本发明属于生物法制备手性化合物，涉及一种应用固定化酶novozym®40086立体选择性催化酯化外消旋洛索洛芬获得2种构型的洛索洛芬对映体的方法。采用novozym®40086脂肪酶选择性催化外消旋洛索洛芬酯化合成(rs)-和(ss)-洛索洛芬正己酯，从而获得较高光学纯度的(rr)-和(sr)-洛索洛芬。
背景技术：
洛索洛芬钠是一种非甾体抗炎镇痛药(nsaids)，由日本三共株式会社开发上市。以镇痛效果好，起效快，副作用小而广受好评。洛索洛芬是一种含有4种对映体的手性药物，其不同构型的对映体具有不同的药理活性，然而该药物目前尚无手性临床数据，全部为外消旋体给药。开发获得洛索洛芬钠单一对映体的方法具有重要意义。
获得单一手性药物对映体的方法主要有化学合成法和外消旋体拆分法等。由于外消旋体拆分法具有成本较低、开发时间较短，易于工业化等优点，因此在工业应用中占据主导地位。常见的外消旋拆分技术有膜法、微生物法、结晶法、色谱法、萃取法或酶法等。其中酶法拆分能够利用酶的高度立体选择性，催化外消旋体中的某一种构型对映体进行酯化以获得高产率、高选择性的单一对映体，具有底物立体选择性高、反应条件温和、生产过程绿色环保、易于工业化等优点，对于外消旋药物的手性分离绿色化生产具有极为重要的意义。
本发明中公开了一种在有机溶剂中，经novozym®40086脂肪酶的立体选择性催化酯化(rs)-和(ss)-洛索洛芬，获得(rr)-和(sr)-洛索洛芬的方法；由于该酯化反应是可逆反应，因此向反应体系中加入除水剂无水硫酸镁使反应向正方向移动，从而达到提高转化率和(rr)-和(sr)-洛索洛芬光学纯度的目的；该技术解决了非酶拆分技术中存在的产物光学纯度低、设备及操作复杂、拆分时间长等问题，也解决了水溶剂酶法中存在的反应浓度难以提高等问题，同时该方法反应条件温和、绿色环保、操作简便。
技术实现要素：
本发明的目的是，针对于其它外消旋体拆分法分离手性对映体的产物光学纯度低、反应浓度低和反应速率慢等难题，提出了一种获得部分构型洛索洛芬对映体的方法。
本发明的技术方案：利用novozym®40086脂肪酶对洛索洛芬对映体的高选择性、高催化效率，在有机溶剂中高催化效率拆分外消旋洛索洛芬获得其部分构型对映体。将一定浓度的外消旋洛索洛芬对映体和正己醇、以及固定化novozym®40086脂肪酶加入到甲基叔丁基醚(mtbe)中；外消旋洛索洛芬对映体的浓度为100-300mmol/l，novozym®40086脂肪酶的用量为50-150mg/ml，正己醇浓度为300-800mmol/l，无水硫酸镁的用量为0-125mg/ml；于25ml的反应管中在一定转速下加热反应一定时间并对反应进行监测。并通过高效液相色谱仪对产物进行定性和定量检测；测得目标产物的对映体过量值为98.64%，收率72.70%，底物整体转化率63.40%。
本发明相比现有技术有如下优势：
本发明利用novozym®40086脂肪酶对洛索洛芬对映体具有高立体选择性、对(rs)-和(ss)-对映体具有高催化效率。该方法反应浓度高，反应使用外消旋洛索洛芬浓度可达300mmol/l；反应条件温和；生产过程绿色环保，使用第三类有机溶剂甲基叔丁基醚；反应体系简单，反应全过程均无使用或生成任何毒害物质；使用固定化酶，方便酶的回收利用。本发明采用novozym®40086脂肪酶对洛索洛芬对映体进行拆分，通过控制反应温度、底物浓度、醇浓度、除水剂用量等条件，可提高(rr)-和(sr)-洛索洛芬对映体的光学纯度。本方法实施过程简单，操作简便。
【具体实施方式】
下面结合本发明的实施例对本发明做进一步说明：
一、测试与分析
本发明所述实施例中分离产物的对映体过剩量和底物转化率，根据检测的洛索洛芬各对映体浓度进行计算。各对映体浓度采用waterse2695高效液相色谱仪分析进行检测，使用色谱柱为rj-oh色谱柱（150mm×4.6mm）和diamonsilc18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)。
二、实施例
实施例1
将100mmol/l的外消旋洛索洛芬对映体和100mmol/l正己醇，300mg的novozym®40086脂肪酶加入到2ml有机溶剂中；于25ml的反应管中在400rpm、79℃下加热反应4h。此时，底物转化率为52.34%，剩余洛索洛芬对映体的对映体过量值为84.84%，目标对映体收率为88.09%。
实施例2
将100mmol/l的外消旋洛索洛芬对映体和100mmol/l正己醇，300mg的novozym®40086脂肪酶，250mg无水硫酸镁，加入到2ml有机溶剂中；于25ml的反应管中在400rpm、反应温度为79℃，加热反应15h。此时，底物转化率为54.22%，剩余洛索洛芬对映体的对映体过量值为90.94%，目标对映体收率为87.41%。
实施例3
将300mmol/l的洛索洛芬对映体和500mmol/l正己醇，300mg的novozym®40086脂肪酶，250mg无水硫酸镁，加入到2ml有机溶剂中；于25ml的反应管中在400rpm、反应温度为79℃，加热反应12h。此时，底物转化率为59.91%，剩余洛索洛芬对映体的对映体过量值为97.48%，目标对映体收率79.17%。
实施例4
将300mmol/l的洛索洛芬对映体和500mmol/l正己醇，300mg的novozym®40086脂肪酶，250mg无水硫酸镁，加入到2ml有机溶剂中；于25ml的反应管中在400rpm、反应温度为79℃，加热反应20h。此时，底物转化率为63.40%，剩余洛索洛芬对映体的对映体过量值为98.64%，目标对映体收率72.70%。
实施例5
将100mmol/l的洛索洛芬对映体和100mmol/l正己醇，200mg的novozym®40086脂肪酶，加入到2ml有机溶剂中；于25ml的反应管中在400rpm、反应温度为50℃，加热反应0.5h。此时，底物转化率为27.08%，剩余洛索洛芬对映体的对映体过量值为33.44%，目标对映体收率97.30%。
以上所述实例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变化和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。