本发明涉及一种昆虫解剖皿的制备方法及其应用，属于昆虫解剖学领域。
背景技术：
昆虫是动物界中种类最多的动物群体，人类已知的昆虫有100余万种，对农业生产和人类健康造成重大影响。以水稻上重要的农业昆虫稻飞虱为例，稻飞虱可通过刺吸水稻汁液，引起“虱烧”等症状，造成水稻减产。此外，稻飞虱还传播水稻条纹叶枯病、水稻黑条矮缩病毒病、南方水稻黑条矮缩病和水稻齿叶矮缩病等多种水稻病毒病，其传播病毒病造成的危害甚至高于昆虫本身的危害。
对昆虫特定组织进行解剖和研究对解析昆虫的致害机制具有重要作用。目前已知的植物病毒约有1100种，其中约80％的植物病毒依赖媒介昆虫进行传播，部分昆虫可将病毒传递到后代。持久增殖型植物病毒通过昆虫取食进入食道、穿过中肠微绒毛侵染上皮细胞并建立初侵染点，增殖后穿过基底膜到达肠道表面的肌肉细胞，随后沿着肌纤维扩散到整个消化道，释放到血淋巴，侵入唾液腺，随昆虫取食进入植物韧皮部。通过组织解剖和免疫荧光标记等研究发现，叶蝉的共生菌sulcia可以与水稻矮缩病毒直接发生相互作用，并携带病毒经过上皮组织进入叶蝉卵母细胞[1]，番茄黄曲叶病毒及水稻条纹病毒的病毒粒子可以与介体昆虫的卵黄原蛋白(vg)互作，侵染卵母细胞，从而进行垂直传播[2，3]。此外，通过对灰飞虱脂肪体、血细胞、卵巢等的解剖和研究发现，灰飞虱雌虫血细胞可产生丰富的vg并最终介导rsv通过卵传播[4]。
当前，对昆虫的组织获取一般是通过使用化学固定液对虫体进行固定，可能会影响其生理活性。对于体型较大的昆虫其组织解剖相对简单，而对于体型较小的昆虫，解剖则需要在体式显微镜下使用精细的解剖镊子进行解剖。如稻飞虱成虫体连翅长大多数仅为3～5mm，其组织如头、中肠、脂肪体等体积则更小。由于解剖镊子前端非常尖细，直接在坚硬的培养皿上进行解剖很快会导致镊子前段弯曲，进而无法使用。本发明针对昆虫组织解剖中存在的这个问题，提供了一种昆虫解剖皿的制备方法，利用这种解剖皿进行昆虫组织解剖，解决了体型较小昆虫的组织解剖时对镊子造成损伤的问题，在解剖皿上滴上生理盐水后进行昆虫组织解剖，可模拟昆虫体内环境，保证昆虫组织的生理活性，用于后续研究。
参考文献：
1、jiad，maoq，cheny，liuy，chenq，wuw，zhangx，chenh，liy.weit.insectsymbioticbacteriaharboursviralpathogensfortransovarialtransmission.naturemicrobiology，2017，2：17025.
2、weij，heyz，guoq，guot，liuyq，zhouxp，liuss，wangxw.vectordevelopmentandvitellogenindeterminethetransovarialtransmissionofbegomoviruses.procnatlacadsciusa，2017，114(26)：6746-6751.
3、huoy，liuw，zhangf，chenx，lil，liuq，zhouy，weit，fangr，wangx.transovarialtransmissionofaplantvirusismediatedbyvitellogeninofitsinsectvector.plospathogens.2014，10(3)：e1003949.
4、huoy，yuy，chenl，liq，zhangm，songz，chenx，fangr，zhangl.insecttissue-specificvitellogeninfacilitatestransmissionofplantvirus.plospathog.2018，14(2)：e1006909.
技术实现要素：
本发明针对目前没有特定的昆虫解剖皿的现状，提供一种昆虫解剖皿的制备方法，主要采用环氧树脂ab混合型水晶滴胶(软胶)制备昆虫解剖皿。此解剖皿在组织解剖时清洗和消毒非常方便，且可在解剖时保护精细的解剖镊子不被损坏。
本发明通过以下技术方案实现：
一种昆虫解剖皿的制备方法，包括以下步骤：
1、按照重量3∶1比例称取环氧树脂a胶和b胶，其中b胶为凝固剂；
2、将a胶和b胶在干净的小烧杯中混合，搅拌均匀后倒入洁净的培养皿中；
3、放入真空泵中去除气泡；
4、水平静置6～8个小时，待胶体凝固即制得昆虫解剖皿。
采用本发明方法制备的昆虫解剖皿，具有透明度高，不收缩，不起翘，柔软性好，易清洁等特点。解剖皿光滑的胶面便于组织解剖时的清洗及消毒，解剖皿具有一定的柔软性，可保护精细的解剖镊子尖端不被损坏，特别适合采用精细的解剖镊子进行昆虫组织的解剖。在此解剖皿上滴加10～20μl的昆虫生理盐水，使其形成一个椭圆形液滴。将要解剖的昆虫置于冰面上短暂预冷，使其进行短暂休眠后置于生理盐水的液滴中，可模拟昆虫体内生理环境，解剖获取有生理活性的昆虫组织。
上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚展示本发明的方法，并可依照说明书的内容予以实施，具体实施方式由以下实施例详细给出。
具体实施方式
实施例1用解剖皿进行灰飞虱中肠组织的解剖
按照重量3∶1比例，用烧杯称取6g环氧树脂a胶和2g环氧树脂b胶。将b胶倒入含有a胶的烧杯中，即刻用玻棒沿同一个方向搅拌均匀，倒入玻璃培养皿或塑料培养皿，ab胶倒入的高度约为培养皿高度的2/3，将培养皿置于真空泵中抽真空，去除溶液中的气泡，水平放置，静止8小时，待ab胶凝固后，制得昆虫解剖皿。
制作解剖皿时，培养皿大小可根据需要选择不同直径的培养皿。本案例对昆虫灰飞虱进行解剖，由于灰飞虱体型较小，体长仅4～5mm，因此选择直径为60cm的培养皿。
将灰飞虱置于冰面放置进入短暂休眠，然后在昆虫解剖皿上滴加10～20μl生理盐水，使其形成圆形液滴，再将休眠中的灰飞虱放入，使用尖细解剖镊子破坏灰飞虱头部与胸部连接处，使头部与胸腹部分离，以此为突破口，另一个镊子夹住尾部，将整个肠组织从尾部拉出，在生理盐水缓冲液中选取中肠组织。
以上所述仅为本发明的实施例，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。