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背景技术：
嗅觉受体基因已经通过同源性被表征为七个跨膜结构域g蛋白偶联受体(gpcr)。据估计，人类中大概有500-750个嗅觉受体基因序列，而大鼠和小鼠中有500-1000个嗅觉基因。嗅觉受体集中在粘液包覆的纤毛的表面上，并且有气味的分子与嗅觉上皮中的嗅觉受体结合。由于哺乳动物可以检测到至少10,000种气味并且嗅觉受体大约有1,000种或更少，因此许多有气味物必须与多种嗅觉受体相互作用。
嗅觉受体的辨别力为使得它可以感知数千种挥发性化学品为具有不同的气味。已知嗅觉系统使用组合受体编码方案来破译气味分子。一种嗅觉受体可以识别多种有气味物，并且一种有气味物被多种嗅觉受体识别出。有气味物的轻微结构变化或环境中有气味物浓度的变化会引起这些受体的气味编码的变化。
气味分子属于各种化学类别：从醇类、醛类、酮类和羧酸到含硫化合物和精油。气味分子的物理化学描述符在预测嗅觉受体的气味响应方面起着重要作用。基于配体中存在的碳原子数，类似的嗅觉受体序列在配体特异性方面可以具有结构偏置。在食物中鉴定出了约8000种有气味物。表征了约400种食物有气味物，并且此数目大约等于在人类中发现的嗅觉受体的数目。有气味物的混合物的响应既不是添加剂也不是其组分的平均。一些混合物导致出现了在单独组分中不存在的新的感知特质。
嗅觉受体已经发现于非嗅觉组织中，如例如，脂肪组织、肾上腺、脑、乳房、结肠、白细胞、肠、心脏、肾、肝、肺、淋巴结、卵巢、胎盘、前列腺、骨骼肌、睾丸和甲状腺。在这些非嗅觉细胞中表达的or可以被称为异位or。在嗅觉神经元中，每个神经元仅表达or基因的一个等位基因。相比之下，在非嗅觉细胞中，每个细胞中可以表达多个or基因。一些异位or跨哺乳动物在进化上是保守的，而若干种异位or跨哺乳动物的许多不同细胞类型广泛地表达。
技术实现要素：
一方面，本文中提供了用于检测异位嗅觉受体处的相互作用的生物传感器。这些生物传感器可以用于鉴定异位嗅觉受体的激动剂和拮抗剂。多个生物传感器可以用于检测一或多个配体在多个异位嗅觉受体处的相互作用。一方面，所述多个生物传感器可以代表在特定类型的细胞和/或组织上发现的异位嗅觉受体的库或所述库的一部分。例如，所述多个生物传感器可以代表在受试者的皮肤、脑、乳房、结肠、心脏、肾、肝、卵巢、前列腺、睾丸、白细胞、淋巴结或其它细胞和组织上表达的异位嗅觉受体的库或所述库的一部分。所述多个生物传感器可以代表在皮肤上表达的异位嗅觉受体的库或所述库的一部分，包含例如嗅觉受体or2at4。所述多个生物传感器可以代表在多巴胺能神经元上表达的异位嗅觉受体的库或所述库的一部分，包含例如or51e1、or51e2和or2j3。
生物传感器还可以包含g蛋白复合物和腺苷酸环化酶。g蛋白复合物可以包含三个亚基，gα亚基、gβ亚基和gγ亚基。腺苷酸环化酶和g蛋白复合物可以源自同一物种。可替代地，腺苷酸环化酶和g蛋白复合物可以源自不同物种。g蛋白亚基也可以源自相同或不同的物种。生物传感器多肽包含与异位嗅觉受体具有70％、80％、90％、95％和99％序列同源性的多肽。
生物传感器可以具有六到七个数量级的动态范围，并且生物传感器可以检测在十亿分之0.15到约十亿分之420,000或10-9m到约10-3m的范围内的有气味物和其它分子的结合。生物传感器的检测窗口在10m到10-12m的范围内可以为六到七个数量级。生物传感器还可以检测在10-11m到约10-2m的范围内的有气味物和其它分子的结合。生物传感器的检测窗口在10m到10-12m的范围内可以为九到十个数量级。生物传感器还可以具有在10m到10-12m的范围内为三到五个数量级的检测窗口。生物传感器可以具有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个数量级的检测窗口。
本说明书中还公开了对生物传感器进行编码的核酸。这些核酸包含在严格的杂交条件下与对生物传感器多肽中的一个生物传感器多肽进行编码的核酸杂交的核酸。生物传感器多肽包含由核酸编码的多肽，所述核酸在严格的杂交条件下与对本文所述的生物传感器多肽进行编码的核酸杂交。核酸对异位嗅觉受体的多肽进行编码或者是在严格的杂交条件下与对异位嗅觉受体进行编码的核酸杂交的核酸。核酸可以对与异位嗅觉受体具有70％、80％、90％、95％和99％序列一致性的多肽进行编码。
本说明书还公开了包含在宿主细胞内的生物传感器多肽和生物传感器核酸。宿主细胞可以是真核细胞，如例如，真菌细胞、动物细胞、植物细胞或藻类细胞。真菌细胞可以选自酵母属(saccharomyces)、毕赤酵母属(pichia)、曲霉属(aspergillus)、金孢子菌属(chrysosporium)或木霉属(trichoderma)。真菌细胞可以是酿酒酵母(saccharomycescerevisiae)、巴斯德毕赤酵母(pichiapastoris)、黑曲霉(aspergillusniger)、米曲霉(aspergillusoryzae)、卢克诺文思金孢子菌(chrysosporiumlucknowense)或里氏木霉(trichodermareesei)。宿主细胞可以是源自中国仓鼠细胞、人肾细胞、猴肾细胞、人宫颈癌细胞或小鼠骨髓瘤细胞的哺乳动物细胞系。宿主细胞可以是人类细胞。宿主细胞可以是鼠类细胞。宿主细胞可以是犬类细胞。
本文中还描述了含有生物传感器多肽和生物传感器核酸的宿主细胞的用途。描述了源自具有生物传感器的宿主细胞的膜部分和膜部分的用途。参考受体报告子可以包含在宿主细胞或膜部分中以允许在生物传感器上进行相对实时的测量。实时测量可以用于测量配体与至少一个异位嗅觉受体的相互作用。实时测量可以用于测量配体在多个不同异位嗅觉受体处的相互作用。可以进行实时测量并与参考进行比较，以提供配体在异位嗅觉受体处的相互作用的比较数字。实时监测的报告子可以是光学报告子或非光学报告子。参考受体可以与报告子相关联，所述报告子不同于与异位嗅觉受体相关联的报告子。不同的报告子可以是光学报告子。
在其它方面，本公开涉及新异位嗅觉受体和用于发现新异位嗅觉受体的方法。对来自不同组织/细胞的rna进行高通量筛选(测序)可以鉴别出在组织/细胞中表达的新异位嗅觉受体。这些高通量筛选还可以用于比较患病的和健康的组织/细胞，以鉴别与疾病、异常状态或受损状态相关联的异位嗅觉受体。
一方面，异位嗅觉受体的配体可以用于与异位嗅觉受体相互作用。配体可以是异位嗅觉受体的激动剂或拮抗剂。多个配体可以用于与某个组织的细胞上的多个异位嗅觉受体相互作用，所述组织包含例如皮肤、脑、乳房、结肠、心脏、肾、肝、卵巢、前列腺、睾丸、白细胞或淋巴结。配体可以是抗体、其它多肽、小肽和/或小分子。
一方面，异位嗅觉受体的配体可以用于受试者的疗法中。这种配体包含例如与异位嗅觉受体结合的抗体。配体可以用于刺激细胞在伤口愈合(例如，包含干细胞的皮肤细胞)、骨修复(骨膜和成软骨细胞)、器官修复和神经再生(例如，在肢体再接以及神经干细胞生长和分化期间)期间变得活跃。异位嗅觉受体的配体还可以用于帕金森氏病、黑色素瘤和其它癌症的治疗中。异位嗅觉受体的配体还可以用于抑制血管生成(在癌症中)或诱导血管生成(在器官和组织修复中)。异位嗅觉受体的配体可以用于避孕或生育治疗。异位嗅觉受体的配体可以用于诱导趋化或更改靶细胞的细胞活性。
附图说明
图1描绘了or生物传感器构建体的质粒图。
具体实施方式
在描述各种实施例之前，应当理解，本公开的教导不限于所描述的特定实施例并且因此当然可以改变。还应当理解，因为本发明教导的范围将仅由所附权利要求书限定，所以本文所使用的术语仅是出于描述特定实施例的目的，而不旨在是限制性的。
除非另外定义，否则本文所使用的全部技术术语和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常所理解的含义相同的含义。虽然与本文所述的那些方法和材料类似或等同的任何方法和材料也可以用于本发明教导的实践或测试中，但是现在描述一些示范性方法和材料。
如对于本领域的技术人员而言在阅读本公开后将显而易见，本文描述和展示的单独实施例中的每一个具有离散的组成部分和特征，所述离散的组成部分和特征可以在不偏离本发明教导的范围或精神的情况下易于与任何其它若干实施例的特征分离或组合。可以按照所叙述的事件的顺序或按照逻辑上可能的任何其它顺序来执行任何所叙述的方法。
定义
如本文所使用的，“激动剂”被定义为与细胞上的受体结合的任何分子，所述受体结合可以潜在地导致细胞的功能随后发生变化。当激动剂与足够数量的受体结合时，受体激活了细胞中的过程。
如本文所使用的，“拮抗剂”被定义为与细胞上的受体结合并抑制受体激活细胞中的过程的任何分子。此抑制可以包含针对激动剂的竞争性结合(当拮抗剂被结合时，激动剂无法结合受体)和变构效应(当拮抗剂结合时，激动剂仍可以结合受体但无法激活受体)。
如本文所使用的，“抗体”被定义为在功能上被定义为配体结合蛋白并且在结构上被定义为包括被技术人员公认为源自免疫球蛋白的可变区的氨基酸序列的蛋白质。抗体可以由基本上由免疫球蛋白基因、免疫球蛋白基因的片段、杂合免疫球蛋白基因(通过组合来自不同动物的遗传信息制成)或合成免疫球蛋白基因编码的一或多种多肽组成。公认的天然免疫球蛋白基因包含κ、λ、α、γ、δ、ε和μ恒定区基因以及无数免疫球蛋白可变区基因和多个d区段和j区段。轻链被分类为κ或λ。重链被分类为γ、μ、α、δ或ε，这些进而分别定义了免疫球蛋白类别igg、igm、iga、igd和ige。抗体以完整的免疫球蛋白存在、以通过各种肽酶的消化产生的许多特征明确的片段存在或以通过重组dna技术制成的各种片段存在。抗体可以源自许多不同的物种(例如，兔、绵羊、骆驼、人或如小鼠或大鼠等啮齿动物)或者可以是合成的。抗体可以是嵌合的、人源化的或人工程化的。抗体可以是单克隆或多克隆的多链或单链的片段或完整的免疫球蛋白。
如本文所使用的，“抗体片段”被定义为完整抗体或其重组变体的至少一部分并且是指抗原结合结构域，例如，完整抗体的抗原决定可变区，所述抗原结合结构域足以赋予抗体片段对如抗原等靶标的识别和特异性结合。抗体片段的实例包含但不限于fab、fab'、f(ab')2和fv片段、scfv抗体片段、线性抗体、如sdab(vl或vh)等单结构域抗体、骆驼科vhh结构域和由抗体片段形成的多特异性抗体。术语“scfv”被定义为包括包含轻链的可变区的至少一个抗体片段和包含重链的可变区的至少一个抗体片段的融合蛋白，其中轻链可变区和重链可变区通过短的柔性多肽连接子连续地连接并且能够作为单链多肽表达，并且其中scfv保留了其源自的完整抗体的特异性。除非具体说明，否则如本文所使用的，scfv可以具有任一顺序的vl可变区和vh可变区，例如，相对于多肽的n端和c端，scfv可以包括vl-连接子-vh或可以包括vh-连接子-vl。
如本文所使用的，“经过修饰的抗体”被定义为抗体片段(酶促的或重组的)、嵌合抗体、人源化抗体、人工程化抗体、单链抗体、双抗体、与天然抗体在结构上不同的其它重组抗体、或者具有非天然且不存在于天然抗体上的一或多种修饰(转译后修饰或通过化学修饰原位产生的修饰)的抗体。
如本文所使用的，“抗原”被定义为引发免疫应答的分子。此免疫应答可以涉及抗体的产生或特异性免疫活性细胞的激活或两者。本领域技术人员将理解，任何大分子都可以用作抗原，所述大分子包含但不限于几乎所有蛋白质或肽，包含糖基化多肽、磷酸化多肽和其它经过转译后修饰的多肽(包含用脂质修饰的多肽)。此外，抗原可以源自重组或基因组dna。本领域技术人员将理解，包括对引起免疫应答的蛋白质进行编码的核苷酸序列或部分核苷酸序列的任何dna因此对如本文所使用的所述术语一样的“抗原”进行编码。此外，本领域技术人员将理解，抗原不需要仅由基因的全长核苷酸序列编码。抗原可以由一或多个基因的部分核苷酸序列编码，并且这些核苷酸序列可以被布置成各种组合以便对引发期望的免疫应答的多肽进行编码。此外，本领域技术人员将理解，抗原根本不需要由“基因”编码。抗原可以是合成的或者可以源自生物样品或者除了多肽以外还可以是大分子。这种生物样品可以包含但不限于组织样品、肿瘤样品、细胞或具有其它生物组分的流体。
如本文所使用的，“香气图(aromagraph)”是指嗅觉受体库(包含异位嗅觉受体)对配体的响应的数字表示。
如本文所使用的，“异位嗅觉受体”是位于并非负责嗅觉的化学感觉器官的一部分的器官、组织和/或细胞中的嗅觉受体。
如本文所使用的，“有效量”是指如本文所述有效实现特定生物学结果的化合物、调配物、材料或组合物的量。
如本文所使用的，术语“表达(express/expression)”是指由包含在核酸序列内的遗传信息产生蛋白质产物。
如本文所使用的，“表达载体”和“表达构建体”可互换地使用并且均定义为被设计用于细胞中的蛋白质表达的质粒、病毒或其它核酸。载体或构建体用于将基因导入宿主细胞中，由此载体将与细胞中的聚合酶相互作用以表达载体/构建体中编码的蛋白质。表达载体和/或表达构建体可以以在染色体外或整合到染色体中的方式存在于细胞中。当整合到染色体中时，包括表达载体或表达构建体的核酸将保留表达载体或表达构建体。
如本文所使用的，术语“融合蛋白”和“融合多肽”可互换地使用并且均指代从已经一起被克隆并对单个多肽区段进行编码的不同基因获得的两个或两个以上核苷酸序列。融合蛋白也被称为“杂合蛋白”或“嵌合蛋白”。如本文所使用的，术语“融合蛋白”包含从不同物种获得的多肽编码片段以及从同一物种获得的编码片段。
如本文所使用的，当结合多核苷酸的各部分使用时，术语“异源”指示核酸包括通常未在自然界发现彼此呈相同关系的两个或两个以上子序列。例如，核酸通常例如从被布置成产生新的功能性核酸的不相关基因重组地产生，从而具有两个或两个以上序列。类似地，“异源”多肽或蛋白质是指未在自然界发现彼此呈相同关系的两个或两个以上子序列。
如本文所使用的，术语“宿主细胞”是指可以将载体或构建体引入、表达和/或繁殖到其中的原核或真核细胞。微生物宿主细胞是原核或真核微生物的细胞，包含细菌、酵母、微观真菌以及真菌和粘菌的生命周期中的微观相。典型的真核宿主细胞是酵母或丝状真菌或哺乳动物细胞，如中国仓鼠细胞、鼠类nih3t3成纤维细胞、人肾细胞或者啮齿动物骨髓瘤或杂交瘤细胞。
如本文所使用的，术语“分离的”是指不仅与存在于核酸或多肽的天然来源中的其它核酸或多肽分离而且还与其它细胞组分分离的核酸或多肽，并且优选地是指在仅存在(如果有的话)溶剂、缓冲剂、离子或通常存在于其溶液中的其它组分的情况下发现的核酸或多肽。术语“分离的”和“纯化的”不涵盖存在于其天然来源中的核酸或多肽。
如本文所使用的，术语“哺乳动物”是指所有拥有毛发并且哺乳其幼崽的温血脊椎动物。
如本文所使用的，“有气味物”是指可以由至少一种嗅觉受体检测到的任何物质。
如本文所使用的，“嗅觉”或“嗅觉接收”是指与细胞信号传导途径偶联的嗅觉受体对化合物的检测。检测到的化合物被称为“有气味物”并且可以是空气传播的(即，挥发性的)和/或在溶液中。
如本文所使用的，术语“嗅觉受体”或“or”在本文中可互换地使用以指代嗅觉受体、微量胺相关受体、犁鼻受体、甲酰肽受体、膜鸟苷酸环化酶、亚型gc-d受体和g蛋白偶联味觉受体。嗅觉受体包含由嗅觉受体、微量胺相关受体、犁鼻受体、甲酰肽受体、膜鸟苷酸环化酶、亚型gc-d受体和g蛋白偶联味觉受体制成的杂合受体。
如本文所使用的，“序列一致性百分比”和“百分比同源性”在本文中可互换地使用以指代多核苷酸或多肽之间的比较并且通过在比较窗口上比较两个最佳比对的序列来确定，其中多核苷酸或多肽序列的在比较窗口中的部分可以包括相比于用于所述两个序列的最佳比对的参考序列而言的添加或缺失(即，缺口)。百分比可以通过以下计算：确定在两个序列中出现相同核酸碱基或氨基酸残基的位置数以产生匹配的位置的数目、将匹配的位置的数目除以比较窗口中的位置总数并且将结果乘以100以得到序列一致性百分比。可替代地，百分比可以通过以下计算：确定在两个序列中出现相同核酸碱基或氨基酸残基的位置数或者核酸碱基或氨基酸残基与缺口对齐的位置数以产生匹配的位置的数目、将匹配的位置的数目除以比较窗口中的位置总数并且将结果乘以100以得到序列一致性百分比。本领域技术人员了解到，有许多既定算法可用于比对两个序列。用于比较的序列的最佳比对可以例如通过以下进行：局部同源性算法，史密斯(smith)和沃特曼(waterman),高等应用数学(advapplmath.)2:482,1981；同源比对算法，尼德曼(needleman)和文森(wunsch),分子生物学杂志(jmolbiol.)48:443,1970；相似性捜索方法，皮尔森(pearson)和里普曼(lipman),美国国家科学院院刊(procnatlacadsci.usa)85:2444,1988；这些算法的计算机化实施方案(gcgwisconsin软件包中的gap、bestfit、fasta和tfasta)或目测检查(通常参见分子生物学实验指南(currentprotocolsinmolecularbiology),f.m.奥苏贝尔(f.m.ausubel)等人编,格林出版公司(greenepublishingassociates,inc.)和约翰·威利父子出版公司(johnwiley&sons,inc.)(1995年增刊))。适于确定百分比序列一致性和序列相似性的算法的实例是blast和blast2.0算法，所述算法分别描述于以下中：奥特舒尔(altschul)等人,分子生物学杂志(jmolbiol.)215:403-410,1990；和奥特舒尔等人,核酸研究(nucleicacidsres.)25(17):3389-3402,1977。用于执行blast分析的软件可通过美国国家生物技术信息中心(nationalcenterforbiotechnologyinformation)网站公开地获得。用于核苷酸序列的blast可以使用具有默认参数的blastn程序：例如，字长(w)为11、期望值(e)为10、m＝5、n＝-4以及两条链的比较。用于氨基酸序列的blast可以使用具有默认参数的blastp程序：例如，字长(w)为3、期望值(e)为10以及blosum62评分矩阵(参见海尼考夫(henikoff)和海尼考夫,美国国家科学院院刊89:10915,1989)。对序列比对和％序列一致性的示范性确定还可以使用提供的默认参数采用gcgwisconsin软件包(威斯康辛州麦迪逊的accelrys公司)中的bestfit或gap程序。
如本文所使用的，术语“蛋白质”、“肽”、“多肽”和“多肽片段”在本文中可互换地使用以指代任何长度的氨基酸残基的聚合物。聚合物可以是线性的或分支的、聚合物可以包括经过修饰的氨基酸或氨基酸类似物并且聚合物可以被除氨基酸以外的化学部分中断。所述术语还涵盖天然地或通过干预修饰的氨基酸聚合物；例如，二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化、peg化或任何其它操作或修饰，如与标记性或生物活性组分缀合。
如本文所使用的，术语“纯化的”意指所指示的核酸或多肽在基本上不存在其它生物大分子(例如，多核苷酸、蛋白质等)的情况下存在。多核苷酸或多肽可以被纯化成使得其构成所存在的生物大分子的按重量计至少95％，更优选按重量计至少99.8％(但是可以存在水、缓冲剂和其它小分子，尤其是分子量小于1000道尔顿的分子)。
如本文所使用的，术语“实时”是指在反应或相互作用期间进行多次测量，如与在反应结束时或在指定时间点进行单次测量相反的。实时测量经常用于对样品中组分的量进行定量或提供对样品中两种或两种以上组分的相对量化。实时测量还可以用于确定反应或相互作用的动力学参数。
如本文所使用的，术语“重组核酸”是指自然界中通常找不到的形式的核酸。例如，重组核酸的侧翼可以是不天然位于核酸侧翼的核苷酸序列，或者重组核酸可以具有通常在自然界中找不到的序列。重组核酸最初可以通过由限制性内切核酸酶操作核酸或者可替代地使用如聚合酶链反应等技术在体外形成。应当理解，一旦制成重组核酸并将其重新引入宿主细胞或生物体中，重组核酸就可以非重组地复制，即，使用宿主细胞的体内细胞机制而非体外操作；然而，一旦重组地产生，即使随后非重组地复制，此类核酸仍被视为重组的。
如本文所使用的，术语“重组多肽”是指从重组核酸表达的多肽或在体外化学合成的多肽。
如本文所使用的，术语“重组变体”是指因使用重组dna技术产生的氨基酸插入、缺失和取代而不同于天然存在的多肽的任何多肽。可以通过比较特定多肽的序列与同源肽的序列并最小化在高同源性区域中进行的氨基酸序列变化的数量来找到确定哪些氨基酸残基可以被置换、添加或缺失而不消除感兴趣的活动(例如，酶促活动或结合活动)的指导。
如本文所使用的，术语“库”或“文库”是指对多个不同嗅觉受体进行编码的基因的文库。库或文库可以代表一个物种(例如人、狗或猫)的所有嗅觉受体。库或文库可以代表检测味道、香味、臭味、香气和/或气味的嗅觉受体。库或文库可以代表检测期望的、令人愉悦的、令人振奋的或不利的味道、香味、臭味、香气和/或气味的嗅觉受体。库或文库可以代表一个类别、家族或类型的嗅觉受体。
如本文所使用的，术语“报告子”或“报告分子”是指能够间接或直接地被检测的部分。报告子包含但不限于发色团、荧光团、荧光蛋白、发光蛋白、受体、半抗原、酶和放射性同位素。
如本文所使用的，术语“报告基因”是指对可以直接或间接地被检测的报告分子进行编码的多核苷酸。示范性报告基因对酶、荧光蛋白、生物发光蛋白、受体、抗原表位和转运蛋白等进行编码。
如本文所使用的，“严格的杂交条件”是指在42℃的温度在5xssc下在50％甲酰胺中杂交并在60℃下在0.2xssc中洗涤过滤器。(1xssc是0.15mnacl、0.015m柠檬酸钠。)严格的杂交条件还涵盖用于洗涤的低离子强度和高温，例如50℃下0.015m氯化钠/0.0015m柠檬酸钠/0.1％十二烷基硫酸钠；在42℃下与变性剂杂交，如甲酰胺，例如，具有0.1％牛血清白蛋白/0.1％聚蔗糖/0.1％聚乙烯吡咯烷酮/50mmph6.5磷酸钠缓冲液的50％(v/v)甲酰胺与750mm氯化钠、75mm柠檬酸钠；或42℃下50％甲酰胺、5xssc(0.75mnacl、0.075m柠檬酸钠)、50mm磷酸钠(ph6.8)、0.1％焦磷酸钠、5xdenhardt溶液、经过超声处理的鲑鱼精子dna(50μg/ml)、0.1％sds和10％硫酸葡聚糖，在42℃下在0.2xssc(氯化钠/柠檬酸钠)中以及在55℃下在50％甲酰胺中洗涤，接着在55℃下进行由含有edta的0.1xssc组成的高严格洗涤。
如本文所使用的，“基本一致性”是指具有至少80％序列一致性、至少85％一致性和89％到95％序列一致性的多核苷酸或多肽序列。基本一致性还涵盖在至少20个残基位置的比较窗口或至少30-50个残基的窗口上与参考序列相比至少99％序列一致性，其中通过将参考序列与包含缺失或添加或取代的序列在比较窗口上进行比较来计算序列一致性百分比。如适用于多肽的，术语“基本一致性”可以意指两个多肽序列在如使用标准参数即默认参数通过程序gap或bestfit进行最佳比对时共享至少80％序列一致性、优选地至少89％序列一致性、至少95％序列一致性或更多(例如，99％序列一致性)。
优选地，氨基酸“取代”是将一种氨基酸用具有类似的结构和/或化学性质的另一种氨基酸置换(即保守性氨基酸置换)的结果。氨基酸取代可以在涉及的残基在极性、电荷、溶解度、疏水性、亲水性和/或两亲性性质上具有相似性的基础上进行。例如，非极性(疏水性)氨基酸包含丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和蛋氨酸；极性中性氨基酸包含甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺；带正电荷的(碱性)氨基酸包含精氨酸、赖氨酸和组氨酸；并且带负电荷的(酸性)氨基酸包含天冬氨酸和谷氨酸。
如本文所使用的，“味觉受体”是指用于检测甜味、苦味和鲜味(谷氨酸盐)的g蛋白偶联味觉受体以及用于检测咸味和酸味的离子通道和离子移变受体。
如本文所使用的，“转染”或“转化”或“转导”被定义为将外源核酸转移或引入到宿主细胞中的过程。“转染的”或“转化的”或“转导的”细胞是用外源核酸转染、转化或转导的细胞。所述细胞包含受试者的原代细胞和其子代。
除非上下文另外清楚地指出，否则单数术语“一个/种(a)”、“一个/种(an)”和“所述(the)”包含复数指代物。类似地，除非上下文另外清楚地指出，否则词语“或/或者(or)”旨在包含“和/以及(and)”。关于物质(如抗原)的浓度或水平给出的数值限制旨在是近似的。因此，当指示浓度为至少(例如)200μg时，所述浓度旨在应被理解为至少近似地“约”或“约”200μg。
嗅觉受体
异位嗅觉受体是在嗅觉方面不起作用的器官、组织和/或细胞中表达的嗅觉受体。异位嗅觉受体已经被发现于许多非嗅觉组织和细胞中，包含例如受试者的皮肤、脑、乳房、结肠、红系细胞、眼睛、心脏、肾、肝、肺、卵巢、前列腺、脾、睾丸、白细胞、淋巴结或其它组织和/或细胞。异位嗅觉受体具有许多与嗅觉无关的作用，包含例如精子和睾丸中的辨别性趋化、发育期间的广泛范围的过程(例如，血管生成、神经纤维的方向)、对肾小球滤过率的调节、对肌动蛋白细胞骨架和胞质分裂的调节、对血压的调节以及对细胞分泌多肽的刺激。
在脂肪中发现的异位嗅觉受体包含例如or51e2、or2w3、or51e1、or2a1/42、or2a4/7、or52n4、or13a1、047d2、or10j1or1l8、or2b6、or4d6、tas1r3、tas2r10、tas2r13、tas2r14、tas2r19、tas2r20、tas2r31、tas2r40、tas2r42、tas2r5、vn1r1和vn1r2。在肾上腺组织中发现的异位嗅觉受体包含例如or51e2、orw3、or51e1、or2a1/42、or2a4/7、or52n4、or13a1、or5k2、or3a2、or2h2、or7c1、or2l13、or1l8、or2t8、or10ad1、or52b6、or1e1、or13j1、or2c1、or52d1、or10a2、or2b6、or8g5、or1f12、or4d6、tas1r1、tas1r3、tas2r10、tas2r13、tas2r14、tas2r19、tas2r20、tas2r3、tas2r30、tas2r31、tas2r4、tas2r42、tas2r5、tas2r50、tas2r9和vn1r1。在cns中发现的异位嗅觉受体包含例如or51e2、or2w3、or4n4、or51e1、or52n4、or13a1、or5k2、or7d2、or3a2、or2v1、or2h2、or7c1、or2l13、or1l8、or2t8、or10ad1、or3a3、or2k2、or13j1、or2c1、or7a5、or10a2、or1f12、taar3、taar5、taar6、tas1r1、tas1r3、tas2r1、tas2r10、tas2r13、tas2r14、tas2r19、tas2r20、tas2r3、tas2r30、tas2r31、tas2r39、tas2r4、tas2r40、tas2r42、tas2r46、tas2r5、tas2r50、tas2r7、tas2r8、tas2r9、vn1r1、vn1r2和vn1r5。在多巴胺能神经元中发现的异位嗅觉受体包含例如or51e1、or51e2和or2j3。在乳房中发现的异位嗅觉受体包含例如or51e2、or51e1、or2a1/42、or2a4/7、or52n4、or5k2、or3a2、or2t8、or10ad1、or3a3、or2k2、or1e1、or2c1、or2c3、or8d1、or7a5、or10a2、tas1r1、tas1r3、tas2r10、tas2r13、tas2r14、tas2r19、tas2r20、tas2r31、tas2r4、tas2r5和vn1r1。在结肠中发现的异位嗅觉受体包含例如or51e2、or2w3、or51e1、or2a1/42、or2a4/7、or5k2、or7d2、or7c1、or2l13、or7a5、or51b5、tas1r1、tas1r3、tas2r14、tas2r20、tas2r4、tas2r43、tas2r5和vn1r1。在心脏中发现的异位嗅觉受体包含例如or51e2、or51e1、or52n4、or13a1、or2h2、or10ad1、or3a3、or52b6、or2k2、or8g5、or4d6、tas1r1、tas1r3、tas2r10、tas2r13、tas2r14、tas2r19、tas2r20、tas2r3、tas2r30、tas2r31、tas2r4、tas2r43、tas2r46、tas2r5、tas2r50、tas2r7和vn1r1。在肾中发现的异位嗅觉受体包含例如or51e2、or51e1、or2a1/42、or2a4/7、or5k2、or1l8、or10a2、or1f12、tas1r1、tas1r3、tas2r1、tas2r10、tas2r14、tas2r19、tas2r20、tas2r3、tas2r30、tas2r31、tas2r4、tas2r42、tas2r43、tas2r5、tas2r50和vn1r1。在肝中发现的异位嗅觉受体包含例如or2w3、or51e1、or2a1/42、or2a4/7、or7d2、or1l8、or2t8、tas1r3、tas2r14、tas2r14、tas2r20、tas2r30、tas2r30、tas2r40、tas2r5、vn1r1和vn1r2。在淋巴结中发现的异位嗅觉受体包含例如or51e2、or51e1、or2a1/42、or52n4、or13a1、or5k2、or3a2、or2h2、or3a3、or2b6、tas1r3、tas2r14、tas2r19、tas2r20、tas2r31、tas2r4、tas2r40、tas2r43、tas2r5和vn1r1。在淋巴结中发现的异位嗅觉受体包含例如or51e2、or2w3、or2a1/42、or2a4/7、or52n4、or5k2、or7d2、or52b6、tas1r1、tas1r3、tas2r14、tas2r20、tas2r31、tas2r4、tas2r5、tas2r50和vn1r1。在卵巢中发现的异位嗅觉受体包含例如or51e2、or2w3、or4n4、or51e1、or2a1/42、or2a4/7、or52n4、or5k2、or3a2、or2v1、or2h2、or2l13、or1l8、or10ad1、or3a3、or52b6、or13j1、or2c1、or52d1、or51b5、or1f12、tas1r1、tas1r3、tas2r1、tas2r10、tas2r13、tas2r14、tas2r19、tas2r20、tas2r3、tas2r31、tas2r4、tas2r42、tas2r43、tas2r5、tas2r50、tas2r60、tas2r7、vn1r1和vn1r2。在前列腺中发现的异位嗅觉受体包含例如or51e2、or2w3、or51e1、or2a1/42、or2a4/7、or52n4、or13a1、or5k2、or2h2、or7c1、or1e1、or13j1、or51b5、tas1r3、tas2r14、tas2r19、tas2r20、tas2r43、tas2r46、tas2r5和vn1r1。在皮肤中发现的异位嗅觉受体包含例如or2at4。在睾丸中发现的异位嗅觉受体包含例如or4n4、or6f1、or2h1、or51e2、or2w3、or4n4、or51e1、or2a1/42、or2a4/7、or52n4、or7d2、or3a2、or2v1、or2h2、or7c1、or10j1、or1l8、or1c1、or2h1、or10ad1、or3a3、or13c3、or2k2、or1e1、or2c1、or2k2、or1e1、or2c1、or2c3、or8d1、or52d1、or7a5、or10a2、or2b6、or7e24、or6f1、or8g5、or51b5、or1f12、tas1r1、tas1r3、tas2r1、tas2r14、tas2r19、tas2r20、tas2r3、tas2r31、tas2r4、tas2r43、tas2r5、tas2r50、tas2r60、vn1r1、vn1r2、vn1r3和vn1r4。在白细胞中发现的异位嗅觉受体包含例如or2w3、or2a4/7、or52n4、or7d2、or2l13、or3a3、or2c1、or2c3、or2b6、tas1r3、tas2r14、tas2r20、tas2r40和tas2r60。在其它组织、器官和细胞中发现的其它异位嗅觉受体在以下中进行描述：菲列格尔(flegel)等人,plosone8:e55368(2013)；艾比菲(abaffy),j.pharmacogen.pharmacoprot.6:4(2015)(dx.doi.org/10.4172/2153-0645.1000152)；以及费勒(ferrer)等人,老化神经科学前沿(front.agingneurosci.)8:163(2016)，所述文献出于所有目的通过全文引用的方式并入。
包含异位嗅觉受体在内的大多数嗅觉受体是g蛋白偶联受体，所述g蛋白偶联受体在受体被有气味物激活后与g蛋白缔合以用于信号转导。gpcr具有七个α螺旋跨膜区的保守结构特征。大多数嗅觉受体的长度为约320±25个氨基酸。长度上的差异主要是由n端和c端区域的变异造成的。大多数嗅觉受体包含位于tm3(跨膜区3)和介于tm3与tm4之间的细胞内环的连接处的基序maydryvaic(seqidno:1)。一些嗅觉受体中保存的其它基序包含例如第一细胞内环中的lhtpmy(seqidno:2)、tm6起始处的fstcssh(seqidno:3)和tm7中的pmlnpf(seqidno:4)。
本文描述的异位嗅觉受体可以是人类嗅觉受体或来自另一种哺乳动物的嗅觉受体或来自另一种生物体的嗅觉受体。本文描述的嗅觉受体可以是杂合嗅觉受体。来自一个嗅觉受体的n端区域的氨基酸可以融合到不同的第二嗅觉受体的n端区域。n端氨基酸可以是供体嗅觉受体的氨基酸位置1-61。n端氨基酸可以是供体嗅觉受体的氨基酸位置1-55。n端氨基酸可以是从氨基酸位置1-20或氨基酸直到第一跨膜结构域，或包含第一跨膜结构域的共有序列的氨基酸位置1-40。n端氨基酸可以在其氨基酸位置1-61的n端区域融合到接受体嗅觉受体。来自供体多肽的c端的氨基酸可以融合到接受体嗅觉受体的c端。来自接受体嗅觉受体的c端的1-50个氨基酸可以被来自供体多肽的氨基酸置换。来自接受体嗅觉受体的c端的1-55个氨基酸可以被来自供体多肽的氨基酸置换。供体多肽可以是嗅觉受体。
接受体嗅觉受体可以是人类嗅觉受体，并且供体嗅觉受体可以是人类嗅觉受体。接受体嗅觉受体可以是人类嗅觉受体，并且供体嗅觉受体可以是鼠类嗅觉受体。接受体嗅觉受体可以是人类嗅觉受体，并且供体嗅觉受体可以是酵母多肽。接受体嗅觉受体可以是鼠类嗅觉受体，并且供体嗅觉受体可以是鼠类嗅觉受体。接受体嗅觉受体可以是鼠类嗅觉受体，并且供体嗅觉受体可以是人类嗅觉受体。接受体嗅觉受体可以是鼠类嗅觉受体，并且供体嗅觉受体可以是酵母多肽。接受体嗅觉受体可以是犬类嗅觉受体，并且供体嗅觉受体可以是犬类嗅觉受体。接受体嗅觉受体可以是犬类嗅觉受体，并且供体嗅觉受体可以是人类或鼠类嗅觉受体。接受体嗅觉受体可以是犬类嗅觉受体，并且供体嗅觉受体可以是酵母多肽。
从供体嗅觉受体添加的氨基酸可以置换接受体嗅觉受体中的对应氨基酸位置。从供体嗅觉受体添加的氨基酸可以增加接受体嗅觉受体中的氨基酸总数。接受体嗅觉受体在进行了融合后可以具有更少的氨基酸(与起始接受体嗅觉受体相比)。
大多数哺乳动物嗅觉受体可以被分类成两个系统发育组，i类嗅觉受体和ii类嗅觉受体。i类嗅觉受体类似于鱼嗅觉受体，而ii类受体是哺乳动物的最大特征。虽然在哺乳动物中，大多数嗅觉受体属于ii类，但哺乳动物也具有i类受体，例如，人和小鼠各自具有超过100个i类嗅觉受体。哺乳动物的嗅觉基因数量从灵长类动物的约800个(包含假基因)到狗和小鼠的约1,500个不等。功能性嗅觉受体的数量从鸭嘴兽的约262个和人的390个到大鼠的1,284个和小鼠的1,194个不等。
人类嗅觉受体库包含18个基因家族和300个亚家族的约850个基因和假基因，包含约390个推定功能基因。展示将人类嗅觉受体基因组织成家族和亚家族的数据库以及到嗅觉受体的多肽和核酸序列的链接可以在以下找到：hugo基因命名委员会网站www.genenames.org/genefamilies/or、嗅觉受体数据库(senselab.med.yale.edu/ordb/info/humanorseqanal)和horde人类嗅觉数据浏览器(在genome.weizmann.ac.il/horde/处找到)，所有所述内容出于所有目的通过全文引用的方式并入。
小鼠嗅觉受体库包含228个家族的约1,296个基因和假基因，其中约80％推定是功能性的。将小鼠嗅觉受体基因组织成家族和亚家族的数据库以及到嗅觉受体的多肽和核酸序列的链接可以在嗅觉受体数据库(senselab.med.yale.edu/ordb/info/humanorseqanal)中找出，所述嗅觉受体数据库出于所有目的通过全文引用的方式并入。
犬类嗅觉受体库包含约1,094个基因。库更(quignon)等人,基因组生物学(genomebiol.)第6卷,第r83-r83.9页(2005)；奥兰德(olender)等人,基因组学(genomics)第83卷,第361-372页(2004)；库更等人,第13章,csh专著(cshmonographs)第44卷:狗和其基因组(thedoganditsgenome)(2006)；所述文献出于所有目的通过全文引用的方式并入。
其它哺乳动物的嗅觉受体库也在本发明的范围内，包含例如小鼠、大鼠、猫、奶牛和牛、马、山羊、猪以及熊的嗅觉受体库。
生物传感器可以由具有以下氨基酸序列的人类嗅觉受体1a1(or1a1、ncbi9606、up000005640、hgnc8179、np_055380.2、dmdm212276451)制成：
mrennqsstlefillgvtgqqeqedffyilflfiypitlignllivlaicsdvrlhnpmyfllanlslvdiffssvtipkmlanhllgsksisfggcltqmyfmialgntdsyilaamaydravaisrplhyttimsprsciwliagswvignanalphtlltaslsfcgnqevanfycditpllklscsdihfhvkmmylgvgifsvpllciivsyirvfstvfqvpstkgvlkafstcgshltvvslyygtvmgtyfrpltnyslkdavitvmytavtpmlnpfiyslrnrdmkaalrklfnkriss(seqidno:5)
人类嗅觉受体1a1的n端氨基酸可以用来自具有以下序列的人类嗅觉受体6a2(or6a2、ncbi9606、up000005640、hgnc15301；np_003687.2)的n端氨基酸置换
mewrnhsgrvsefvllgfpapaplqvllfallllayvlvltentliimairnhstlhkpmyfflanmsfleiwyvtvtipkmlagfvgskqdhgqlisfegcmtqlyfflglgctecvllavmaydrymaicyplhypvivsgrlcvqmaagswaggfgismvkvflisglsycgpniinhffcdvspllnlsctdmstaeltdfilaifillgplsvtgasyvaitgavmhipsaagrykafstcashltvviifyaasifiyarpkalsafdtnklvsvlyavivpllnpiiyclrnqevkralcctlhlyqhqdpdpkkasrnv(seqidno:6)
来自or6a2的n端区域的氨基酸(氨基酸位置1-61)可以融合到or1a1，以制成用于生物传感器中的融合嗅觉受体。来自or6a2的n端区域的至少20个连续氨基酸可以与or1a1融合。or6a2的n端区域可以是氨基酸位置1-55。or6a2的这些氨基酸在or1a1的n端区域中的范围为1-61的位置处融合。or6a2的n端序列可以融合到or1a1的氨基酸位置56。人类or6a2可以不加修饰地用于生物传感器中。通过与来自其它嗅觉受体的其它c端序列融合，人类or6a2受体可以在其c端进行修饰。通过融合来自其它嗅觉受体的n端序列，人类or6a2可以在其n端进行修饰。
生物传感器可以由人类嗅觉受体2j2(or2j2、hgnc8260；np_112167)制成。
mmikknassedffillgfsnwpqlevvlfvvilifylmtltgnlfiiilsyvdshlhtpmyfflsnlsfldlcyttssipqllvnlrgpektisyagcmvqlyfvlalgitecvllvvmsydryvavcrplhytvlmhprfchllvaaswvigftisalhssftfwvplcghrlvdhffcevpallrlscvdthaneltlmvmssifvliplililttygaiaravlsmqsttglqkvfrtcgahlmvvslffipvmcmylqppsenspdqgkfialfytvvtpslnpliytlrnkhvkgaakrllgwewgk(seqidno:7)
生物传感器可以由人类嗅觉受体2w1(or2w1、hgnc8281；np_112165)制成。
mdqsnysslhgfillgfsnhpkmemilsgvvaifylitlvgntaiilaslldsqlhtpmyfflrnlsfldlcfttsiipqmlvnlwgpdktisyvgciiqlyvymwlgsveclllavmsydrftaickplhyfvvmnphlclkmiimiwsislansvvlctltlnlptcgnnildhflcelpalvkiacvdtttvemsvfalgiiivltplililisygyiakavlrtkskasqrkamntcgshltvvsmfygtiiymylqpgnraskdqgkfltlfytvitpslnpliytlrnkdmkdalkklmrfhhkstkikrncks(seqidno:8)
生物传感器可以由人类嗅觉受体5p3(or5p3、hgnc14784；np_703146)制成。
mgtgndttvveftllglsedttvcailflvflgiyvvtlmgnisiivlirrshhlhtpmyiflchlafvdigysssvtpvmlmsflrketslpvagcvaqlcsvvtfgtaecfllaamaydryvaicspllystcmspgvciilvgmsylggcvnawtfigcllrlsfcgpnkvnhffcdyspllklacshdftfeiipaissgsiivatvcviaisyiyilitilkmhstkgrhkafstctshltavtlfygtitfiyvmpkssystdqnkvvsvfytvvipmlnpliyslrnkeikgalkrelrikifs(seqidno:9)
来自大鼠ri7嗅觉受体的n端氨基酸可以融合到人类嗅觉受体的n端。大鼠ri7嗅觉受体具有以下n端序列：
merrnhsgrvsefvllgfpapaplrvllfflsllayvlvltenmliiiairnhptlhkpmyfflanmsfleiwyvtvtipkmlagfigskenhgqlisfe(seqidno:10)
大鼠ri7嗅觉受体的n端序列的氨基酸位置1-55可以融合到人类嗅觉受体的n端。
嗅觉受体可以在其n端或c端与flag标签或his标签融合，以帮助对生物传感器多肽进行某些纯化和生物化学表征。
人类嗅觉受体可以分类成18个家族：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、51、52、55和56。or1家族有21个成员：or1a、or1b、or1c、or1d、or1e、or1f、or1g、or1h、or1i、or1j、or1k、or1l、or1m、or1n、or1p、or1q、or1r、or1s、or1x、or1aa和or1ab。or2家族有41个成员：or2a、or2b、or2c、or2d、or2e、or2f、or2g、or2h、or2i、or2j、or2k、or2l、or2m、or2n、or2q、or2r、or2s、or2t、or2u、or2v、or2w、or2x、or2y、or2z、or2ad、or2ae、or2af、or2ag、or2ah、or2ai、or2aj、or2ak、or2al、or2am、or2ao、or2ap、or2as和or2at。or3家族有3个成员：or3a、or3b和or3d。or4家族有21个成员：or4a、or4b、or4c、or4d、or4e、or4f、or4g、or4h、or4k、or4l、or4m、or4n、or4p、or4q、or4r、or4s、or4t、or4u、or4v、or4w和or4x。or5家族有49个成员：or5a、or5b、or5c、or5d、or5e、or5f、or5g、or5h、or5i、or5j、or5k、or5l、or5m、or5p、or5r、or5s、or5t、or5v、or5w、or5ac、or5ah、or5ak、or5al、or5am、or5an、or5ao、or5ap、or5aq、or5ar、or5as、or5au、or5w、or5x、or5y、or5z、or5ba、or5bb、or5bc、or5bd、or5be、or5bh、or5bj、or5bk、or5bl、or5bm、or5bn、or5bp、or5bq、or5br、or5bs和or5bt。or6家族有21个成员：or6a、or6b、or6c、or6d、or6e、or6f、or6j、or6k、or6l、or6m、or6n、or6p、or6q、or6r、or6s、or6t、or6u、or6v、or6w、or6x和or6y。or7家族有9个成员：or7a、or7c、or7d、or7e、or7g、or7h、or7k、or7l和or7m。or8家族有18个成员：or8a、or8b、or8c、or8d、or8f、or8g、or8h、or8i、or8j、or8k、or8l、or8q、or8r、or8s、or8t、or8u、or8v和or8x。or9家族有12个成员：or9a、or9g、or9h、or9j、or9k、or9l、or9m、or9n、or9p、or9q、or9r和or9s。or10家族有29个成员：or10a、or10b、or10c、or10d、or10g、or10h、or10j、or10k、or10n、or10p、or10q、or10r、or10s、or10t、or10u、or10v、or10w、or10x、or10y、or10z、or10aa、or10ab、or10ac、or10ad、or10ae、or10af、or10ag、or10ah和or10ak。or11家族有11个成员：or11a、or11g、or11h、or11i、or11j、or11k、or11l、or11m、or11n、or11p、or11q。or12家族有1个成员：or12d。or13家族有11个成员：or13a、or13c、or13d、or13e、or13f、or13g、or13h、or13i、or13j、or13k和or13z。or14家族有6个成员：or14a、or14c、or14i、or14j、or14k和or14l。or51家族有21个成员：or51a、or51b、or51c、or51d、or51e、or51f、or51g、or51h、or51i、or51j、or51k、or51l、or51m、or51n、or51p、or51q、or51r、or51s、or51t、or51v和or51ab。or52家族有22个成员：or52a、or52b、or52d、or52e、or52h、or52i、or52j、or52k、or52l、or52m、or52n、or52p、or52q、or52r、or52s、or52t、or52u、or52v、or52w、or52x、or52y和or52z。or55家族有1个成员：or55b。or56家族有2个成员：or56a和or56b。
新异位嗅觉受体的鉴别
可以使用测序技术来鉴别非嗅觉组织和细胞中表达的嗅觉受体。例如，可以使用rna测序(也称为全转录组鸟枪法测序)来揭示异位嗅觉受体的rna转录物在广泛选择的人类组织中的时间存在和数量，所述人类组织包含来自产前、产后、儿童期、成年期和老年期受试者的组织。
一旦一或多个组织被鉴别为表达异位嗅觉受体，就可以使用细胞/组织培养中的敲除实验来研究异位嗅觉受体的作用。异位嗅觉受体参与例如趋化作用并促进细胞与细胞、细胞与组织或组织与组织通信。这些作用参与例如组织和细胞的发育和分化、正常的儿童期发育、青春期相关发育和其它正常的生理功能。
癌细胞和处于其它疾病状态的细胞也可以被筛选用于异位嗅觉受体表达，以发现异常表达的异位嗅觉受体。这种异常的异位嗅觉受体会参与疾病过程，如癌症中的血管生成或某些视网膜疾病中的血管生成。这种异常的异位嗅觉受体可以在诊断上用于鉴别疾病状态，并且可以是例如用于抑制异位嗅觉受体参与的疾病过程的拮抗剂的靶标。
生物传感器
本文中描述了用于检测嗅觉受体(包含异位嗅觉受体)处的相互作用的生物传感器。生物传感器可以用于检测配体在嗅觉受体处的相互作用。生物传感器可以包括多个嗅觉受体，并且所述多个嗅觉受体可以用于检测配体。生物传感器中的所述多个嗅觉受体可以代表在特定的组织、多个组织、细胞或多个细胞中发现的动物异位嗅觉受体库或所述库的一部分。生物传感器中的所述多个嗅觉受体可以代表在细胞或者一或多个组织上表达的人类嗅觉受体库、所述库的一部分或异位嗅觉受体库。生物传感器中的多个嗅觉受体可以代表人类嗅觉受体库的在神经组织中发现的部分。生物传感器中的多个嗅觉受体可以代表人类嗅觉受体库的在皮肤细胞中发现的部分。生物传感器中的多个嗅觉受体可以代表人类嗅觉受体库的在骨细胞中发现的部分。生物传感器中的多个嗅觉受体可以代表人类嗅觉受体库的在肿瘤细胞中发现的部分。生物传感器中的多个嗅觉受体可以代表人类嗅觉受体库的在患病组织中发现的部分。
单独的生物传感器可以包含嗅觉受体(包含异位嗅觉受体)，所述嗅觉受体在其n端区域融合到将新生多肽靶向用于将嗅觉受体插入到膜中的宿主细胞分泌设备的多肽序列，并且在其c端区域融合到使膜中的受体稳定的多肽。融合到嗅觉受体的c端区域的多肽可以将受体靶向宿主细胞的外膜。嗅觉受体可以是哺乳动物嗅觉受体。嗅觉受体可以是人类嗅觉受体。生物传感器中可以使用全长嗅觉受体。全长嗅觉受体可以是人类嗅觉受体。
生物传感器可以包含g蛋白信号传导途径。可以使用许多g蛋白信号传导途径。g蛋白信号传导途径可以包括g蛋白介导的对腺苷酸环化酶的激活，由此产生了camp作为第二信使。camp可以与camp激活的阳离子通道相互作用。
生物传感器还可以包含g蛋白和腺苷酸环化酶(例如，uniproto60266)。g蛋白可以包含三个亚基，gα亚基(例如，uniprotp38405)、gβ亚基(例如，uniprotp62879)和gγ亚基(例如，uniprotp63218)。腺苷酸环化酶和g蛋白可以来自同一物种。腺苷酸环化酶和g蛋白可以来自不同物种。g蛋白亚基可以来自相同或不同物种。嗅觉受体、g蛋白和腺苷酸环化酶可以来自同一物种，或者所述组分中的一或多个组分来自不同物种。生物传感器的嗅觉受体和g蛋白可以来源于人类多肽。
生物传感器可以包含报告子。生物传感器的g蛋白可以直接与报告多肽相互作用以产生可检测的信号，例如，腺苷酸环化酶是产生camp的报告多肽。camp分子本身可以被检测到(例如，可商购获得的试剂盒由例如赛默飞世尔科技公司(thermofisherscientific)、瑞博奥生物科技有限公司(raybiotech)、恩佐生命科学公司(enzolifesciences)、开曼化学品公司(caymanchemical)和细胞生物学实验室公司(cellbiolabs)出售)。生物传感器的g蛋白可以与诱导报告子的多肽相互作用。g蛋白可以与多肽(例如，腺苷酸环化酶)相互作用以产生第一信号，并且当报告子对第一信号作出响应时，第二系统扩增第一信号。可以使用多个扩增步骤来增加对嗅觉受体处的相互作用的检测。初级信号和一或多个经过扩增的信号都可以被检测到，以增大生物传感器检测到的结合相互作用的动态范围。
生物传感器可以包含一或多个报告子。可以将对报告蛋白进行编码的异源基因引入宿主细胞中，使得宿主细胞表达报告子，并且当在生物传感器的嗅觉受体处发生适当的相互作用时，生物传感器激活报告子。宿主细胞可以被工程化以表达单个报告子。可以使用各自表达不同报告子的不同宿主细胞来增强对生物传感器的信号检测。宿主细胞可以被工程化以表达两种或两种以上报告产物，例如通过使用对两个或两个以上报告子进行编码的单个载体构建体。一或多个报告子可以提供至少3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个数量级的动态检测范围，从而覆盖在约10-12m到约10m的范围内的嗅觉受体处检测范围。
所述一或多个报告子可以是荧光报告子、生物发光报告子、酶和离子通道中的一或多个。荧光报告子的实例包含例如来自维多利亚水母(aequoreavictoria)或海肾(renillareniformis)的绿色荧光蛋白和其活性变体(例如，蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、青色荧光蛋白等)；来自水螅水母、桡足动物、栉水母、珊瑚虫和奶嘴海葵的荧光蛋白和其活性变体；以及藻胆蛋白和其活性变体。其它荧光报告子包含例如小分子，如cpsd(3-(4-甲氧基螺环{1,2-二氧杂环丁烷-3,2'-(5'-氯)三环[3.3.1.13,7]癸烷}-4-基)磷酸苯二钠，赛默飞世尔科技公司目录号t2141)。生物发光报告子包含例如水母发光蛋白(和其它ca+2调节的光蛋白)、基于荧光素底物的荧光素酶、基于腔肠素底物的荧光素酶(例如，renilla、gaussia和metridina)和来自海萤的荧光素酶以及其活性变体。生物发光报告子可以是例如北美萤火虫荧光素酶、日本萤火虫荧光素酶、意大利萤火虫荧光素酶、东欧萤火虫荧光素酶、宾夕法尼亚州萤火虫荧光素酶、叩头虫荧光素酶、苹果蝇蛆荧光素酶(railroadwormluciferase)、海肾荧光素酶、gaussia荧光素酶、海萤荧光素酶、metrida荧光素酶、oluc和红色萤火虫荧光素酶，所有这些都可从赛默飞世尔科技公司和/或普洛麦格公司(promega)商购获得。酶报告子包含例如β-半乳糖苷酶、氯霉素乙酰转移酶、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、乙酰胆碱酯酶和过氧化氢酶。离子通道报告子包含例如camp激活的阳离子通道。所述一或多个报告子还可以包含正电子发射断层摄影(pet)报告子、单光子发射计算机断层摄影(spect)报告子、光声报告子、x射线报告子和超声报告子。
可以用本文描述的生物传感器进行实时测量。报告子发出光或产生可以用光学传感器检测的分子。在生物传感器与潜在配体相互作用时，通过记录光发射随时间推移的变化，可以从生物传感器获得实时测量。实时测量可以用于通过绝对测量或相对测量来量化结合相互作用。在绝对测量中，将实时信号与标准品进行比较，以确定嗅觉受体处的结合活性。可以使用已知数量的嗅觉受体配体来生成受体占用与报告基因输出的标准结合曲线。然后可以将测试配体的结合与标准曲线进行比较，以量化测试配体在嗅觉受体处的相互作用。在相对测量中，生物传感器可以包含允许比较嗅觉受体处的相互作用差异的内部参考物。可以在宿主细胞中包含参考g蛋白偶联受体，并且将已知量的参考配体添加到参考受体中作为标准品。参考受体可以偶联到不同的报告子，例如，提供与嗅觉受体报告子不同的光信号的报告多肽。参考受体和测试受体可以偶联到如绿色荧光蛋白gfp和红色荧光蛋白rfp等不同的荧光蛋白。可以在同一嗅觉受体处针对不同测试配体比较绿色荧光与红色荧光的比率，或者比较同一测试配体与不同嗅觉受体的结合。
实时数据可以从具有非光学报告子的生物传感器获得。来自第一报告系统的信号可以通过第二报告系统扩增，以增强来自嗅觉受体处的弱相互作用的信号。可以控制生物传感器的gtp/gdp比率，以调节来自受体的g蛋白偶联信号转导的灵敏度。可以控制gtp/gdp比率以更改生物传感器的动态范围。
根据从报告基因表达的报告产物的类型，报告基因的产物可以通过任何适合的检测方法和设备来检测。举例来说，示范性报告基因对光产生性蛋白(例如，荧光素酶或egfp)进行编码，并且此表型可以使用光学成像进行检测。在本文的描述中，报告子的表达意味着包含导致编码的报告子或报告分子表达的对应报告基因的表达。
多肽包含由以下核酸编码的多肽：所述核酸在严格的杂交条件下与对seqidno:5-9和11-16的多肽中的一个多肽进行编码或者对来自18个人类嗅觉受体家族的人类嗅觉受体中的一个人类嗅觉受体进行编码的核酸杂交。多肽还包含由以下核酸编码的多肽：所述核酸在严格的杂交条件下与对seqidno:5或6的多肽进行编码的核酸杂交。
多肽可以与seqidno:5-9和11-16中的一个或来自18个人类嗅觉受体家族的人类or受体中的一个人类or受体具有至少70％、80％、90％、95％或99％的序列一致性。多肽可以与seqidno:5-6中的一个具有至少70％、80％、90％、95％或99％的序列一致性。
人类嗅觉受体在生物传感器中的检测阈值可以为约十亿分之0.15到约十亿分之420,000或在6-7个数量级的范围内。人类嗅觉受体在本文所述的生物传感器中的检测范围为约10-9m到约10-3m或在约6个数量级的范围内。在配体范围为10m到10-12m时，检测范围可以超过3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个数量级。
多肽可以涵盖本文所述的多肽的片段和变体。因此，术语“片段或变体多肽”进一步考虑了序列的缺失、添加和取代，只要多肽如本文所述那样起作用即可。术语“保守性变异”表示氨基酸残基被另一个生物学上类似的残基置换或核酸序列中的核苷酸的取代，使得编码的氨基酸残基不改变或改变为另一个结构上、化学上或以其他方式在功能上类似的残基。在这点上，特别优选的取代在本质上通常是保守的，即发生在氨基酸家族中的那些取代。例如，氨基酸通常分为四个家族：(1)酸性—天冬氨酸和谷氨酸；(2)碱性—赖氨酸、精氨酸、组氨酸；(3)非极性—丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、色氨酸；以及(4)不带电荷的极性—甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸。苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸有时被分类为芳香族氨基酸。保守性变异的实例包含用一个疏水残基(如异亮氨酸、缬氨酸、亮氨酸或蛋氨酸)取代另一个疏水残基，或用一个极性残基取代另一个极性残基，如用精氨酸取代赖氨酸、用谷氨酸替代天冬氨酸或用谷氨酰胺替代天冬酰胺等；或者用不会对生物活性产生重大影响的在结构上相关的氨基酸对氨基酸进行类似的保守性置换。因此，具有与参考分子基本上相同的氨基酸序列但拥有基本上不影响蛋白质的免疫原性的少量氨基酸取代的蛋白质在参考多肽的定义之内。通过这些修饰产生的所有多肽都包含在本文中。术语“保守性变异”还包含使用取代的氨基酸代替未取代的亲本氨基酸，条件是针对取代的多肽产生的抗体也与未取代的多肽发生免疫反应。
“变体”多肽或核酸涵盖具有基本上类似的序列的多肽或核酸。对于多核苷酸，变体包括天然多核苷酸内的一或多个位点处的一或多个核苷酸的缺失和/或添加和/或在天然多核苷酸内的一或多个位点处的一或多个核苷酸的取代。如本文所使用的，“天然”多核苷酸或多肽分别包括天然存在的核苷酸序列或氨基酸序列。特定多核苷酸(即，参考多核苷酸)的变体也可以通过比较由变体多核苷酸编码的多肽与由参考多核苷酸编码的多肽之间的百分比序列一致性来评估。“变体”蛋白质旨在意指通过在天然蛋白质中的一或多个位点处的一或多个氨基酸的缺失或添加和/或在天然蛋白质中的一或多个位点处的一或多个氨基酸的取代而衍生自天然蛋白质的蛋白质。变体蛋白质具有生物活性。
来自其它等位基因的多肽的同源物旨在处于本说明书的范围内。如本文所使用的，术语“同源物”包含类似物和旁系同源物。术语“类似物”是指具有相同或类似功能但分别在不相关的宿主生物体中演化的两个多核苷酸或多肽。术语“旁系同源物”是指通过基因组内的复制而相关的两个多核苷酸或多肽。旁系同源物通常具有不同的功能，但这些功能可以是相关的。野生型多肽的类似物和旁系同源物可以因转译后修饰、氨基酸序列差异或两者而不同于野生型多肽。具体地，同源物通常将展现出与所有或部分野生型多肽或多核苷酸序列至少80-85％、85-90％、90-95％、或95％、96％、97％、98％、99％的序列一致性并且将展现出类似的功能。变体包含等位基因变体。术语“等位基因变体”是指含有导致蛋白质的氨基酸序列发生变化并且存在于天然群体(例如，病毒物种或种类)中的多态性的多核苷酸或多肽。这种天然等位基因变异通常会导致多核苷酸或多肽有1-5％的变化。等位基因变体可以通过对许多不同物种中的感兴趣核酸序列进行测序来鉴别，这可以通过使用杂交探针鉴别那些物种中的相同遗传基因座来容易地进行。任何和所有此类核酸变异和是天然等位基因变异的结果并且不更改感兴趣基因的功能活性的所得氨基酸多态性或变异都旨在处于本公开的范围内。
如本文所使用的，术语“衍生物”或“变体”是指多肽或对多肽进行编码的核酸，所述多肽或所述核酸具有一或多个保守性氨基酸变异或其它微小修饰，使得(1)对应的多肽具有与野生型多肽相比基本上等同的功能或(2)抗体针对与野生型多肽免疫反应的多肽产生。这些变体或衍生物包含多肽一级氨基酸序列有微小修饰的多肽，所述多肽可以产生与未修饰的对应多肽相比具有基本上等同的活性的肽。这种修饰可以是有意的(如通过定点诱变突变)或者可以是自发的。术语“变体”进一步考虑了序列的缺失、添加和取代，只要多肽起作用即可。术语“变体”还包含多肽的修饰，其中天然信号肽被异源信号肽置换，以促进多肽从宿主物种表达或分泌。
多肽可以包含用于引入糖基化位点或用于修饰或衍生多肽的其它位点的氨基酸序列。上述多肽可以包含可以充当糖基化位点的氨基酸序列n-x-s或n-x-t。在糖基化期间，寡糖链附接到三肽序列n-x-s或n-x-t中出现的天冬酰胺(n)，其中x可以是除pro之外的任何氨基酸。此序列被称为糖基化序列。此糖基化位点可以置于多肽的n端、c端或内部序列内。
宿主细胞
可以使用各种真核细胞作为宿主细胞。宿主细胞可以是真菌细胞、动物细胞、植物细胞或藻类细胞。在一些实施例中，真核细胞是真菌细胞，包含但不限于曲霉属、木霉属、酵母属、金孢子菌属、克鲁维酵母属(klyuveromyces)、假丝酵母属(candida)、毕赤酵母属、德巴利氏酵母属(debaromyces)、汉逊酵母属(hansenula)、亚罗酵母属(yarrowia)、接合酵母属(zygosaccharomyces)、裂殖酵母属(schizosaccharomyces)、青霉属(penicillium)或根霉属(rhizopus)真菌。真菌细胞可以是酿酒酵母、巴斯德毕赤酵母、黑曲霉、米曲霉、卢克诺文思金孢子菌或里氏木霉。
宿主细胞可以是动物细胞。宿主细胞可以是来自有商业价值的家畜的细胞。动物细胞可以是哺乳动物细胞，如牛类、犬类、猫类、仓鼠、小鼠、猪类、兔、大鼠或绵羊的细胞。哺乳动物细胞可以是灵长类动物的细胞，包含但不限于猴子、黑猩猩、大猩猩和人类。哺乳动物细胞是小鼠细胞，因为小鼠通常用作其它哺乳动物的模型，尤其是用作人类的模型(参见例如，j.汉纳(hanna,j.)等人,“用自体皮肤产生的ips细胞治疗镰状细胞性贫血小鼠模型(treatmentofsicklecellanemiamousemodelwithipscellsgeneratedfromautologousskin)”,科学(science)318:1920-23,2007；d.m.霍尔茨曼(holtzman,d.m.)等人,“人载脂蛋白e的表达减少了阿尔茨海默病小鼠模型中的淀粉样蛋白-β沉积(expressionofhumanapolipoproteinereducesamyloid-βdepositioninamousemodelofalzheimer'sdisease)”,临床研究杂志(jclininvest.)103(6):r15-r21,1999；r.s.沃伦(warren,r.s.)等人,“血管内皮生长因子对小鼠实验性肝转移模型中人结肠癌发生的调节(regulationbyvascularendothelialgrowthfactorofhumancoloncancertumorigenesisinamousemodelofexperimentallivermetastasis)”,临床研究杂志95:1789-1797,1995；各出版物通过引用的方式并入本文)。动物细胞包含例如成纤维细胞、上皮细胞(例如，肾细胞、乳腺细胞、前列腺细胞、肺细胞)、角质细胞、肝细胞、脂肪细胞、内皮细胞、造血细胞。动物细胞可以是成体细胞(例如，终末分化的、分裂的或不分裂的)或干细胞。哺乳动物细胞系可以用作宿主细胞。所述细胞系可以衍生自中国仓鼠细胞、人肾细胞、猴肾细胞、人宫颈癌细胞或小鼠骨髓瘤细胞。这些和其它哺乳动物细胞系在本领域中是公知的，例如，可从赛默飞世尔科技公司、atcc(美国模式培养物保藏所(americantypeculturecollection))和查尔斯河实验室国际有限公司(charlesriverlaboratoriesinternational,inc.)公开获得的哺乳动物细胞系。在赛默飞世尔科技公司、atcc和查尔斯河实验室的网站上公开的细胞系出于所有目的通过全文引用的方式并入。
真核细胞可以是植物细胞。植物细胞可以是单子叶植物或双子叶植物的细胞，包含但不限于：苜蓿、杏仁、芦笋、鳄梨、香蕉、大麦、豆、黑莓、芸苔、西兰花、卷心菜、芥花、胡萝卜、花菜、芹菜、樱桃、菊苣、柑橘、咖啡、棉花、黄瓜、桉树、大麻、生菜、小扁豆、玉米、芒果、甜瓜、燕麦、木瓜、豌豆、花生、菠萝、李子、马铃薯(包含甘薯)、南瓜(pumpkin)、小红萝卜、油菜籽、覆盆子、大米、黑麦、高粱、大豆、菠菜、草莓、甜菜、甘蔗、向日葵、烟草、番茄、芜菁、小麦、西葫芦和其它结果蔬菜(例如，番茄、胡椒、红辣椒、茄子、黄瓜、南瓜(squash)等)、其它鳞茎类蔬菜(例如，大蒜、洋葱、韭菜等)、其它仁果(如苹果、梨等)、其它核果(例如，桃子、油桃、杏、梨、李子等)、拟南芥、木本植物(如针叶树和落叶树)、观赏植物、多年生草、饲料作物、花、其它蔬菜、其它果实、其它农作物、草本植物、草或多年生植物部分(如鳞茎；块茎；根；冠；干；匍匐茎；分蘖；嫩枝；包含未生根插条、生根插条和愈伤组织插条或愈伤组织生成的小植株的插条；顶端分生组织等)。术语“植物”是指植物的所有物理部分，包含种子、幼苗、幼树、根、块茎、干、秆、叶子和果实。
真核细胞可以是藻类，包含但不限于小球藻属(chlorella)、衣藻属(chlamydomonas)、栅藻属(scenedesmus)、等鞭金藻属(isochrysis)、杜氏藻属(dunaliella)、扁藻属(tetraselmis)、微拟球藻属(nannochloropsis)或原藻属(prototheca)藻类。
核酸
核酸可以至少部分地对本文所述的单独的肽、多肽和蛋白质进行编码。核酸可以是天然的、合成的或其组合。核酸可以是rna、mrna、dna、cdna或合成核酸。
核酸还可以包含表达载体，如质粒或病毒载体或线性载体或整合到染色体dna中的载体。表达载体可以含有使载体能够在一或多个选定的宿主细胞中复制的核酸序列。此序列对于各种细胞是公知的。来自质粒pbr322的复制起点适于大多数革兰氏阴性细菌。在真核宿主细胞(例如，哺乳动物细胞)中，表达载体可以整合到宿主细胞染色体中并且然后与宿主染色体一起复制。类似地，载体可以整合到原核细胞的染色体中。载体可以与酵母yrp、yep和ycp中的自主复制质粒相关。这三种都是通常携带用于插入表达盒的多克隆位点(mcs)的酿酒酵母/大肠杆菌穿梭载体。可以使用酵母表位标记性载体pesc。pesc载体可从安捷伦科技公司(agilenttechnologies)商够获得。
表达载体一般还包含选择基因，也称为可选择标志。原核细胞和真核细胞(包含宿主细胞)的可选择标志在本领域中是公知的。一般而言，选择基因对在选择性培养基中生长的经过转化的宿主细胞的存活或生长所必需的蛋白质进行编码。未用含有选择基因的载体转化的宿主细胞不会在培养基中存活。典型的选择基因对以下蛋白质进行编码：所述蛋白质(a)赋予对抗生素或其它毒素(例如，氨苄青霉素、新霉素、甲氨蝶呤或四环素)的抗性；(b)补充营养缺陷型不足；或(c)供应无法从复合培养基获得的关键营养素，例如对杆菌(bacilli)的d-丙氨酸消旋酶进行编码的基因。示范性选择方案可以利用药物来阻止宿主细胞的生长。用异源基因成功地转化的那些细胞产生了赋予抗药性的蛋白质并因此使选择方案得以存活。用于细菌或真核(包含哺乳动物)系统的其它可选择标志在本领域中是公知的。酵母选择基因的实例包含ura3、trp1、leu2、his3、lys2、ade2、met15、hphnt1和natnt2。达席尔瓦(dasilva)等人,fems酵母研究(femsyeastresearch)12:197-214(2012)，所述文献出于所有目的通过全文引用的方式并入。这些酵母选择基因可以与适合的营养缺陷型酵母菌株一起使用。
还考虑在本文中使用诱导型启动子。诱导型启动子的实例包含但不限于gali、gal7和gal10(半乳糖诱导型)cup1(铜离子诱导型)、adh2(葡萄糖抑制)的酵母启动子；以及哺乳动物启动子，如金属硫蛋白启动子、糖皮质激素启动子、孕酮启动子、c-fos启动子、赛默飞世尔科技公司的将人巨细胞病毒即时早期启动子的表达置于一或多个四环素操纵子的控制下的t-rex系统和intrexon的rheoswitch启动子。d.卡斯诺斯科(karzenowski,d.)等人,生物技术(biotechiques)39:191-196(2005)；x.戴(dai,x.)等人,蛋白质表达和纯化(proteinexpr.purif)42:236-245(2005)；s.r.帕里(palli,s.r.)等人,欧洲生物化学杂志(eur.j.biochem.)270:1308-1515(2003)；t.s.达狄阿拉(dhadialla,t.s.)等人,昆虫学年评(annualrev.entomol.)43:545-569(1998)；m.b.库玛(kumar,m.b)等人,生物化学杂志(j.biol.chem.)279:27211-27218(2004)；verhaegent,m.等人,分析化学(annal.chem.)74:4378-4385(2002)；a.k.卡塔拉姆(katalam,a.k.)等人,分子疗法(moleculartherapy)13:s103(2006)；以及d.卡斯诺斯科等人,分子疗法13:s194(2006)；达席尔瓦等人,fems酵母研究12:197-214(2012)；美国专利第8,895,306号、第8,822,754号、第8,748,125号、第8,536,354号，所有所述文献出于所有目的通过全文引用的方式并入。
表达载体通常具有启动子元件，例如增强子，以调节转录起始的频率。通常，这些启动子元件位于起始位点上游30-110bp的区域中，尽管已显示许多启动子也包含起始位点下游的功能元件。启动子元件之间的间隔往往是灵活的，使得当元件相对于彼此反转或移动时保留启动子功能。在胸苷激酶(tk)启动子中，启动子元件之间的间隔可以在活性开始下降之前增加到50bp。取决于启动子，似乎单独元件可以协同地或独立地起作用以激活转录。
核酸可以可操作地连接到另一个核酸，以便在适合的启动子的控制下进行表达。为了实现核酸的高效转录，核酸还可以可操作地连接到与启动子或转录起始位点协作的其它调节元件，例如，包括增强子序列、polya位点或终止子序列的核酸。除了核酸之外，还可以掺入可以是用于确认核酸的表达的标志的基因(例如，抗药基因、对报告酶进行编码的基因或对荧光蛋白进行编码的基因)。
可以期望修饰本文所述的多肽。技术人员将认识到在给定核酸构建体中产生更改以生成变体多肽的许多种方式。这些公知方法包含定点诱变、使用简并寡核苷酸的pcr扩增、将含有核酸的细胞暴露于诱变剂或辐射、化学合成期望的寡核苷酸(例如，结合连接和/或克隆以生成大的核酸)以及其它公知技术(参见例如，吉勒姆(gillam)和史密斯,基因(gene)8:81-97,1979；罗伯茨(roberts)等人,自然(nature)328:731-734,1987，所述文献出于所有目的通过全文引用的方式并入。可以修饰对多肽进行编码的重组核酸以提供增强所选生物体中核酸的转译的优选密码子。
多核苷酸还包含包括与本发明的多核苷酸基本上等同的核苷酸序列的多核苷酸。多核苷酸可以与本文描述的嗅觉受体或其它蛋白质的多核苷酸具有至少约80％、更典型地至少约90％并且甚至更典型地至少约95％序列一致性。多核苷酸还包含多核苷酸的补体，所述补体包含与对本文所述多肽进行编码的多核苷酸具有至少约80％、更典型地至少约90％并且甚至更典型地至少约95％序列一致性的核苷酸序列。多核苷酸可以是dna(基因组的、cdna、经过扩增的或合成的)或rna。用于获得此类多核苷酸的方法和算法是本领域的技术人员公知的并且可以包含例如用于确定杂交条件的方法，所述杂交条件通常可以分离具有期望的序列一致性的多核苷酸。
对蛋白质类似物或变体(即，其中一或多个氨基酸被设计成与野生型多肽不同)进行编码的核酸可以使用定点诱变或pcr扩增产生，其中一或多个引物具有期望的点突变。关于适合的诱变技术的详细描述，参见萨姆布鲁克(sambrook)等人,分子克隆：实验室手册(molecularcloning:alaboratorymanual),冷泉港实验室出版社(coldspringharborlaboratorypress),冷泉港(coldspringharbor),纽约(n.y.)(1989)和/或分子生物学实验指南,奥苏贝尔等人编,格林出版公司和约翰·威利父子出版公司,纽约(1994)，所有文献中的每个文献出于所有目的通过全文引用的方式并入。使用本领域公知的方法进行的化学合成，如恩格斯(engels)等人,应用化学国际版(angewchemintled.)28:716-34,1989(所述文献出于所有目的通过全文引用的方式并入)中描述的方法也可以用于制备此类核酸。
用于产生变体的氨基酸“取代”可以优选地是将一种氨基酸用具有类似的结构和/或化学性质的另一种氨基酸置换(即保守性氨基酸置换)的结果。氨基酸取代可以在涉及的残基在极性、电荷、溶解度、疏水性、亲水性和/或两亲性性质上具有相似性的基础上进行。例如，非极性(疏水性)氨基酸包含丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和蛋氨酸；极性中性氨基酸包含甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺；带正电荷的(碱性)氨基酸包含精氨酸、赖氨酸和组氨酸；并且带负电荷的(酸性)氨基酸包含天冬氨酸和谷氨酸。
“插入”或“缺失”通常在约1到5个氨基酸的范围内。允许的变异可以通过使用重组dna技术系统地在多肽分子中进行氨基酸的插入、缺失或取代并测定所得重组变体的活性来实验性地确定。
可替代地，可以通过利用遗传密码中的“冗余”来合成或选择对这些相同或类似的多肽进行编码的重组变体。可以引入各种密码子取代(如产生各种限制性位点的沉默变化)以优化到质粒或病毒载体的克隆或在特定的原核或真核系统中的表达。多核苷酸序列中的突变可以反映在多肽或添加到多肽的其它肽的结构域中，以修饰多肽的任何部分的性质、改变如配体结合亲和力或降解/转换率等特性。
可替代地，在期望更改功能的情况下，可以将插入、缺失或非保守性更改工程化以产生经过更改的多肽或嵌合多肽。这种更改可以例如更改多肽的生物学功能或生物化学特性中的一或多种。例如，这种更改可以改变如配体结合亲和力或降解/转换率等多肽特性。此外，可以选择这种更改以生成更适于在被选择用于表达的宿主细胞中表达、按比例放大等的多肽。
可以通过定点诱变来改变对本文所述多肽进行编码的多核苷酸。此方法使用了对期望的氨基酸变体的多核苷酸序列进行编码的寡核苷酸序列以及在经过改变的氨基酸两侧的足以在正在被改变的位点的任一侧形成稳定的双链体的相邻核苷酸。一般而言，定点诱变技术是本领域的技术人员所公知的，并且此技术通过如埃德尔曼(edelman)等人,dna2:183(1983)等出版物进行了例证。佐勒(zoller)和史密斯,核酸研究10:6487-6500(1982)中描述了用于在多核苷酸序列中产生位点特异性变化的通用且高效的方法。
pcr也可以用于产生核酸的氨基酸序列变体。当使用少量模板dna作为起始材料时，与模板dna中的对应区域在序列上略有不同的一或多个引物可以产生期望的氨基酸变体。pcr扩增产生不同于在由引物指定的位置处对靶标进行编码的多核苷酸模板的产物dna片段群体。产物dna片段置换质粒中的对应区域，并且这给出了期望的氨基酸变体。
用于产生氨基酸变体的另外的技术是威尔斯(wells)等人,基因34:315(1985)中描述的盒式诱变技术以及本领域公知的其它诱变技术，如例如萨姆布鲁克等人(同上)和奥苏贝尔等人(同上)中的技术。
用于利用生物传感器制备宿主细胞的方法
如上所述，对嗅觉受体(包含异位嗅觉受体)进行遗传工程化以在所需宿主细胞中表达。嗅觉受体可以来自某个物种或者可以是融合或杂合构建体。嗅觉受体或融合体/杂合体的n端和c端序列将嗅觉受体或融合体/杂合体定位于宿主细胞膜并且在适当的时候定位于宿主细胞的外膜。将这些嗅觉受体或融合/杂合基因构建体置于宿主细胞的适合的表达载体中，并且然后将这些表达构建体或表达载体置于宿主细胞内部。
可以对宿主细胞进行遗传工程化以表达人类g蛋白亚基。还可以对宿主细胞进行遗传工程化以表达人类g蛋白亚基gα、gβ和gγ。可以将对人类gα、gβ和gγ亚基进行编码的基因置于所需宿主细胞的适合的控制序列(启动子、增强子、转译起始序列、polya位点等)的控制下，并且将人类gα、gβ和gγ亚基的这些构建体置于所需宿主细胞中。还可以将人类g蛋白与腺苷酸环化酶缔合。可以将适合的腺苷酸环化酶的基因置于所需宿主细胞的适合的控制序列的控制下，并且将此构建体置于所需宿主细胞中。
在本文所述的方法中，可以使用如上所述的真核宿主细胞。可以使用真菌细胞。真菌细胞可以来自曲霉属、木霉属、酵母属、金孢子菌属、克鲁维酵母属、假丝酵母属、毕赤酵母属、德巴利氏酵母属、汉逊酵母属、亚罗酵母属、接合酵母属、裂殖酵母属、青霉属或根霉属。真菌细胞可以是酿酒酵母。可以使用源自哺乳动物的真核细胞(例如，人细胞)或源自非人哺乳动物(例如，猴子、小鼠、大鼠、猪、马或狗)的细胞。并未特别限制本文所述的方法中使用的细胞，并且可以使用任何细胞。
可以通过以下将对生物传感器进行编码的核酸引入宿主细胞：转染(例如，戈尔曼(gorman)等人,国家科学院院刊(proc.natl.acad.sci.)79.22(1982):6777-6781，所述文献出于所有目的通过全文引用的方式并入)；转导(例如，塞普考(cepko)和皮尔(pear)(2001)最新分子生物学实验指南第9.9单元；doi:10.1002/0471142727.mb0909s36，所述文献出于所有目的通过全文引用的方式并入)；磷酸钙转化(例如，金斯顿(kingston),陈(chen)和冈山(okayama)(2001)最新分子生物学实验指南附录1c；doi:10.1002/0471142301.nsa01cs01，所述文献出于所有目的通过全文引用的方式并入)；细胞穿透性肽(例如，科波罗维西(copolovici),朗格尔(langel),艾瑞斯特(eriste)和朗格尔(2014)acsnano20148(3),1972-1994；doi:10.1021/nn4057269，所述文献出于所有目的通过全文引用的方式并入)；电穿孔(例如，波特(potter)(2001)最新分子生物学实验指南第10.15单元；doi:10.1002/0471142735.im1015s03以及金姆(kim)等人(2014)基因组(genome)1012-19.doi:10.1101/gr.171322.113，金姆等人2014描述了经过优化的电穿孔系统爱玫姿核转染体(amazanucleofecto)，所述两个参考文献出于所有目的通过全文引用的方式并入)；显微注射(例如，麦克尼尔(mcneil)(2001)最新细胞生物学实验指南(currentprotocolsincellbiology)第20.1单元；doi:10.1002/0471143030.cb2001s18，所述文献出于所有目的通过全文引用的方式并入)；脂质体或细胞融合(例如，霍利-尼尔森(hawley-nelson)和奇卡罗内(ciccarone)(2001)最新神经科学实验指南(currentprotocolsinneuroscience)附录1f；doi:10.1002/0471142301.nsa01fs10，所述文献出于所有目的通过全文引用的方式并入)；机械操作(例如，莎伦(sharon)等人(2013)pnas2013110(6)；doi:10.1073/pnas.1218705110，所述文献出于所有目的通过全文引用的方式并入)；或用于将核酸递送到真核细胞的其它公知技术。一旦引入，核酸就可以以附加体的方式瞬时表达或者可以使用如以下等公知技术整合到真核细胞的基因组中：重组(例如，利斯比(lisby)和罗思坦(rothstein)(2015)冷泉港生物学观点(coldspringharbperspectbiol.)3月2日；7(3).pii:a016535.doi:10.1101/cshperspect.a016535，所述文献出于所有目的通过全文引用的方式并入)；或非同源整合(例如，戴利(deyle)和罗塞尔(russell)(2009)分子治疗学新见(curropinmolther.)2009年8月；11(4):442-7，所述文献出于所有目的通过全文引用的方式并入)。通过引入靶向双链断裂(dsb)的基因组编辑技术，可以促进同源和非同源重组的效率。产生dsb的技术的实例是crispr/cas9、talen、锌指核酸酶或等效系统(例如，cong等人,科学339.6121(2013):819-823；李(li)等人,核酸研究(2011):gkr188；嘉仕(gaj)等人,生物技术趋势(trendsinbiotechnology)31.7(2013):397-405，所有所述文献出于所有目的通过全文引用的方式并入)；转座子，如睡美人(sleepingbeauty)(例如，辛格(singh)等人(2014)免疫学综述(immunolrev.)2014年1月；257(1):181-90.doi:10.1111/imr.12137，所述文献出于所有目的通过全文引用的方式并入)；使用例如flp重组酶的靶向重组(例如，奥戈尔曼(o'gorman),福克斯(fox)和瓦尔(wahl)科学(1991)15:251(4999):1351-1355，所述文献出于所有目的通过全文引用的方式并入)；cre-lox(例如，萨奥尔(sauer)和亨德森(henderson),pnas(1988):85；5166-5170)；或等效系统；或本领域已知的用于将核酸整合到真核细胞基因组中的其它技术。
可以将对gα、gβ、gγ、腺苷酸环化酶和嗅觉受体进行编码的一或多个核酸在基因组安全港位点(如例如，ccr5、aavs1、人rosa26、或人类细胞的psip1基因座)处整合到真核宿主细胞染色体中。(赛德莱恩(sadelain)等人,自然综述(naturerev.)12:51-58(2012)；法德勒(fadel)等人,病毒学杂志(j.virol.)88(17):9704-9717(2014)；叶(ye)等人,pnas111(26):9591-9596(2014)，所有所述文献出于所有目的通过全文引用的方式并入。)酵母细胞(例如，酿酒酵母)的安全港位点包含例如酵母tyδ序列。宿主细胞可以是人类细胞，并且使用基因编辑系统(如例如，crispr、talen或锌指核酸酶系统)完成对gα、gβ、gγ、腺苷酸环化酶和嗅觉受体进行编码的所述一或多个核酸在ccr5和/或psip1基因座处的整合。真核细胞可以是酿酒酵母细胞，并且crispr系统被用来在tyδ基因座处整合gα、gβ、gγ、腺苷酸环化酶和嗅觉受体。使用crispr系统在安全港基因座处整合核酸还可以使安全港基因座的一部分或全部缺失。真核细胞中的cas9可以源自对cas9进行编码的质粒、对cas9进行编码的外源mrna或者单独的或在核糖核蛋白复合物中的重组cas9多肽。(金姆等人(2014)基因组1012-19.doi:10.1101/gr.171322.113.；王(wang)等人(2013)细胞(cell)153(4).爱思唯尔公司(elsevierinc.):910-18.doi:10.1016/j.cell.2013.04.025，所述文献均出于所有目的通过全文引用的方式并入。)
用于将多核苷酸引入宿主细胞中的化学手段包含胶体分散系统，如大分子复合物、纳米胶囊、微球、珠以及包含水包油乳剂、胶束、混合胶束和脂质体的基于脂质的系统。用作体外和体内递送媒剂的示范性胶体系统是脂质体(例如，人工膜囊)。以现有技术靶向递送核酸的其它方法是可用的，如用靶向纳米颗粒或其它适合的亚微米大小的递送系统递送多核苷酸。
异位嗅觉受体的配体
异位嗅觉受体的配体可以是任何已知的或新的化合物，并且实例包含核酸、碳水化合物、脂质、蛋白质、肽、低分子量有机化合物(小分子)、使用组合化学技术制备的化合物文库、通过固相合成或噬菌体展示法制备的随机肽文库、或源自微生物、动物和植物以及海洋生物的天然产物。异位嗅觉受体的配体包含例如抗体(包含全长抗体、抗体片段、单链抗体等)、大多肽和小多肽以及小分子。
在用上述异位嗅觉受体中的一个异位嗅觉受体使适合的动物免疫后，可以获得抗体。用于利用如异位嗅觉受体等膜蛋白使动物免疫的方法包含例如以下中描述的那些方法：萨托富加(satofuka)等人,生物化学与生物物理学研究通讯(biochem.biophys.res.comm.),450:99-104(2014)；汉森(hansen)等人,科学报告6(scientificreports6):文章编号21925(2016),doi:10.1038/srep21925；塔穆拉(tamura)等人,生物医学与生物技术杂志(j.biomed.biotechnol.)第2009卷,文章编号673098,dx.doi.org/10.1155/2009/673098；巴尼克(banik)等人,药物发现和开发(drugdiscoverydevelopment)12:14-17(2009)，所述文献出于所有目的通过全文引用的方式并入。对异位嗅觉受体具有特异性的抗体可以从经过免疫的动物中获得，例如，通过筛选由经过免疫的动物的免疫细胞制成的杂交瘤。这种杂交瘤可以包含由针对人(或其它)免疫球蛋白基因座转基因的小鼠制成的那些杂交瘤(例如，亚科巴维茨(jakobavits),1998,先进药物递送评论(advdrugdelivrev.)31:33-42，所述文献通过全文引用的方式并入本文)。异位嗅觉受体的抗体也可以通过使用异位嗅觉受体和体外方法来获得，所述方法利用了在丝状噬菌体(例如，麦卡弗蒂(mccafferty)等人,1990,自然348:552-554，所述文献通过全文引用的方式并入本文)上展示并在其中编码的抗体片段的重组文库，酵母细胞(例如，博德(boder)和威特瑞普(wittrup),1997,自然生物技术(natbiotechnol)15:553-557，所述文献通过全文引用的方式并入本文)和核糖体(例如，哈内斯(hanes)和普拉克图恩(pluckthun),1997,美国国家科学院院刊94:4937-4942，所述文献通过全文引用的方式并入本文)针对固定化抗原进行淘选。一旦分离出来，抗体就可以被工程化以用于特定的生物体中。生物体可以是人、犬类或有商业价值的牲畜，如例如，猪、马、狗、猫、鸡或其它鸟类。抗体的此类工程化包含例如使用本领域已知的库技术或单克隆技术中的任一种对人(或其它生物体)抗体进行人源化、人工程化、嵌合化或分离。
目前有许多方法用于基于糖、肽和核酸的化合物的随机和定向合成。合成化合物文库可从美布里奇化学公司(maybridgechemicalco.)(英国康沃尔郡特雷维尔特(trevillet,cornwall,uk))、卡姆格耐克斯公司(comgenex)(新泽西州普林斯顿(princeton,n.j.))、布兰顿联合公司(brandonassociates)(新罕布什尔州梅里马克(merrimack,n.h.))和微源公司(microsource)(康涅狄格州新米尔福德(newmilford,conn.))商购获得。可从奥德里奇公司(aldrich)(威斯康辛州密尔沃基(milwaukee,wis.))获得稀有化学品文库。可替代地，细菌、真菌、植物和动物提取物形式的天然化合物文库可从例如潘实验室(panlaboratories)(华盛顿州博瑟尔(bothell,wash.))或麦考萨奇公司(mycosearch)(北卡罗来纳州(n.c.))获得或可易于生产。另外，天然的和合成地产生的文库和化合物易于通过常规的化学、物理和生物化学手段进行修饰(勃朗德尔(blondelle)等人,(1996)tibtech14:60，所述文献出于所有目的通过全文引用的方式并入)。
用于制备分子文库的方法是公知的，并且许多文库是可商购获得的。此类文库包含肽文库、随机化寡核苷酸文库、合成有机组合文库等。简并肽文库可以容易地在溶液中制备成固定化形式作为细菌鞭毛肽展示文库或作为噬菌体展示文库。肽配体可以选自含有至少一种氨基酸的肽的组合文库。文库可以是类肽和非肽合成部分合成的。可以进一步合成包含非肽合成部分的此类文库，所述非肽合成部分与其天然存在的对应物相比经受酶促降解更少。文库也意味着包含例如但不限于质粒上肽文库、多核糖体文库、适体文库、合成肽文库、合成小分子文库和化学品文库。文库还可以包括被上文鉴别的官能团中的一或多个取代的环碳或杂环结构和/或芳香族或多芳香族结构。
也可以生成小分子组合文库。小有机化合物的组合文库是紧密相关的类似物的集合，所述类似物在一或多个具有多样性的点上彼此不同并且是通过使用多步方法的有机技术合成的。组合文库包含大量的小有机化合物。一种类型的组合文库通过并行合成方法制备，以产生化合物阵列。化合物阵列可以是通过其在笛卡尔坐标中的空间地址可识别的化合物的集合并且被布置成使得每个化合物具有共同的分子核心和一或多个可变的结构多样性元素。这种化合物阵列中的化合物在单独的反应容器中并行地产生，其中每个化合物通过其空间地址进行鉴别和跟踪。于1994年1月5日提交的美国序列号08/177,497和其于1995年7月13日公开的对应的pct公开专利申请wo95/18972以及于1998年1月27日授予的美国专利第5,712,171号和其对应的pct公开专利申请wo96/22529中提供了并行合成混合物和并行合成方法的实例，所述文献出于所有目的通过全文引用的方式并入。
化学合成文库的实例在以下中进行了描述：福多尔(fodor)等人,(1991)科学251:767-773；霍登(houghten)等人,(1991)自然354:84-86；兰(lam)等人,(1991)自然354:82-84；梅登斯基(medynski),(1994)生物技术(biotechnology)12:709-710；盖洛普(gallop)等人,(1994)药物化学杂志(j.medicinalchemistry)37(9):1233-1251；奥尔迈尔(ohlmeyer)等人,(1993)美国国家科学院院刊90:10922-10926；厄尔布(erb)等人,(1994)美国国家科学院院刊91:11422-11426；霍登等人,(1992)生物技术(biotechniques)13:412；贾耶维克瑞姆(jayawickreme)等人,(1994)美国国家科学院院刊91:1614-1618；萨蒙(salmon)等人,(1993)美国国家科学院院刊90:11708-11712；pct公开号wo93/20242，日期为1993年10月14日；以及布雷内(brenner)等人,(1992)美国国家科学院院刊89:5381-5383，所述所有文献出于所有目的通过全文引用的方式并入。
可以将对生物传感器的组分(例如，异位嗅觉受体、g蛋白和腺苷酸环化酶和/或其它报告子)进行编码的核酸置于适合的宿主细胞(例如，酿酒酵母)中，并且可以使用具有生物传感器的宿主细胞来鉴别异位嗅觉受体的配体。可以使这些宿主细胞裂解，并且可以获得包含异位嗅觉受体、g蛋白和腺苷酸环化酶(和/或其它报告子)的膜部分。这些膜部分可以用作用于检测配体的生物传感器。例如，可以针对生物传感器对通过用异位嗅觉受体进行免疫获得的或通过针对异位嗅觉受体进行淘选获得的抗体进行测试，以寻找激动剂和拮抗剂。异位嗅觉受体的生物传感器也可以用于寻找多肽或小分子激动剂和拮抗剂。潜在的激动剂和拮抗剂可以通过针对异位嗅觉受体淘选肽或小分子文库来获得。淘选的实例包含将异位嗅觉受体粘附到底物并且然后将那些粘附的异位嗅觉受体暴露于抗体、多肽或小分子的文库以鉴别结合到异位嗅觉受体的文库成员。然后针对用异位嗅觉受体制成的生物传感器筛选结合到异位嗅觉受体的成员，以找到激动剂和拮抗剂。激动剂可以是完全激动剂、部分激动剂、反向激动剂(结合到受体并产生与激动剂相反的药理学响应)或中性激动剂(阻断激动剂或反向激动剂在受体处的作用)。配体也可以是变构调制剂，包含正变构调制剂或负变构调制剂。
配体与异位嗅觉受体的相互作用程度可以用生物传感器来表征和量化。可以针对在组织或细胞上发现的一些或全部异位嗅觉受体的生物传感器库对配体进行测试。配体与异位嗅觉受体库的相互作用可以形成一或多个配体的香气图。由异位嗅觉受体制成的生物传感器可以用于解构与组织或细胞的异位嗅觉受体相互作用的天然配体的香气图，以鉴别哪些异位嗅觉受体受到刺激以及刺激程度(香气图)。这种香气图可以用于制备模拟异位嗅觉受体的天然配体的香气图的混合物或配体(例如，人工配体)。这些香气图还可以用于通过使用天然配体的不同混合物(或配体的不同衍生物)并鉴别香气图的变化来解构对香气图有贡献的组分。例如，可以通过移除组分并鉴别对香气图的改变来解构组合物。
药物组合物
药物组合物可以包括异位嗅觉受体的配体以及一或多种药学或生理学上可接受的载剂、稀释剂或赋形剂。这种组合物可以包括缓冲液，如中性缓冲盐水、磷酸盐缓冲盐水等；碳水化合物，如葡萄糖、甘露糖、蔗糖或葡聚糖、甘露醇；蛋白质；多肽或如甘氨酸等氨基酸；抗氧化剂；如edta等螯合剂或谷胱甘肽；佐剂(例如，氢氧化铝)；以及防腐剂。
药物组合物可以以适于待治疗(或预防)的疾病或病状的方式施用。施用的数量和频率将由如患者的病状以及患者的疾病类型和严重程度等因素确定，但是适当的剂量可以通过临床试验确定。
适合的药学上可接受的赋形剂是本领域的技术人员公知的。药学上可接受的赋形剂的实例包含磷酸盐缓冲盐水(例如，0.01m磷酸盐、0.138mnacl、0.0027mkcl、ph7.4)、含有如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐或硫酸盐等无机酸盐的水溶液、盐水、乙二醇或乙醇的溶液以及如乙酸盐、丙酸盐、丙二酸盐或苯甲酸盐等有机酸盐。也可以使用如润湿剂或乳化剂等佐剂以及ph缓冲剂。可以适当地使用雷明顿药物科学(remington'spharmaceuticalsciences)(新泽西州麦克出版公司(mackpub.co.,n.j.)1991)(所述文献出于所有目的通过全文引用的方式并入本文)中描述的药学上可接受的赋形剂。配体组合物可以配制成适于肠胃外施用的已知形式，例如注射或输注(例如，任何配体都可以以此方式施用，包含抗体、其它多肽和小分子)。可替代地，配体可以被配制用于口服施用、鼻或其它粘膜组织施用或者作为栓剂施用(例如，用于小分子)。配体组合物可以包括如悬浮剂、防腐剂、稳定剂和/或分散剂等调配添加剂以及用于延长储存期间的有效期的防腐剂。
包括异位嗅觉受体的配体的药物组合物可以通过常规的混合、溶解、制粒、糖衣丸制备、磨细、乳化、包囊、包埋或冻干方法来制造。可以使用一或多种生理学上可接受的载剂、稀释剂、赋形剂或助剂以常规方式配制药物组合物，所述一或多种生理学上可接受的载剂、稀释剂、赋形剂或助剂有助于将配体或其结晶形式和一或多种药学上可接受的媒剂加工成药学上可以使用的调配物。适当的调配取决于所选择的施用途径。药物组合物可以采取溶液、悬浮液、乳液、片剂、丸剂、小丸剂、胶囊、含有液体的胶囊、粉剂、缓释调配物、栓剂、乳剂、气雾剂、喷雾剂、混悬剂的形式，或任何其它适于施用于患者的形式。
可以施用包括异位嗅觉受体配体作为活性成分的组合物以用于治疗例如伤口愈合、骨和软骨生长以修复骨、神经再生和修复、器官修复、角膜修复和血管生成。配体组合物可以用于治疗黑色素瘤、帕金森氏病、阿尔茨海默病、用于避孕或生育、用于刺激毛发生长等。
主题组合物的施用可以以任何方便的方式进行，包含雾化吸入、注射、摄入、灌输、植入或移植。本文所述的组合物可以通过动脉、皮下、皮内、瘤内、结内、髓内、肌内、鼻内、动脉内、淋巴输入管内、通过静脉内(i.v.)注射或腹膜内施用于患者。可替代地，可以将配体组合物掺入药物组合物中，以通过其它适合的施用途径施用，包含鼻内、硬膜外、口服、舌下、大脑内、阴道内、经皮、直肠、吸入或局部施用。
当指示“有效量”、“治疗有效量”或“肿瘤抑制有效量”时，待施用的配体组合物的精确量可以由医生在考虑了患者(受试者)的年龄、体重、肿瘤大小、感染或转移程度和状况的个体差异的情况下确定。包括本文所述配体的药物组合物可以施用的剂量为约10μg/kg到约50mg/kg、约100μg/kg到约50mg/kg、约1mg/kg到约50mg/kg以及在某些实施例中约5mg/kg到约25mg/kg，包含那些范围内的所有整数值。异位嗅觉受体的配体可以随时间推移施用的剂量为每天约1mg到约5g、每天约10mg到约4g或每天约20mg到约2g，包含这些范围内的所有整数值。配体组合物也可以按这些剂量施用多次。
异位嗅觉受体的用途
异位嗅觉受体可以用于各种治疗性、诊断性和非治疗性应用。例如，异位嗅觉受体可以被激动剂刺激以诱导皮肤生长从而用于伤口愈合、骨和软骨生长以修复骨、神经再生和修复、器官修复、角膜修复、血管生成等。异位嗅觉受体还可以用于抑制癌症中的血管生成、用于治疗黑色素瘤、帕金森氏病、阿尔茨海默病、用于避孕或生育、用于刺激毛发生长等。异位嗅觉受体可以用于刺激适当的胚胎生长、成熟、分化、发育和/或组织组构(例如，在产前或产后发育不良(如脊柱裂、唇/腭裂等)的情况下)。
异位嗅觉受体(例如，上述异位嗅觉受体)的配体可以用于结合动物(例如，包含人或小鼠在内的哺乳动物)中的异位嗅觉受体。当异位嗅觉受体结合配体(例如，抗体)时，这可以刺激受体并激活展示出异位嗅觉受体的细胞。细胞的这种激活可以诱导细胞增殖、分化、分泌因子、迁移等。可替代地，配体可以阻断异位嗅觉受体并阻止其它配体结合到异位嗅觉受体，或者配体可以变构地作用于异位嗅觉受体。
已经在角质细胞中发现了异位嗅觉受体or2at4，并且用激动剂刺激此异位嗅觉受体引起了细胞层的增殖、迁移和再生。如人造檀香(sandalore)、婆罗门檀香(brahmanol)、抗体和or2at4的其它激动剂等激动剂可以涂敷伤口，以刺激伤口愈合期间角质细胞的生长。例如，伤口敷料(例如，创口贴)可以具有水凝胶层，所述水凝胶层中分散有or2at4的激动剂以用于延长激动剂的释放以刺激伤口愈合。用于敷料的适合的水凝胶包含例如交联的甲基丙烯酸2-羟乙酯、如例如
异位嗅觉受体or51e2、or51e1、or2j3和vn1r1在神经组织和细胞中表达。异位嗅觉受体or51e2发现于各种神经组织中，包含例如黑质，其中or51e2在黑素原生成中起作用。or51e2的配体包含例如具有缀合到丁二烯系统的羰基的抗体或分子，所述二烯系统如类异戊二烯β-紫罗酮(紫罗兰香)、α-4,6-雄甾烯-17-醇-3-酮、6-脱氢睾酮和1,4,6-雄甾二烯-3,17-二酮。黑素原生成的刺激可以具有神经保护作用并且可用于治疗神经退行性疾病，如帕金森氏病和阿尔茨海默病。异位嗅觉受体vn1r1发现于各种神经组织中，包含例如边缘区(例如，扁桃体和海马体)。vn1r1的配体包含例如抗体和常见的花香味苯乙醇和希蒂莺(hedione)。刺激神经组织中的vn1r1受体可以诱导性激素的分泌，已知性激素具有抗帕金森氏病和其它神经退行性疾病的神经保护性质。
生物传感器可以用来检测和诊断疾病。许多疾病与可以用来诊断疾病的气味或臭味有关。例如，某些肺、肝、肾和消化系统疾病可以从患者的呼吸中检测到，糖尿病、精神分裂症、帕金森氏病和某些传染性疾病(肺结核和伤寒)可以通过患者的气味检测到，并且某些癌症可以通过犬类的嗅觉库检测到。可以将与患者的皮肤、汗液、毛发、唾液和其它身体分泌物(例如，耳垢)相关联的气味、香味和/或臭味与疾病诊断相关联。具有异位嗅觉受体的生物传感器可以用于产生患有可以通过气味、香味和/或臭味检测到的疾病的患者的香气图。这些香气图可以基于人类嗅觉受体库或异位嗅觉受体库。香气图基于犬类嗅觉受体库。香气图可以基于小鼠或大鼠嗅觉受体库。香气图可以基于哺乳动物嗅觉受体库。然后，通过采集气味、呼吸或其它样品并对所述样品进行筛选以查看是否检测到某种疾病的香气图，可以对患者进行疾病诊断。
生物传感器还可以用于鉴别与疾病相关联的异位嗅觉受体的集合。可以制备疾病特异性异位嗅觉受体的配体组，并且所述配体组可以用于通过观察患者在与疾病相关联的一或多个异位嗅觉受体处的响应的变化来监测疾病。例如，嗅觉差是阿尔茨海默病的早期预警迹象之一。嗅觉的退化与大脑感知某些嗅觉受体的能力的丧失和嗅觉受体记忆的丧失相关联(嗅觉与某些嗅觉受体的刺激的关联)。嗅觉受体响应和嗅觉受体记忆的丧失可以用作阿尔茨海默病的早期预警迹象并且也可以用于监测针对抗阿尔茨海默病治疗的响应，因为嗅觉丧失在某些情况下是可逆的。可以针对疾病相关嗅觉受体处的嗅觉丧失以及针对嗅觉受体记忆对有阿尔茨海默病风险的患者进行测试。可以针对疾病相关嗅觉受体处的嗅觉丧失以及针对嗅觉受体记忆对达到一定年龄的患者进行筛查。有气味物组可以用于监测患者在疾病相关嗅觉受体或异位嗅觉受体处的嗅觉。有气味物组在与疾病相关嗅觉受体处可以具有从强相互作用到弱相互作用的不同相互作用。生物传感器可以用于鉴别疾病相关嗅觉受体并鉴别可以用于诊断早期阿尔茨海默病的配体。
生物传感器还可以用于药物发现。生物传感器可以用于设计药物和/或药物组合物的味道、臭味、气味、香味和/或香气。生物传感器可以用于鉴别和掩盖与药物和/或药物组合物相关联的味道、臭味、气味、香味和/或香气。被掩盖的味道、臭味、气味、香味和/或香气可以在某些受试者中产生负面响应。被掩盖的味道、臭味、气味、香味和/或香气可以在某些受试者中产生正面响应或成瘾响应(成瘾抑制)。生物传感器可以用于设计防滥用调配物。不利物调配物(adversantformulation)可以用于阿片类药物，包含例如氢可酮(维柯丁(vicodin))、氧可酮(奥施康定(oxycontin)、泊可酮(percocet)、洛可酮(roxicodone)、奥可他(oxecta))、吗啡(卡地安(kadian)、阿维扎(avinza))、可待因、丁丙诺啡(布普耐克思(buprenex)、布特思(butrans))、布托啡诺(施他多尔(stadol))、氢吗啡酮(地拉地(dilaudid)、氢化达(hydrostat)、艾司他戈(exalgo))、左啡诺(左吗喃(levo-dromoran))、哌替啶(杜冷丁(demerol))、美沙酮(多洛啡(dolophine)、美沙多思(methadose))、纳布啡(努巴因(nubain))、氧吗啡酮(努吗凡(numorphan))、喷他佐辛(塔尔温(talwin))、丙氧吩(可他纳-65(cotanal-65)、达尔丰(darvon))、芬太尼(萨麦姿(sublimaze)、艾克替可(actiq)、多瑞吉(durogesic)、芬托拉(fentora)、马替芬(matrifen)、哈迪德(hadid)、恩索利斯(onsolis)、安西坦(instanyl)、阿巴思特拉(abstral)、拉赞达(lazanda))、曲马多(奥特拉姆(ultram))和他喷他多(努克恩他(nucynta))。调配物中可以包含产生使受试者产生回避行为或其它强烈负面反应的味道、臭味、气味、香味和/或香气的不利物。不利物可以包含两种或两种以上组分，所述两种或两种以上组分当一起被感知到时产生负面反应，但是当单独被感知到时不会引起负面反应。所述两种或两种以上组分可以在防滥用调配物中工程化以便在不同的时间释放，但是当调配物被压碎或提取以滥用药物时，这释放了所述两种组分从而形成不利物。当所述两种组分组合时形成的不利物可以在室温下变成气体或者在组分混合并且药物调配物被加热后变成气体。
本说明书中引用的所有出版物和专利通过引用的方式并入本文，就好像每个单独的出版物或专利都被具体地且单独地指示为通过引用的方式并入并且通过引用的方式并入本文以公开和描述引用出版物所结合的方法和/或材料。
实例
实例1：以酵母细胞制备生物传感器
将人or6a2受体的n端55个氨基酸融合到人or1a1受体的n端区域，而不是or1a1的n端55个氨基酸，以给出具有以下序列的生物传感器嗅觉受体：
将对此嗅觉受体进行编码的核酸工程化到酵母细胞中，所述酵母细胞先前已被工程化以表达人类g蛋白亚基gα、gβ和gγ以及腺苷酸环化酶。将酵母用构建体工程化，所述构建体将人类gα、gβ和gγ亚基：
mgclggnskttedqgvdekerreankkiekqlqkerlaykathrllllgagesgkstivkqmrilhvngfnpeekkqkildirknvkdaivtivsamstiippvplanpenqfrsdyiksiapitdfeysqeffdhvkklwddegvkacfersneyqlidcaqyfleridsvslvdytptdqdllrcrvltsgifetrfqvdkvnfhmfdvggqrderrkwiqcfndvtaiiyvaacssynmvirednntnrlresldlfesiwnnrwlrtisiilflnkqdmlaekvlagkskiedyfpeyanytvpedatpdagedpkvtrakffirdlflristatgdgkhycyphftcavdtenirrvfndcrdiiqrmhlkqyell(seqidno:12)
mseleqlrqeaeqlrnqirdarkacgdstltqitagldpvgriqmrtrrtlrghlakiyamhwgtdsrllvsasqdgkliiwdsyttnkvhaiplrsswvmtcayapsgnfvacggldnicsiyslktregnvrvsrelpghtgylsccrflddnqiitssgdttcalwdietgqqtvgfaghsgdvmslslapdgrtfvsgacdasiklwdvrdsmcrqtfighesdinavaffpngyafttgsddatcrlfdlradqellmyshdniicgitsvafsrsgrlllagyddfncniwdamkgdragvlaghdnrvsclgvtddgmavatgswdsflkiwn(seqidno:13)
msgsssvaamkkvvqqlrleaglnrvkvsqaaadlkqfclqnaqhdplltgvssstnpfrpqkvcsfl(seqidno:14)
置于酵母gali或gal10启动子的控制下。还将酵母菌株工程化，以在酵母gali或gal10启动子的控制下表达人腺苷酸环化酶(人腺苷酸环化酶5型，np_001186571.1)：
mprnqgfsepeysaeysaeysvslpsdpdrgvgrtheisvrnsgsclclprfmrltfvpeslenlyqtyfkrqrhetllvlvvfaalfdcyvvvmcavvfssdklaslavagiglvldiilfvlckkgllpdrvtrrvlpyvlwllitaqifsylglnfarahaasdtvgwqvffvfsffitlplslspiviisvvscvvhtlvlgvtvaqqqqeelkgmqllreilanvflylcaiavgimsyymadrkhrkaflearqslevkmnleeqsqqqenlmlsilpkhvademlkdmkkdesqkdqqqfntmymyrhenvsilfadivgftqlssacsaqelvkllnelfarfdklaakyhqlrikilgdcyycicglpdyredhavcsilmglamveaisyvrektktgvdmrvgvhtgtvlggvlgqkrwqydvwstdvtvankmeaggipgrvhisqstmdclkgefdvepgdggsrcdyleekgietyliiaskpevkktatqnglngsalpngapasskssspalietkepngsahssgstsekpeeqdaqadnpsfpnprrrlrlqdladrvvdasedehelnqllnealleresaqvvkkrntfllsmrfmdpemetrysvekekqsgaafscscvvllctalveilidpwlmtnyvtfmvgeilllilticslaaifprafpkklvafstwidrtrwarntwamlaifilvmanvvdmlsclqyytgpsnatagmetegsclenpkyynyvavlsliatimlvqvshmvkltlmllvagavatinlyawrpvfdeydhkrfrehdlpmvaleqmqgfnpglngtdrlplvpskysmtvmvflmmlsfyyfsrhveklartlflwkievhdqkervyemrrwnealvtnmlpehvarhflgskkrdeelysqtydeigvmfaslpnfadfyteesinnggieclrflneiisdfdslldnpkfrvitkiktigstymaasgvtpdvntngfassnkedksererwqhladladfalamkdtltninnqsfnnfmlrigmnkggvlagvigarkphydiwgntvnvasrmestgvmgniqvveetqvilreygfrfvrrgpifvkgkgelltfflkgrdklatfpngpsvtlphqvvdns(seqidno:15)
或人腺苷酸环化酶3(uniprotkb:o60266)：
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针对组分的表达盒杂合or的信号转导来测试具有表达杂合嗅觉受体人类gα、gβ和gγ亚基以及人腺苷酸环化酶的酵母细胞的生物传感器。
实例2：使用实时检测来定量嗅觉受体库处的配体结合
将如实例1所述的多个生物传感器用于来自or家族or7的人类嗅觉受体。还对具有or7家族嗅觉受体的酵母细胞进行遗传修饰以包含由camp所激活的对照区表达的重组gfp基因。因此，当生物传感器被有气味物质激活时，生物传感器将产生gfp，并且活性可以通过荧光来监测。
or7家族中的嗅觉受体是哺乳动物信息素的受体，如与雄甾烯酮相关的那些。针对雄甾烯酮相关分子组筛选有气味物组，所述分子包含雄甾二烯醇(5,16-雄甾二烯-3β醇)、雄甾二烯酮(雄甾-4,16,-二烯-3-酮)、雄甾烷醇(5α-雄甾-16-烯-3α-醇)和雌甾四烯(雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-醇)。
将表达or7嗅觉受体家族的不同成员的酵母细胞置于单独的孔或容器中、用来自所述组的各个有气味物进行询问，并在时间点0、10秒、20秒、30秒、1分钟、2分钟、3分钟、4分钟、5分钟、10分钟、20分钟、30分钟、40分钟、50分钟和1小时处进行荧光读取。
实例3：用人类嗅觉受体or1a1制备生物传感器
使用全长人类嗅觉受体or1a1来制备表达质粒nixp218和nixp354。在nixp218和nixp354两者中，对or1a1进行编码的核酸处于gal1-10启动子的控制下。图1中示出了or构建体的总体质粒图。在nixp354中，or1a1在其n端与flag标签(seqidno:17)融合并且在其c端与红色荧光蛋白(rfp)的编码序列融合。
将质粒nixp354或nixp218置于单倍体酿酒酵母(mata菌株)中。使用flag标签监测来自nixp354的or1a1的表达以测量表达(使用免疫测定)，并且通过来自rfp的荧光来监测or1a1的细胞定位。通过将具有nixp218的酿酒酵母菌株与互补的酿酒酵母菌株(matα)交配来评估生物传感器的功能，所述互补的酿酒酵母菌株是经过人类g蛋白亚基gα、gβ和gγ以及腺苷酸环化酶修饰的。将这两种酵母菌株交配在一起使or1a1受体与人类g蛋白亚基gα、gβ和gγ以及腺苷酸环化酶进行功能性缔合。or1a1受体的功能可以在刺激or1a1受体后通过camp测定来评估。
实例4：用人类嗅觉受体or2j2制备生物传感器
使用全长人类嗅觉受体or2j2来制备表达质粒nixp219和nixp352。在nixp219和nixp352中，对or2j2进行编码的核酸处于gal1-10启动子的控制下。图1中示出了or构建体的质粒图。在nixp352中，or2j2在其n端与flag标签(seqidno:17)融合并且在其c端与红色荧光蛋白(rfp)的编码序列融合。
将质粒nixp352或nixp219置于单倍体酿酒酵母(mata菌株)中。使用flag标签监测来自nixp352的or2j2的表达以测量表达(使用免疫测定)，并且通过来自rfp的荧光来监测or2j2的细胞定位。通过将具有nixp219的酿酒酵母菌株与互补的酿酒酵母菌株(matα)交配来评估生物传感器的功能，所述互补的酿酒酵母菌株是经过人类g蛋白亚基gα、gβ和gγ以及腺苷酸环化酶修饰的。将这两种酵母菌株交配在一起使or2j2受体与人类g蛋白亚基gα、gβ和gγ以及腺苷酸环化酶进行功能性缔合。or2j2受体的功能可以在刺激or2j2受体后通过camp测定来评估。
实例5：用人类嗅觉受体or2w1制备生物传感器
使用全长人类嗅觉受体or2w1来制备表达质粒nixp220和nixp351。在nixp220和nixp351中，对or2w1进行编码的核酸处于gal1-10启动子的控制下。图1中示出了or构建体的质粒图。在nixp351中，or2w1在其n端与flag标签(seqidno:17)融合并且在其c端与红色荧光蛋白(rfp)的编码序列融合。
将质粒nixp351或nixp220置于单倍体酿酒酵母(mata菌株)中。使用flag标签监测来自nixp351的or2w1的表达以测量表达(使用免疫测定)，并且通过来自rfp的荧光来监测or2w1的细胞定位。通过将具有nixp220的酿酒酵母菌株与互补的酿酒酵母菌株(matα)交配来评估生物传感器的功能，所述互补的酿酒酵母菌株是经过人类g蛋白亚基gα、gβ和gγ以及腺苷酸环化酶修饰的。将这两种酵母菌株交配在一起使or2w1受体与人类g蛋白亚基gα、gβ和gγ以及腺苷酸环化酶进行功能性缔合。or2w1受体的功能可以在刺激or2w1受体后通过camp测定来评估。
实例6：用人类嗅觉受体or5p3制备生物传感器
使用全长人类嗅觉受体or5p3来制备表达质粒nixp217和nixp353。在nixp217和nixp353中，对or5p3进行编码的核酸处于gal1-10启动子的控制下。图1中示出了or构建体的质粒图。在nixp353中，or5p3在其n端与flag标签(seqidno:17)融合并且在其c端与红色荧光蛋白(rfp)的编码序列融合。
将质粒nixp353或nixp217置于单倍体酿酒酵母(mata菌株)中。使用flag标签监测来自nixp353的or5p3的表达以测量表达(使用免疫测定)，并且通过来自rfp的荧光来监测or5p3的细胞定位。通过将具有nixp217的酿酒酵母菌株与互补的酿酒酵母菌株(matα)交配来评估生物传感器的功能，所述互补的酿酒酵母菌株是经过人类g蛋白亚基gα、gβ和gγ以及腺苷酸环化酶修饰的。将这两种酵母菌株交配在一起使or5p3受体与人类g蛋白亚基gα、gβ和gγ以及腺苷酸环化酶进行功能性缔合。or5p3受体的功能可以在刺激or5p3受体后通过camp测定来评估。
实例7：用人类嗅觉受体or6a2制备生物传感器
使用全长人类嗅觉受体or6a2来制备表达质粒nixp239。在nixp239中，对or6a2进行编码的核酸处于gal1-10启动子的控制下。图1中示出了or构建体的质粒图。
将质粒nixp239置于单倍体酿酒酵母(mata菌株)中。通过将具有nixp239的酿酒酵母菌株与互补的酿酒酵母菌株(matα)交配来评估生物传感器的功能，所述互补的酿酒酵母菌株是经过人类g蛋白亚基gα、gβ和gγ以及腺苷酸环化酶修饰的。将这两种酵母菌株交配在一起使or6a2受体与人类g蛋白亚基gα、gβ和gγ以及腺苷酸环化酶进行功能性缔合。or6a2受体的功能可以在刺激or6a2受体后通过camp测定来评估。
实例8：制备具有生物传感器的细胞提取物
在本实例中，使用具有由来自实例3-7的or1a1、or2j2、or2w1、or5p3和or6a2制成的生物传感器的酵母细胞。将具有嗅觉受体、g蛋白和腺苷酸环化酶的酵母细胞在搅拌器中用玻璃珠裂解。通过将裂解物以600xg离心来去除细胞碎片。将剩余的裂解物在超速离心机(104,300xg)中离心，以得到具有嗅觉受体、g蛋白和腺苷酸环化酶的膜部分。将膜部分重新悬浮并置于多孔板中以检测有气味物。
实例9：用人类嗅觉受体or51e2制备生物传感器
使用全长人类嗅觉受体or51e2来制备表达质粒。在表达质粒中，对or51e2进行编码的核酸处于gal1-10启动子的控制下。图1中示出了or构建体的质粒图。
将or51e2的表达质粒置于单倍体酿酒酵母(mata菌株)中。通过将此酿酒酵母菌株与互补的酿酒酵母菌株(matα)交配来评估生物传感器的功能，所述互补的酿酒酵母菌株是经过人类g蛋白亚基gα、gβ和gγ以及腺苷酸环化酶修饰的。将这两种酵母菌株交配在一起使or51e2受体与人类g蛋白亚基gα、gβ和gγ以及腺苷酸环化酶进行功能性缔合。or51e2受体的功能可以在刺激or51e2受体后通过camp测定来评估。
实例10：用人类嗅觉受体or2at4制备生物传感器
使用全长人类嗅觉受体or2at4来制备表达质粒。在表达质粒中，对or2at4进行编码的核酸处于gal1-10启动子的控制下。图1中示出了or构建体的质粒图。
将or2at4的表达质粒置于单倍体酿酒酵母(mata菌株)中。通过将此酿酒酵母菌株与互补的酿酒酵母菌株(matα)交配来评估生物传感器的功能，所述互补的酿酒酵母菌株是经过人类g蛋白亚基gα、gβ和gγ以及腺苷酸环化酶修饰的。将这两种酵母菌株交配在一起使or2at4受体与人类g蛋白亚基gα、gβ和gγ以及腺苷酸环化酶进行功能性缔合。or2at4受体的功能可以在刺激or2at4受体后通过camp测定来评估。
实例11：用人类嗅觉受体or2j3制备生物传感器
使用全长人类嗅觉受体or2j3来制备表达质粒。在表达质粒中，对or2j3进行编码的核酸处于gal1-10启动子的控制下。图1中示出了or构建体的质粒图。
将or2j3的表达质粒置于单倍体酿酒酵母(mata菌株)中。通过将此酿酒酵母菌株与互补的酿酒酵母菌株(matα)交配来评估生物传感器的功能，所述互补的酿酒酵母菌株是经过人类g蛋白亚基gα、gβ和gγ以及腺苷酸环化酶修饰的。将这两种酵母菌株交配在一起使or2j3受体与人类g蛋白亚基gα、gβ和gγ以及腺苷酸环化酶进行功能性缔合。or2j3受体的功能可以在刺激or2j3受体后通过camp测定来评估。
实例12：用人类嗅觉受体or51e1制备生物传感器
使用全长人类嗅觉受体or51e1来制备表达质粒。在表达质粒中，对or51e1进行编码的核酸处于gal1-10启动子的控制下。图1中示出了or构建体的质粒图。
将or51e1的表达质粒置于单倍体酿酒酵母(mata菌株)中。通过将此酿酒酵母菌株与互补的酿酒酵母菌株(matα)交配来评估生物传感器的功能，所述互补的酿酒酵母菌株是经过人类g蛋白亚基gα、gβ和gγ以及腺苷酸环化酶修饰的。将这两种酵母菌株交配在一起使or51e1受体与人类g蛋白亚基gα、gβ和gγ以及腺苷酸环化酶进行功能性缔合。or51e1受体的功能可以在刺激or51e1受体后通过camp测定来评估。
本说明书中引用的所有出版物和专利通过引用的方式并入本文，就好像每个单独的出版物或专利都被具体地且单独地指示为通过引用的方式并入并且通过引用的方式并入本文以公开和描述引用出版物所结合的方法和/或材料。
本领域技术人员将认识到或仅使用常规实验就能够确定本文所述的本发明的具体实施例的许多等效形式。此类等效形式旨在由以下权利要求书涵盖。
序列表
<110>阿罗米克斯公司(aromyxcorporation)
<120>异位嗅觉受体和其用途
<130>arx.0009
<160>17
<170>patentin版本3.5
<210>1
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>嗅觉受体基序
<400>1
metalatyraspargtyrvalalailecys
1510
<210>2
<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>嗅觉受体基序
<400>2
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15
<210>3
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>嗅觉受体基序
<400>3
pheserthrcysserserhis
15
<210>4
<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>嗅觉受体基序
<400>4
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15
<210>5
<211>309
<212>prt
<213>智人
<400>5
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