcsf的亚克隆(utp-hgcsfr)。

活力检测：以媒介物、rhgcsf、rhtpo、rhepo或化合物x将ut7-tpo、ut7-epo或utp-hgcsfr细胞处理48小时。通过(perkinelmer)检测活力。

粒细胞分化检测：将cd34阳性人骨髓细胞在补充有人干细胞因子(hscf,r&dsystems)以及媒介物、rhgcsf或化合物x的培养基中培养7天。以抗cd15(bdbiosciences)对细胞染色，并通过facs分析。

磷酸-stat3和磷酸-stat5的检测：将细胞以媒介物、rhgcsf或化合物x培养不同的时间，并使用检测试剂盒(perkinelmer)测量磷酸-stat3和磷酸-stat5。

放射性配体结合实验：以[125i]rhgcsf(perkinelmer)在rhgcsf或化合物x存在或不存在下，将utp-hgcsfr细胞于室温下孵育2h。将细胞洗涤两次，并在闪烁计数器中测量放射活性量。

结果

化合物x激活了以hgcsfr表达载体共转染的细胞中的stat3和stat5应答荧光素酶报告子(图1a和图1b)。化合物x在转染的hgcsfr不存在下未激活任一报告子(未显示)。化合物x未激活以htpor或hepor表达载体转染的hek293细胞中的stat5应答荧光素酶报告子(图2a和图2b)。

化合物x增加了utp-hgcsfr稳定细胞的活力(图3)，但未增加tpo或epo应答的ut-7细胞的生长(数据未显示)。化合物x增加了utp-hgcsfr稳定细胞中stat3和stat5的磷酸化(图3b和图3c)。

化合物x诱导cd34阳性的人骨髓细胞(bm-hc)中粒细胞特异性标志物cd15(fut4)的表达(图4)。相比gcsf的正常血清浓度，化合物x增加了0.1ng/mlrhgcsf的效应。

比较了来自不同物种的gcsfr的跨膜结构域的氨基酸序列(图5)。化合物x在表达猴而非小鼠、豚鼠或兔gcsfr的细胞中具有活性(数据未显示)。seqidno.:01是来自人的gcsfr的跨膜结构域；seqidno.:02是来自猴的gcsfr的跨膜结构域；seqidno.:03是来自兔的gcsfr的跨膜结构域；seqidno.:04是来自豚鼠的gcsfr的跨膜结构域；seqidno.:05是来自小鼠的gcsfr的跨膜结构域。

通过用存在于小鼠gcsfr中的类似位置的n(n602)取代hgcsfr中的h627，以及通过用h取代小鼠gcsfr中的n602，产生了突变型受体。化合物x在表达mgcsfr或hgcsfr-h627n的细胞中无活性(图6a)。然而，化合物x对mgcsfr-n602h具有活性(图6b)。均值(一式三份)±sd

化合物x未取代结合utp-hgcsfr细胞的[125i]rhgcsf，但是[125i]rhgcsf的结合以浓度依赖性方式增强(图v)。

讨论

发现了激活gcsfr功能的新的小分子人gcsfr激动剂。发现化合物x能激活gcsfr/jak/stat信号转导通路并增加含有hgcsfr的细胞的活力。化合物x促进骨髓细胞分化为粒细胞、增加cd15表达。化合物x依赖于hgcsfr表达，并且受体跨膜结构域中的组氨酸为活性所需，这类似于针对小分子人tpor激动剂所发现的。化合物x以与变构受体调节一致的方式增加gcsf结合。

这些数据证明化合物x为新的小分子选择性hgcsfr激动剂，其以与gcsf不同且与小分子htpor激动剂的机制类似的方式激活受体。化合物x化学产品系列的进一步优化应当能产生新一代的可经口治疗中性粒细胞减少症的分子，其相比当前的可注射rhgcsf具有改善的安全性和便利性。

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说明书中使用的表示成分、反应条件等量的所有数字应当理解为在所有情形下均由术语“约”修饰。因此，除非有相反指示，本文所示的数字参数为近似值，其可基于试图获取的所需的性质发生改变。至少并且不试图将等同原则的应用限制于要求本申请优先权的任何申请中的任何权利要求的范围，每个数字参数均应当根据有效数字的数目和常用的四舍五入法加以理解。

以上描述公开了本发明的几种方法和材料。本发明容许修改方法和材料，以及改变制造方法和设备。考虑本公开或本文公开的发明的实施，此类修改将变得对本领域技术人员显而易见。因此，本发明不试图限制于本文公开的具体的实施方案，但其包括在本发明的真实范围和精神内的所有修饰和改变。

本文引用的所有参考文献，包括但不限于公布的或未公布的申请、专利和参考文献，均通过引用以其整体并入本文，且据此组成本说明书的一部分。对于通过引用并入的出版物和专利或专利申请与本说明书中包含的公开相矛盾的程度，本说明书试图替代和/或优先于任何此类相矛盾的材料。

序列表

<110>利亘制药公司

<120>与粒细胞集落刺激因子受体相关的方法和组合物

<130>ligand.200wo

<150>61/559660

<151>2011-11-14

<150>61/561510

<151>2011-11-18

<160>5

<170>fastseqforwindowsversion4.0

<210>1

<211>31

<212>prt

<213>智人(homosapiens)

<400>1

gluglysergluleuhisileileleuglyleupheglyleuleuleu

151015

leuleuthrcysleucysglythralatrpleucyscysserpro

202530

<210>2

<211>31

<212>prt

<213>猴(monkey)

<400>2

gluglysergluleuhisileleuleuglyleupheglyleuleuleu

151015

leuleuthrcysleucysglythralatrpleucyscysserpro

202530

<210>3

<211>31

<212>prt

<213>家兔(oryctolaguscuniculus)

<400>3

glugluservalleuhisileileleuglyleuserglyserleuphe

151015

leuleuleucysleucysglythrthrtrpleucyscysserpro

202530

<210>4

<211>31

<212>prt

<213>天竺鼠(caviaporcellus)

<400>4

glyglusergluilehisilephevalalavalpheglyileleuile

151015

leuleuilecysleucysglythrthrtrpleucyscyshispro

202530

<210>5

<211>30

<212>prt

<213>小家鼠(musmusculus)

<400>5

aspproseraspleuasnilepheleuglyileleucysleuvalleu

151015

leuserthrthrcysvalvalthrtrpleucyscyslysarg

202530