本发明属于微生物制剂领域，具体涉及一种除臭复合生物酶的制备方法。
背景技术：
：目前，常用的除臭剂主要有以下几种类型物理除臭剂、化学除臭剂、微生物型除臭剂、植物型除臭剂和复合型除臭剂等。物理除臭剂是通过物理方法进行除臭，利用除臭剂或者臭气的物理性质，不改变臭气组分的结果，只改变臭气的局部浓度，或者说是相对浓度。常见的有吸附除臭剂、遮掩除臭剂等。缺点是很难完全改变臭气气体成分，对人畜、设备和环境等仍有一定程度的损害。化学除臭剂是利用氧化、还原分解、中和反应、加成反应、缩合反应、离子交换反应等将产生的恶臭物质变为无臭物质从而消除臭气。缺点是投资大，运营成本相对较高，特别是化学反应后的产物有造成新不可控的环境污染的可能性。近年来由于化学合成除臭剂造成的污染引发的病例时有发生，有的人在喷洒过香水或含有芳香的除臭剂的环境中待上一段时间，会出现皮肤瘙痒、头晕及咳嗽等症状，严重的甚至会突发哮喘。有的人一接触某些芳香型除臭剂便会出现瘙痒难忍的皮炎，甚至恶心、呕吐。这些都与化学除臭剂的污染有关。技术实现要素：本发明提出了一种除臭复合生物酶的制备方法，该方法简单、成本低、无毒无害、无二次污染，能产生一种用于生物降解的全天然广谱复合型生物酶除臭剂。本发明的技术方案是这样实现的：一种除臭复合生物酶的制备方法，其包括以下步骤：（1）培养基准备：将玉米粉、豆饼粉、麸皮、糠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钾以3-5%：2-4%：2.5-4%：0.5-2%：0.2-0.5%：0.01-0.05%的比例调制成ph7.0的溶液，作为酵母中性蛋白酶发酵培养基一，将酵母菌接种于培养基一在35度下培养，得到酵母菌液，即液体一；将葡萄糖、酵母膏和琼脂以8-11%：0.5-2%：0.5-2.5%的比例配置，再加入蒸馏水调制成ph6.8的溶液，作为醋酸菌培养基二，将醋酸菌接种于培养基二在31度条件下培养，得到醋酸菌液，即液体二；将葡萄糖8-11g，酵母膏6-9g，蛋白胨6-9g，西红柿汁90-110ml，tween-800.2-1ml和蒸馏水调制成900ml的ph7.0的溶液，作为乳酸菌培养基三，将乳酸菌接种于培养基三在35度条件下培养，得到乳酸菌液体，即液体三；（2）原料处理：将尾菜和果皮等进行清理去掉腐败变质部分，将清理后的尾菜和果皮等进行清洗；（3）配料：将清洗后的尾菜和果皮等进行打浆，得到原料一，以红糖7%作为碳源，即原料二，尿素0.2%作为氮源，即原料三，将71%的经过过滤的自来水和22%的原料一，原料二，原料三混合制备成基础原材料；（4）灭菌：将发酵罐放进用乙酸ph调至3.0的溶液中浸泡8小时，进行消毒；（5）发酵：将过滤过的自来水加入发酵罐放置12小时，每4小时搅拌20分钟，将基础原材料加入到发酵罐同时开始升温，在发酵罐升温至35度时将液体一以0.2%容量加入发酵罐继续发酵，此处为第一阶段发酵，酵母菌发酵阶段将大分子分解成小分子，把淀粉分解成二氧化碳和酒精，也叫糖化；发酵10小时后将液体二以0.2%容量加入发酵罐继续发酵，此处为第二阶段发酵，醋酸发酵阶段将酒精分解掉，也叫醋化；发酵18小时后将液体三以0.2%容量加入发酵罐中继续发酵，此处为乳酸菌发酵阶段，乳酸在反应作用下产生益生菌，也叫熟化；继续发酵120小时，此处为代谢阶段，益生菌产生代谢物，主要为各种蛋白质，氨基酸等复合成分；再继续发酵120小时后检测发酵液ph值，ph值降到3.5以下，无其他异味则发酵结束；（6）提取成品：将发酵产生的液体和固体分离出来，将液体放入离心机中，分离出悬浮物和其他残渣，将离心机中分离的液体通过分子量为15000的透析膜再次过滤，得到澄清的液体成品。在本发明的除臭复合生物酶的制备方法中，步骤（1）中所述的培养基一的组分为：玉米粉4%，豆饼粉3%，麸皮3.2%，糠1%，磷酸氢二钠0.4%和磷酸二氢钾0.03%。在本发明的除臭复合生物酶的制备方法中，步骤（1）中所述的培养基二的组分为：葡萄糖10%，酵母膏1%，琼脂1.5%和蒸馏水。在本发明的除臭复合生物酶的制备方法中，步骤（1）中所述的培养基三的组分为：葡萄糖10g，酵母膏7.5g，蛋白胨7.5g，西红柿汁100ml，tween-800.5ml和蒸馏水。实施本发明的这种除臭复合生物酶的制备方法，具有以下有益效果：1、该方法产生的除臭剂相比于传统的化学除臭除臭剂，具有安全无毒、无环境污染等优点，具有良好的开发应用前景。2、该方法产生的除臭剂相比于传统的物理除臭除臭剂，能够从物质结构上改变污染气体，达到消除污染物的目的。3、该方法所用的几种主要原料，具有来源丰富、廉价和可再生等特点。4、该方法所用的仪器设备均为化学领域的常用仪器设备，设备简单，操作简便，反应所需条件温和。具体实施方式下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例1除臭复合生物酶的制备方法一、培养基准备：将玉米粉4%，豆饼粉3%，麸皮3.2%，糠1%，磷酸氢二钠0.4%和磷酸二氢钾0.03%调制成ph7.0的溶液，作为酵母中性蛋白酶发酵培养基一，将酵母菌接种于培养基一在35度下培养，得到酵母菌液，即液体一；将葡萄糖10%，酵母膏1%，琼脂1.5%和蒸馏水调制成ph6.8的溶液，作为醋酸菌培养基二，将醋酸菌接种于培养基二在31度条件下培养，得到醋酸菌液，即液体二；将葡萄糖10g，酵母膏7.5g，蛋白胨7.5g，西红柿汁100ml，tween-800.5ml和蒸馏水调制成900ml的ph7.0的溶液，作为乳酸菌培养基三，将乳酸菌接种于培养基三在35度条件下培养，得到乳酸菌液体，即液体三；二、原料处理：将尾菜和果皮等进行清理去掉腐败变质部分，将清理后的尾菜和果皮等进行清洗；三、配料：将清洗后的尾菜和果皮等进行打浆，得到原料一，以红糖7%作为碳源，即原料二，尿素0.2%作为氮源，即原料三，将71%的经过过滤的自来水和22%的原料一，原料二，原料三混合制备成基础原材料；四、灭菌：将发酵罐放进用乙酸ph调至3.0的溶液中浸泡8小时，进行消毒；五、发酵：将过滤过的自来水加入发酵罐放置12小时，每4小时搅拌20分钟，将基础原材料加入到发酵罐同时开始升温，在发酵罐升温至35度时将液体一以0.2%容量加入发酵罐继续发酵，此处为第一阶段发酵，酵母菌发酵阶段将大分子分解成小分子，把淀粉分解成二氧化碳和酒精，也叫糖化；发酵10小时后将液体二以0.2%容量加入发酵罐继续发酵，此处为第二阶段发酵，醋酸发酵阶段将酒精分解掉，也叫醋化；发酵18小时后将液体三以0.2%容量加入发酵罐中继续发酵，此处为乳酸菌发酵阶段，乳酸在反应作用下产生益生菌，也叫熟化；继续发酵120小时，此处为代谢阶段，益生菌产生代谢物，主要为各种蛋白质，氨基酸等复合成分；再继续发酵120小时后检测发酵液ph值，ph值降到3.5以下，无其他异味则发酵结束；六、提取成品：将发酵产生的液体和固体分离出来，将液体放入离心机中，分离出悬浮物和其他残渣，将离心机中分离的液体通过分子量为15000的透析膜再次过滤，得到澄清的液体成品。实施例2除臭测试测试方法：将本发明的除臭复合生物酶按照1：1500的比例进行稀释，得到稀释后的本发明除臭剂，将等量的本发明除臭剂分别加入两个自动喷雾装置中，再将自动喷雾装置分别放置于医废堆置间和公厕中，进行连续自动喷雾式除臭，分别于5、10分钟后测试医废堆置间和公厕中的除臭率。测试结果如下：表1地点时间（min）除臭率（%）时间（min）除臭率（%）医废堆置间586.3%1096.7%公厕587.82%1098%表1为本发明除臭剂对医废堆置间和公厕的除臭结果，结果可见，本发明除臭剂对日常环境中的排泄物、垃圾味、霉菌味、腐烂味等各种异味都起到作用，具有高效的除臭效果，且快速有效。实施例2皮肤刺激性测试测试方法：《化妆品安全技术规范（2015）》国家食品药品监督管理总局测试样品：本发明除臭剂1.动物：普通新西兰白兔5只，体重2.0-3.0kg2.试验环境：普通级兔房，环境温度18-23度，相对湿度45-65%。实验步骤：试验前24小时，去除实验同屋背部脊柱两侧部位毛，避免损伤皮肤，去毛范围3cmx3cm；去受试样品0.5ml涂布于一侧的测试皮肤，采用封闭试验，4小时后去除敷料，用温水清洗接触部位。分别于清除受试物后24、48、72小时观察皮肤的红斑和水肿反应。测试结果如下：表2表2中样品为受试样品，即本发明的除臭剂，对照为未接种微生物的培养基。表2结果可见，各观察时点最高皮肤刺激积分均为0，说明本发明除臭剂对家兔皮肤的刺激强度属无刺激性。实施例3急性经口毒性试验测试方法：《化妆品安全技术规范（2015）》国家食品药品监督管理总局测试样品：本发明除臭剂1.实验动物：km小鼠，spf级，体重18-22g。2.检测环境：spf动物房，室温20-22度，相对湿度45-60%。3.试验步骤：按随机选择动物进行分组，受试钱动物禁食过夜16小时。采用一次限量法，灌胃剂量为5.0g/kg,灌胃容量按20mg/kg.bw计。每天2次观察动物一般状态、中毒状态、行为变化状态和死亡情况，每3天称重一次。对中毒死亡动物和染毒后14天存活动物做答题病例观察。测试结果如下：表3表3为本发明除臭剂对小鼠急性经口毒性试验结果，结果可见，实验动物在染毒后观察期内未见任何中毒症状和中毒死亡，雌雄动物体重增长未见异常。实验观察结束，对受试动物进行大体病理解刨检查也未见异常变化。以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围。当前第1页12