贴壁细胞冲洗组合装置的制作方法

本实用新型涉及细胞培养装置技术领域，具体涉及一种贴壁细胞冲洗组合装置。

背景技术：

细胞培养技术是现代生物学、药理学、药效学、遗传学的重要基础技术之一，其在基础实验研究和临床应用研究中发挥着巨大的积极作用，采用细胞培养技术可以对细胞的所有相关结构和功能进行系统化地分析。

一般而言，细胞培养技术主要分为贴壁细胞培养技术、悬浮细胞培养技术，其中，贴壁细胞培养技术的应用范围非常广阔。资料显示，贴壁细胞培养技术的关键核心是贴壁细胞的体外培养，需要将贴壁细胞在模拟体外的基本条件下大规模克隆，以此获得大量同类型的贴壁细胞或者同类型贴壁细胞的代谢产物。在贴壁细胞的体外培养过程中，往往会涉及到贴壁细胞培养的常规操作，例如贴壁细胞洗涤、贴壁细胞换液、贴壁细胞冻存、添加营养物质等。

目前，在体外贴壁细胞洗涤过程中，由于贴壁细胞缺少机体免疫系统的保护作用，很容易出现各类微生物的污染，例如细菌、真菌、寄生虫、支原体、原虫等污染贴壁细胞培养体系，这些细菌、真菌、寄生虫、支原体、原虫等污染物的代谢速度明显快于贴壁细胞的代谢速度，导致细菌、真菌、寄生虫、支原体、原虫等污染物处于优势，贴壁细胞处于劣势，最终引起贴壁细胞的死亡、凋亡、焦亡等。由此，体外贴壁细胞洗涤需要避免各类微生物的污染。

然而，以往的贴壁细胞培养技术常常会遇到细菌、真菌、寄生虫、支原体、原虫等污染的情况，这与多次拧开贴壁细胞培养瓶瓶盖洗涤贴壁细胞有一定关系，也与贴壁细胞洗涤不彻底有一定关系。

技术实现要素：

针对现有技术中的缺陷，本实用新型的目的在于提供一种方便工作人员利用不同种类溶液对贴壁细胞培养瓶进行冲洗的贴壁细胞冲洗组合装置。

为实现上述目的，本实用新型采用以下技术方案：

一种贴壁细胞冲洗组合装置，其特征在于：

包括四个冲洗瓶、一个五通小管、一个洗涤管、一个贴壁细胞培养瓶、一个收集管、一个收集瓶和一个真空抽气泵；所述五通小管具有一个五通小管出口和四个五通小管入口；所述五通小管出口通过一个洗涤管与所述贴壁细胞培养瓶相连；所述贴壁细胞培养瓶的底部经过一收集管通往收集瓶，收集管上设有收集管阀门；所述收集瓶设有收集瓶出口阀门；所述收集瓶上连有一个真空抽气泵；所述的四个五通小管入口分别与四个冲洗瓶相连。

其中，冲洗瓶的瓶底中央设有冲洗瓶瓶底吊环，每个冲洗瓶瓶底设有一透气小阀门；冲洗瓶表面设有冲洗瓶刻度值，冲洗瓶刻度值最大值为400mL；

其中，所述五通小管入口通过冲洗管与冲洗瓶相连；所述冲洗瓶的瓶口处设有冲洗瓶软胶塞；冲洗管的一端直接插入冲洗瓶软胶塞内，冲洗管的另一端通过快速接头与所述五通小管入口相连接，冲洗管上设有冲洗管滴柱和冲洗管阀门，冲洗管阀门上设有冲洗管阀门手动旋钮。

其中，洗涤管的一端为快速接头，该快速接头连接于五通小管出口，洗涤管的另一端为洗涤针，洗涤针直接深入贴壁细胞培养瓶内；洗涤管上设有洗涤管过滤器和洗涤管阀门。

其中，所述洗涤管过滤器为圆柱状立体结构，洗涤管过滤器内设有一层400 目304不锈钢过滤网、一层800目304不锈钢过滤网、一层0.45μm微孔纤维过滤膜和一层0.22μm微孔纤维过滤膜。

其中，所述的400目304不锈钢过滤网与800目304不锈钢过滤网间距1mm， 800目304不锈钢过滤网与0.45μm微孔纤维过滤膜间距2mm，0.45μm微孔纤维过滤膜与0.22μm微孔纤维过滤膜间距3mm。

其中，贴壁细胞培养瓶上设有一个瓶盖，所述瓶盖为圆形结构，中央为圆形乳胶小孔，圆形乳胶小孔具有伸缩弹性，圆形乳胶小孔内有洗涤针穿过，瓶盖周边分布着圆形透气小孔，圆形透气小孔上设有0.22μm微孔纤维过滤膜。

其中，所述洗涤针为具有150度角的弯曲针状结构。

其中，所述收集瓶放置于地面，收集瓶的瓶底设有一收集瓶出口，收集瓶出口上设有收集瓶出口阀门；收集瓶的瓶体上设有收集瓶刻度值，收集瓶刻度值的最大值为4500mL；收集瓶的瓶颈呈现倾斜状态；收集瓶的瓶口设有一收集瓶胶塞，收集瓶胶塞由弹性乳胶材料制备而成，收集瓶胶塞有2个可伸缩的弹性乳胶孔，其中一乳胶孔走行收集管末端，另一弹性乳胶孔走行真空抽气泵的抽气管。

本实用新型的有益效益是：助于实验人员可以选择不同的冲洗液(磷酸盐缓冲液、生理盐水、含有青霉素的磷酸盐缓冲液或贴壁细胞培养液)对贴壁细胞进行分步骤冲洗，有助于实验人员保证贴壁细胞在冲洗过程中不会出现细菌污染且可以保证贴壁细胞处于合理气体供应状态，并具有结构简单、价格便宜、操作简洁、实用性强等优势。

附图说明

图1是本实用新型一实施例的结构示意图。

图2是洗涤管过滤器的结构示意图。

图3是贴壁细胞培养瓶瓶盖的结构示意图。

图4是洗涤针头上面观的结构示意图。

图5是洗涤针头下面观的结构示意图。

图6是洗涤针头侧面观的结构示意图。

图7是收集瓶胶塞的结构示意图。

具体实施方式

一种贴壁细胞冲洗组合装置，包括4个冲洗瓶(A4、B4、C4、D4)、四个冲洗管(A5、B5、C5、D5)、一个五通小管1、一个洗涤管2、一个贴壁细胞培养瓶3、一个收集管5、一个收集瓶8、一个真空抽气泵6。

冲洗瓶(A4、B4、C4、D4)由聚二甲基硅氧烷、聚苯乙烯、聚氯乙烯材料按照1：1：1的比例制备而成，冲洗瓶(A4、B4、C4、D4)由冲洗瓶瓶底、冲洗瓶瓶体、冲洗瓶瓶颈、冲洗瓶瓶口四部分构成，冲洗瓶(冲洗瓶A4、冲洗瓶 B4、冲洗瓶C4、冲洗瓶D4)瓶底中央为冲洗瓶瓶底吊环(冲洗瓶瓶底吊环A41、冲洗瓶瓶底吊环B41、冲洗瓶瓶底吊环C41、冲洗瓶瓶底吊环D41)，冲洗瓶瓶底吊环(冲洗瓶瓶底吊环A41、冲洗瓶瓶底吊环B41、冲洗瓶瓶底吊环C41、冲洗瓶瓶底吊环D41)借助于弯形粘贴挂钩(弯形粘贴挂钩A2、弯形粘贴挂钩B2、弯形粘贴挂钩C2、弯形粘贴挂钩D2)悬挂于操作箱顶板(操作箱顶板A1、操作箱顶板B1、操作箱顶板C21、操作箱顶板D1)上，冲洗瓶(冲洗瓶A4、冲洗瓶B4、冲洗瓶C4、冲洗瓶D4)瓶底周边有1个透气小阀门(透气小阀门A3、透气小阀门B3、透气小阀门C3、透气小阀门D3)，通常情况下透气小阀门(透气小阀门A3、透气小阀门B3、透气小阀门C3、透气小阀门D3)处于关闭状态。冲洗瓶(冲洗瓶A4、冲洗瓶B4、冲洗瓶C4、冲洗瓶D4)表面为冲洗瓶刻度值 (冲洗瓶刻度值A42、冲洗瓶刻度值B42、冲洗瓶刻度值C42、冲洗瓶刻度值 D24)，冲洗瓶刻度值(冲洗瓶刻度值A42、冲洗瓶刻度值B42、冲洗瓶刻度值 C42、冲洗瓶刻度值D24)容积最大值为400mL，冲洗瓶(冲洗瓶A4、冲洗瓶 B4、冲洗瓶C4、冲洗瓶D4)瓶口处有1个冲洗瓶软胶塞(冲洗瓶软胶塞A43、冲洗瓶软胶塞B43、冲洗瓶软胶塞C43、冲洗瓶软胶塞D43)，冲洗瓶软胶塞(冲洗瓶软胶塞A43、冲洗瓶软胶塞B43、冲洗瓶软胶塞C43、冲洗瓶软胶塞D43) 由聚倍半硅氧烷、乳胶、橡胶材料按照1：1：1的比例制备而成，冲洗瓶软胶塞(冲洗瓶软胶塞A43、冲洗瓶软胶塞B43、冲洗瓶软胶塞C43、冲洗瓶软胶塞 D43)的中央有冲洗管(冲洗管A5、冲洗管B5、冲洗管C5、冲洗管D5)入口插入。

冲洗管(冲洗管A5、冲洗管B5、冲洗管C5、冲洗管D5)由二氧化钛、聚氯乙烯材料按照1：1比例制备而成，冲洗管(冲洗管A5、冲洗管B5、冲洗管 C5、冲洗管D5)的一端直接插入冲洗瓶软胶塞(冲洗瓶软胶塞A43、冲洗瓶软胶塞B43、冲洗瓶软胶塞C43、冲洗瓶软胶塞D43)内，冲洗管(冲洗管A5、冲洗管B5、冲洗管C5、冲洗管D5)的另一端通过快速接头(快速接头A54、快速接头B54、快速接头C54、快速接头D54)与五通小管1的五通小管入口(五通小管入口A6、五通小管入口B6、五通小管入口C6、五通小管入口D6)相连接，冲洗管(冲洗管A5、冲洗管B5、冲洗管C5、冲洗管D5)上有冲洗管滴柱 (冲洗管滴柱A51、冲洗管滴柱B51、冲洗管滴柱C51、冲洗管滴柱D51)、冲洗管滴柱(冲洗管滴柱A52、冲洗管滴柱B52、冲洗管滴柱C52、冲洗管滴柱 D52)，冲洗管滴柱(冲洗管滴柱A52、冲洗管滴柱B52、冲洗管滴柱C52、冲洗管滴柱D52)上有可以转动的冲洗管阀门手动旋钮(冲洗管阀门手动旋钮A53、冲洗管阀门手动旋钮B53、冲洗管阀门手动旋钮C53、冲洗管阀门手动旋钮D53)，通过冲洗管阀门手动旋钮(冲洗管阀门手动旋钮A53、冲洗管阀门手动旋钮B53、冲洗管阀门手动旋钮C53、冲洗管阀门手动旋钮D53)可以控制冲洗瓶(冲洗瓶 A4、冲洗瓶B4、冲洗瓶C4、冲洗瓶D4)的液体是否流出。

五通小管1由聚苯乙烯、二氧化钛、氧化镍材料按照1：1比例制备而成，五通小管1包括五通小管1的主体结构、四个五通小管入口(五通小管入口A6、五通小管入口B6、五通小管入口C6、五通小管入口D6)以及一个五通小管出口11。五通小管1主体结构呈现梳子样结构，五通小管入口(五通小管入口A6、五通小管入口B6、五通小管入口C6、五通小管入口D6)通过快速接头(快速接头A54、快速接头B54、快速接头C54、快速接头D54)与冲洗管(冲洗管 A5、冲洗管B5、冲洗管C5、冲洗管D5)相连接，五通小管出口11通过快速接头21与洗涤管2一端相连接。

洗涤管2由聚丙乙烯、石英、聚倍半硅氧烷材料按照1：1：1比例制备而成，洗涤管2的一端为快速接头21，该快速接头连接于五通小管出口11，洗涤管2的另一端为洗涤针25，洗涤针25直接深入贴壁细胞培养瓶3内。洗涤管2 上依次分布着快速接头21、洗涤管过滤器22、洗涤管阀门23、洗涤针柄24、洗涤针25。

洗涤管过滤器22为圆柱状立体结构，洗涤管过滤器22内依次分布着一层 400目304不锈钢过滤网221、一层800目304不锈钢过滤网222、一层0.45μ m微孔纤维过滤膜223、一层0.22μm微孔纤维过滤膜224。其中，洗涤管过滤器400目304不锈钢过滤网221与800目304不锈钢过滤网222间距1mm，洗涤管过滤器800目304不锈钢过滤网222与0.45μm微孔纤维过滤膜223间距 2mm，洗涤管过滤器0.45μm微孔纤维过滤膜223与0.22μm微孔纤维过滤膜 224间距3mm。

洗涤管阀门23位于洗涤管2上，洗涤管过滤器22的后面是洗涤管阀门23，洗涤管阀门23上有洗涤管阀门手动旋钮231。洗涤针柄24位于洗涤管2上，洗涤管阀门23的后面是洗涤针柄24。

洗涤针25位于洗涤管2末端上，洗涤针柄24的后面是洗涤针25。洗涤针 25由聚丙乙烯、聚氯乙烯、氧化镍、石英材料按照1：1：1：1的比例制备而成，洗涤针25为弯曲的针状结构，洗涤针25后段与洗涤针25前段的比值为1：1，洗涤针25后段与洗涤针25前段的顺时针夹角α为150度，洗涤针25前段末端为洗涤针头26，洗涤针25前段与洗涤针头26的顺时针夹角β为30度。洗涤针头26上面观为正方形结构，洗涤针头26上面观的中央为1个洗涤针头入口261，洗涤针头26下面观为正方形结构，洗涤针头26下面观为15个洗涤针头出口262，洗涤针头出口262均匀分布于洗涤针头26下面，洗涤针头下面每行3个洗涤针头出口262，共5列洗涤针头出口262。

贴壁细胞培养瓶3由聚苯乙烯、聚倍半硅氧烷、二氧化钛材料按照1：1：1 比例制备而成，贴壁细胞培养瓶3为平颈培养瓶，贴壁细胞培养瓶3包括贴壁细胞培养瓶瓶盖31、贴壁细胞培养瓶3瓶颈、贴壁细胞培养瓶3瓶体、贴壁细胞培养瓶3瓶底四部分。贴壁细胞培养瓶瓶盖31为圆形结构，贴壁细胞培养瓶瓶盖31内侧螺纹与贴壁细胞培养瓶3瓶颈的外侧螺纹紧密咬合，贴壁细胞培养瓶瓶盖31中央为圆形乳胶小孔313，圆形乳胶小孔313具有伸缩弹性，圆形乳胶小孔313内有洗涤针25穿过，贴壁细胞培养瓶瓶盖31周边分布着圆形透气小孔311，圆形透气小孔311内有0.22μm微孔纤维过滤膜312覆盖。贴壁细胞培养瓶3瓶体平放于操作箱平台4上，贴壁细胞培养瓶3瓶颈中央有洗涤针头 25从中央部位穿过。贴壁细胞培养瓶3瓶底末端为1个收集管5。

收集管5由聚氯乙烯、二氧化钛、氧化镍材料按照1：2：1比例制备而成，收集管5为管状结构，收集管5一端为贴壁细胞培养瓶3瓶底末端，收集管5 另一端为收集管末端53。收集管5上有收集管阀门51，收集管阀门51上有收集管阀门手动旋钮52。收集管末端53直接插入收集瓶8内。

收集瓶8由玻璃、二氧化钛、氧化镍材料按照1：2：1比例制备而成。收集瓶8分为收集瓶8瓶底、收集瓶8瓶体、收集瓶8瓶颈、收集瓶8瓶口四部分。收集瓶8瓶底位于地面7上，收集瓶8瓶底一端为收集瓶出口82，收集瓶出口82上有收集瓶出口阀门83。收集瓶8瓶体上有收集瓶刻度值81，收集瓶刻度值81的最大值为4500mL。收集瓶8瓶颈呈现倾斜状态。收集瓶8瓶口有收集瓶胶塞84，收集瓶胶塞84由弹性乳胶材料制备而成，收集瓶胶塞84有2 个可以伸缩的弹性乳胶孔(第一弹性乳胶孔841、第二弹性乳胶孔842)，第一弹性乳胶孔841走行收集管末端53，第二弹性乳胶孔842走行真空抽气泵抽气管61。

真空抽气泵6为小型真空抽气装置，真空抽气泵6的一端为真空抽气泵抽气管61，真空抽气泵抽气管61直接深入收集瓶8内，真空抽气泵6的另一端为真空抽气泵电源62。

使用具体流程如下：

本实用新型专利有助于实验人员可以选择不同的冲洗液(磷酸盐缓冲液、生理盐水、含有青霉素的磷酸盐缓冲液、贴壁细胞培养液)对贴壁细胞进行分步骤冲洗，有助于实验人员保证贴壁细胞在冲洗过程中不会出现细菌污染且可以保证贴壁细胞处于合理气体供应状态，本实用新型专利具有结构简单、价格便宜、操作简洁、实用性强等优势。

(一)对贴壁细胞进行常规培养，需要旋紧冲洗管阀门(冲洗管阀门A52、冲洗管阀门B52、冲洗管阀门C52、冲洗管阀门D52)上有可以转动的冲洗管阀门手动旋钮(冲洗管阀门手动旋钮A53、冲洗管阀门手动旋钮B53、冲洗管阀门手动旋钮C53、冲洗管阀门手动旋钮D53)，旋紧洗涤管阀门23上有洗涤管阀门手动旋钮231，旋紧收集管阀门51上有收集管阀门手动旋钮52，旋紧收集瓶出口82上有收集瓶出口阀门83，关闭真空抽气泵6的真空抽气泵电源62。

(二)对贴壁细胞常规冲洗

1.磷酸盐缓冲液冲洗

需要旋松冲洗管阀门A52上有可以转动的冲洗管阀门手动旋钮A53，旋紧冲洗管阀门(冲洗管阀门B52、冲洗管阀门C52、冲洗管阀门D52)上有可以转动的冲洗管阀门手动旋钮(冲洗管阀门手动旋钮B53、冲洗管阀门手动旋钮C53、冲洗管阀门手动旋钮D53)，旋松洗涤管阀门23上有洗涤管阀门手动旋钮231，旋松收集管阀门51上有收集管阀门手动旋钮52，旋紧收集瓶出口82上有收集瓶出口阀门83，开启真空抽气泵6的真空抽气泵电源62。此时磷酸盐缓冲液经过冲洗管A5、五通小管入口A6、五通小管1主体结构、五通小管出口11、洗涤管2、洗涤针25、洗涤针头入口261、洗涤针头出口262、贴壁细胞培养瓶3、收集管5、收集瓶8。

2.生理盐水冲洗

需要旋松冲洗管阀门B52上有可以转动的冲洗管阀门手动旋钮B53，旋紧冲洗管阀门(冲洗管阀门A52、冲洗管阀门C52、冲洗管阀门D52)上有可以转动的冲洗管阀门手动旋钮(冲洗管阀门手动旋钮A53、冲洗管阀门手动旋钮C53、冲洗管阀门手动旋钮D53)，旋松洗涤管阀门23上有洗涤管阀门手动旋钮231，旋松收集管阀门51上有收集管阀门手动旋钮52，旋紧收集瓶出口82上有收集瓶出口阀门83，开启真空抽气泵6的真空抽气泵电源62。此时生理盐水经过冲洗管B5、五通小管入口B6、五通小管1主体结构、五通小管出口11、洗涤管2、洗涤针25、洗涤针头入口261、洗涤针头出口262、贴壁细胞培养瓶3、收集管 5、收集瓶8。

3.含有青霉素的磷酸盐缓冲液冲洗

需要旋松冲洗管阀门C52上有可以转动的冲洗管阀门手动旋钮C53，旋紧冲洗管阀门(冲洗管阀门A52、冲洗管阀门B52、冲洗管阀门D52)上有可以转动的冲洗管阀门手动旋钮(冲洗管阀门手动旋钮A53、冲洗管阀门手动旋钮B53、冲洗管阀门手动旋钮D53)，旋松洗涤管阀门23上的洗涤管阀门手动旋钮231，旋松收集管阀门51上有收集管阀门手动旋钮52，旋紧收集瓶出口82上有收集瓶出口阀门83，开启真空抽气泵6的真空抽气泵电源62。此时含有青霉素的磷酸盐缓冲液经过冲洗管C5、五通小管入口C6、五通小管1主体结构、五通小管出口11、洗涤管2、洗涤针25、洗涤针头入口261、洗涤针头出口262、贴壁细胞培养瓶3、收集管5、收集瓶8。

4.贴壁细胞培养液冲洗

需要旋松冲洗管阀门D52上有可以转动的冲洗管阀门手动旋钮D53，旋紧冲洗管阀门(冲洗管阀门A52、冲洗管阀门B52、冲洗管阀门C52)上有可以转动的冲洗管阀门手动旋钮(冲洗管阀门手动旋钮A53、冲洗管阀门手动旋钮B53、冲洗管阀门手动旋钮C53)，旋松洗涤管阀门23上有洗涤管阀门手动旋钮231，旋松收集管阀门51上有收集管阀门手动旋钮52，旋紧收集瓶出口82上有收集瓶出口阀门83，开启真空抽气泵6的真空抽气泵电源62。此时贴壁细胞培养液经过冲洗管D5、五通小管入口D6、五通小管1主体结构、五通小管出口11、洗涤管2、洗涤针25、洗涤针头入口261、洗涤针头出口262、贴壁细胞培养瓶 3、收集管5、收集瓶8。

最终本实用新型可以对贴壁细胞培养体系进行培养、洗涤且保证贴壁细胞处于无菌状态。