本发明涉及禽、畜、水产养殖技术领域，特别涉及一种微藻活性细胞养殖营养液及其制备方法。
背景技术：
随着人们生活水平的不断提高，对禽、畜、水产品的需求量不断增加，刺激了养殖业的发展，禽、畜、水产养殖逐步转变为专业化、集约化、高密度养殖。禽、畜、水产动物的养殖，不仅直接关系到养殖产量和养殖效益，而且也直接影响终产品肉质的质量。
养殖过程中，动物机体长期接受应激因素的影响，例如：长期食用超量添加抗生素的饲料；养殖环境空气污浊、饮水污染，病毒、细菌、原虫等致病性因素的侵袭；频繁合群转群、频繁换料换人。长期应激因素的影响对动物机体产生较大影响，例如：体内毒素累积，生理机能衰退，免疫系统功能低下；动物机体酸碱度失调，细胞作用变弱；血红细胞携氧和养分能力降低，酶促反应效率下降，新陈代谢缓慢；消化系统受损，营养不良，增重缓慢。
技术实现要素：
本发明的目的一在于：提供一种微藻活性细胞养殖营养液，用于畜类、禽类以及水产养殖。本发明的养殖营养液能够：作为天然补血剂；排除动物体内毒素；平衡动物体液酸碱度，促进新陈代谢；补充动物营养，提高细胞再生能力；增强动物免疫力；防治、调理、修复动物的消化道、内循环等系统疾病。
本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：
一种微藻活性细胞养殖营养液，包含多种呈活体状态的微藻，所述微藻包括蛋白核小球藻(chlorellapyrenoidosa)和螺旋藻(spirulinasp.)，按微藻细胞个体数量计，蛋白核小球藻:螺旋藻为1:(0.2-2)
较佳的，按微藻细胞个体数量计，蛋白核小球藻:螺旋藻为1:(0.4-1.2)。
较佳的，按微藻细胞个体数量计，蛋白核小球藻:螺旋藻为1:(0.65-0.8)。
通过采用上述方案，蛋白核小球藻属于绿藻，为一种真核生物，是一种球形单细胞淡水藻类，是地球上最早的生命之一，是一种高效的光合植物。蛋白核小球藻借助阳光、水和二氧化碳，每隔20h即可分裂出4个细胞，繁殖能力旺盛，不断转化太阳能量，产生高能营养物质，并在增殖中释放出大量氧气。蛋白核小球藻的植物性蛋白质含量在50％以上，脂肪含量为6-7％，其氨基酸组成亦极为优良，含有维生素、纤维质、叶酸、核酸、钙、镁、铁、锌等营养元素。蛋白核小球藻还具有修复细胞的作用，可以解除动物体内铬代谢异常，有助于各器官的机能恢复。
螺旋藻属于蓝藻，是一类低等的原核生物，本身富含多种营养物质：蛋白质含量高达60-70％；特有的藻蓝蛋白能够提高淋巴细胞活性，增强动物免疫；富含异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、缬氨酸等氨基酸；富含维生素a、维生素b1、维生素b2、维生素b3、维生素b6、维生素b12、维生素e等维生素；富含动物生长所需的矿物质，钙、磷、镁、铁、钠、锰、锌、钾、氯等，均属细胞生物性范围内的碱金属元素，不对机体细胞和组织器官产生副作用；螺旋藻中的螺旋藻多糖含量高达干重的14-16％，螺旋藻多糖通过抑制机体内自由基氧化反应，降低脂质过氧化作用，减少组织脂褐质的形成，可以达到减缓机体衰老的作用；富含叶绿素，类型主要是叶绿素a，分子结构与动物的血红素十分相似，是动物合成血红蛋白的直接原料。此外，还含有不饱和脂肪酸、碳水化合物、类胡萝卜素、藻青素、烟酸、肌酸、γ-亚麻酸、泛酸钙、叶酸等。
养殖营养液中的上述两种微藻活性细胞本身具有较高的营养价值，能够为动物提供蛋白质、氨基酸、多种有益维生素、多种矿物质，促进动物的生长；再者，其中的微藻细胞能够保持高度活性，发明人经大量实验证明，本发明的养殖营养液中的蛋白核小球藻和螺旋藻之间具有很好的兼容性和共生性，养殖营养液中，微藻活性细胞的数量级可达106个/ml以上，且能够保持旺盛的生命力，养殖营养液的保存期达两年。微藻细胞活性高，生命活动旺盛，能够帮助动物排除动物体内毒素、平衡动物体液酸碱度、促进新陈代谢、提高细胞再生能力、增强动物免疫力，还能作为天然补血剂，防治、调理、修复动物的消化道、内循环等系统疾病，提高进食量，促进动物健康生长。在畜类、禽类以及水产养殖领域，具有很高的实践意义。
本发明的目的二：提供一种微藻活性细胞养殖营养液的制备方法，包括有以下步骤：
s1，分别扩大培殖蛋白核小球藻和螺旋藻，获得两种藻液；
s2，将两种藻液混合获得微藻活性细胞养殖营养液。
较佳的，步骤s1的扩大培殖所用的培养基溶液包括：2-6mg/l乙二胺四乙酸二钠、5-13mg/l柠檬酸、0.05-0.15mg/lfeso4·7h2o、0.15-0.35g/lnahco3、0.03-0.1g/lcacl2、0.05-0.2g/lmgso4·7h2o、1-3.5g/lnano3、0.05-0.15g/lk2hpo4、0.2-1g/lkh2po4、1.5-2.5mg/lmncl2·4h2o、0.02-0.05mg/lznso4·7h2o、0.05-0.1mg/lcuso4·5h2o、0.02-0.05mg/lna2moo4·2h2o、2-4mg/lh3bo3。
通过采用上述方案，培养基溶液中的各组分能够为微藻提供营养元素，促进微藻的健康生长和快速繁殖，提高微藻的生命活性，进而提高营养修复液的功效。
较佳的，步骤s1的扩大培殖过程包括：选择和分离单个微藻细胞，将单个微藻细胞进行分级扩大培殖，每一级扩大培殖过程中，微藻细胞的数量≥106个/ml时，进入下一级扩大培殖过程。
通过采用上述方案，大量实验证明，在微藻培养过程中，当微藻活性细胞的生物密度为≥106个/ml时，较适合微藻的存活和继续更大的繁殖，以此作为分级扩大培养的标准，有利于提高微藻培养的效率和质量。
较佳的，步骤s1的扩大培殖过程包括：单个微藻细胞于15ml培养基溶液中培殖10-15天，获得15ml藻液→转接种到85ml培养基溶液中继续培殖10-15天，获得100ml藻液→转接种到0.9l培养基溶液中继续培殖10-15天，获得1l藻液→转接种到4l培养基溶液中继续培殖10-15天，获得5l藻液→转接种到13l培养基溶液中继续培殖10-15天，获得18l藻液→转接种到782l培养基溶液中继续培殖10-15天，获得800l藻液。
通过采用上述方案，经发明人实验证明，上述培养方式培殖获得的微藻的生物量适宜、微藻活性高、质量好，易于微藻培殖的产业化。
较佳的，步骤s1的扩大培殖过程中，光照强度为2300-2700lux，培殖温度为25-27℃。
通过采用上述方案，设置适宜的光照强度和培殖温度，能够进一步促进微藻的生长繁殖。
较佳的，步骤s1的扩大培殖过程中：向藻液里持续性通入净化空气，净化空气的压强为0.14-0.6mpa；向藻液里间歇性通入co2气体，co2气体的压强为0.14-0.6mpa，通气间隔3-5h，每次通20-50min。
通过采用上述方案，通入的气体不仅能够促进微藻细胞的生长繁殖，还能起到搅动藻液的作用，使得微藻在藻液中均匀分布，提高微藻生长繁殖的均匀性和一致性。
本发明的目的三：提供一种微藻活性细胞养殖营养液的应用，用于畜类、禽类以及水产养殖。
综上所述，本发明具有以下有益效果：
1、本发明提供的养殖营养液中，微藻细胞本身营养丰富，且呈活体状态，能够：作为天然补血剂；排除动物体内毒素；平衡动物体液酸碱度，促进新陈代谢；补充动物营养，提高细胞再生能力；增强动物免疫力；防治、调理、修复动物的消化道、内循环等系统疾病。在畜类、禽类以及水产养殖领域，具有很高的实践意义。
2、本发明提供的养殖营养液中，蛋白核小球藻和螺旋藻之间具有良好的兼容性和共生性，微藻活性细胞的数量级可达106个/ml，且能够保持旺盛的生命力，养殖营养液的保存期达两年；
3、本发明提供的养殖营养液有淡淡的腥藻味，适于畜、禽、水产动物食用习惯；
4、本发明的扩大培殖过程通过大量实验获得，培殖效率高。
具体实施方式
以下对本发明作进一步详细说明。
藻母来源
以下实施例中的蛋白核小球藻(chlorellapyrenoidosa)50-80份和螺旋藻(spirulinasp.)的藻母来源于中国科学院典型培养物保藏委员会淡水藻种库。
实施例1
一种微藻活性细胞养殖营养液，制备过程包括有以下步骤：
s1，分别扩大培殖蛋白核小球藻和螺旋藻，获得两种藻液，其中，扩大培殖中，
两种藻液的扩大培殖过程均包括：显微镜下选择和分离单个微藻细胞→单个微藻细胞于15ml培养基溶液中培殖10天，获得15ml藻液→转接种到85ml培养基溶液中继续培殖10天，获得100ml藻液→转接种到0.9l培养基溶液中继续培殖10天，获得1l藻液→转接种到4l培养基溶液中继续培殖10天，获得5l藻液→转接种到13l培养基溶液中继续培殖10天，获得18l藻液→转接种到782l培养基溶液中继续培殖10天，获得800l藻液。上述每一级扩大培殖结束时，微藻活性细胞的数量均≥106个/ml，最终获得的藻液中的微藻活性细胞的数量≥106个/ml；
所用培养基溶液均包括：2mg/l乙二胺四乙酸二钠、5mg/l柠檬酸、0.05mg/lfeso4·7h2o、0.15g/lnahco3、0.03g/lcacl2、0.05g/lmgso4·7h2o、1g/lnano3、0.05g/lk2hpo4、0.2g/lkh2po4、1.5mg/lmncl2·4h2o、0.02mg/lznso4·7h2o、0.05mg/lcuso4·5h2o、0.02mg/lna2moo4·2h2o、2mg/lh3bo3；
光照强度为2300lux，培殖温度为25℃；向藻液里持续性通入净化空气，净化空气的压强为0.14mpa；向藻液里间歇性通入co2气体，co2气体的压强为0.14mpa，通气间隔3h，每次通20min。
s2，将两种藻液混合获得微藻活性细胞养殖营养液，按微藻细胞个体数量计，蛋白核小球藻:螺旋藻为1:0.2，添加无菌水至微藻活性细胞养殖营养液中微藻活性细胞的数量为106个/ml。
实施例2
与实施例1的区别在于，步骤s1的扩大培殖中，
两种藻液的扩大培殖过程均包括：显微镜下选择和分离单个微藻细胞→单个微藻细胞于15ml培养基溶液中培殖12天，获得15ml藻液→转接种到85ml培养基溶液中继续培殖10天，获得100ml藻液→转接种到0.9l培养基溶液中继续培殖12天，获得1l藻液→转接种到4l培养基溶液中继续培殖12天，获得5l藻液→转接种到13l培养基溶液中继续培殖12天，获得18l藻液→转接种到782l培养基溶液中继续培殖12天，获得800l藻液。上述每一级扩大培殖结束时，微藻活性细胞的数量均≥106个/ml，最终获得的藻液中的微藻活性细胞的数量≥106个/ml；
扩大培殖中：光照强度为2500lux，培殖温度为26℃；向藻液里持续性通入净化空气，净化空气的压强为0.3mpa；向藻液里间歇性通入co2气体，co2气体的压强为0.3mpa，通气间隔4h，每次通35min。
实施例3
与实施例1的区别在于，步骤s1的扩大培殖中，
两种藻液的扩大培殖过程均包括：显微镜下选择和分离单个微藻细胞→单个微藻细胞于15ml培养基溶液中培殖15天，获得15ml藻液→转接种到85ml培养基溶液中继续培殖15天，获得100ml藻液→转接种到0.9l培养基溶液中继续培殖15天，获得1l藻液→转接种到4l培养基溶液中继续培殖15天，获得5l藻液→转接种到13l培养基溶液中继续培殖15天，获得18l藻液→转接种到782l培养基溶液中继续培殖15天，获得800l藻液。上述每一级扩大培殖结束时，微藻活性细胞的数量均≥106个/ml，最终获得的藻液中的微藻活性细胞的数量≥106个/ml；
扩大培殖中：光照强度为2700lux，培殖温度为27℃；向藻液里持续性通入净化空气，净化空气的压强为0.6mpa；向藻液里间歇性通入co2气体，co2气体的压强为0.14-0.6mpa，通气间隔5h，每次通50min。
实施例4
与实施例2的区别在于，步骤s1中，
所用培养基溶液均包括：4mg/l乙二胺四乙酸二钠、9mg/l柠檬酸、0.1mg/lfeso4·7h2o、0.25g/lnahco3、0.07g/lcacl2、0.12g/lmgso4·7h2o、2g/lnano3、0.1g/lk2hpo4、0.6g/lkh2po4、2mg/lmncl2·4h2o、0.03mg/lznso4·7h2o、0.07mg/lcuso4·5h2o、0.03mg/lna2moo4·2h2o、3mg/lh3bo3。
实施例5
与实施例2的区别在于，步骤s1中，
所用培养基溶液均包括：6mg/l乙二胺四乙酸二钠、13mg/l柠檬酸、0.15mg/lfeso4·7h2o、0.35g/lnahco3、0.1g/lcacl2、0.2g/lmgso4·7h2o、3.5g/lnano3、0.15g/lk2hpo4、1g/lkh2po4、2.5mg/lmncl2·4h2o、0.05mg/lznso4·7h2o、0.1mg/lcuso4·5h2o、0.05mg/lna2moo4·2h2o、4mg/lh3bo3。
实施例6
与实施例2的区别在于，步骤s1中，
所用培养基溶液为无菌水。
实施例7
与实施例4的区别在于，步骤s2中，
按微藻细胞个体数量计，蛋白核小球藻:螺旋藻为1:0.4。
实施例8
与实施例4的区别在于，步骤s2中，
按微藻细胞个体数量计，蛋白核小球藻:螺旋藻为1:0.65。
实施例9
与实施例4的区别在于，步骤s2中，
按微藻细胞个体数量计，蛋白核小球藻:螺旋藻为1:0.8。
实施例10
与实施例4的区别在于，步骤s2中，
按微藻细胞个体数量计，蛋白核小球藻:螺旋藻为1:1.2。
实施例11
与实施例4的区别在于，步骤s2中，
按微藻细胞个体数量计，蛋白核小球藻:螺旋藻为1:2。
养殖营养液中微藻活性细胞成活率及兼容性和共生性试验
将实施例1-11制得的11份养殖营养液于室温避光环境下保存10天、1个月、2个月、3个月、6个月，镜检11份养殖营养液，以镜检时微藻活性细胞数量与初始时微藻活性细胞数量之比计算微藻的成活率，镜检前摇匀，检测结果如表1所示。
表1养殖营养液中微藻活性细胞成活率检测结果
由表1可以看出：
(1)实施例1-5和实施例7-11制备的养殖营养液，6个月时，蛋白核小球藻和螺旋藻的成活率仍能保持在91％以上；其中，实施例8和实施例9的养殖营养液的效果最为显著，6个月时，两种微藻的成活率均保持在96％以上，这说明，本发明的养殖营养液中，蛋白核小球藻和螺旋藻均能长期保持生长活性，并且具有很好的兼容性和共生性，使得养殖营养液拥有较长保质期；
(2)对比实施例2和实施例6，实施例6对应的微藻成活率具有大幅降低，6个月时，实施例6对应的蛋白核小球藻和螺旋藻的成活率分别降至80％和81％，说明，相比于采用无菌水，本发明提供的培养基溶液的组分配比合理，能够为微藻提供营养元素，促进微藻的健康生长和繁殖；对比实施例2、实施例4和实施例5，可以进一步看出，本发明提供的培养基的组分浓度对微藻的活性同样存在影响；
(3)对比实施例7-11，蛋白核小球藻和螺旋藻的个体数量之比对成活率具有一定的影响，当上述比例在1:(0.65-0.82)时，成活率较高，这说明，该比例范围内的蛋白核小球藻和螺旋藻，能够更好的互利共生，更具兼容性和共生性。
养殖营养液喂养猪实验
选择品种相同，体重均在(60±2)kg，生长发育正常，健康无病的育肥猪360头，平均分为12组，分别置于相同环境的12个猪圈中。采用常规猪饲料喂养30天，每天上午8:30、下午5:30定时喂料2次。日饮水3次，分别于上午9:30，中午12:30，下午6:30进行，保证每头猪充分饮水。其中，前11组喂养的猪饲料中分别拌入实施例1-11中制备的养殖营养液，养殖营养液的拌入量均为每天每头10ml，第12组不拌入养殖营养液作为对比例。对30天内育肥猪的生病数、每组内每头育肥猪的平均日增重进行分析，结果列于表2。
表2养殖营养液喂养猪实验结果
由表2可以看出，实施例1-11制备的养殖营养液拌入猪饲料后，育肥猪的生病头数明显减少，日增重明显提高，而且，养殖营养液的上述功效与养殖营养液中微藻的活性有关。
养殖营养液喂养羊实验
选择品种相同，体重均在(32±2)kg，生长发育正常，健康无病的育肥羊360只，平均分为12组，分别置于相同环境的12个羊圈中。采用常规羊饲料喂养30天，每天上午8:30、下午5:30定时喂料2次。日饮水3次，分别于上午9:30，中午12:30，下午6:30进行，保证每只羊充分饮水。其中，前11组喂养的羊饲料中分别拌入实施例1-11中制备的养殖营养液，养殖营养液的拌入量均为每天每只10ml，第12组不拌入养殖营养液作为对比例。对30天内育肥羊的生病数、每组内每只育肥羊的平均日增重进行分析，结果列于表3。
表3养殖营养液喂养羊实验结果
由表3可以看出，实施例1-11制备的养殖营养液拌入羊饲料后，育肥羊的生病只数明显减少，日增重明显提高，而且，养殖营养液的上述功效与养殖营养液中微藻的活性有关。
养殖营养液喂养鸡实验
选择品种相同，生长发育正常的肉鸡鸡苗2400只，平均分为12组，分别置于相同环境的12个鸡圈中。采用常规鸡饲料喂养至出栏，每天上午8:00、中午12:00、下午6:30定时喂料3次，保证每只鸡充分饮水。其中，前11组喂养的鸡饲料中分别拌入实施例1-11中制备的养殖营养液，养殖营养液的拌入量均为每天每百只10ml，第12组不拌入养殖营养液作为对比例。对出栏时肉鸡的成活率、每只肉鸡的平均重量进行分析，结果列于表4。
表4养殖营养液喂养鸡实验结果
由表4可以看出，实施例1-11制备的养殖营养液拌入鸡饲料后，肉鸡的成活率明显提高，每只重量明显提高，而且，养殖营养液的上述功效与养殖营养液中微藻的活性有关。
养殖营养液喂养鸭实验
选择品种相同，生长发育正常的肉鸭鸭苗2400只，平均分为12组，分别置于相同环境的12个鸭圈中。采用常规鸭饲料喂养至出栏，每天上午8:00、中午12:00、下午6:30定时喂料3次，保证每只鸭充分饮水。其中，前11组喂养的鸭饲料中分别拌入实施例1-11中制备的养殖营养液，养殖营养液的拌入量均为每天每百只10ml，第12组不拌入养殖营养液作为对比例。对出栏时肉鸭的成活率、每只肉鸭的平均重量进行分析，结果列于表5。
表5养殖营养液喂养鸭实验结果
由表5可以看出，实施例1-11制备的养殖营养液拌入鸭饲料后，肉鸭的成活率明显提高，每只重量明显提高，而且，养殖营养液的上述功效与养殖营养液中微藻的活性有关。
养殖营养液喂养鱼实验
选择品种相同，体重均在(10±0.5)g，生长发育正常的鲤鱼1920条，平均分为12组，每组160尾，分别置于相同环境的12个池塘中，每个池塘的体积为7m×7m×0.8m。采用常规鱼饲料喂养200天。其中，前11组的池塘中分别混入实施例1-11中制备的养殖营养液，养殖营养液的混入量均为：每亩每1m深的池塘使用量为1l，第12组不投入养殖营养液作为对比例。200天后，对鲤鱼的存活率、每条鲤鱼的平均重量进行分析，结果列于表6。
表6养殖营养液喂养鱼实验结果
由表6可以看出，实施例1-11制备的养殖营养液混入池塘后，鲤鱼的存活率明显提高，每条重量明显提高，而且，养殖营养液的上述功效与养殖营养液中微藻的活性有关。
综上，本发明制备的养殖营养液在畜、禽、水产养殖方面均具有促进动物机体健康成长、提高养殖产量的效果。这是因为：养殖营养液中的微藻活性细胞本身具有较高的营养价值，能够为动物提供蛋白质、氨基酸、多种有益维生素、多种矿物质，促进动物的生长；再者，其中的微藻细胞具有高度活性，其新陈代谢等生命活动能够帮助动物排除动物体内毒素、平衡动物体液酸碱度、促进新陈代谢、提高细胞再生能力、增强动物免疫力，还能作为天然补血剂，防治、调理、修复动物的消化道、内循环等系统疾病，提高进食量，促进动物健康生长。
上述具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。