一种提高自由基清除能力的黄精皂甙的提取方法与流程

本发明属于黄精加工技术领域。更具体地，本发明涉及一种提高自由基清除能力的黄精皂甙的提取方法。

背景技术：

黄精别名土灵芝、太阳草、鸡头参,为百合科黄精属植物滇黄精polygonatumkingianumcoll.ethemsl.、黄精p.sibiricumred.或多花黄精p.cyrtonemahua的干燥根茎。黄精具有补气养阴、健脾、润肺、益肾的功效。黄精在全世界有40余种，我国有31种，分布于全国各地；其中，西北地区有18种黄精属植物，药用有11种，主要分布于甘肃和陕西，特别是在秦岭蕴藏量极大。黄精是我国的传统中药，其药用历史已有2000多年，在古代常被视为“长生不老和延年益寿”药用植物目前从黄精中已分离得到的化学成分主要包括黄精多糖、甾体皂苷、黄酮类化合物、生物碱、强心苷、木脂素、维生素和多种对人体有用的氨基酸等活性成分。现代药理学研究表明，黄精具有提高免疫力、降血糖、降血脂、抗炎、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗衰老、提高记忆力等作用。有报道也认为，生黄精应用于临床时，会产生口舌麻木，刺激咽喉的副作用，经炮制后不仅可消除刺激性副作用，同时使黄精药效增强。因而，以黄精中的皂甙为提取指标来提取黄精药材中的有效成分，对控制黄精的质量及提升黄精的利用价值具有重要意义。

大量科学实验证明，机体的多种疾病与自由基对机体的氧化损伤有关，与医学密切相关的是氧自由基。人体内的自由基95%以上属于氧自由基，其主要形式有羟自由基、超氧阴离子、过氧化自由基、单线态氧、过氧化氢、过氧亚硝基等。其中羟自由基是氧自由基中对人机体损害最大的。迄今用于评价植物抗氧化能力的方法很多，但这些方法或者繁琐费时，或者所需设备或试剂价格昂贵，应当选择一种能很好分析自由基清除能力的指标，以使自由基清除能力的评价更加全面、简单易行并具有可重现性。dpph是一种稳定的有机自由基，通过检测生物试剂对dpph自由基的清除能力，可以表示该生物试剂的抗氧化性的强弱。因而，本发明人选择了清除dpph自由基的抗氧化体系用于评价黄精皂甙的抗氧化性能。

黄精皂甙的提取方法有很多种，包括溶剂提取法、酸提法、碱提法、酶解法、超滤法、超声波辅助提取法、微波提取法等。黄精皂甙是植物皂甙中的一种，根据其溶解性等相关特性，目前主要的提取方法有水提醇沉法、超声细胞粉碎法、酶法等。例如cn201410044465.7、“苦瓜皂甙提取新技术”以及cn201010127667.x、“一种连续提取黄精皂甙和黄精多糖的工艺”等专利申请公开了皂甙的这些提取方法。而以提高黄精皂甙自由基清除能力为目的的超临界二氧化碳萃取（supercriticalfluidextraction，简称sfe）技术，是近20年来国际上迅速发展的新一代化工分离技术，已广泛应用于食品、香料、医药、烟草等行业。co2是最常用的超临界流体。与传统方法比较，超临界co2萃取(sfe-co2)应用于中药领域具有许多独特的优点，对实现中药现代化具有重要意义和可观的应用前景。例如，cn200710014170.5、“超临界二氧化碳萃取桔梗皂甙方法”，cn200710014170.5、“超临界二氧化碳萃取桔梗皂甙方法”以及cn201210350322.x、“一种樱花皂甙的提纯方法”公开了利用超临界提取方法从植物中提取皂甙的方法。这种方法能够克服常规乙醇或水提取带来的产率低、操作温度高、耗时长及对活性物质带来的不利影响。

本申请人研制了利用超临界提取方法从黄精中提取黄精皂甙的方法，这种方法能够加强与样品相接触的溶剂，并破坏其中黄精中的细胞组分，将所需化合物从样品基体中分离出来，使其进入溶剂中。本发明方法提取的黄精皂甙具有更高的自由基清除能力。

技术实现要素：

[要解决的技术问题]

本发明的目的是提供一种提高自由基清除能力的黄精皂甙的提取方法。

[技术方案]

本发明是通过下述技术方案实现的。

本发明涉及一种提高自由基清除能力的黄精皂甙的提取方法，所述方法包括以下步骤：

(1)原料处理

将黄精除去杂质并洗净后置于烘箱中烘至近干，然后恒温恒湿干燥器内烘至恒重，使得黄精的含水率低于0.01%，然后粉碎并过100目筛后，得到黄精粉末（第一产物）；

(2)超临界二氧化碳萃取

步骤(1)得到的第一产物用超临界萃取设备进行萃取，得到固液混合物（第二产物）；

(3)粗提

步骤(2)得到的固液混合物进行过滤，得到的滤渣用提取溶剂洗涤3次，洗涤之后的滤渣合并，得到黄精皂甙粗产品（第三产物）；

(4)树脂吸附

先将工业级lichroluten树脂进行预处理，以除掉lichroluten树脂中含有的少量未聚合单体、交联剂、致孔剂以及其它有害有机、无机杂质；

将步骤(3)得到的第三产物加水配置成浓度10.0mg/ml的溶液，接着用预处理过的工业级lichroluten树脂对所述水溶液进行吸附，然后在水浴中振荡24h，保持水浴温度恒定为40℃，振荡频率为900~1000r/min，得到第四产物；

(5)成品制备

将步骤(4)的吸附第四产物后的lichroluten树脂过滤，过滤后的树脂用蒸馏水洗涤两次，待树脂滤干后用乙醇进行动态洗脱，洗脱液浓缩后真空冷冻干燥，得到黄精皂甙提取物固体（第五产物）。

根据本发明的一种优选实施方案，步骤(1)中所述烘箱的温度为50~60℃，所述的恒温恒湿干燥器的温度为100~110℃。

根据本发明的另一种优选实施方案，在步骤(2)中，萃取使用的夹带剂是甲醇或乙醇，其浓度为60%~80%，所述黄精粉末与所述夹带剂按照黄精粉末的质量与夹带剂的体积比1:30~1:50(mg/ml)的比例进行混合。

根据本发明的另一种优选实施方案，在步骤(2)中，萃取条件为温度30~50℃、压力50~70mpa，萃取时间为1~2h。

根据本发明的另一种优选实施方案，在步骤(3)中，所述的提取溶剂是液态co2，滤渣的质量与提取溶剂的体积比为1:40~1:60（g/ml）。

根据本发明的另一种优选实施方案，在步骤(4)中，用预处理过的工业级lichroluten树脂对所述水溶液进行吸附，吸附流速为0.8~1.0bv/h，吸附时间为2h。

根据本发明的另一种优选实施方案，在步骤(5)中，所述的乙醇的浓度是70%，洗脱速率为1.0~2.0bv/h。

根据本发明的另一种优选实施方案，在步骤(5)中，洗脱液在60℃条件下浓缩到原有体积的10~15%，然后在-20~-10℃温度和0.05~0.1mpa压力条件下进行真空冷冻干燥。

下面将更详细地描述本发明。

本发明涉及一种提高自由基清除能力的黄精皂甙的提取方法，所述方法包括以下步骤：

(1)原料处理

将黄精除去杂质并洗净后置于50~60℃烘箱中烘至近干，然后在100~110℃恒温恒湿干燥器内烘至恒重，使得黄精的含水率低于0.01%，然后粉碎并过100目筛后，得到黄精粉末，备用。

在该原料处理步骤中，烘干黄精的烘箱温度50~60℃是适宜的，如果高于60℃，会造成黄精表面组织水分散失过快带来组织体的萎缩，如果低于50℃则会导致黄精原料预处理时间过长。

恒温恒湿干燥器的温度100~110℃是适宜的，如果温度高于110℃，会造成黄精原料组织内活性物质的降解，如果低于100℃则会导致水分清除不彻底。使用的恒温恒湿干燥器是本技术领域常用的可在市场上购买得到的产品，例如上海一恒仪器公司生产销售的dhg-9031a型产品。

用恒温恒湿干燥器处理黄精使其含水率低于0.01%，是为了提高黄精粉末样品的贮藏性及提高后期酶解的处理效率。

接下来黄精进行粉碎并过100目筛，这是为了利于下一步的超临界二氧化碳萃取。黄精粒度越小，越有利于co2向黄精内部迁移，增加传质效果，但当黄精粉碎过细时又会增加表面流动阻力，反不利于萃取的进行。因而，黄精粉末的粒度为100目是适宜的。

(2)超临界二氧化碳萃取

步骤(1)得到的黄精粉末用超临界萃取设备进行萃取，使用的夹带剂是甲醇或乙醇，其浓度为60%~80%，所述黄精粉末与所述夹带剂按照黄精粉末的质量与夹带剂的体积比1:30~1:50(mg/ml)的比例进行混合。萃取条件为温度30~50℃、压力50~70mpa，萃取时间为1~2h，得到固液混合物。

取黄精粉末，按照黄精粉末的质量与夹带剂的体积比1:40~1:60（g/ml），将黄精粉末与夹带剂投入超临界萃取装置的萃取釜中，对萃取釜、解析釜ⅰ、解析釜ⅱ、贮罐分别加热到30~50℃，开启co2气瓶对系统进行加压，当压力达到50~70mpa时，关闭气瓶，循环萃取，并保持恒温恒压。当萃取时间达到1~2h后，从解析釜ⅰ、解析釜ⅱ出料口出料，得到固液混合物。

本发明方法中使用的超临界萃取装置是本技术领域常用的设备，可在市场中购买得到，例如是华安超临界萃取有限公司生产的ha-9508型5l超临界萃取装置。

夹带剂是影响萃取效率的重要因素，在皂甙的超临界萃取方法中，由于皂甙类成分极性极大，加入适量夹带剂能大大提高萃取效率。夹带剂种类的选择和加入量的不同都会对萃取效率产生影响。不同的夹带剂对成分的萃取选择性不同，对于黄精皂甙的萃取来说，可以选用甲醇或乙醇。本发明方法可以使用的夹带剂包括但不限于这些夹带剂。所用夹带剂的浓度是60%~80%，此浓度范围内可最佳改善原料和提取溶剂分子间的作用力，从而改善原料与提取溶剂的溶解度和选择性。

黄精粉末的质量与夹带剂的体积比是1:30~1:50(mg/ml)，当黄精粉末的质量一定时，如果夹带剂的体积超出这一范围，会造成后期处理成本提高，如果夹带剂的体积小于这一范围，则会导致提取得率不高。

此外，通过控制超临界co2的温度和压力，改变极性、表面张力和黏度，从而实现皂甙组分从水溶性成分到脂溶性成分的连续提取，甚至可以选择性提取。在本发明方法中，可以选择有利于黄精皂甙分离的温度和压力。温度30~50℃和压力50~70mpa是适宜的。当温度高于50℃时，会造成活性成分的破坏比例大幅度提高，如果温度低于30℃时，则会导致提取得率不高。当压力大于70mpa会造成提取工艺成本提高及后期的仪器维护成本提高，如果压力小于50mpa，则会导致原料与溶剂间的接触不够充分，带来提取率不高的问题。

(3)粗提

步骤(2)得到的固液混合物进行过滤，得到的滤渣用提取溶剂洗涤3次，所述的提取溶剂是甲醇或乙醇，其浓度为60%~80%，洗涤之后的滤渣合并，得到黄精皂甙粗产品。

之所以选择甲醇或乙醇作为提取溶剂，是因为溶剂可改善原料和提取溶剂分子间的作用力，从而改善原料与提取溶剂的溶解度和选择性。

提取溶剂的浓度对于皂甙提取效率有重要影响。如果提取溶剂的浓度高于80%，会造成原料与提取溶剂的溶解度降低，如果浓度低于60%，则会造成原料中活性物质与提取溶剂的选择性降低。

(4)树脂吸附

在本发明方法中使用的树脂是工业级lichroluten树脂，与食品级树脂相比，在保证提取效果的同时，该工业级lichroluten树脂大大降低了提取的成本。

先将工业级lichroluten树脂进行预处理，以除掉lichroluten树脂中含有的少量未聚合单体、交联剂、致孔剂以及其它有害有机、无机杂质。其流程如下：以0.5bv的乙醇浸泡树脂24h（(1bv个树脂床体积）；用2bv的乙醇以2bv/h的流速通过树脂柱，并浸泡树脂2h；用乙醇2bv/h的流速洗涤树脂，至流出液加水不呈白色混浊为止，再用水以同样流速洗净乙醇；用2bv的5%hcl溶液以2bv/h的流速通过树脂层，并浸泡树脂2h，而后用水以同样流速洗至出水ph中性；用2bv的2%naoh溶液以2bv/h的流速通过树脂层，并浸泡树脂1h，而后用水以同样流速洗至出水ph中性。

将步骤(3)得到的黄精皂甙粗产品加水配置成浓度10.0mg/ml的溶液，接着用预处理过的工业级lichroluten树脂对所述水溶液进行吸附，吸附流速为0.8~1.0bv/h，吸附时间为2h，然后在水浴中振荡24h，保持水浴温度恒定为40℃，振荡频率为900~1000r/min；

(5)成品制备

将步骤(4)的吸附后的lichroluten树脂过滤，过滤后的树脂用蒸馏水洗涤两次，待树脂滤干后用70%乙醇进行动态洗脱，洗脱速率为1.0bv/h，得到的洗脱液在60℃条件下浓缩到原有体积的10~15%，然后在-20~-10℃温度和0.05~0.1mpa压力条件下进行真空冷冻干燥，得到黄精皂甙提取物固体样品。

之所以用浓度70%乙醇进行动态洗脱，是由于此浓度下解吸率最高。

采用以下方法和条件测定根据上述方法制备得到的黄精皂甙的得率、纯度以及dpph自由基清除能力。

采用液相色谱法测定皂甙产品中皂甙的纯度，选择的色谱条件为：色谱柱：welchmaterialsaq-c18(4.6mm×150mm,5μm)；流动相：60min0~100%乙腈溶液梯度；流速：1ml/min；检测波长：230nm；柱温：30℃；进样量：10μl。

皂甙得率的计算公式为：

皂甙得率（mg/g）=提取产品皂甙量（mg）/原料总量（g）。

采用vandertoorn等使用的dtnb间接测定卷烟烟气中自由基，结果以自由基清除率（%）表示，不同提取物清除自由基能力采用清除的ic50值表示；计算出自由基清除率为50%时所需提取物浓度（ec50），按式计算ic50＝50%×加入的dpph质量／加入的试样溶液中溶质质量。

测定结果表明，根据本发明方法制备得到的黄精皂甙的得率比传统乙醇提法提高1.27~1.61倍，比传统水提法提高1.29~1.63倍；纯度比传统乙醇提法提高1.41~1.79倍，比传统水提法提高1.37~1.74倍；dpph自由基清除能力比传统乙醇提法提高1.41~1.86倍，比传统水提法提高1.21~1.59倍，具有明显提高的dpph自由基清除能力。如图1所示，在dpph自由基体系中，黄精皂甙的ic50为31.45~41.55μg/ml。

根据本发明方法制备得到的黄精皂甙具有抗氧化、增强机体免疫功能及抗肿瘤等活性，可在医药领域中应用。

[有益效果]

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

(1)本发明的提取方法适宜工业化生产，提取率高、纯度高。黄精皂甙的提取物得率比传统乙醇提法提高1.27~1.61倍，比传统水提法提高1.29~1.63倍；纯度比传统乙醇提法提高1.41~1.79倍，比传统水提法提高1.37~1.74倍；

(2)根据本发明方法得到的黄精皂甙的dpph自由基清除能力比传统乙醇提法提高1.41~1.86倍，比传统水提法提高1.21~1.59倍，具有明显提高的dpph自由基清除能力；

(3)所使用的夹带剂、溶剂等具有无毒、无害、用量少、成本低的特点，工艺简单、无环境污染，具有高效、省时和成本低等优点，是一种绿色环保、前景广阔的黄精皂甙提取技术。

【附图说明】

附图1是本发明的提取方法的黄精皂甙的得率、纯度以及清除dpph自由基活性的ic50值与现有的醇提和水提法的对比图。

【具体实施方式】

通过下述实施例将能够更好地理解本发明。

实施例1：本发明的黄精皂甙的提取方法

所述提取方法的实施步骤如下：

(1)原料处理

将黄精除去杂质并洗净后置于55℃烘箱中烘至近干，然后在110℃恒温恒湿干燥器内烘至恒重，使得黄精的含水率低于0.01%，然后粉碎并过100目筛后，得到黄精粉末（第一产物a）；

(2)超临界二氧化碳萃取

步骤(1)得到的第一产物a用超临界萃取设备进行萃取，萃取使用的夹带剂是乙醇，其浓度为70%，所述黄精粉末与所述夹带剂按照黄精粉末的质量与夹带剂的体积比1:40(mg/ml)的比例进行混合，萃取条件为温度40℃、压力60mpa，萃取时间为2h，得到固液混合物（第二产物a）；

(3)粗提

步骤(2)得到的第二产物a进行过滤，得到的滤渣按照滤渣与提取溶剂的体积比1:50（g/ml）用浓度70%的乙醇提取溶剂洗涤3次，洗涤之后的滤渣合并，得到黄精皂甙粗产品（第三产物a）；

(4)树脂吸附

先将工业级lichroluten树脂进行预处理，以除掉lichroluten树脂中含有的少量未聚合单体、交联剂、致孔剂以及其它有害有机、无机杂质，处理流程如下：以0.5bv的乙醇浸泡树脂24h（(1bv个树脂床体积）；用2bv的乙醇以2bv/h的流速通过树脂柱，并浸泡树脂2h；用乙醇2bv/h的流速洗涤树脂，至流出液加水不呈白色混浊为止，再用水以同样流速洗净乙醇；用2bv的5%hcl溶液以2bv/h的流速通过树脂层，并浸泡树脂2h，而后用水以同样流速洗至出水ph中性；用2bv的2%naoh溶液以2bv/h的流速通过树脂层，并浸泡树脂1h，而后用水以同样流速洗至出水ph中性；

将步骤(3)得到的第三产物a加水配置成浓度10.0mg/ml的溶液，接着用预处理过的工业级lichroluten树脂对所述水溶液进行吸附，树脂吸附的流速为0.9bv/h，吸附时间为2h，然后在水浴中振荡24h，保持水浴温度恒定为40℃，振荡频率为1000r/min，得到第四产物a；

(5)成品制备

将步骤(4)的吸附第四产物a后的lichroluten树脂过滤，过滤后的树脂用蒸馏水洗涤两次，待树脂滤干后用浓度70%乙醇进行动态洗脱，洗脱速率为1.5bv/h，洗脱液在60℃条件下浓缩到原有体积的10%，然后在-15℃温度和0.1mpa压力条件下进行真空冷冻干燥，得到最终的黄精皂甙提取物固体（第五产物a）。

实施例2：本发明的黄精皂甙的提取方法

所述提取方法的实施步骤如下：

(1)原料处理

将黄精除去杂质并洗净后置于55℃烘箱中烘至近干，然后在110℃恒温恒湿干燥器内烘至恒重，使得黄精的含水率低于0.01%，然后粉碎并过100目筛后，得到黄精粉末（第一产物b）；

(2)超临界二氧化碳萃取

步骤(1)得到的第一产物b用超临界萃取设备进行萃取，萃取使用的夹带剂是乙醇，其浓度为70%，所述黄精粉末与所述夹带剂按照黄精粉末的质量与夹带剂的体积比1:40(mg/ml)的比例进行混合，萃取条件为温度40℃、压力70mpa，萃取时间为2h，得到固液混合物（第二产物b）；

(3)粗提

步骤(2)得到的第二产物b进行过滤，得到的滤渣按照滤渣与提取溶剂的体积比1:50（g/ml）用浓度70%的乙醇提取溶剂洗涤3次，洗涤之后的滤渣合并，得到黄精皂甙粗产品（第三产物b）；

(4)树脂吸附

先将工业级lichroluten树脂进行预处理，以除掉lichroluten树脂中含有的少量未聚合单体、交联剂、致孔剂以及其它有害有机、无机杂质，处理流程如下：以0.5bv的乙醇浸泡树脂24h（(1bv个树脂床体积）；用2bv的乙醇以2bv/h的流速通过树脂柱，并浸泡树脂2h；用乙醇2bv/h的流速洗涤树脂，至流出液加水不呈白色混浊为止，再用水以同样流速洗净乙醇；用2bv的5%hcl溶液以2bv/h的流速通过树脂层，并浸泡树脂2h，而后用水以同样流速洗至出水ph中性；用2bv的2%naoh溶液以2bv/h的流速通过树脂层，并浸泡树脂1h，而后用水以同样流速洗至出水ph中性；

将步骤(3)得到的第三产物b加水配置成浓度10.0mg/ml的溶液，接着用预处理过的工业级lichroluten树脂对所述水溶液进行吸附，树脂吸附的流速为0.9bv/h，吸附时间为2h，然后在水浴中振荡24h，保持水浴温度恒定为40℃，振荡频率为1000r/min，得到第四产物b；

(5)成品制备

将步骤(4)的吸附第四产物b后的lichroluten树脂过滤，过滤后的树脂用蒸馏水洗涤两次，待树脂滤干后用浓度70%乙醇进行动态洗脱，洗脱速率为2.0bv/h，洗脱液在60℃条件下浓缩到原有体积的10%，然后在-20℃温度和0.1mpa压力条件下进行真空冷冻干燥，得到最终的黄精皂甙提取物固体（第五产物b）。

实施例3：本发明的黄精皂甙的提取方法

所述提取方法的实施步骤如下：

(1)原料处理

将黄精除去杂质并洗净后置于55℃烘箱中烘至近干，然后在110℃恒温恒湿干燥器内烘至恒重，使得黄精的含水率低于0.01%，然后粉碎并过100目筛后，得到黄精粉末（第一产物c）；

(2)超临界二氧化碳萃取

步骤(1)得到的第一产物c用超临界萃取设备进行萃取，萃取使用的夹带剂是乙醇，其浓度为60%，所述黄精粉末与所述夹带剂按照黄精粉末的质量与夹带剂的体积比1:50(mg/ml)的比例进行混合，萃取条件为温度50℃、压力60mpa，萃取时间为1h，得到固液混合物（第二产物c）；

(3)粗提

步骤(2)得到的第二产物c进行过滤，得到的滤渣按照滤渣与提取溶剂的体积比1:40（g/ml）用浓度70%的乙醇提取溶剂洗涤3次，洗涤之后的滤渣合并，得到黄精皂甙粗产品（第三产物c）；

(4)树脂吸附

先将工业级lichroluten树脂进行预处理，以除掉lichroluten树脂中含有的少量未聚合单体、交联剂、致孔剂以及其它有害有机、无机杂质，处理流程如下：以0.5bv的乙醇浸泡树脂24h（(1bv个树脂床体积）；用2bv的乙醇以2bv/h的流速通过树脂柱，并浸泡树脂2h；用乙醇2bv/h的流速洗涤树脂，至流出液加水不呈白色混浊为止，再用水以同样流速洗净乙醇；用2bv的5%hcl溶液以2bv/h的流速通过树脂层，并浸泡树脂2h，而后用水以同样流速洗至出水ph中性；用2bv的2%naoh溶液以2bv/h的流速通过树脂层，并浸泡树脂1h，而后用水以同样流速洗至出水ph中性；

将步骤(3)得到的第三产物c加水配置成浓度10.0mg/ml的溶液，接着用预处理过的工业级lichroluten树脂对所述水溶液进行吸附，树脂吸附的流速为0.8bv/h，吸附时间为2h，然后在水浴中振荡24h，保持水浴温度恒定为40℃，振荡频率为900r/min，得到第四产物c；

(5)成品制备

将步骤(4)的吸附第四产物c后的lichroluten树脂过滤，过滤后的树脂用蒸馏水洗涤两次，待树脂滤干后用浓度70%乙醇进行动态洗脱，洗脱速率为1.5bv/h，洗脱液在60℃条件下浓缩到原有体积的10%，然后在-15℃温度和0.1mpa压力条件下进行真空冷冻干燥，得到最终的黄精皂甙提取物固体（第五产物c）。

实施例4：本发明的黄精皂甙的提取方法

所述提取方法的实施步骤如下：

(1)原料处理

将黄精除去杂质并洗净后置于55℃烘箱中烘至近干，然后在110℃恒温恒湿干燥器内烘至恒重，使得黄精的含水率低于0.01%，然后粉碎并过100目筛后，得到黄精粉末（第一产物d）；

(2)超临界二氧化碳萃取

步骤(1)得到的第一产物d用超临界萃取设备进行萃取，萃取使用的夹带剂是甲醇，其浓度为80%，所述黄精粉末与所述夹带剂按照黄精粉末的质量与夹带剂的体积比1:50(mg/ml)的比例进行混合，萃取条件为温度50℃、压力50mpa，萃取时间为2h，得到固液混合物（第二产物d）；

(3)粗提

步骤(2)得到的第二产物d进行过滤，得到的滤渣按照滤渣与提取溶剂的体积比1:40（g/ml）用浓度70%的乙醇提取溶剂洗涤3次，洗涤之后的滤渣合并，得到黄精皂甙粗产品（第三产物d）；

(4)树脂吸附

先将工业级lichroluten树脂进行预处理，以除掉lichroluten树脂中含有的少量未聚合单体、交联剂、致孔剂以及其它有害有机、无机杂质，处理流程如下：以0.5bv的乙醇浸泡树脂24h（(1bv个树脂床体积）；用2bv的乙醇以2bv/h的流速通过树脂柱，并浸泡树脂2h；用乙醇2bv/h的流速洗涤树脂，至流出液加水不呈白色混浊为止，再用水以同样流速洗净乙醇；用2bv的5%hcl溶液以2bv/h的流速通过树脂层，并浸泡树脂2h，而后用水以同样流速洗至出水ph中性；用2bv的2%naoh溶液以2bv/h的流速通过树脂层，并浸泡树脂1h，而后用水以同样流速洗至出水ph中性；

将步骤(3)得到的第三产物d加水配置成浓度10.0mg/ml的溶液，接着用预处理过的工业级lichroluten树脂对所述水溶液进行吸附，树脂吸附的流速为0.8bv/h，吸附时间为2h，然后在水浴中振荡24h，保持水浴温度恒定为40℃，振荡频率为900r/min，得到第四产物d；

(5)成品制备

将步骤(4)的吸附第四产物d后的lichroluten树脂过滤，过滤后的树脂用蒸馏水洗涤两次，待树脂滤干后用浓度70%乙醇进行动态洗脱，洗脱速率为2.0bv/h，洗脱液在60℃条件下浓缩到原有体积的10%，然后在-20℃温度和0.05mpa压力条件下进行真空冷冻干燥，得到最终的黄精皂甙提取物固体（第五产物d）。

实施例5：本发明的黄精皂甙的提取方法

所述提取方法的实施步骤如下：

(1)原料处理

将黄精除去杂质并洗净后置于55℃烘箱中烘至近干，然后在110℃恒温恒湿干燥器内烘至恒重，使得黄精的含水率低于0.01%，然后粉碎并过100目筛后，得到黄精粉末（第一产物e）；

(2)超临界二氧化碳萃取

步骤(1)得到的第一产物e用超临界萃取设备进行萃取，萃取使用的夹带剂是甲醇，其浓度为70%，所述黄精粉末与所述夹带剂按照黄精粉末的质量与夹带剂的体积比1:30(mg/ml)的比例进行混合，萃取条件为温度30℃、压力70mpa，萃取时间为2h，得到固液混合物（第二产物e）；

(3)粗提

步骤(2)得到的第二产物e进行过滤，得到的滤渣按照滤渣与提取溶剂的体积比1:60（g/ml）用浓度70%的乙醇提取溶剂洗涤3次，洗涤之后的滤渣合并，得到黄精皂甙粗产品（第三产物e）；

(4)树脂吸附

先将工业级lichroluten树脂进行预处理，以除掉lichroluten树脂中含有的少量未聚合单体、交联剂、致孔剂以及其它有害有机、无机杂质，处理流程如下：以0.5bv的乙醇浸泡树脂24h（(1bv个树脂床体积）；用2bv的乙醇以2bv/h的流速通过树脂柱，并浸泡树脂2h；用乙醇2bv/h的流速洗涤树脂，至流出液加水不呈白色混浊为止，再用水以同样流速洗净乙醇；用2bv的5%hcl溶液以2bv/h的流速通过树脂层，并浸泡树脂2h，而后用水以同样流速洗至出水ph中性；用2bv的2%naoh溶液以2bv/h的流速通过树脂层，并浸泡树脂1h，而后用水以同样流速洗至出水ph中性；

将步骤(3)得到的第三产物e加水配置成浓度10.0mg/ml的溶液，接着用预处理过的工业级lichroluten树脂对所述水溶液进行吸附，树脂吸附的流速为1.0bv/h，吸附时间为2h，然后在水浴中振荡24h，保持水浴温度恒定为40℃，振荡频率为950r/min，得到第四产物e；

(5)成品制备

将步骤(4)的吸附第四产物e后的lichroluten树脂过滤，过滤后的树脂用蒸馏水洗涤两次，待树脂滤干后用浓度70%乙醇进行动态洗脱，洗脱速率为1.0bv/h，洗脱液在60℃条件下浓缩到原有体积的10%，然后在-10℃温度和0.05mpa压力条件下进行真空冷冻干燥，得到最终的黄精皂甙提取物固体（第五产物e）。

实施例6：本发明的黄精皂甙的提取方法

所述提取方法的实施步骤如下：

(1)原料处理

将黄精除去杂质并洗净后置于55℃烘箱中烘至近干，然后在110℃恒温恒湿干燥器内烘至恒重，使得黄精的含水率低于0.01%，然后粉碎并过100目筛后，得到黄精粉末（第一产物f）；

(2)超临界二氧化碳萃取

步骤(1)得到的第一产物f用超临界萃取设备进行萃取，萃取使用的夹带剂是甲醇，其浓度为60%，所述黄精粉末与所述夹带剂按照黄精粉末的质量与夹带剂的体积比1:30(mg/ml)的比例进行混合，萃取条件为温度30℃、压力50mpa，萃取时间为1h，得到固液混合物（第二产物f）；

(3)粗提

步骤(2)得到的第二产物f进行过滤，得到的滤渣按照滤渣与提取溶剂的体积比1:60（g/ml）用浓度70%的乙醇提取溶剂洗涤3次，洗涤之后的滤渣合并，得到黄精皂甙粗产品（第三产物f）；

(4)树脂吸附

先将工业级lichroluten树脂进行预处理，以除掉lichroluten树脂中含有的少量未聚合单体、交联剂、致孔剂以及其它有害有机、无机杂质，处理流程如下：以0.5bv的乙醇浸泡树脂24h（(1bv个树脂床体积）；用2bv的乙醇以2bv/h的流速通过树脂柱，并浸泡树脂2h；用乙醇2bv/h的流速洗涤树脂，至流出液加水不呈白色混浊为止，再用水以同样流速洗净乙醇；用2bv的5%hcl溶液以2bv/h的流速通过树脂层，并浸泡树脂2h，而后用水以同样流速洗至出水ph中性；用2bv的2%naoh溶液以2bv/h的流速通过树脂层，并浸泡树脂1h，而后用水以同样流速洗至出水ph中性；

将步骤(3)得到的第三产物f加水配置成浓度10.0mg/ml的溶液，接着用预处理过的工业级lichroluten树脂对所述水溶液进行吸附，树脂吸附的流速为1.0bv/h，吸附时间为2h，然后在水浴中振荡24h，保持水浴温度恒定为40℃，振荡频率为950r/min，得到第四产物f；

(5)成品制备

将步骤(4)的吸附第四产物f后的lichroluten树脂过滤，过滤后的树脂用蒸馏水洗涤两次，待树脂滤干后用浓度70%乙醇进行动态洗脱，洗脱速率为1.0bv/h，洗脱液在60℃条件下浓缩到原有体积的10%，然后在-10℃温度和0.05mpa压力条件下进行真空冷冻干燥，得到最终的黄精皂甙提取物固体（第五产物f）。