本发明涉及一种有机微量元素的制备方法，尤其涉及一种高活性小肽螯合钼的生产工艺。
背景技术：
钼是动物生长发育和维持生理机能所必需的微量元素之一，对动物健康的影响很大。钼元素是许多金属酶(如黄嘌呤氧化酶、醇脱氢酶和亚硫酸盐氧化酶等)所必需，参与机体内铁的利用，可以预防贫血，促进发育，并能帮助碳水化合物和脂肪的代谢。钼能维持心肌能量代谢，维护机体免疫功能，调节甲状腺。钼缺乏导致的不良影响主要有以下几个方面：使体内的能量代谢过程发生障碍，致使心肌缺氧而出现灶性坏死；导致缺铁性贫血；影响胰岛素调节功能，造成眼球晶状体房水渗透压上升，屈光度增加而导致近视；生长发育迟缓甚至死亡，神经异常，智力发育迟缓。
目前，市场上常见的补钼剂主要是无机钼，无机钼离子在消化吸收过程中易受饲料中植酸、氨基酸、纤维素、糖的复合物、维生素、不饱和脂肪酸等影响，导致吸收利用率低。研究证明，有机钼比无机钼有更高的生物利用率，且对动物的生长、生殖、健康及饲料转化率等有明显的促进作用。小肽螯合钼是近年来在国内外发展较快的新型有机钼源补充剂，是钼离子与小分子肽或短肽发生配位反应生成的具有环状结构的化合物。由于小肽螯合钼是接近于动物体内天然形态的钼元素存在形式，有良好的化学稳定性、较高的生物学效价、易消化吸收、抗干扰、无刺激、无毒害作用，比相应的物无机态钼离子更为优越，目前被认为是一种较理想的饲料用补钼剂。因此，开发一类吸收利用率高、生化稳定性好、营养价值高、副作用小的小肽螯合钼具有十分重要的市场意义。但是，目前国内对小肽钼螯合物的研究和开发不多，有关小分子肽螯合钼的制备方法尚未见到研究报道。
技术实现要素：
本发明的目的正是基于上述状况而提出的一种高活性小肽螯合钼的生产工艺，该工艺以猪血为主要原料，工艺简单，成本低，易于实施，所制备的小肽螯合钼作为微量元素钼添加剂，可显著提高饲料利用率，增强动物免疫力和抗病力，促进动物生长。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案来实现的：一种高活性小肽螯合钼的生产工艺，其工艺步骤如下：
（1）血球液制备：采集经抗凝处理的新鲜猪血，离心分离，收集血红细胞，即得到血球液；
（2）溶血：往血球液中加入其体积1倍的去离子水，不断搅拌溶血60min，得到溶血液；
（3）酶解：调节溶血液ph值至8.0-8.5，加入蛋白酶，在50-55℃温度下酶解4-6h，将酶解液升温至85℃灭酶10分钟，即得到酶解液；
（4）离心：将酶解液进行高速离心，去除沉淀，收集上清夜，得到离心上清液；
（5）超滤：将收集的离心上清液经截留分子量为1000da的超滤膜装置进行超滤，收集透过液，得到小肽溶液；
（6）螯合反应：向步骤（5）得到的小肽溶液中加入无机钼盐，无机钼盐的添加量为小肽溶液中蛋白肽量（以蛋白质含量计）的1.5-3%，将溶液的ph值调整到8.0～8.5，在45-50℃下搅拌螯合反应1-1.5小时，得到小肽螯合钼反应液；
（7）喷雾干燥：将步骤（6）得到的小肽螯合钼反应液进行喷雾干燥，即得到小肽螯合钼。
上述步骤（1）中所述的离心分离是采用管式离心机连续分离，离心转速大于10000r/min。
上述步骤（3）所述的蛋白酶酶活力为250000-280000u/ml，蛋白酶的添加量为血球液重量的1.0-2.0%。
上述步骤（4）所述的高速离心是采用管式离心机分离，离心转速大于10000r/min。
上述步骤（6）所述的无机钼盐为钼酸铵、钼酸钠、二硫化钼、三氧化钼中的任一种。
通过实施上述技术方案，本发明具有如下的有益效果：
(1)本发明的方法综合应用酶解、超滤、分子螯合和喷雾干燥等现代生物工程技术和现代加工技术，具有工艺流程简单，生产效率高，成本低，适合工业化规模生产的特点。
（2）本发明的方法以价格低廉、来源广泛的猪血为肽源，以无机钼盐为钼源，将钼元素与小肽螯合，使小肽与钼元素的生理功能相互促进，协同增效，所得产品具有直接吸收、生物活性强、安全稳定、持久补钴等特点，能显著提高动物生长性能，增强动物的免疫力和抗病力。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细的说明，但是本发明的实施方式并不局限于此实施例表示的范围。
实施例1
（1）血球液制备：采集经抗凝处理的新鲜猪血1000l，用管式离心机连续离心分离得到440l血球液和560l血浆液，收集血球液，血浆液经喷雾干燥制成血浆蛋白粉；
（2）溶血：将血球液泵入反应罐中，加入440l的去离子水，不断搅60min，使血球破碎，搅拌速度为30r/min，制得溶血液880l；
（3）酶解：继续搅拌下将溶血液加热升温至50℃，用naoh溶液调节其ph值至8.5，随后添加血球液重量1.2%的蛋白酶，不断搅拌，每间隔一小时检测酶解液的ph值，当ph值下降至8.5以下时，补碱液调ph值至8.5，保温酶解6h后，将酶解液升温至85℃灭酶10分钟，即得到酶解液；
（4）离心：将酶解液采用管式离心机连续分离，离心转速为10000r/min，收集离心上清夜，去除沉淀；
（5）超滤：将收集的离心上清液经截留分子量为3000da的中空纤维超滤膜装置，收集超滤透过液，得到小肽溶液488l；
（6）螯合反应：向步骤（5）得到的小肽溶液中加入钼酸铵，钼酸铵的添加量为小肽溶液中蛋白肽量（以蛋白质含量计）的1.5%，将溶液的ph值调整到8.0，在45℃下搅拌螯合反应1.5小时，得到小肽螯合钼反应液；
（7）喷雾干燥：将步骤（6）得到的小肽螯合钼反应液进行喷雾干燥，即得到小肽螯合钼92公斤。
实施例2
（1）血球液制备：采集经抗凝处理的新鲜猪血1000l，用管式离心机连续离心分离得到435l血球液和565l血浆液，收集血球液，血浆液经喷雾干燥制成血浆蛋白粉；
（2）溶血：将血球液泵入反应罐中，加入435l的去离子水，不断搅60min，使血球破碎，搅拌速度为30r/min，制得溶血液870l；
（3）酶解：继续搅拌下将溶血液加热升温至55℃，用naoh溶液调节其ph值至8.2，随后添加血球液重量2%的蛋白酶，不断搅拌，每间隔一小时检测酶解液的ph值，当ph值下降至8.2以下时，补碱液调ph值至8.2，保温酶解4h后，将酶解液升温至85℃灭酶10分钟，即得到酶解液；
（4）离心：将酶解液采用管式离心机连续分离，离心转速为10000r/min，收集离心上清夜，去除沉淀；
（5）超滤：将收集的离心上清液经截留分子量为3000da的中空纤维超滤膜装置，收集超滤透过液，得到小肽溶液462l；
（6）螯合反应：向步骤（5）得到的小肽溶液中加入钼酸铵，钼酸铵的添加量为小肽溶液中蛋白肽量（以蛋白质含量计）的2%，将溶液的ph值调整到8.5，在50℃下搅拌螯合反应1小时，得到小肽螯合钼反应液；
（7）喷雾干燥：将步骤（6）得到的小肽螯合钼反应液进行喷雾干燥，即得到小肽螯合钼91公斤。
实施例3
（1）血球液制备：采集经抗凝处理的新鲜猪血1000l，用管式离心机连续离心分离得到456l血球液和544l血浆液，收集血球液，血浆液经喷雾干燥制成血浆蛋白粉；
（2）溶血：将血球液泵入反应罐中，加入456l的去离子水，不断搅60min，使血球破碎，搅拌速度为30r/min，制得溶血液912l；
（3）酶解：继续搅拌下将溶血液加热升温至52℃，用naoh溶液调节其ph值至8.0，随后添加血球液重量1.5%的蛋白酶，不断搅拌，每间隔一小时检测酶解液的ph值，当ph值下降至8.0以下时，补碱液调ph值至8.0，保温酶解5h后，将酶解液升温至85℃灭酶10分钟，即得到酶解液；
（4）离心：将酶解液采用管式离心机连续分离，离心转速为10000r/min，收集离心上清夜，去除沉淀；
（5）超滤：将收集的离心上清液经截留分子量为3000da的中空纤维超滤膜装置，收集超滤透过液，得到小肽溶液475l；
（6）螯合反应：向步骤（5）得到的小肽溶液中加入钼酸铵，钼酸铵的添加量为小肽溶液中蛋白肽量（以蛋白质含量计）的2.5%，将溶液的ph值调整到8.2，在45℃下搅拌螯合反应1小时，得到小肽螯合钼反应液；
（7）喷雾干燥：将步骤（6）得到的小肽螯合钼反应液进行喷雾干燥，即得到小肽螯合钼93.5公斤。
对上述实施例得到的成品进行钼含量、粗蛋白含量以及肽分子量分布检测。
钼元素含量采用原子吸收分光光度法测定，粗蛋白含量采用gb/t6432-94方法测定，肽分子量大小采用高效凝胶过滤色谱（hplc）法测定，以已知分子量蛋白质做参照。
结果如表1：
表1：小肽螯合钼的钼含量、蛋白含量以及肽分子量分布
从表1中可以看出，实施例所得的成品中螯合态钼含量均在0.2%以上，粗蛋白含量均在90%以上，其中相对分子量在180-1000da之间的小分子肽占总蛋白的比例达到81%以上。