本发明涉及南瓜籽多肽技术领域，具体涉及一种酶法制备南瓜籽多肽的方法。
背景技术
近年来，我国对南瓜籽的开发利用多集中在南瓜籽油上，如果在制油的同时将南瓜蛋白进行开发利用，无疑将极大地促进南瓜资源的开发与利用。但目前南瓜籽粕一般只被当作工业废料处理，或用做普通饲料的添加物。将南瓜籽粕直接加工为食品或作为食品成分，由于其颜色和味道等性状较为特殊，难以获得理想的食用效果。若用酶法将其降解为小分子肽，则可大大提高其在食品中的理化性能，并可能获得其前体没有的生理活性。因此，将南瓜籽粕进行酶解处理具有较大的实用价值和应用前景。植物蛋白水解率一般较动物蛋白低，采用单酶水解较难获得足够短肽。生物活性肽因具有抗氧化、降血压、降胆固醇、抗肿瘤等功效，易吸收、健康安全等特点，已成为全球天然产物研究热点。其中抗氧化肽具有抑制生物大分子过氧化及清除体内自由基功效。因此，有必要研究一种南瓜籽多肽的制备方法。
技术实现要素：
针对上述技术中存在的不足之处，本发明提供了一种工艺安全、制备便捷的南瓜籽多肽的制备方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种南瓜籽多肽的制备方法，包括如下步骤：步骤一、湿热处理：将所述南瓜籽蛋白与蒸馏水混匀，并进行加热加压处理，得到湿热南瓜籽蛋白浆液；步骤二、一次酶解：调节所述湿热南瓜籽蛋白浆液ph，并加入一次复合酶进行超声波处理，待一次酶解反应结束，得到一次酶解液；步骤三、二次酶解：调节所述一次酶解液的ph，并加入二次复合酶进行超声波处理，待二次酶解反应结束，得到二次酶解液；步骤四、灭酶、脱盐脱苦：对所述二次酶解液进行微波灭酶处理，得到灭酶酶解液，用多功能膜分离机，在分离的过程中将盐和苦味脱掉并将滤渣除去；步骤五、多肽的富集：离心后的上清液通过超滤富集活性肽，最后经浓缩和冷冻干燥，得到南瓜籽多肽。
优选的是，所述步骤一中南瓜籽蛋白与蒸馏水按料液比1：8～12，加热温度为90～100℃，保温处理时间为20～30分钟。
优选的是，所述步骤二中一次酶解的过程具体如下：调节湿热南瓜籽蛋白浆液的ph至4～5，并加入一次复合酶进行超声波处理，酶解反应温度为53～57℃，酶解反应时间为2～3小时，超声功率为30～40khz，待一次酶解反应结束，得到一次酶解液。
优选的是，所述一次复合酶包括纤维素酶和糖化酶，所述纤维素酶和糖化酶的比例为1：2～3，且一次复合酶的加酶量为湿热南瓜籽蛋白浆液用量的2～2.5ug/g。
优选的是，所述步骤三中二次酶解的过程如下：调节一次酶解液的ph至8～9，并加入二次复合酶进行超声辅助酶解，酶解反应温度为48～52℃，酶解反应时间为3～4小时，超声功率为30～40khz，待二次酶解反应结束，得到二次酶解液。
优选的是，所述二次复合酶包括碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶，碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶的比例依次为3～4：1～2：1：2～3，且二次复合酶的加酶量为南瓜籽蛋白浆液用量的2.5～3.5ug/g。
优选的是，所述步骤四中微波灭酶的过程如下：对二次酶解液进行微波灭酶处理，微波功率为400～600w，微波灭酶温度为90～95℃，微波灭酶时间为3～5分钟，待微波灭酶结束，得到灭酶酶解液；静置冷却30～40分钟，通过多功能分离设备过滤、脱盐脱苦，得到离心后的上清液。
优选的是，所述步骤五中多肽的富集条件如下：超滤所用超滤膜的截留分子量为4000～6000da，超滤压力为0.20～0.30mpa，料液质量浓度为1%～3%，料液ph为7～8，超滤时间为40～60分钟。
优选的是，所述南瓜籽蛋白的吸水性为2.33～3.12g/g、吸油性为2.48～3.06g/g；所述南瓜籽多肽的吸水性为1.82～2.23g/g、吸油性为2.52～3.05g/g。本发明与现有技术相比，其有益效果是：
（1）酶解南瓜籽蛋白之前可对蛋白进行预处理，加热加压处理，可使其高度压缩的结构松散开，能够使蛋白质充分变性，提高水解度，加快反应速度，提高反应效率蛋白的预处理显著地提高了酶解效率。
（2）通过对一次酶解时采用一定比例的纤维素酶+糖化酶组成的复合酶进行酶解，有效去除一些糖类等假蛋白，显著提高了南瓜籽多肽的纯度。通过二次酶解时采用一定比例的碱性蛋白酶+中性蛋白酶+木瓜蛋白酶+风味蛋白酶，并且进行超声波处理，碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶组成的复合酶可有效提高南瓜籽蛋白的水解率。
（3）通过采用微波灭酶，可有效避免南瓜籽多肽在高温下失活，使得制得的多肽具有一定的生物活性，多功能膜分离机，在分离的过程中将盐和苦味脱掉，使多肽具有良好的风味。
（4）通过采用超滤的方法，使用不同分子截流量的膜可以获得不同分子量的多肽。该南瓜籽多肽的制备方法，工艺安全、纯度高、风味较佳、制备便捷。
具体实施方式
下面对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
<实施例1>
本发明提供了一种南瓜籽多肽的制备方法，包括如下步骤：
步骤一、将南瓜籽蛋白与蒸馏水按料液比1：8混匀，并加热至90℃保温处理20分钟，得到湿热南瓜籽蛋白浆液；
其中，所述南瓜籽蛋白的吸水性为2.33g/g、吸油性为2.48g/g；
步骤二、调节湿热南瓜籽蛋白浆液的ph至4，并加入一次复合酶进行超声波处理，所述一次复合酶采用纤维素酶+糖化酶，所述纤维素酶：糖化酶的比例为1：2，且一次复合酶的加酶量为湿热南瓜籽蛋白浆液用量的2ug/g，酶解反应温度为53℃，酶解反应时间为2小时，超声功率为30khz，待一次酶解反应结束，得到一次酶解液；
步骤三、调节一次酶解液的ph至8，并加入二次复合酶进行超声辅助酶解，所述二次复合酶采用碱性蛋白酶+中性蛋白酶+木瓜蛋白酶+风味蛋白酶，其比例为3：1：1：2，且二次复合酶的加酶量为南瓜籽蛋白浆液用量的2.5ug/g，酶解反应温度为48℃，酶解反应时间为3小时，超声功率为30khz，待二次酶解反应结束，得到二次酶解液；
步骤四、对二次酶解液进行微波灭酶处理，微波功率为400w，微波灭酶温度为90℃，微波灭酶时间为3分钟，待微波灭酶结束，得到灭酶酶解液；静置冷却340分钟，通过多功能分离设备过滤、脱盐脱苦，得到多肽溶液；
步骤五、多肽的富集：离心后的上清液通过超滤富集活性肽，超滤所用超滤膜的截留分子量为4000da，超滤压力为0.20mpa，料液质量浓度为1%，料液ph为7，超滤时间为40分钟，最后经浓缩和冷冻干燥，得到南瓜籽多肽，所述南瓜籽多肽的吸水性为1.82g/g、吸油性为2.52g/g。
<实施例2>
本发明提供了一种南瓜籽多肽的制备方法，包括如下步骤：
步骤一、将南瓜籽蛋白与蒸馏水按料液比1：12混匀，并加热至100℃保温处理30分钟，得到湿热南瓜籽蛋白浆液；
其中，所述南瓜籽蛋白的吸水性为3.12g/g、吸油性为3.06g/g；
步骤二、调节湿热南瓜籽蛋白浆液的ph至5，并加入一次复合酶进行超声波处理，所述一次复合酶采用纤维素酶+糖化酶，所述纤维素酶：糖化酶的比例为1：3，且一次复合酶的加酶量为湿热南瓜籽蛋白浆液用量的2.5ug/g，酶解反应温度为57℃，酶解反应时间为3小时，超声功率为40khz，待一次酶解反应结束，得到一次酶解液；
步骤三、调节一次酶解液的ph至9，并加入二次复合酶进行超声辅助酶解，所述二次复合酶采用碱性蛋白酶+中性蛋白酶+木瓜蛋白酶+风味蛋白酶，其比例为4：2：1：3，且二次复合酶的加酶量为南瓜籽蛋白浆液用量的3.5ug/g，酶解反应温度为52℃，酶解反应时间为4小时，超声功率为40khz，待二次酶解反应结束，得到二次酶解液；
步骤四、对二次酶解液进行微波灭酶处理，微波功率为600w，微波灭酶温度为95℃，微波灭酶时间为5分钟，待微波灭酶结束，得到灭酶酶解液；静置冷却40分钟，通过多功能分离设备过滤、脱盐脱苦，得到多肽溶液；
步骤五、多肽的富集：离心后的上清液通过超滤富集活性肽，超滤所用超滤膜的截留分子量为6000da，超滤压力为0.30mpa，料液质量浓度为3%，料液ph为8，超滤时间为60分钟，最后经浓缩和冷冻干燥，得到南瓜籽多肽，所述南瓜籽多肽的吸水性为2.23g/g、吸油性为3.05g/g。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。