本发明属于医药技术领域，尤其涉及一种土贝母苷甲纯化方法。
背景技术：
国内现有土贝母提取工艺，主要包括土贝母原料的提取、分离两大步骤。土贝母中土贝母苷甲提取分离的步骤是：现将土贝母原料粉碎，然后用水提取三次，将提取液浓缩至无醇，将浓缩液上d101大孔树脂，用不同醇度的甲醇分离土贝母苷甲，收集不同醇度的洗脱液，将不同醇度的洗脱液浓缩干，加甲醇溶解，溶解后加入乙酸乙酯放置结晶，过滤结晶母液浓缩至小体积放置结晶。
现有工艺中用不同醇度的甲醇洗脱分段收集操作复杂，收集率低，不利于生产，结晶的纯度低，收率低。
技术实现要素：
本发明提供一种土贝母苷甲纯化方法，旨在解决现有工艺中用不同醇度的甲醇洗脱分段收集操作复杂，收集率低，不利于生产，结晶的纯度低，收率低的问题。
本发明涉及一种土贝母苷甲纯化方法，步骤如下：
(1)将土贝母材料粉碎，过筛，装入热回流提取器中，加入纯净水将原料粗粉浸透，在一定温度下回流提取，料渣弃去，将提取液经过滤器后收集滤液，滤液经减压浓缩罐浓缩后，冷却至室温备用；
(2)将大孔树脂装入层析柱中备用，将大孔树脂用甲醇活化，用纯净水洗至无醇，将步骤(1)中备用的提取液加入到大孔树脂柱子上，按吸附量的1％加入。第一步用纯净水洗脱，洗脱液弃去，第二步用35％的甲醇洗脱，洗脱液浓缩回收甲醇，第三步用60％的甲醇洗脱，收集洗脱液，第四步将第三步收集到的洗脱液减压浓缩至无醇备用；
(3)将步骤(2)浓缩至无醇的备用洗脱液重新加入到新的大孔树脂柱上，按吸附量的1.5％加入。第一步用纯净水洗脱，洗脱液弃去，第二步用35％的甲醇洗脱，洗脱液减压浓缩回收甲醇，第三步用95％的甲醇洗脱，收集洗脱液，第四步将第三步收集到的洗脱液减压浓缩至干稠膏备用；
(4)将步骤(3)中备用的稠膏加入2倍稠膏量的乙酸乙酯顺时针搅拌、放置在20℃温度下、结晶，过滤结晶烘干备用，过滤母液浓缩至稠膏在加入2倍稠膏量的乙酸乙酯放置在20℃温度下、二次结晶，过滤结晶烘干备用；
(5)将步骤(4)中两次结晶粗品用50％的甲醇溶解，待固体全部溶解后加入无水乙醇放置72h结晶，过滤结晶备用，母液浓缩无水乙醇放置72h结晶，过滤结晶备用；
(6)将步骤(5)中两次结晶粗品用无水乙醇加热溶解30分钟，趁热过滤，得到结晶成品，过滤母液浓缩干得到高纯度的土贝母苷丙。
优选的，步骤(1)中过筛步骤中采用6目筛子。
优选的，步骤(1)中回流温度为97℃，回流次数为3次每次回流时间为1.5小时。
优选的，步骤(2)大孔树脂选d101大孔树脂，层析柱尺寸为内径300毫米，长度2000毫米。
优选的，步骤(2)中纯净水和用35％的甲醇的用量是层析柱柱体积的3倍，60％的甲醇的用量是层析柱柱体积的3倍。
优选的，步骤(3)中纯净水和用35％的甲醇的用量是层析柱柱体积的3倍，95％的甲醇的用量是层析柱柱体积的2倍。
优选的，步骤(4)中乙酸乙酯的用量是备用的稠膏2倍，所述搅拌时间30分钟，温度为20℃，结晶时间为48小时。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明的一种土贝母苷甲纯化方法，具有收率高、纯度好、生产周期短、工艺过程简单、操作更加安全并且可以得到高纯度的土贝母苷甲丙的优点。
具体实施方式
实施例1
一种土贝母苷甲纯化方法，
(1)将土贝母材料粉碎，过筛，装入热回流提取器中，加入纯净水将原料粗粉浸透，在一定温度下回流提取，料渣弃去，将提取液经过滤器后收集滤液，滤液经加压浓缩罐浓缩后，冷却至室温备用；
(2)将大孔树脂装入层析柱中备用，将大孔树脂用甲醇活化，用纯净水洗至无醇，将步骤(1)中备用的提取液加入到大孔树脂柱子上，第一步用纯净水洗脱，洗脱液弃去，第二步用35％的甲醇洗脱，洗脱液浓缩回收甲醇，第三步用60％的甲醇洗脱，收集洗脱液，第四步将第三步收集到的洗脱液减压浓缩至无醇备用；
(3)将步骤(2)浓缩至无醇的备用洗脱液重新加入到新的大孔树脂柱上，第一步用纯净水洗脱，洗脱液弃去，第二步用35％的甲醇洗脱，洗脱液减压浓缩回收甲醇，第三步用95％的甲醇洗脱，收集洗脱液，第四步将第三步收集到的洗脱液减压浓缩至干稠膏备用；
(4)将步骤(3)中备用的稠膏加入乙酸乙酯顺时针搅拌、放置在一定温度下、结晶，过滤结晶烘干备用，过滤母液浓缩至稠膏在加入乙酸乙酯放置在一定温度下、结晶，过滤结晶烘干备用；
(5)将步骤(4)中两次结晶粗品用50％的甲醇溶解，待固体全部溶解后加入无水乙醇放置72h结晶，过滤结晶备用，母液浓缩无水乙醇放置72h结晶，过滤结晶备用；
(6)将步骤(5)中两次结晶粗品用1无水乙醇反复溶解，趁热过滤，得到结晶成品，过滤母液浓缩干得到高纯度的土贝母苷丙。
步骤(1)中过筛步骤中采用6目筛子。
步骤(1)中回流温度为97℃，回流次数为3次每次回流时间为1.5小时。
步骤(2)大孔树脂可选d101大孔树脂，层析柱尺寸为内径300毫米，长度2000毫米。
步骤(2)中纯净水和用35％的甲醇的用量是层析柱柱体积的3倍。
步骤(3)中纯净水和用35％的甲醇的用量是层析柱柱体积的3倍。
步骤(4)中乙酸乙酯的用量是备用的稠膏2倍，所述搅拌时间30分钟，温度为20℃，结晶时间为48小时。
实施例2
一种土贝母苷甲纯化方法，
1、土贝母原料50kg粉碎过6目筛子，装入热回流提取器中加入250l的纯净水将原料粗粉浸透，在97℃温度下回流提取3次每次1.5小时，料渣弃去，得到750l提取液，将提取液经过滤器后收集滤液，滤液经加压浓缩罐浓缩至300l，冷却至室温备用。
2、土贝母苷甲的初步纯化：准备100kgd101大孔树脂、300毫米*2000毫米层析柱备用，将大孔树脂装入层析柱中备用，将树脂用甲醇活化，用纯净水洗至无醇，将1000l的提液上到准备好的d101大孔树脂柱子上，第一步用450l纯净水洗脱，洗脱液弃去，第二步用35％的甲醇洗脱450l-500l，洗脱液浓缩回收甲醇，第三步用60％的甲醇洗脱450l，收集洗脱液，第四部将第三步收集到的洗脱液减压浓缩至无醇备用。
3、土贝母洗脱液脱水和二次纯化：将上述浓缩至无醇的洗脱液重新上一根d101大孔树脂柱，第一步用450l纯净水洗脱，洗脱液弃去，第二步用35％的甲醇洗脱450l-500l，洗脱液减压浓缩回收甲醇，第三步用95％的甲醇洗脱300l，收集洗脱液，第四部将第三步收集到的洗脱液减压浓缩至干稠膏约20l备用。
4、土贝母苷甲的三次纯化：将上述得到的稠膏约20l加入40l乙酸乙酯顺时针搅拌30min放置20℃结晶48h。过滤结晶烘干备用，得到粗结晶含量30％左右土贝母苷甲1.35kg左右。过滤母液浓缩至稠膏在加入40l乙酸乙酯放置20℃结晶48h二次结晶，过滤结晶，得到含量30％左右土贝母苷甲700g左右，过滤母液浓缩干，含有土贝母苷甲12％左右。
5、土贝母苷甲的四次纯化：将上述土贝母苷甲两次结晶粗品用20l50％的甲醇溶解，待固体全部溶解后加入50l-60l无水乙醇放置72h结晶，过滤结晶得到75％土贝母苷甲410g左右，母液浓缩至5l左右加入25l无水乙醇放置72h结晶，过滤结晶得到75％土贝母苷甲160g左右，过滤母液浓缩干。
6、土贝母苷甲的四次纯化：将上述土贝母苷甲两次结晶粗品用18000l无水乙醇60℃反复溶解1h，趁热过滤，的到结晶95％的土贝母结晶450g，收率95％。过滤母液浓缩干得到高纯度的土贝母苷丙。
实施例3
1、土贝母原料50kg粉碎过6目筛子，装入热回流提取器中加入250l的纯净水将原料粗粉浸透，在97℃温度下回流提取3次每次1.5小时，料渣弃去，得到750l提取液，将提取液经过滤器后收集滤液，滤液经加压浓缩罐浓缩至300l，冷却至室温备用。
2、土贝母苷甲的初步纯化：准备100kgab-8大孔树脂、300毫米*2000毫米层析柱备用，将大孔树脂装入层析柱中备用，将树脂用甲醇活化，用纯净水洗至无醇，将1000l的提液上到准备好的ab-8大孔树脂柱子上，第一步用450l纯净水洗脱，洗脱液弃去，第二步用35％的甲醇洗脱450l-500l，洗脱液浓缩回收甲醇，第三步用60％的甲醇洗脱450l，收集洗脱液，第四部将第三步收集到的洗脱液减压浓缩至无醇备用。
3、土贝母洗脱液脱水和二次纯化：将上述浓缩至无醇的洗脱液重新上一根ab-8大孔树脂柱，第一步用450l纯净水洗脱，洗脱液弃去，第二步用35％的甲醇洗脱450l-500l，洗脱液减压浓缩回收甲醇，第三步用95％的甲醇洗脱300l，收集洗脱液，第四部将第三步收集到的洗脱液减压浓缩至干稠膏约20l备用。
4、土贝母苷甲的三次纯化：将上述得到的稠膏约20l加入40l乙酸乙酯顺时针搅拌30min放置20℃结晶48h。过滤结晶烘干备用，得到粗结晶含量30％左右土贝母苷甲1.35kg左右。过滤母液浓缩至稠膏在加入40l乙酸乙酯放置20℃结晶48h二次结晶，过滤结晶，得到含量30％左右土贝母苷甲700g左右，过滤母液浓缩干，含有土贝母苷甲12％左右。
5、土贝母苷甲的四次纯化：将上述土贝母苷甲两次结晶粗品用20l50％的甲醇溶解，待固体全部溶解后加入50l-60l无水乙醇放置72h结晶，过滤结晶得到75％土贝母苷甲410g左右，母液浓缩至5l左右加入25l无水乙醇放置72h结晶，过滤结晶得到75％土贝母苷甲160g左右，过滤母液浓缩干。
6、土贝母苷甲的四次纯化：将上述土贝母苷甲两次结晶粗品用18000l无水乙醇60℃反复溶解1h，趁热过滤，的到结晶95％的土贝母结晶450g，收率85％。过滤母液浓缩干得到高纯度的土贝母苷丙。
实施例4
1、土贝母原料50kg粉碎过6目筛子，装入热回流提取器中加入250l的纯净水将原料粗粉浸透，在97℃温度下回流提取3次每次1.5小时，料渣弃去，得到750l提取液，将提取液经过滤器后收集滤液，滤液经加压浓缩罐浓缩至300l，冷却至室温备用。
2、土贝母苷甲的初步纯化：准备100kgd301大孔树脂、300毫米*2000毫米层析柱备用，将大孔树脂装入层析柱中备用，将树脂用甲醇活化，用纯净水洗至无醇，将1000l的提液上到准备好的d301大孔树脂柱子上，第一步用450l纯净水洗脱，洗脱液弃去，第二步用35％的甲醇洗脱450l-500l，洗脱液浓缩回收甲醇，第三步用60％的甲醇洗脱450l，收集洗脱液，第四部将第三步收集到的洗脱液减压浓缩至无醇备用。
3、土贝母洗脱液脱水和二次纯化：将上述浓缩至无醇的洗脱液重新上一根d301大孔树脂柱，第一步用450l纯净水洗脱，洗脱液弃去，第二步用35％的甲醇洗脱450l-500l，洗脱液减压浓缩回收甲醇，第三步用95％的甲醇洗脱300l，收集洗脱液，第四部将第三步收集到的洗脱液减压浓缩至干稠膏约20l备用。
4、土贝母苷甲的三次纯化：将上述得到的稠膏约20l加入40l乙酸乙酯顺时针搅拌30min放置20℃结晶48h。过滤结晶烘干备用，得到粗结晶含量30％左右土贝母苷甲1.35kg左右。过滤母液浓缩至稠膏在加入40l乙酸乙酯放置20℃结晶48h二次结晶，过滤结晶，得到含量30％左右土贝母苷甲700g左右，过滤母液浓缩干，含有土贝母苷甲12％左右。
5、土贝母苷甲的四次纯化：将上述土贝母苷甲两次结晶粗品用20l50％的甲醇溶解，待固体全部溶解后加入50l-60l无水乙醇放置72h结晶，过滤结晶得到75％土贝母苷甲410g左右，母液浓缩至5l左右加入25l无水乙醇放置72h结晶，过滤结晶得到75％土贝母苷甲160g左右，过滤母液浓缩干。
6、土贝母苷甲的四次纯化：将上述土贝母苷甲两次结晶粗品用18000l无水乙醇60℃反复溶解1h，趁热过滤，的到结晶95％的土贝母结晶450g，收率80％。过滤母液浓缩干得到高纯度的土贝母苷丙。
通过上述实施例，最后可得采用选用d101大孔树脂作为分离树脂是最合适，纯化效果最明显。