本发明涉及引入新的蛋白酶的包含表面活性剂的洗涤剂组合物。
背景技术：
：水可以是稀缺资源。希望在基材上使用洗涤剂组合物，特别是在织物上使用洗衣洗涤剂的用户，可能仅能够使用对于清洁不是最佳的水。这个的一个实例是有时使用盐水(具有显著氯化钠含量的水)，如海水。蛋白酶是清洁组合物中的常见成分。采用商业蛋白酶的一个问题是它们在盐水条件下不良地起作用。技术实现要素：我们已经发现，在洗涤剂组合物中引入根据权利要求1的新蛋白酶显示增强的清洁。在一个方面，本发明提供了一种洗涤剂组合物，其包含：(i)1至60重量％，优选2至50，更优选4至50重量％的表面活性剂；(ii)0.0005至1重量％，优选0.005至0.6重量％的具有与seqidno:1至少90％序列同一性的蛋白酶。优选地，所述蛋白酶具有与seqidno:1至少95％，更优选97％序列同一性。最优选地，所述蛋白酶具有与seqidno:1100％序列同一性。优选的洗涤剂组合物为洗衣洗涤剂组合物。优选地，洗衣洗涤剂组合物为液体或粉末，更优选地，洗涤剂为液体洗涤剂。优选地，洗衣洗涤剂组合物包含阴离子和/或非离子表面活性剂，更优选地，洗衣洗涤剂组合物包含阴离子和非离子表面活性剂。洗衣洗涤剂优选地包含烷氧基化多胺。洗衣洗涤剂优选地包含去污聚合物，更优选基于聚酯的去污聚合物。优选地，洗衣洗涤剂包含含量小于0.1重量％、更优选小于0.01重量％的膦酸(或其盐)螯合剂，最优选地，所述组合物不含膦酸(或其盐)螯合剂。优选的洗涤剂组合物，特别是洗衣洗涤剂组合物，还包含选自以下的进一步的酶：脂肪酶、纤维素酶、α-淀粉酶、过氧化物酶/氧化酶、果胶酸裂解酶、甘露聚糖酶，和/或另外的蛋白酶。在另一个方面，本发明提供了一种改善在20℃下氯化钠含量为0.1至4％，优选0.25至3重量％的水中的酶促清洁的方法，所述方法包括将具有与seqidno:1至少90％序列同一性的蛋白酶引入包含1至60重量％的表面活性剂的洗涤剂组合物中；和随后用所述组合物处理基材，优选织物。在另一个方面，本发明提供了具有与seqidno:1至少90％、优选95％、更优选97％、最优选100％序列同一性的蛋白酶用于改善在15℃至45℃的温度下氯化钠含量为0.1至4％的水中的酶促清洁的用途。具体实施方式除非另有规定，否则如本文使用的不定冠词“一个/种(a/an)”及其相应定冠词“所述/该(the)”是指至少一个/种、或一个/种或多个/种。除非另有规定，否则本文所列组合物(制剂)中成分的所有含量％是基于总制剂的重量％。洗涤剂组合物可以采取任何合适的形式，例如液体、固体(包括粉末)或凝胶剂。洗涤剂组合物可以施用于任何合适的基材。特别优选的基材是织物。特别优选的洗涤剂组合物是洗衣洗涤剂组合物。洗衣洗涤剂组合物可以采取任何合适的形式。优选的形式是液体或粉末，液体是最优选的。表面活性剂洗涤剂组合物包含表面活性剂(其包括两种或更多种表面活性剂的混合物)。所述组合物包含1至60重量％，优选2至50重量％，更优选4至50重量％的表面活性剂。表面活性剂的甚至更优选的含量为6至30重量％，更优选8至20重量％。洗涤剂组合物(优选地，洗衣洗涤剂组合物)包含阴离子和/或非离子表面活性剂，优选包含阴离子和非离子表面活性剂两者。可以使用的合适的阴离子洗涤剂化合物通常是具有含约8至约22个碳原子的烷基的有机硫酸和磺酸的水溶性碱金属盐，术语烷基用于包括较高级烷基的烷基部分。合适的合成阴离子洗涤剂化合物的实例是烷基硫酸钠和烷基硫酸钾，特别是通过使例如由牛油或椰油制得的较高级c8至c18醇硫酸化而获得的那些，烷基c9至c20苯磺酸钠和钾，特别是直链仲烷基c10至c15苯磺酸钠；以及烷基甘油醚硫酸钠，特别是衍生自牛油或椰油的较高级醇和衍生自石油的合成醇的那些醚。阴离子表面活性剂优选选自：直链烷基苯磺酸盐；烷基硫酸盐；烷基醚硫酸盐；皂；烷基(优选甲基)酯磺酸盐及其混合物。最优选的阴离子表面活性剂选自：直链烷基苯磺酸盐；烷基硫酸盐；烷基醚硫酸盐及其混合物。优选地，烷基醚硫酸盐是具有平均1至3个eo(乙氧基化物)单元的c12-c14正烷基醚硫酸盐。月桂基醚硫酸钠(sles)是特别优选的。优选地，直链烷基苯磺酸盐是c11至c15烷基苯磺酸钠。优选地，烷基硫酸盐是直链或支链c12至c18烷基硫酸钠。十二烷基硫酸钠是特别优选的(sds，也称为伯烷基硫酸盐)。在液体制剂中，优选地存在两种或更多种阴离子表面活性剂，例如直链烷基苯磺酸盐连同烷基醚硫酸盐。在液体制剂中，优选地，除了阴离子表面活性剂之外，洗衣组合物还包含烷基乙氧基化非离子表面活性剂，优选2至8重量％的烷基乙氧基化非离子表面活性剂。可以使用的合适的非离子洗涤剂化合物包括，特别是，具有脂肪族疏水基团和反应性氢原子的化合物(例如脂肪醇、酸或酰胺)与尤其是环氧乙烷(单独或与环氧丙烷一起)的反应产物。优选的非离子洗涤剂化合物是脂肪族c8至c18直链或支链伯或仲醇与环氧乙烷的缩合产物。最优选地，非离子洗涤剂化合物为烷基乙氧基化非离子表面活性剂，其为具有7eo至9eo单元的平均乙氧基化的c8至c18伯醇。优选地，所用表面活性剂是饱和的。蛋白酶我们已经发现，该蛋白酶在盐水条件下良好工作。因此，该蛋白酶可以被认为是耐盐的(halotolerant)。这是指其可以在高盐环境中发挥功能。我们还已经发现，该蛋白酶可以在20℃低温下良好工作。该蛋白酶在40℃高温和20℃低温盐水环境两者中都胜过商业蛋白酶。该蛋白酶以0.0005至1重量％，优选0.005至0.6重量％的含量存在。该蛋白酶具有与seqidno:1至少90％，优选95％、或者甚至97％序列同一性。最优选地，该蛋白酶可以具有与seqidno:1100％序列同一性。烷氧基化多胺当洗涤剂组合物为洗衣组合物的形式时，优选的是包含烷氧基化多胺。烷氧基化多胺的优选含量在0.1至8重量％，优选0.2至6重量％，更优选0.5至5重量％的范围内。另一种优选的含量为1至4重量％。烷氧基化多胺可以是直链或支链的。其可以支链化至其为树枝状聚合物的程度。烷氧基化通常可以为乙氧基化或丙氧基化，或两者的混合物。当氮原子被烷氧基化时，优选的平均烷氧基化度为10至30，优选15至25。一种优选的材料是具有10至30，优选15至25的平均乙氧基化度的烷氧基化聚乙烯亚胺，最优选乙氧基化聚乙烯亚胺，其中氮原子被乙氧基化。去污聚合物当洗涤剂组合物为洗衣组合物的形式时，优选的是包含去污聚合物。去污聚合物的优选含量在0.1至10重量％，优选0.2至8重量％，更优选0.25至7重量％，最优选0.5至6重量％的范围内。合适的基于聚酯的去污聚合物在wo2014/029479和wo2016/005338中描述。另外的酶除了所指定的酶之外，另外的酶可以存在于洗涤剂组合物中。优选的是另外的酶存在于优选的洗衣洗涤剂组合物中。如果存在，则每种酶在本发明的洗衣组合物中的含量为0.0001重量％至0.1重量％。在该组合物中存在的酶的含量优选地与作为纯蛋白的酶的含量有关。优选的进一步的酶包括选自以下的那些：脂肪酶、纤维素酶、α-淀粉酶、过氧化物酶/氧化酶、果胶酸裂解酶、甘露聚糖酶，和/或另外的蛋白酶。所述优选的另外的酶包括这些酶中的两种或更多种的混合物。优选地，所述进一步的酶选自：脂肪酶、纤维素酶、α-淀粉酶，和/或另外的蛋白酶。合适的脂肪酶包括具有细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的或蛋白质工程化的突变体。有用的脂肪酶的实例包括来自以下的脂肪酶：腐质霉(humicola)(同义词嗜热真菌(thermomyces))，例如来自ep258068和ep305216中所述的h.lanuginosa(t.lanuginosus)或来自wo96/13580中所述的h.insolens；假单胞菌脂肪酶，例如来自产碱假单胞菌(p.alcaligenes)或假产碱假单胞菌(p.pseudoalcaligenes)(ep218272)、洋葱假单胞菌(p.cepacia)(ep331376)、施氏假单胞菌(p.stutzeri)(gb1,372,034)、荧光假单胞菌(p.fluorescens)，假单胞菌菌株sd705(wo95/06720和wo96/27002)、p.wisconsinensis(wo96/12012)；芽孢杆菌脂肪酶，例如来自枯草芽孢杆菌(b.subtilis)(dartois等(1993),biochemicaetbiophysicaacta,1131,253-360)、嗜热脂肪芽孢杆菌(b.stearothermophilus)(jp64/744992)或短小芽孢杆菌(b.pumilus)(wo91/16422)。其他实例是脂肪酶变体，例如在wo92/05249、wo94/01541、ep407225、ep260105、wo95/35381、wo96/00292、wo95/30744、wo94/25578、wo95/14783、wo95/22615、wo97/04079和wo97/07202、wo00/60063中描述的那些。优选的可商购脂肪酶包括lipolasetm和lipolaseultratm、lipextm和lipocleantm(novozymesa/s)。本发明的方法可以在分类为ec3.1.1.4和/或ec3.1.1.32的磷脂酶的存在下进行。如本文所用，术语磷脂酶是对磷脂具有活性的酶。磷脂，例如卵磷脂或磷脂酰胆碱，由在外部(sn-1)和中间(sn-2)位置被两个脂肪酸酯化，并在第三位置被磷酸酯化的甘油组成；磷酸反过来可以被酯化成氨基醇。磷脂酶是参与磷脂水解的酶。可以区分磷脂酶活性的多种类型，包括磷脂酶a1和a2，其水解一个脂肪酰基(分别在sn-1和sn-2位置)以形成溶血磷脂；和溶血磷脂酶(或磷脂酶b)，其可以水解溶血磷脂中剩余的脂肪酰基。磷脂酶c和磷脂酶d(磷酸二酯酶)分别释放二酰基甘油或磷脂酸。蛋白酶水解肽和蛋白质内的键，在洗衣环境中，这导致对含有蛋白质或肽的污渍的去除增强。合适的蛋白酶家族的实例包括天冬氨酸蛋白酶，半胱氨酸蛋白酶，谷氨酸蛋白酶，天冬酰胺(aspargine)肽裂解酶，丝氨酸蛋白酶和苏氨酸蛋白酶。这样的蛋白酶家族在merops肽酶数据库(http://merops.sanger.ac.uk/)中描述。丝氨酸蛋白酶是优选的。枯草杆菌酶型丝氨酸蛋白酶是更优选的。根据siezen等，proteinengng.4(1991)719-737和siezen等，proteinscience6(1997)501-523，术语“枯草杆菌酶”是指丝氨酸蛋白酶的亚组。丝氨酸蛋白酶是特征在于在活性位点具有丝氨酸的蛋白酶的亚组，该丝氨酸与底物形成共价加合物。枯草杆菌酶可以分为6个亚分类，即枯草杆菌蛋白酶(subtilisin)家族，嗜热蛋白酶(thermitase)家族，蛋白酶k家族，羊毛硫氨酸抗生素(lantibiotic)肽酶家族，kexin家族和pyrolysin家族。枯草杆菌酶的实例是源自芽孢杆菌例如在us7262042和wo09/021867中描述的迟缓芽孢杆菌，嗜碱芽孢杆菌，枯草芽孢杆菌，解淀粉芽孢杆菌，短小芽孢杆菌和吉氏芽孢杆菌的那些，以及在wo89/06279中描述的迟缓枯草杆菌蛋白酶(subtilisinlentus)，枯草杆菌蛋白酶novo，枯草杆菌蛋白酶carlsberg，地衣芽孢杆菌，枯草杆菌蛋白酶bpn’，枯草杆菌蛋白酶309，枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168，以及在wo93/18140中描述的蛋白酶pd138。其它有用的蛋白酶可以是wo92/175177，wo01/016285，wo02/026024和wo02/016547中描述的那些。胰蛋白酶样蛋白酶的实例是wo89/06270，wo94/25583和wo05/040372中描述的胰蛋白酶(例如，猪或牛来源的)和镰刀菌蛋白酶，以及在wo05/052161和wo05/052146中描述的源自纤维单胞菌属(cellumonas)的糜蛋白酶。最优选地，蛋白酶是枯草杆菌蛋白酶(ec3.4.21.62)。枯草杆菌酶的实例是源自芽孢杆菌例如在us7262042和wo09/021867中描述的迟缓芽孢杆菌，嗜碱芽孢杆菌，枯草芽孢杆菌，解淀粉芽孢杆菌，短小芽孢杆菌和吉氏芽孢杆菌的那些，以及在wo89/06279中描述的迟缓枯草杆菌蛋白酶，枯草杆菌蛋白酶novo，枯草杆菌蛋白酶carlsberg，地衣芽孢杆菌，枯草杆菌蛋白酶bpn’，枯草杆菌蛋白酶309，枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168，以及在wo93/18140中描述的蛋白酶pd138。优选地，枯草杆菌蛋白酶源自芽孢杆菌，优选迟缓芽孢杆菌，嗜碱芽孢杆菌，枯草芽孢杆菌，解淀粉芽孢杆菌，短小芽孢杆菌和吉氏芽孢杆菌，如us6,312,936b1，us5,679,630，us4,760,025，us7,262,042和wo09/021867中所述。最优选地，枯草杆菌蛋白酶源自吉氏芽孢杆菌或迟缓芽孢杆菌。合适的可商购蛋白酶包括以商品名duralasetm，durazymtm，ultra，ultra，ultra，ultra，和销售的那些，所有都可作为或(novozymesa/s)销售。组合物可以使用分类为ec3.1.1.74的角质酶。根据本发明使用的角质酶可以具有任何来源。优选地，角质酶具有微生物来源，特别是细菌、真菌或酵母来源。合适的淀粉酶(α和/或β)包括具有细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的或蛋白质工程化的突变体。淀粉酶包括例如获自芽孢杆菌，如在gb1,296,839中更详细描述的地衣芽孢杆菌的特殊菌株，或在wo95/026397或wo00/060060中公开的芽孢杆菌菌株的α-淀粉酶。可商购的淀粉酶是duramyltm、termamyltm、termamylultratm、natalasetm、stainzymetm、fungamyltm和bantm(novozymesa/s)、rapidasetm和purastartm(来自genencorinternationalinc.)。合适的纤维素酶包括具有细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的或蛋白质工程化的突变体。合适的纤维素酶包括来自以下的纤维素酶：芽孢杆菌属、假单胞菌属、腐质霉属、镰刀菌属、梭孢壳属、支顶孢属，例如从公开于us4,435,307、us5,648,263、us5,691,178、us5,776,757、wo89/09259、wo96/029397和wo98/012307的特异腐质霉、太瑞斯梭孢壳霉、嗜热毁丝霉和尖孢镰刀菌产生的真菌纤维素酶。可商购的纤维素酶包括celluzymetm、carezymetm、cellucleantm、endolasetm、renozymetm(novozymesa/s)、clazinasetm和puradaxhatm(genencorinternationalinc.)和kac-500(b)tm(kaocorporation)。celluzymetm是优选的。合适的过氧化物酶/氧化酶包括具有植物、细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的或蛋白质工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自鬼伞属，例如来自灰盖鬼伞的过氧化物酶，及其变体，如在wo93/24618、wo95/10602和wo98/15257中所述的那些。可商购的过氧化物酶包括guardzymetm和novozymtm51004(novozymesa/s)。另外的适用的酶在wo2009/087524、wo2009/090576、wo2009/107091、wo2009/111258和wo2009/148983中讨论。该方法中使用的水性溶液优选地具有存在的酶。酶优选地在该方法中使用的水性溶液中以0.01至10ppm，优选0.05至1ppm范围的浓度存在。酶稳定剂存在于组合物中的任何酶可以使用常规的稳定剂稳定化，例如多元醇，如丙二醇或甘油；糖或糖醇；乳酸；硼酸或硼酸衍生物，例如芳族硼酸酯，或苯基硼酸衍生物，如4-甲酰基苯基硼酸，并且组合物可以如例如wo92/19709和wo92/19708中所述配制。螯合剂螯合剂可以存在于或不存在于洗涤剂组合物中。优选地，洗衣洗涤剂包含含量小于0.1重量％、更优选小于0.01重量％的膦酸(或其盐)螯合剂，最优选地，组合物不含膦酸(或其盐)螯合剂。实例膦酸(或其盐)螯合剂为：1-羟基亚乙基-1,1-二膦酸(hedp)；二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(dtpmp)；六亚甲基二胺四(亚甲基膦酸)(hdtmp)；氨基三(亚甲基膦酸)(atmp)；乙二胺四(亚甲基膦酸)(edtmp)；四亚甲基二胺四(亚甲基膦酸)(tdtmp)；和膦酰基丁烷-三羧酸(pbtc)。进一步的材料洗涤剂组合物(优选洗衣洗涤剂组合物)可以包含的进一步任选但优选的材料包括荧光剂、香料、调色染料和聚合物。荧光剂组合物优选地包含荧光剂(光学增亮剂)。荧光剂是众所周知的，并且许多这样的荧光剂是可商购的。通常，这些荧光剂以其碱金属盐，例如钠盐的形式供应和使用。组合物中使用的一种或多种荧光剂的总量通常为0.0001至0.5重量％，更优选0.005至2重量％，更优选地0.01至0.1重量％。优选的荧光剂类别是：二苯乙烯基联苯化合物，如tinopal(商标)cbs-x；二胺二苯乙烯二磺酸化合物，如tinopaldmspurextra和blankophor(商标)hrh；以及吡唑啉化合物，如blankophorsn。优选的荧光剂为具有cas-no3426-43-5；cas-no35632-99-6；cas-no24565-13-7；cas-no12224-16-7；cas-no13863-31-5；cas-no4193-55-9；cas-no16090-02-1；cas-no133-66-4；cas-no68444-86-0；cas-no27344-41-8的荧光剂。最优选的荧光剂为：2(4-苯乙烯基-3-磺苯基)-2h-萘酚[1,2-d]三唑钠、4,4'-双{[(4-苯胺基-6-(n甲基-n-2羟乙基)氨基1,3,5-三嗪-2-基)]氨基}二苯乙烯-2,2'二磺酸二钠、4,4'-双{[(4-苯胺基-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)]氨基}二苯乙烯-2-2'二磺酸二钠，和4,4'-双(2-磺苯乙烯基)联苯二钠。该方法中使用的水性溶液优选地具有存在的荧光剂。荧光剂优选地在该方法中使用的水性溶液中以0.0001g/l至0.1g/l，更优选0.001至0.02g/l范围存在。香料组合物优选包含香料。在由cftapublications出版的ctfa(cosmetic，toiletryandfragranceassociation)1992internationalbuyersguide和由schnellpublishingco.出版的opd1993chemicalsbuyersdirectory80thannualedition中提供了香料的许多合适实例。优选地，香料包含以下的至少一种香型(note)(化合物)：α-异甲基紫罗酮，水杨酸苄酯；香茅醇；香豆素；己基肉桂醛；芳樟醇；2-甲基戊酸乙基酯；辛醛；乙酸苄酯；3,7-二甲基-1,6-辛二烯-3-醇3-乙酸酯；2-(1,1-二甲基乙基)-环己醇1-乙酸酯；δ-大马酮(damascone)；β-紫罗酮；乙酸三环癸烯酯(verdylacetate)；十二醛；己基肉桂醛(hexylcinnamicaldehyde)；环十五内酯；苯乙酸2-苯基乙基酯；水杨酸戊酯；β-石竹烯；十一碳烯酸乙酯；邻氨基苯甲酸香叶酯；α-鸢尾酮；β-苯基乙基苯甲酸酯；α-檀香醇；雪松醇；乙酸柏木酯；甲酸柏木酯(cedryformate)；水杨酸环己酯；γ-十二内酯，和β-苯乙基苯基乙酸酯。香料的有用组分包括天然和合成来源的材料两者。它们包括单一化合物和混合物。这样的组分的具体实例可见于现有文献中，例如，fenaroli'shandbookofflavoringredients,1975,crcpress；m.b.jacobs,syntheticfoodadjuncts,1947,vannostrand编辑；或s.arctander,perfumeandflavorchemicals,1969,montclair,n.j.(usa)。在制剂中存在多种香料组分是常见的。在本发明的组合物中，设想将存在四种或更多种、优选五种或更多种、更优选六种或更多种、或甚至七种或更多种不同的香料组分。在香料混合物中，优选15至25重量％是头香。头香是由poucher(journalofthesocietyofcosmeticchemists6(2):80[1955])所定义的。优选的头香选自柑桔油、芳樟醇、乙酸芳樟酯、薰衣草、二氢月桂烯醇、玫瑰醚(roseoxide)和顺-3-己醇。国际日用香精香料协会已在2011年发布了香氛成分(香料)的清单。(http://www.ifraorg.org/en-us/ingredients#.u7z4hpldwzk)。国际日用香料研究所提供了具有安全性信息的香料(香氛)数据库。香料头香可用于提示本发明的白度和亮度益处。一些或所有香料可以被包封，有利于包封的典型香料组分包括具有相对低的沸点的那些，优选沸点小于300℃，优选为100-250℃的那些。包封具有低clogp(即，将具有更高的被分配到水中的倾向的那些)，优选具有小于3.0的clogp的香料组分也是有利的。这些具有相对低沸点和相对低clogp的材料已经被称为“延迟释香(delayedblooming)”的香料成分，并且包含以下材料中的一种或多种：己酸烯丙酯、乙酸戊酯、丙酸戊酯、茴香醛、苯甲醚、苯甲醛、乙酸苄酯、苄基丙酮、苯甲醇、甲酸苄酯、异戊酸苄酯、丙酸苄酯、β-γ己烯醇、樟脑胶、左旋-香芹酮、d-香芹酮、肉桂醇、甲酸肉桂酯(cinamylformate)、顺-茉莉酮、顺-3-己烯基乙酸酯、枯茗醇、cyclalc、二甲基苄基甲醇、二甲基苄基甲醇乙酸酯、乙酸乙酯、乙酰乙酸乙酯、乙基戊基酮、苯甲酸乙酯、丁酸乙酯、乙基己基酮、乙基苯基乙酸酯、桉树脑、丁香酚、乙酸葑酯(fenchylacetate)、floracetate(三环癸烯基乙酸酯)、frutene(三环癸烯基丙酸酯)、香叶醇、己烯醇、乙酸己烯酯、乙酸己酯、甲酸己酯、龙葵醇(hydratropicalcohol)、羟基香茅醛、茚酮、异戊醇、异薄荷酮、乙酸异胡薄荷酯(isopulegylacetate)、异喹啉酮、女贞醛、芳樟醇、芳樟醇氧化物、甲酸芳樟酯、薄荷酮、薄荷基苯乙酮(menthylacetphenone)、甲基戊基酮、邻氨基苯甲酸甲酯、苯甲酸甲酯、甲基苄基乙酸酯(methylbenylacetate)、甲基丁香酚、甲基庚烯酮、甲基庚炔碳酸酯(methylheptinecarbonate)、甲基庚基酮、甲基己基酮、甲基苯基甲基乙酸酯、水杨酸甲酯、甲基-n-甲基邻氨基苯甲酸酯、橙花醇、辛内酯、辛醇、对甲酚、对甲酚甲基醚、对甲氧基苯乙酮、对甲基苯乙酮、苯氧乙醇、苯基乙醛、苯基乙基乙酸酯、苯基乙基醇、苯基乙基二甲基甲醇、乙酸异戊二烯酯、propylbornate、胡薄荷酮、玫瑰醚(roseoxide)、黄樟素、4-萜品烯醇(4-terpinenol)、α-萜品烯醇和/或苯乙醛二甲醇缩醛(viridine)。多种香料组分存在于制剂中是常见的。在本发明的组合物中，设想将有来自上文给出的延迟释香香料的给定列表的四种或更多种，优选五种或更多种，更优选六种或更多种，或甚至七种或更多种不同的香料组分存在于香料中。可以与本发明一起应用的另一组香料是所谓的“芳香疗法”材料。这些包括也用于香水中的许多组分，包括精油的组分如鼠尾草、桉树、天竺葵、薰衣草、肉豆蔻干皮(mace)提取物、橙花油、肉豆蔻、留兰香、甜紫罗兰叶和缬草。优选的是洗衣处理组合物不含过氧漂白剂，例如过碳酸钠，过硼酸钠和过酸。调色染料优选地，当组合物为洗衣洗涤剂组合物时，则其包含调色染料。优选地，调色染料以组合物的0.0001至0.1重量％存在。染料在colorchemistrysynthesis,propertiesandapplicationsoforganicdyesandpigments(hzollinger，wileyvch，zürich，2003)和industrialdyeschemistry,propertiesapplications(khunger(ed)，wiley-vchweinheim2003)中描述。用于洗衣组合物的调色染料优选在可见光范围(400-700nm)中的最大吸收处具有大于5000lmol-1cm-1，优选大于10000lmol-1cm-1的消光系数。染料的颜色是蓝色或紫色。优选的调色染料发色团是偶氮、吖嗪、蒽醌和三苯甲烷。偶氮、蒽醌、酞菁和三苯甲烷染料优选带有净阴离子电荷或不带电荷。吖嗪优选带有净阴离子或阳离子电荷。在洗涤过程的洗涤或漂洗步骤期间，蓝色或紫色调色染料沉积到织物上，从而为织物提供可见的色调。在这方面，染料对白色布料赋予蓝色或紫色，色调角为240至345、更优选250至320、最优选250至280。该测试中使用的白色布料是经漂白的、非丝光处理的编织棉片。调色染料在wo2005/003274，wo2006/032327(unilever)，wo2006/032397(unilever)，wo2006/045275(unilever)，wo06/027086(unilever)，wo2008/017570(unilever)，wo2008/141880(unilever)，wo2009/132870(unilever)，wo2009/141173(unilever)，wo2010/099997(unilever)，wo2010/102861(unilever)，wo2010/148624(unilever)，wo2008/087497(p&g)，wo2011/011799(p&g)，wo2012/054820(p&g)，wo2013/142495(p&g)和wo2013/151970(p&g)中讨论。单偶氮染料优选含有杂环，并且最优选是噻吩染料。单偶氮染料优选是烷氧基化的，并且优选在ph＝7时不带电荷或带阴离子电荷。烷氧基化噻吩染料在wo/2013/142495和wo/2008/087497中讨论。噻吩染料的优选实例如下所示：双偶氮染料优选为磺化双偶氮染料。磺化双偶氮化合物的优选实例是直接紫7，直接紫9，直接紫11，直接紫26，直接紫31，直接紫35，直接紫40，直接紫41，直接紫51，直接紫66，直接紫99及其烷氧基化形式。烷氧基化双偶氮染料在wo2012/054058和wo2010/151906中讨论。烷氧基化双偶氮染料的实例是：噻吩染料可以以商品名liquitintvioletdd和liquitintvioletion获自milliken。吖嗪染料优选选自磺化吩嗪染料和阳离子吩嗪染料。优选的实例是酸性蓝98，酸性紫50，cas号为72749-80-5的染料，酸性蓝59，以及选自以下的吩嗪染料：其中：x3选自：-h，-f，-ch3，-c2h5，-och3和-oc2h5；x4选自：-h，-ch3，-c2h5，-och3和-oc2h5；y2选自：-oh，-och2ch2oh，-ch(oh)ch2oh，-oc(o)ch3和c(o)och3。调色染料以0.0001至0.5重量％、优选0.001至0.1重量％的范围存在于组合物中。取决于调色染料的性质，存在取决于调色染料的效力的优选范围，所述调色染料的效力取决于类别和任何特定类别内的具体效力。如上所述，调色染料是蓝色或紫色调色染料。可以使用调色染料的混合物。调色染料最优选是与烷氧基化聚乙烯亚胺共价连接的活性蓝色蒽醌染料。烷氧基化优选选自乙氧基化和丙氧基化，最优选丙氧基化。优选地，通过丙氧基化将聚乙烯亚胺中80至95摩尔％的n-h基团替换为异丙醇基团。优选地，在与染料反应和丙氧基化之前，聚乙烯亚胺的分子量为600至1800。共价连接到丙氧基化聚乙烯亚胺的优选活性蒽醌的实例结构是：(结构i)。聚合物组合物可以包含一种或多种另外的聚合物。实例是羧甲基纤维素、聚(乙二醇)、聚(乙烯醇)、聚羧酸盐如聚丙烯酸盐、马来酸/丙烯酸共聚物和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物。序列表：seqidno:1实施例将通过以下非限制性实施例展示本发明。产生蛋白酶的微生物的分离和培养通过在含有(g/l海水)：胰蛋白胨5、酵母提取物2、脱脂乳粉40、琼脂粉末16的脱脂乳琼脂板上的选择性筛选，从胶州湾(中国黄海，36°09'n，120°32'e)收集的海洋沉积物样品分离产生蛋白酶的微生物菌株。将板在20℃下培养48-72小时以获得细菌菌落。将具有乳中的酪蛋白的透明水解圈的菌落作为蛋白酶产生者评价。选择显示较大水解圈的蛋白水解性la-05菌株作进一步实验。用于la-05菌株培养物的种子和发酵培养基由5g胰蛋白胨、2g酵母提取物和1l海水组成，ph7.0。将培养基在121℃下高压灭菌20分钟。首先，用2％(v/v)种子培养基接种分离的la-05菌株，并在20℃和150rpm下，在旋转振摇培养器上培养12小时。然后将培养物转移到含有400ml的发酵培养基的2-l锥形烧瓶中，并在15-30℃和150rpm下培养78小时。为了获得最大酶产率，在培养期(78小时)期间，每6小时测量生长和酶生产的动力学。通过测量600nm处的吸光度监测细胞密度。通过在4℃下，以12000rpm离心20min回收无细胞上清液，然后用作粗酶制备物以测定蛋白酶活性。菌株识别和系统发生分析对于la-05菌株的属识别，进行分析特性指数(analyticalprofilingindex，api)试纸条测试和16srrna基因测序。根据制造商的说明，使用api试纸条研究菌株la-05的生理和生化特性。通过使用正向引物(27f，5'-agagtttgatcmtggctcag-3')和反向引物(1492r，5'-tacggytaccttgttacgactt-3')的pcr，扩增16srrna序列。通过tianampbacteriadnakit(tiangen，北京，中国)纯化菌株la-05的基因组dna，然后用作包括30个循环(循环参数：在94℃下变性50s，在58℃下引物退火50s，并在72℃下延伸100s)的pcr扩增的模板。将扩增产物在pmd18-t载体(takara，大连，中国)中克隆，并构建重组质粒pmd-16s。然后，将重组质粒转移到大肠杆菌dh5a的感受态细胞中。使用含有氨苄西林(60μg/ml)的lb肉汤培养基培养大肠杆菌dh5a的重组体克隆。通过商业dna测序(sangonbiotechco.,ltd.，上海，中国)确认连接到重组质粒中的16srrna的dna片段。使用识别程序通过eztaxon数据库进行多重序列比对。选择具有高于97％的成对相似性的模式培养菌株，并通过邻接法(neighbor-joiningmethod)，采用分子进化遗传学分析(molecularevolutionarygeneticsanalysis，mega)软件(版本7.0.9)进行系统发生和分子进化分析。通过采用1000次复制的靴值分析(bootstrapanalysis)计算树状拓扑的统计学评价。蛋白酶纯化除非另有规定，否则所有纯化步骤均在4℃下进行。超滤浓缩在4℃下，以12,000rpm离心400ml的30小时龄培养物20分钟。将上清液经过0.22μm过滤器过滤，以彻底除去细菌细胞和培养基碎片，并回收为粗蛋白酶制备物。通过具有3kda分子量截止值的millipore'samiconultra-4离心过滤器装置浓缩所制备的上清液。在用超纯水洗涤三次之后，用含有0.1mnacl的50mmtris-hcl缓冲液(ph8.0)替换粗蛋白酶的缓冲液。纯化将2ml的浓缩溶液加载在用含有0.1mnacl的50mmtris-hcl缓冲液(ph8.0)平衡和洗脱的凝胶过滤柱(hiload16/600superdex200pg,gehealthcare)上。用180ml的缓冲液以1ml/min的流速洗脱所述柱，直到洗脱液在280nm处的光密度为零。收集各自3ml的洗脱级分，并分析蛋白酶活性。合并显示蛋白酶活性的级分，然后用于用含有0.1mnacl的50mmtris-hcl缓冲液(ph8.0)平衡的hitrapqff(1ml)离子交换柱。随后用相同的缓冲液冲洗柱，并用在0.1-1m范围内的线性梯度的nacl以1ml/min的流速洗脱结合的蛋白质。收集各自1ml的洗脱级分，并分析蛋白酶活性。合并含有蛋白酶活性的级分，并储存在-80℃下用于进一步研究。蛋白酶活性的测定用bca蛋白质分析试剂盒(sangonbiotech，上海，中国)，使用牛血清白蛋白(bsa)作为参照，测定蛋白质浓度。根据改良方法(lagzianandasoodeh，2012)测定蛋白酶活性。简而言之，在45℃下，用0.75ml的含有1％(w/v)酪蛋白的50mmtris-hcl缓冲液(ph8.0)培养0.25ml等分试样的纯化蛋白酶10分钟。通过加入0.5ml的20％(w/v)三氯乙酸(tca)终止该反应。将该混合物采用lab-dancer混合，并置于室温下20分钟。然后，通过以12,000rpm离心20分钟除去沉淀物，并在280nm处测量上清液的吸光度。一个单位(u)的蛋白酶活性定义为在实验条件下水解酪蛋白以每分钟释放1μg酪氨酸的酶的量。使用酪氨酸(0-100μg/ml)作为标准品计算蛋白酶活性单位。电泳、质谱、酶谱(zymography)和等电聚焦分子量采用bio-radmini-protein装置(farhadian等，2015)，根据标准方案，通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)，使用(5％，w/v)积层凝胶和(12％，w/v)分离凝胶，测定纯化蛋白酶的分子量。用考马斯亮蓝r-250染色该凝胶，并用甲醇-乙酸-水(5/1/4，v/v/v)去色。通过将其活动性与标准蛋白标志物进行比较，估计纯化酶的相对分子量。同时，使用flashdetectortm仪器(brukermicroflextmlrf，brukerdaltonics，usa)，通过基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(maldi-tof/ms)的方法，以线性正向模式分析纯化蛋白酶的精确分子质量。通过flexcontrol3.4收集数据，并用flexanalysis3.4软件分析。酶谱采用改良方法(machado等，2016)进行酶谱以使酶活性显现。简而言之，将样品与无β-巯基乙醇凝胶加载缓冲液混合，并在没有加热的情况下加载到电泳凝胶。在冰水中进行电泳。接着，将凝胶浸入在4℃下含有2.5％tritonx-100的50mmtris-hcl缓冲液(ph8.0)中，并轻轻振摇1小时以除去sds。为了萃取残余tritonx-100，在4℃下用50mmtris-hcl缓冲液(ph8.0)冲洗凝胶两次，每次20分钟，然后在25℃下，在50mmtris-hcl缓冲液(ph8.0)中与1％(w/v)酪蛋白一起培养1小时。将凝胶浸泡在20％(w/v)三氯乙酸(tca)中以终止蛋白酶反应，用考马斯亮蓝r-250染色2小时，并用甲醇-乙酸-水(5/1/4，v/v/v)过夜去色以显示蛋白酶水解带。等电聚焦使用multiphorii电泳系统(gehealthcare)，在具有3至10的固定ph梯度(ipg)的凝胶试纸条(bio-rad，usa)上进行纯化蛋白酶的等电聚焦。简而言之，使纯化蛋白酶脱盐，并通过超滤用1％甘氨酸缓冲液冲洗。在固定ipg试纸条之后，在15℃下在700v开始预电泳(pre-electrophoresis)20分钟。然后在15℃下，使样品和ief标准品进行在2000v下的电泳90分钟。最后，通过tca缓冲液处理来固定条带30分钟，用考马斯蓝r-250染色，并用甲醇-乙酸-水混合物去色。通过imagequanttlversion7.0软件评估纯化蛋白酶的pi值。n-端氨基酸序列测定根据matsudaira的方案(matsudaira，1987)，将通过sds-page纯化的蛋白酶转移到在caps缓冲液中的聚偏二氟乙烯(pvdf)膜。将pvdf膜用考马斯亮蓝r-250轻微染色，并切除含有酶的条带。接着，使用ppsq-21a蛋白质测序仪(shimadzu)，通过自动化edman降解法分析n-端氨基酸序列。使用blast同源性搜索(ncbi，usa)，将开头的20个氨基酸残基与uniprotkb/swiss-prot数据库和proteindatabank蛋白质数据库中的那些进行比对。潜在蛋白酶编码基因识别和三维结构建模小心地切除通过变性sds-page获得的含有蛋白酶的条带，并通过如公布的方案(marchand等，2009)中描述的串联质谱(maldims/ms)分析蛋白。使用缺省模式的tof/tofexplorertm软件(absciex)处理所有获得的样品光谱。使用具有搜索引擎mascot(2.3)的gpsexplorer(v3.6)针对ncbi数据库(非冗余蛋白质序列)搜索肽质量指纹(pmf)的识别。具有高于95％的蛋白质评分置信区间(c.i.)的蛋白质被认为是置信识别。基于mascot搜索结果、蛋白水解活性和分泌机制，选择候选蛋白质。为了通过pcr扩增蛋白酶的编码序列，通过dnaman软件对候选者的编码序列进行多重序列比对。根据上游和下游编码序列的保守区设计一对引物：5'-atgaaccaacaacgtcaactaagctg-3'和5'-cgggtcaatctaaacgcaacg-3'。使用大肠杆菌dh5a作为用于sanger测序的宿主菌株，将编码序列扩增和克隆到pmd18-t载体中。最后，将得到的核苷酸序列翻译为氨基酸序列，其是具有321个氨基酸残基的成熟蛋白酶。通过火焰原子吸收光谱确定纯化蛋白酶中的痕量金属。在迷你瓶中的洗涤研究在棉布e116(centrefortestmaterials-netherlands)上用血液/奶/墨染渍的棉布样品与棉压载物(cottonballast)一起用于迷你瓶洗涤。在洗瓶内一式三份施加污渍。使用水制备含有1g/l洗衣制剂(两种类型，标记为f1和f2)的fh26，加入蛋白酶(对照基准或耐盐的)至100ml总体积中5mg/l的浓度。该酶含量等于在制剂中0.5重量％蛋白酶的含量。所用对照基准是领先的商业蛋白酶材料(carnivalevity，来自novozymes)。为了复制盐水条件，也使用2％最终盐浓度(nacl)。在20℃和40℃下进行洗涤，以250rpm振摇1小时。在20℃下的洗涤显示本发明甚至在低温条件下的益处。在洗涤之后，从洗涤液分离污渍，在含有1lfh26水的烧杯中冲洗2x，之后静置干燥过夜。在干燥之后，对污渍板进行数字扫描，并测量它们的δe。该值用于表示清洁效果，定义为白布和在洗涤之后的染渍布之间的色差。在数学上，δe的定义为：其中δl为经洗涤的布和白色布之间的暗度差异的量度；δa和δb分别是两种布料之间的红色和黄色差异的量度。从这个等式清楚的是δe值越低，布料越白。关于这种颜色测量技术，参见国际照明委员会(commissioninternationaldel'eclairage)(cie)；recommendationonuniformcolourspaces,colourdifferenceequations,psychometriccolourterms,supplementno.2tociepublication,no.15,colormetry,bureaucentraldeiacie,paris1978。本文中，清洁效果以去污指数(sri)的形式表示：sri＝100-δesri越高，布越干净，sri＝100(白色)。使用的制剂制剂1(f1)(重量％)去矿物质水至100非离子表面活性剂(25-7)4.365tinopal5bmgx0.200acusolwr0.700tea8.820eulas酸5.820甘油2.000prifac59080.860dequest20101.500eusles4.365bit-proxel0.040柠檬酸1.000制剂2(f2)(重量％)去矿物质水至100％tinopalcbs-x0.090naoh0.457tea1.500柠檬酸0.400las酸(indiatuba)4.500epei2.325sles3eo(texaponn70lst)13.500epei0.775bit0.0200mit0.0095soladonala059-2012使用0.9800nacl1.5000capb1.5000将两种测试的酶加入到制剂1和2中以给出在制剂中为0.5重量％的有效酶含量。蛋白酶为：蛋白酶1(比较)＝carnivalevity，其是来自novozymes的可商购酶。蛋白酶2(根据本发明)＝具有与seqidno:1100％一致性的蛋白酶结果显示在表1中。sri越高(去污指数)，则清洁越好。洗涤研究的结果显示，如所预期的，在所有洗涤环境(在20℃和40℃两者下，以及在不同制剂中)中，两种蛋白酶都给出了超过仅有对照的制剂的清洁益处。在20℃下的洗涤研究显示甚至在低温洗涤条件(20℃)下的改善的清洁的增加的益处。在含有2％盐(nacl)的fh26水中，该耐盐性蛋白酶的性能益处显然是明显的。在20℃和40℃两者下，该耐盐性蛋白酶在制剂1和2两者中胜过对照商业蛋白酶。由该耐盐性蛋白酶引起的清洁益处(高于基准蛋白酶1)在不含有螯合剂(其在制剂1中存在)的洗衣制剂2中甚至更值得注意。有趣地是，在20℃洗涤温度下，所述性能益处得到极大改善，其进一步起到突出该技术在海水条件中改善污渍清洁的潜在适用性的作用。当前第1页12