本发明涉及硫酸皮肤素提取技术领域，特别是涉及一种肝素钠废液提取硫酸皮肤素的方法。
背景技术：
硫酸皮肤素（ds）是一种硫酸化的二糖单位组成的糖胺聚糖，其二糖单位l-艾杜糖醛酸和n-乙酰氨基半乳糖以糖苷键连接而成，天然硫酸皮肤素的分子量一般在15000da～45000da之间。硫酸皮肤素广泛存在于动物组织中，具有抗凝血、抗血栓、抗炎症、促进伤口愈合、抑制肿瘤细胞内活跃蛋白因子活性等生理功能，尤其对血栓的治疗效果尤为显著。近年来国内外学者纷纷投入研究，主要集中在从猪小肠粘膜、牛小肠粘膜、猪肺中提取硫酸皮肤素的工艺研究上，也有部分学者从生产精品肝素钠产生的下脚料中提取硫酸皮肤素，对于从粗品肝素钠废液中提取硫酸皮肤素鲜有研究。
粗品肝素钠生产过程中会产生大量废液，废液中含有蛋白质、核酸、硫酸皮肤素、硫酸乙酰肝素等成分，如果得不到有效处理，不但会造成资源浪费，而且会严重污染环境。
粗品肝素钠废液和精品肝素钠下脚料中都含有大量蛋白质、核酸等杂质，目前的提取方式除极少数将原料进行脱脂处理，普遍采取原料溶解后直接进行提取，其中的杂质不仅影响了提取效果，而且使后续精制工序繁琐复杂。如何能够简化精制工序，从肝素钠废液中提取纯度更高的硫酸皮肤素，是本发明要解决的技术问题。
技术实现要素：
本发明就是针对上述存在的缺陷而提供一种肝素钠废液提取硫酸皮肤素的方法。本发明对肝素钠废液进行蛋白絮凝除去蛋白、核酸等杂质后再进行硫酸皮肤素的提取，不但简化后续精制工序、提高ds纯度，而且杂质蛋白烘干后可应用到禽畜饲料生产中，增加企业额外收益。
本发明的一种肝素钠废液提取硫酸皮肤素的方法技术方案为，以生产粗品肝素钠产生的废液为原料，经过蛋白絮凝剂除去蛋白质、核酸等杂质，过滤得到的清液再经过离子交换树脂吸附、氯化钠溶液洗脱，洗脱液经过超滤膜提纯浓缩，浓缩液经乙醇分级沉淀、干燥而得到硫酸皮肤素。
所述的一种肝素钠废液提取硫酸皮肤素的方法，包括以下步骤：
（1）除杂澄清：向肝素钠废液中加入蛋白絮凝剂，虹吸上清液，下层沉淀物离心，合并离心清液与虹吸上清液得到清液，收集固体分离物；
（2）树脂吸附：将步骤（1）所得清液升温，加入树脂，缓慢搅拌吸附，将树脂滤出；
（3）清洗、洗脱：用清水反复冲洗树脂至无杂物，再用5%～10%的氯化钠溶液两次洗脱树脂，收集洗脱液；
（4）超滤膜提纯浓缩：将步骤（3）所得洗脱液通过截留分子量为50000da超滤膜，收集透析液再通过截留分子量为5000da的超滤膜，浓缩倍数为4～5倍，收集浓缩液；
（5）醇沉：向浓缩液中添加无水乙醇，静置，分离出沉淀，再向分离上清液中继续添加无水乙醇，静置后收集硫酸皮肤素沉淀；
（6）脱水、干燥：向步骤（5）所得硫酸皮肤素沉淀加入无水乙醇，脱水滤出沉淀，烘干，即得硫酸皮肤素成品。
步骤（1）中，所述蛋白絮凝剂为壳聚糖、羧甲基壳聚糖、氨基葡聚糖中的至少一种。
步骤（1）中，加入蛋白絮凝剂后，搅拌30分钟后静置1～2小时。
步骤（2）中，所述树脂为罗门哈斯强碱性阴离子交换树脂。
步骤（2）具体为，将步骤（1）所得清液升温至55～57℃，并调整至ph8.0～9.0，加入树脂，缓慢搅拌吸附8～10小时，用80目尼龙过滤袋将树脂滤出。
步骤（3）中，氯化钠溶液的添加量为树脂质量的2～4倍。
步骤（5）中，无水乙醇的温度为10℃～25℃。
步骤（5）具体为，在搅拌状态下，向浓缩液中添加无水乙醇，使液体的乙醇浓度达到30%～35%v/v，停止搅拌，10℃～25℃静置5～10小时，分离出沉淀，再向分离上清液中继续添加无水乙醇，至乙醇浓度达到35%～50%v/v，10℃～25℃静置9～18小时后收集硫酸皮肤素沉淀。
步骤（6）具体为，向步骤（5）所得硫酸皮肤素沉淀加入无水乙醇，脱水0.5～2小时，滤出沉淀，置于55～60℃烘箱中烘干，即得硫酸皮肤素成品，所述无水乙醇的温度为10℃～25℃。
本发明的有益效果为：
（1）本发明利用粗品肝素钠废液为原料，经过蛋白质絮凝剂沉淀除杂、所得澄清滤液再经强碱性离子交换树脂吸附、氯化钠溶液洗脱、洗脱液通过50000da超滤膜除去大分子杂质、透析液通过5000da超滤膜浓缩、浓缩液再经乙醇分级沉淀将小分子肝素、硫酸软骨素除去而得高纯度硫酸皮肤素。本发明不但工艺简单、绿色环保、易于大规模工业生产，而且为肝素钠废水创造了利用价值，减少了环境污染，为企业增加了社会效益和经济效益。
（2）按本发明所述废液预处理方法得到的蛋白质可应用到禽畜饲料的生产中，使资源得到有效利用，增加企业额外收益。
（3）本发明方法洗脱液经过超滤膜浓缩，减少了沉淀剂乙醇的用量，降低了试剂成本消耗。
（4）本发明方法硫酸皮肤素纯化过程包括超滤膜提纯和乙醇分级沉淀提纯，提高硫酸皮肤素纯度，经取样检测，ds纯度≥95%，抗凝效价≤8uspu/mg，比旋度为-45°～-50°。
综上所述，本发明所述方法工艺简单、绿色环保、利于大规模工业化生产；按本发明所述方法制备硫酸皮肤素纯度高；本发明所述方法产生的副产物蛋白质等杂质可应用到动物饲料生产中，增加企业额外收益。
具体实施方式：
为了更好地理解本发明，下面用具体实例来详细说明本发明的技术方案，但是本发明并不局限于此。
实施例１
一种肝素钠废液提取硫酸皮肤素的方法:
（1）除杂澄清：向2000kg肝素钠废液中加入2kg蛋白絮凝剂（壳聚糖：羧甲基壳聚糖3:1m/m），搅拌30分钟后静置2小时，虹吸上清液，下层沉淀物离心，合并离心清液与虹吸上清液，收集固体分离物；
（2）树脂吸附：将步骤（1）所得清液升温至56℃，并调整至ph8.5，加入100kg强碱性阴离子交换树脂，缓慢搅拌吸附10小时，用80目尼龙过滤袋将树脂滤出；
（3）清洗、洗脱：用清水反复冲洗树脂至无杂物，再用400kg8%的氯化钠溶液分两次洗脱树脂，收集洗脱液；
（4）超滤膜提纯浓缩：将步骤（3）所得洗脱液通过截留分子量为50000da超滤膜，收集透析液再通过截留分子量为5000da的超滤膜，收集浓缩液72kg；
（5）醇沉：在搅拌状态下，向浓缩液中添加无水乙醇，使液体的乙醇浓度达到32%v/v，停止搅拌，15℃静置10小时，分离出沉淀，再向分离上清液中继续添加无水乙醇，至乙醇浓度达到45%v/v，15℃静置12小时后收集硫酸皮肤素沉淀；
（6）脱水、干燥：向步骤（5）所得硫酸皮肤素沉淀加入无水乙醇，脱水1.5小时，滤出沉淀，置于60℃烘箱中烘干，即得硫酸皮肤素2.58kg；
取样检测，ds纯度为95.5%，抗凝效价为7uspu/mg，比旋度为-46°。
实施例2
一种肝素钠废液提取硫酸皮肤素的方法:
（1）除杂澄清：向2000kg肝素钠废液中加入2kg蛋白絮凝剂（壳聚糖：氨基葡聚糖2:1m/m），搅拌30分钟后静置1.5小时，虹吸上清液，下层沉淀物离心，合并离心清液与虹吸上清液，收集固体分离物；
（2）树脂吸附：将步骤（1）所得清液升温至55℃，并调整至ph9，加入100kg强碱性阴离子交换树脂，缓慢搅拌吸附8小时，用80目尼龙过滤袋将树脂滤出；
（3）清洗、洗脱：用清水反复冲洗树脂至无杂物，再用400kg5%的氯化钠溶液分两次洗脱树脂，收集洗脱液；
（4）超滤膜提纯浓缩：将步骤（3）所得洗脱液通过截留分子量为50000da超滤膜，收集透析液再通过截留分子量为5000da的超滤膜，收集浓缩液72kg；
（5）醇沉：在搅拌状态下，向浓缩液中添加无水乙醇，使液体的乙醇浓度达到30%v/v，停止搅拌，10℃静置8小时，分离出沉淀，再向分离上清液中继续添加无水乙醇，至乙醇浓度达到35%v/v，10℃静置18小时后收集硫酸皮肤素沉淀；
（6）脱水、干燥：向步骤（5）所得硫酸皮肤素沉淀加入无水乙醇，脱水0.5小时，滤出沉淀，置于60℃烘箱中烘干，即得硫酸皮肤素2.72kg；
取样检测，ds纯度为95.4%，抗凝效价为6uspu/mg，比旋度为-45°。
实施例3
一种肝素钠废液提取硫酸皮肤素的方法:
（1）除杂澄清：向2000kg肝素钠废液中加入2kg蛋白絮凝剂（壳聚糖：氨基葡聚糖：羧甲基壳聚糖3:1:1m/m/m），搅拌30分钟后静置1小时，虹吸上清液，下层沉淀物离心，合并离心清液与虹吸上清液，收集固体分离物；
（2）树脂吸附：将步骤（1）所得清液升温至57℃，并调整至ph8，加入100kg强碱性阴离子交换树脂，缓慢搅拌吸附9小时，用80目尼龙过滤袋将树脂滤出；
（3）清洗、洗脱：用清水反复冲洗树脂至无杂物，再用400kg10%的氯化钠溶液分两次洗脱树脂，收集洗脱液；
（4）超滤膜提纯浓缩：将步骤（3）所得洗脱液通过截留分子量为50000da超滤膜，收集透析液再通过截留分子量为5000da的超滤膜，收集浓缩液72kg；
（5）醇沉：在搅拌状态下，向浓缩液中添加无水乙醇，使液体的乙醇浓度达到35%v/v，停止搅拌，25℃静置5小时，分离出沉淀，再向分离上清液中继续添加无水乙醇，至乙醇浓度达到50%v/v，25℃静置9小时后收集硫酸皮肤素沉淀；
（6）脱水、干燥：向步骤（5）所得硫酸皮肤素沉淀加入无水乙醇，脱水2小时，滤出沉淀，置于55℃烘箱中烘干，即得硫酸皮肤素2.80kg；
取样检测，ds纯度为95.6%，抗凝效价为8uspu/mg，比旋度为-49°。