一种用于嗜酸乳杆菌氨基酸需求的筛查方法与流程

本发明涉及生物技术领域，具体地说是一种用于嗜酸乳杆菌氨基酸需求的筛查方法。

背景技术：

嗜酸乳杆菌是常见的益生菌，并具有许多的益生功能，如调节肠道健康，抗氧化，抗真菌等，并且具有良好的耐酸，耐胆盐能力，可以在肠道内存活。嗜酸乳杆菌市场需求巨大，嗜酸乳杆菌的高密度发酵是生产高活菌数嗜酸乳杆菌产品的重要课题。嗜酸乳杆菌营养需求复杂，不同嗜酸乳杆菌菌株氨基酸营养需求差异大，目前尚无嗜酸乳杆菌氨基酸营养需求筛查的技术的报道。现有的考察嗜酸乳杆菌营养需求的文献方法是通过配比碳源，无机盐，氨基酸，生长因子等实现。由于嗜酸乳杆菌生长因子包括嘌呤，嘧啶和维生素等十多种营养物质，制备复杂，成本较高，大部分营养物质特别是嘌呤和嘧啶等不是企业生产中的通用原料，不适合企业针对嗜酸乳杆菌氨基酸营养需求的大规模筛选。

技术实现要素：

本发明为克服现有技术的不足，提供一种用于嗜酸乳杆菌氨基酸需求的筛查方法，其原理是以mrs培养基成分为基础营养框架，将其中的氮源全部用19种氨基酸替代，并以一定浓度的酵母提取物作为生长因子，通过少添加19种氨基酸中某的一种氨基酸，制得一系列培养基，考察系列培养基对嗜酸乳杆菌菌株的生长影响，通过最终od600和ph对比，可以确定不同嗜酸乳杆菌的氨基酸特殊需求。

为实现上述目的，设计一种用于嗜酸乳杆菌氨基酸需求的筛查方法，包括基础培养基、对照培养基、缺陷考察培养基，其特征在于：具体步骤如下：

(1)制作基础培养基；

(2)将-80℃冷冻保藏的嗜酸乳杆菌菌株接种于基础培养基，并在37℃的温度下培养12小时；

(3)活化的种子培养基以1％的接种量取液，离心去培养基，再等量无菌水重悬待接种；

(4)制作对照培养基，调整培养基ph值为6.5±0.1，在121℃的温度下灭菌20分钟；

(5)将步骤(3)中准备好的种子以1～2％比例接种，在37℃的温度下培养16小时；

(6)在制作对照培养基的同时，分别制作19个分别缺失19种氨基酸当中的一种氨基酸的缺陷考察培养基；

(7)制作缺陷考察培养基，调整培养基ph值为6.5±0.1，在121℃的温度下灭菌20分钟；

(8)将步骤(3)中准备好的种子以1～2％比例接种，在37℃的温度下培养16小时；

(9)观察各项数据，并保存。

所述的基础培养基由葡萄糖：20g/l、蛋白胨：10g/l、牛肉浸粉：10g/l、酵母膏：5g/l、磷酸氢二钾：2g/l、柠檬酸氢二胺：2g/l、乙酸钠：5g/l、七水硫酸镁：0.25g/l、一水硫酸锰：0.05g/l、吐温－80：1g/l组成。

所述的对照培养基由葡萄糖：20～30g/l、酵母膏：0.1～0.25g/l、色氨酸：0.1g/l、天冬酰胺：0.1g/l、异亮氨酸：0.1g/l、赖氨酸：0.1g/l、甘氨酸：0.1g/l、亮氨酸：0.1g/l、丝氨酸：0.1g/l、组氨酸：0.1g/l、酪氨酸：0.1g/l、半胱氨酸：0.1g/l、缬氨酸：0.1g/l、苯丙氨酸：0.1g/l、天冬氨酸：0.1g/l、谷氨酸：0.1g/l、苏氨酸：0.1g/l、丙氨酸：0.1g/l、甲硫氨酸：0.1g/l、脯氨酸：0.1g/l、精氨酸：0.1g/l、磷酸氢二钾：2g/l、柠檬酸氢二胺：2g/l、乙酸钠：5g/l、七水硫酸镁：0.25g/l、一水硫酸锰：0.05g/l、吐温－80：1g/l组成。

所述的缺陷考察培养基包括色氨酸缺陷考察培养基、天冬酰胺缺陷考察培养基、异亮氨酸缺陷考察培养基、赖氨酸缺陷考察培养基、甘氨酸缺陷考察培养基、亮氨酸缺陷考察培养基、丝氨酸缺陷考察培养基、组氨酸缺陷考察培养基、酪氨酸缺陷考察培养基、半胱氨酸缺陷考察培养基、缬氨酸缺陷考察培养基、苯丙氨酸缺陷考察培养基、天冬氨酸缺陷考察培养基、谷氨酸缺陷考察培养基、苏氨酸缺陷考察培养基、丙氨酸缺陷考察培养基、甲硫氨酸缺陷考察培养基、脯氨酸缺陷考察培养基、精氨酸缺陷考察培养基；

所述的色氨酸缺陷考察培养基由葡萄糖：20～30g/l、酵母膏：0.1～0.25g/l、色氨酸：0g/l、天冬酰胺：0.1g/l、异亮氨酸：0.1g/l、赖氨酸：0.1g/l、甘氨酸：0.1g/l、亮氨酸：0.1g/l、丝氨酸：0.1g/l、组氨酸：0.1g/l、酪氨酸：0.1g/l、半胱氨酸：0.1g/l、缬氨酸：0.1g/l、苯丙氨酸：0.1g/l、天冬氨酸：0.1g/l、谷氨酸：0.1g/l、苏氨酸：0.1g/l、丙氨酸：0.1g/l、甲硫氨酸：0.1g/l、脯氨酸：0.1g/l、精氨酸：0.1g/l、磷酸氢二钾：2g/l、柠檬酸氢二胺：2g/l、乙酸钠：5g/l、七水硫酸镁：0.25g/l、一水硫酸锰：0.05g/l、吐温－80：1g/l组成；

所述的天冬酰胺缺陷考察培养基由葡萄糖：20～30g/l、酵母膏：0.1～0.25g/l、色氨酸：0.1g/l、天冬酰胺：0g/l、异亮氨酸：0.1g/l、赖氨酸：0.1g/l、甘氨酸：0.1g/l、亮氨酸：0.1g/l、丝氨酸：0.1g/l、组氨酸：0.1g/l、酪氨酸：0.1g/l、半胱氨酸：0.1g/l、缬氨酸：0.1g/l、苯丙氨酸：0.1g/l、天冬氨酸：0.1g/l、谷氨酸：0.1g/l、苏氨酸：0.1g/l、丙氨酸：0.1g/l、甲硫氨酸：0.1g/l、脯氨酸：0.1g/l、精氨酸：0.1g/l、磷酸氢二钾：2g/l、柠檬酸氢二胺：2g/l、乙酸钠：5g/l、七水硫酸镁：0.25g/l、一水硫酸锰：0.05g/l、吐温－80：1g/l组成；

所述的异亮氨酸缺陷考察培养基由葡萄糖：20～30g/l、酵母膏：0.1～0.25g/l、色氨酸：0.1g/l、天冬酰胺：0.1g/l、异亮氨酸：0g/l、赖氨酸：0.1g/l、甘氨酸：0.1g/l、亮氨酸：0.1g/l、丝氨酸：0.1g/l、组氨酸：0.1g/l、酪氨酸：0.1g/l、半胱氨酸：0.1g/l、缬氨酸：0.1g/l、苯丙氨酸：0.1g/l、天冬氨酸：0.1g/l、谷氨酸：0.1g/l、苏氨酸：0.1g/l、丙氨酸：0.1g/l、甲硫氨酸：0.1g/l、脯氨酸：0.1g/l、精氨酸：0.1g/l、磷酸氢二钾：2g/l、柠檬酸氢二胺：2g/l、乙酸钠：5g/l、七水硫酸镁：0.25g/l、一水硫酸锰：0.05g/l、吐温－80：1g/l组成；

所述的赖氨酸缺陷考察培养基由葡萄糖：20～30g/l、酵母膏：0.1～0.25g/l、色氨酸：0.1g/l、天冬酰胺：0.1g/l、异亮氨酸：0.1g/l、赖氨酸：0.1g/l、甘氨酸：0g/l、亮氨酸：0.1g/l、丝氨酸：0.1g/l、组氨酸：0.1g/l、酪氨酸：0.1g/l、半胱氨酸：0.1g/l、缬氨酸：0.1g/l、苯丙氨酸：0.1g/l、天冬氨酸：0.1g/l、谷氨酸：0.1g/l、苏氨酸：0.1g/l、丙氨酸：0.1g/l、甲硫氨酸：0.1g/l、脯氨酸：0.1g/l、精氨酸：0.1g/l、磷酸氢二钾：2g/l、柠檬酸氢二胺：2g/l、乙酸钠：5g/l、七水硫酸镁：0.25g/l、一水硫酸锰：0.05g/l、吐温－80：1g/l组成；

所述的甘氨酸缺陷考察培养基由葡萄糖：20～30g/l、酵母膏：0.1～0.25g/l、色氨酸：0.1g/l、天冬酰胺：0.1g/l、异亮氨酸：0.1g/l、赖氨酸：0.1g/l、甘氨酸：0g/l、亮氨酸：0.1g/l、丝氨酸：0.1g/l、组氨酸：0.1g/l、酪氨酸：0.1g/l、半胱氨酸：0.1g/l、缬氨酸：0.1g/l、苯丙氨酸：0.1g/l、天冬氨酸：0.1g/l、谷氨酸：0.1g/l、苏氨酸：0.1g/l、丙氨酸：0.1g/l、甲硫氨酸：0.1g/l、脯氨酸：0.1g/l、精氨酸：0.1g/l、磷酸氢二钾：2g/l、柠檬酸氢二胺：2g/l、乙酸钠：5g/l、七水硫酸镁：0.25g/l、一水硫酸锰：0.05g/l、吐温－80：1g/l组成；

所述的亮氨酸缺陷考察培养基由葡萄糖：20～30g/l、酵母膏：0.1～0.25g/l、色氨酸：0.1g/l、天冬酰胺：0.1g/l、异亮氨酸：0.1g/l、赖氨酸：0.1g/l、甘氨酸：0.1g/l、亮氨酸：0g/l、丝氨酸：0.1g/l、组氨酸：0.1g/l、酪氨酸：0.1g/l、半胱氨酸：0.1g/l、缬氨酸：0.1g/l、苯丙氨酸：0.1g/l、天冬氨酸：0.1g/l、谷氨酸：0.1g/l、苏氨酸：0.1g/l、丙氨酸：0.1g/l、甲硫氨酸：0.1g/l、脯氨酸：0.1g/l、精氨酸：0.1g/l、磷酸氢二钾：2g/l、柠檬酸氢二胺：2g/l、乙酸钠：5g/l、七水硫酸镁：0.25g/l、一水硫酸锰：0.05g/l、吐温－80：1g/l组成；

所述的丝氨酸缺陷考察培养基由葡萄糖：20～30g/l、酵母膏：0.1～0.25g/l、色氨酸：0.1g/l、天冬酰胺：0.1g/l、异亮氨酸：0.1g/l、赖氨酸：0.1g/l、甘氨酸：0.1g/l、亮氨酸：0.1g/l、丝氨酸：0g/l、组氨酸：0.1g/l、酪氨酸：0.1g/l、半胱氨酸：0.1g/l、缬氨酸：0.1g/l、苯丙氨酸：0.1g/l、天冬氨酸：0.1g/l、谷氨酸：0.1g/l、苏氨酸：0.1g/l、丙氨酸：0.1g/l、甲硫氨酸：0.1g/l、脯氨酸：0.1g/l、精氨酸：0.1g/l、磷酸氢二钾：2g/l、柠檬酸氢二胺：2g/l、乙酸钠：5g/l、七水硫酸镁：0.25g/l、一水硫酸锰：0.05g/l、吐温－80：1g/l组成；

所述的组氨酸缺陷考察培养基由葡萄糖：20～30g/l、酵母膏：0.1～0.25g/l、色氨酸：0.1g/l、天冬酰胺：0.1g/l、异亮氨酸：0.1g/l、赖氨酸：0.1g/l、甘氨酸：0.1g/l、亮氨酸：0.1g/l、丝氨酸：0.1g/l、组氨酸：0g/l、酪氨酸：0.1g/l、半胱氨酸：0.1g/l、缬氨酸：0.1g/l、苯丙氨酸：0.1g/l、天冬氨酸：0.1g/l、谷氨酸：0.1g/l、苏氨酸：0.1g/l、丙氨酸：0.1g/l、甲硫氨酸：0.1g/l、脯氨酸：0.1g/l、精氨酸：0.1g/l、磷酸氢二钾：2g/l、柠檬酸氢二胺：2g/l、乙酸钠：5g/l、七水硫酸镁：0.25g/l、一水硫酸锰：0.05g/l、吐温－80：1g/l组成；

所述的酪氨酸缺陷考察培养基由葡萄糖：20～30g/l、酵母膏：0.1～0.25g/l、色氨酸：0.1g/l、天冬酰胺：0.1g/l、异亮氨酸：0.1g/l、赖氨酸：0.1g/l、甘氨酸：0.1g/l、亮氨酸：0.1g/l、丝氨酸：0.1g/l、组氨酸：0.1g/l、酪氨酸：0g/l、半胱氨酸：0.1g/l、缬氨酸：0.1g/l、苯丙氨酸：0.1g/l、天冬氨酸：0.1g/l、谷氨酸：0.1g/l、苏氨酸：0.1g/l、丙氨酸：0.1g/l、甲硫氨酸：0.1g/l、脯氨酸：0.1g/l、精氨酸：0.1g/l、磷酸氢二钾：2g/l、柠檬酸氢二胺：2g/l、乙酸钠：5g/l、七水硫酸镁：0.25g/l、一水硫酸锰：0.05g/l、吐温－80：1g/l组成；

所述的半胱氨酸缺陷考察培养基由葡萄糖：20～30g/l、酵母膏：0.1～0.25g/l、色氨酸：0.1g/l、天冬酰胺：0.1g/l、异亮氨酸：0.1g/l、赖氨酸：0.1g/l、甘氨酸：0.1g/l、亮氨酸：0.1g/l、丝氨酸：0.1g/l、组氨酸：0.1g/l、酪氨酸：0.1g/l、半胱氨酸：0g/l、缬氨酸：0.1g/l、苯丙氨酸：0.1g/l、天冬氨酸：0.1g/l、谷氨酸：0.1g/l、苏氨酸：0.1g/l、丙氨酸：0.1g/l、甲硫氨酸：0.1g/l、脯氨酸：0.1g/l、精氨酸：0.1g/l、磷酸氢二钾：2g/l、柠檬酸氢二胺：2g/l、乙酸钠：5g/l、七水硫酸镁：0.25g/l、一水硫酸锰：0.05g/l、吐温－80：1g/l组成；

所述的缬氨酸缺陷考察培养基由葡萄糖：20～30g/l、酵母膏：0.1～0.25g/l、色氨酸：0.1g/l、天冬酰胺：0.1g/l、异亮氨酸：0.1g/l、赖氨酸：0.1g/l、甘氨酸：0.1g/l、亮氨酸：0.1g/l、丝氨酸：0.1g/l、组氨酸：0.1g/l、酪氨酸：0.1g/l、半胱氨酸：0.1g/l、缬氨酸：0g/l、苯丙氨酸：0.1g/l、天冬氨酸：0.1g/l、谷氨酸：0.1g/l、苏氨酸：0.1g/l、丙氨酸：0.1g/l、甲硫氨酸：0.1g/l、脯氨酸：0.1g/l、精氨酸：0.1g/l、磷酸氢二钾：2g/l、柠檬酸氢二胺：2g/l、乙酸钠：5g/l、七水硫酸镁：0.25g/l、一水硫酸锰：0.05g/l、吐温－80：1g/l组成；

所述的苯丙氨酸缺陷考察培养基由葡萄糖：20～30g/l、酵母膏：0.1～0.25g/l、色氨酸：0.1g/l、天冬酰胺：0.1g/l、异亮氨酸：0.1g/l、赖氨酸：0.1g/l、甘氨酸：0.1g/l、亮氨酸：0.1g/l、丝氨酸：0.1g/l、组氨酸：0.1g/l、酪氨酸：0.1g/l、半胱氨酸：0.1g/l、缬氨酸：0.1g/l、苯丙氨酸：0g/l、天冬氨酸：0.1g/l、谷氨酸：0.1g/l、苏氨酸：0.1g/l、丙氨酸：0.1g/l、甲硫氨酸：0.1g/l、脯氨酸：0.1g/l、精氨酸：0.1g/l、磷酸氢二钾：2g/l、柠檬酸氢二胺：2g/l、乙酸钠：5g/l、七水硫酸镁：0.25g/l、一水硫酸锰：0.05g/l、吐温－80：1g/l组成；

所述的天冬氨酸缺陷考察培养基由葡萄糖：20～30g/l、酵母膏：0.1～0.25g/l、色氨酸：0.1g/l、天冬酰胺：0.1g/l、异亮氨酸：0.1g/l、赖氨酸：0.1g/l、甘氨酸：0.1g/l、亮氨酸：0.1g/l、丝氨酸：0.1g/l、组氨酸：0.1g/l、酪氨酸：0.1g/l、半胱氨酸：0.1g/l、缬氨酸：0.1g/l、苯丙氨酸：0.1g/l、天冬氨酸：0g/l、谷氨酸：0.1g/l、苏氨酸：0.1g/l、丙氨酸：0.1g/l、甲硫氨酸：0.1g/l、脯氨酸：0.1g/l、精氨酸：0.1g/l、磷酸氢二钾：2g/l、柠檬酸氢二胺：2g/l、乙酸钠：5g/l、七水硫酸镁：0.25g/l、一水硫酸锰：0.05g/l、吐温－80：1g/l组成；

所述的谷氨酸缺陷考察培养基由葡萄糖：20～30g/l、酵母膏：0.1～0.25g/l、色氨酸：0.1g/l、天冬酰胺：0.1g/l、异亮氨酸：0.1g/l、赖氨酸：0.1g/l、甘氨酸：0.1g/l、亮氨酸：0.1g/l、丝氨酸：0.1g/l、组氨酸：0.1g/l、酪氨酸：0.1g/l、半胱氨酸：0.1g/l、缬氨酸：0.1g/l、苯丙氨酸：0.1g/l、天冬氨酸：0.1g/l、谷氨酸：0g/l、苏氨酸：0.1g/l、丙氨酸：0.1g/l、甲硫氨酸：0.1g/l、脯氨酸：0.1g/l、精氨酸：0.1g/l、磷酸氢二钾：2g/l、柠檬酸氢二胺：2g/l、乙酸钠：5g/l、七水硫酸镁：0.25g/l、一水硫酸锰：0.05g/l、吐温－80：1g/l组成；

所述的苏氨酸缺陷考察培养基由葡萄糖：20～30g/l、酵母膏：0.1～0.25g/l、色氨酸：0.1g/l、天冬酰胺：0.1g/l、异亮氨酸：0.1g/l、赖氨酸：0.1g/l、甘氨酸：0.1g/l、亮氨酸：0.1g/l、丝氨酸：0.1g/l、组氨酸：0.1g/l、酪氨酸：0.1g/l、半胱氨酸：0.1g/l、缬氨酸：0.1g/l、苯丙氨酸：0.1g/l、天冬氨酸：0.1g/l、谷氨酸：0.1g/l、苏氨酸：0g/l、丙氨酸：0.1g/l、甲硫氨酸：0.1g/l、脯氨酸：0.1g/l、精氨酸：0.1g/l、磷酸氢二钾：2g/l、柠檬酸氢二胺：2g/l、乙酸钠：5g/l、七水硫酸镁：0.25g/l、一水硫酸锰：0.05g/l、吐温－80：1g/l组成；

所述的丙氨酸缺陷考察培养基由葡萄糖：20～30g/l、酵母膏：0.1～0.25g/l、色氨酸：0.1g/l、天冬酰胺：0.1g/l、异亮氨酸：0.1g/l、赖氨酸：0.1g/l、甘氨酸：0.1g/l、亮氨酸：0.1g/l、丝氨酸：0.1g/l、组氨酸：0.1g/l、酪氨酸：0.1g/l、半胱氨酸：0.1g/l、缬氨酸：0.1g/l、苯丙氨酸：0.1g/l、天冬氨酸：0.1g/l、谷氨酸：0.1g/l、苏氨酸：0.1g/l、丙氨酸：0g/l、甲硫氨酸：0.1g/l、脯氨酸：0.1g/l、精氨酸：0.1g/l、磷酸氢二钾：2g/l、柠檬酸氢二胺：2g/l、乙酸钠：5g/l、七水硫酸镁：0.25g/l、一水硫酸锰：0.05g/l、吐温－80：1g/l组成；

所述的甲硫氨酸缺陷考察培养基由葡萄糖：20～30g/l、酵母膏：0.1～0.25g/l、色氨酸：0.1g/l、天冬酰胺：0.1g/l、异亮氨酸：0.1g/l、赖氨酸：0.1g/l、甘氨酸：0.1g/l、亮氨酸：0.1g/l、丝氨酸：0.1g/l、组氨酸：0.1g/l、酪氨酸：0.1g/l、半胱氨酸：0.1g/l、缬氨酸：0.1g/l、苯丙氨酸：0.1g/l、天冬氨酸：0.1g/l、谷氨酸：0.1g/l、苏氨酸：0.1g/l、丙氨酸：0.1g/l、甲硫氨酸：0g/l、脯氨酸：0.1g/l、精氨酸：0.1g/l、磷酸氢二钾：2g/l、柠檬酸氢二胺：2g/l、乙酸钠：5g/l、七水硫酸镁：0.25g/l、一水硫酸锰：0.05g/l、吐温－80：1g/l组成；

所述的脯氨酸缺陷考察培养基由葡萄糖：20～30g/l、酵母膏：0.1～0.25g/l、色氨酸：0.1g/l、天冬酰胺：0.1g/l、异亮氨酸：0.1g/l、赖氨酸：0.1g/l、甘氨酸：0.1g/l、亮氨酸：0.1g/l、丝氨酸：0.1g/l、组氨酸：0.1g/l、酪氨酸：0.1g/l、半胱氨酸：0.1g/l、缬氨酸：0.1g/l、苯丙氨酸：0.1g/l、天冬氨酸：0.1g/l、谷氨酸：0.1g/l、苏氨酸：0.1g/l、丙氨酸：0.1g/l、甲硫氨酸：0.1g/l、脯氨酸：0g/l、精氨酸：0.1g/l、磷酸氢二钾：2g/l、柠檬酸氢二胺：2g/l、乙酸钠：5g/l、七水硫酸镁：0.25g/l、一水硫酸锰：0.05g/l、吐温－80：1g/l组成；

所述的精氨酸缺陷考察培养基由葡萄糖：20～30g/l、酵母膏：0.1～0.25g/l、色氨酸：0.1g/l、天冬酰胺：0.1g/l、异亮氨酸：0.1g/l、赖氨酸：0.1g/l、甘氨酸：0.1g/l、亮氨酸：0.1g/l、丝氨酸：0.1g/l、组氨酸：0.1g/l、酪氨酸：0.1g/l、半胱氨酸：0.1g/l、缬氨酸：0.1g/l、苯丙氨酸：0.1g/l、天冬氨酸：0.1g/l、谷氨酸：0.1g/l、苏氨酸：0.1g/l、丙氨酸：0.1g/l、甲硫氨酸：0.1g/l、脯氨酸：0.1g/l、精氨酸：0g/l、磷酸氢二钾：2g/l、柠檬酸氢二胺：2g/l、乙酸钠：5g/l、七水硫酸镁：0.25g/l、一水硫酸锰：0.05g/l、吐温－80：1g/l组成。

所述的19种氨基酸为色氨酸、天冬酰胺、异亮氨酸、赖氨酸、甘氨酸、亮氨酸、丝氨酸、组氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苏氨酸、丙氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、精氨酸。

所述的氨基酸需求判定标准为强烈需求：od值低于对照0.3及以上，且ph值不低于对照ph0.15；一般满足：od值介于对照0.1之内，且ph值介于对照0.1之内；强烈抑制：od值高于对照0.3及以上，且ph值不高于对照ph0.1；易缺乏：生长情形在强烈需求、一般满足、强烈抑制等三种情况之外，od值低于对照；易过量：生长情形在强烈需求、一般满足、强烈抑制等三种情况之外，od值高于对照。

所述的基础培养基、对照培养基、缺陷考察培养基放置在盒体内，盒体为长方体结构，盒体上设有盒盖，盒体内设有长方形的凹槽，凹槽内从前至后依次布置mrs培养基溶液槽、试验溶液瓶，所述的试验溶液瓶共有20个，并且分成两排布置；位于mrs培养基溶液槽、试验溶液瓶的周边围绕设有衬垫，位于试验溶液瓶后侧的盒体内设有96孔板。

所述的mrs培养基溶液槽为长方体凹槽结构。

所述的试验溶液瓶为圆柱形瓶结构。

所述的mrs培养基溶液槽、试验溶液瓶及衬垫组成1个试验组，并且在盒体内至少设有4个试验组。

本发明同现有技术相比，提供一种用于嗜酸乳杆菌氨基酸需求的筛查方法，其原理是以mrs培养基成分为基础营养框架，将其中的氮源全部用19种氨基酸替代，并以一定浓度的酵母提取物作为生长因子，通过少添加19种氨基酸中某的一种氨基酸，制得一系列培养基，考察系列培养基对嗜酸乳杆菌菌株的生长影响，通过最终od600和ph对比，可以确定不同嗜酸乳杆菌的氨基酸特殊需求。

本方法用一定低浓度酵母膏代替生长因子，大大简化培养基配制，并降低实验成本；本方法采用原料易得，适合企业研发使用；本方法综合od600和ph对比，方法简单，对实验设备要求低；本方法不仅可以筛查嗜酸乳杆菌必需的氨基酸，同时也能筛查嗜酸乳杆菌排斥的氨基酸。

附图说明

图1为本发明结构俯视图。

图2为本发明结构侧视图。

图3为图1中mrs培养基溶液槽的结构放大示意图。

图4为图1中试验溶液瓶的结构放大示意图。

图5为金属浴装置结构示意图。

参见图1至图4，1为盒盖，2为盒体，3为衬垫，4为mrs培养基溶液槽，5为凹槽，6为试验溶液瓶，7为96孔板。

参见图5，8为加热器，9为槽孔，10为金属浴装置。

具体实施方式

如图1至图5所示，基础培养基、对照培养基、缺陷考察培养基放置在盒体2内，盒体2为长方体结构，盒体2上设有盒盖1，盒体2内设有长方形的凹槽5，凹槽5内从前至后依次布置mrs培养基溶液槽4、试验溶液瓶6，所述的试验溶液瓶6共有20个，并且分成两排布置；位于mrs培养基溶液槽4、试验溶液瓶6的周边围绕设有衬垫3，位于试验溶液瓶6后侧的盒体2内设有96孔板7。

mrs培养基溶液槽4为长方体凹槽结构。

试验溶液瓶6为圆柱形瓶结构。

mrs培养基溶液槽4、试验溶液瓶6及衬垫3组成1个试验组，并且在盒体2内至少设有4个试验组。

实施例一

将-80℃冷冻保藏的嗜酸乳杆菌菌株007接种于基础培养基(基础培养基：葡萄糖：20g/l、蛋白胨：10g/l、牛肉浸粉：10g/l、酵母膏：5g/l、磷酸氢二钾：2g/l、柠檬酸氢二胺：2g/l、乙酸钠：5g/l、七水硫酸镁：0.25g/l、一水硫酸锰：0.05g/l、吐温－80：1g/l)中于37℃培养12h。活化的种子培养基以1％的接种量取液，离心去培养基，再等量无菌水重悬待接种。

制备对照培养基：葡萄糖：30g/l、酵母膏：0.1g/l、色氨酸：0.1g/l，天冬酰胺：0.1g/l，异亮氨酸：0.1g/l，赖氨酸：0.1g/l，甘氨酸：0.1g/l，亮氨酸0.1g/l，丝氨酸：0.1g/l，组氨酸：0.1g/l，酪氨酸：0.1g/l，半胱氨酸：0.1g/l，缬氨酸：0.1g/l，苯丙氨酸：0.1g/l，天冬氨酸：0.1g/l，谷氨酸：0.1g/l，苏氨酸：0.1g/l，丙氨酸：0.1g/l，甲硫氨酸：0.1g/l，脯氨酸：0.1g/l，精氨酸：0.1g/l，磷酸氢二钾：2g/l、柠檬酸氢二胺：2g/l、乙酸钠：5g/l、七水硫酸镁：0.25g/l、一水硫酸锰：0.05g/l、吐温－80：1g/l。

色氨酸缺陷考察培养基成分为：葡萄糖：30g/l、酵母膏：0.1g/l、色氨酸：0g/l，天冬酰胺：0.1g/l，异亮氨酸：0.1g/l，赖氨酸：0.1g/l，甘氨酸：0.1g/l，亮氨酸：0.1g/l，丝氨酸：0.1g/l，组氨酸：0.1g/l，酪氨酸：0.1g/l，半胱氨酸：0.1g/l，缬氨酸：0.1g/l，苯丙氨酸：0.1g/l，天冬氨酸：0.1g/l，谷氨酸：0.1g/l，苏氨酸：0.1g/l，丙氨酸：0.1g/l，甲硫氨酸：0.1g/l，脯氨酸：0.1g/l，精氨酸：0.1g/l，磷酸氢二钾：2g/l、柠檬酸氢二胺：2g/l、乙酸钠：5g/l、七水硫酸镁：0.25g/l、一水硫酸锰：0.05g/l、吐温－80：1g/l。

其他18种氨基酸缺陷考察培养基成分参照色氨酸缺陷考察培养基，分别为对照培养基组成配方中去除某种氨基酸制得。培养基制备后调整ph为6.5±0.1，121℃灭菌20min。将种子活化步骤中准备好的种子1％接种，37℃培养16h。

将发酵好的菌液，分别检测od600和ph，依照氨基酸需求判定标准(强烈需求：od值低于对照0.3及以上，且ph值不低于对照ph0.15。一般满足：od值介于对照0.1之内，且ph值介于对照0.1之内。强烈抑制：od值高于对照0.3及以上，且ph值不高于对照ph0.1。易缺乏：生长情形在强烈需求、一般满足、强烈抑制等三种情况之外，od值低于对照。易过量：生长情形在强烈需求、一般满足、强烈抑制等三种情况之外，od值高于对照)对氨基酸需求判定。结果如表1所示，表1为嗜酸乳杆菌菌株007氨基酸需求检测结果数据表。

表1

实施例二

将-80℃冷冻保藏的嗜酸乳杆菌菌株008接种于基础培养基(基础培养基：葡萄糖：20g/l、蛋白胨：10g/l、牛肉浸粉：10g/l、酵母膏：5g/l、磷酸氢二钾：2g/l、柠檬酸氢二胺：2g/l、乙酸钠：5g/l、七水硫酸镁：0.25g/l、一水硫酸锰：0.05g/l、吐温－80：1g/l)中于37℃培养12h。活化的种子培养基以1％的接种量取液，离心去培养基，再等量无菌水重悬待接种。

制备对照培养基：葡萄糖：20g/l、酵母膏：0.25g/l、色氨酸：0.1g/l，天冬酰胺：0.1g/l，异亮氨酸：0.1g/l，赖氨酸：0.1g/l，甘氨酸：0.1g/l，亮氨酸：0.1g/l，丝氨酸：0.1g/l，组氨酸：0.1g/l，酪氨酸：0.1g/l，半胱氨酸：0.1g/l，缬氨酸：0.1g/l，苯丙氨酸：0.1g/l，天冬氨酸：0.1g/l，谷氨酸：0.1g/l，苏氨酸：0.1g/l，丙氨酸：0.1g/l，甲硫氨酸：0.1g/l，脯氨酸：0.1g/l，精氨酸：0.1g/l，磷酸氢二钾：2g/l、柠檬酸氢二胺：2g/l、乙酸钠：5g/l、七水硫酸镁：0.25g/l、一水硫酸锰：0.05g/l、吐温－80：1g/l。

色氨酸缺陷考察培养基成分为：葡萄糖：20g/l、酵母膏：0.25g/l、色氨酸：0g/l，天冬酰胺：0.1g/l，异亮氨酸：0.1g/l，赖氨酸：0.1g/l，甘氨酸：0.1g/l，亮氨酸：0.1g/l，丝氨酸：0.1g/l，组氨酸：0.1g/l，酪氨酸：0.1g/l，半胱氨酸：0.1g/l，缬氨酸：0.1g/l，苯丙氨酸：0.1g/l，天冬氨酸：0.1g/l，谷氨酸：0.1g/l，苏氨酸：0.1g/l，丙氨酸：0.1g/l，甲硫氨酸：0.1g/l，脯氨酸：0.1g/l，精氨酸：0.1g/l，磷酸氢二钾：2g/l、柠檬酸氢二胺：2g/l、乙酸钠：5g/l、七水硫酸镁：0.25g/l、一水硫酸锰：0.05g/l、吐温－80：1g/l。其他18种氨基酸缺陷考察培养基成分参照色氨酸缺陷考察培养基，分别为对照培养基组成配方中去除某种氨基酸制得。培养基制备后调整ph为6.5±0.1，121℃灭菌20min。将种子活化步骤中准备好的种子1％接种，37℃培养16h。

将发酵好的菌液，分别检测od600和ph，依照氨基酸需求判定标准(强烈需求：od值低于对照0.3及以上，且ph值不低于对照ph0.15。一般满足：od值介于对照0.1之内，且ph值介于对照0.1之内。强烈抑制：od值高于对照0.3及以上，且ph值不高于对照ph0.1。易缺乏：生长情形在强烈需求、一般满足、强烈抑制等三种情况之外，od值低于对照。易过量：生长情形在强烈需求、一般满足、强烈抑制等三种情况之外，od值高于对照)对氨基酸需求判定。结果如表2所示，表2为嗜酸乳杆菌菌株008氨基酸需求检测结果数据表。

表2

实施例三

将-80℃冷冻保藏的嗜酸乳杆菌菌株009接种于基础培养基(基础培养基：葡萄糖：20g/l、蛋白胨：10g/l、牛肉浸粉：10g/l、酵母膏：5g/l、磷酸氢二钾：2g/l、柠檬酸氢二胺：2g/l、乙酸钠：5g/l、七水硫酸镁：0.25g/l、一水硫酸锰：0.05g/l、吐温－80：1g/l)中于37℃培养12h。活化的种子培养基以1％的接种量取液，离心去培养基，再等量无菌水重悬待接种。

制备对照培养基：葡萄糖：20g/l、酵母膏：0.1g/l、色氨酸：0.1g/l，天冬酰胺：0.1g/l，异亮氨酸：0.1g/l，赖氨酸：0.1g/l，甘氨酸：0.1g/l，亮氨酸：0.1g/l，丝氨酸：0.1g/l，组氨酸：0.1g/l，酪氨酸：0.1g/l，半胱氨酸：0.1g/l，缬氨酸：0.1g/l，苯丙氨酸：0.1g/l，天冬氨酸：0.1g/l，谷氨酸：0.1g/l，苏氨酸：0.1g/l，丙氨酸：0.1g/l，甲硫氨酸：0.1g/l，脯氨酸：0.1g/l，精氨酸：0.1g/l，磷酸氢二钾：2g/l、柠檬酸氢二胺：2g/l、乙酸钠：5g/l、七水硫酸镁：0.25g/l、一水硫酸锰：0.05g/l、吐温－80：1g/l。

色氨酸缺陷考察培养基成分为：葡萄糖：20g/l、酵母膏：0.1g/l、色氨酸：0g/l，天冬酰胺：0.1g/l，异亮氨酸：0.1g/l，赖氨酸：0.1g/l，甘氨酸：0.1g/l，亮氨酸：0.1g/l，丝氨酸：0.1g/l，组氨酸：0.1g/l，酪氨酸：0.1g/l，半胱氨酸：0.1g/l，缬氨酸：0.1g/l，苯丙氨酸：0.1g/l，天冬氨酸：0.1g/l，谷氨酸：0.1g/l，苏氨酸：0.1g/l，丙氨酸：0.1g/l，甲硫氨酸：0.1g/l，脯氨酸：0.1g/l，精氨酸：0.1g/l，磷酸氢二钾：2g/l、柠檬酸氢二胺：2g/l、乙酸钠：5g/l、七水硫酸镁：0.25g/l、一水硫酸锰：0.05g/l、吐温－80：1g/l。其他18种氨基酸缺陷考察培养基成分参照色氨酸缺陷考察培养基，分别为对照培养基组成配方中去除某种氨基酸制得。培养基制备后调整ph为6.5±0.1，121℃灭菌20min。将种子活化步骤中准备好的种子2％接种，37℃培养16h。

将发酵好的菌液，分别检测od600和ph，依照氨基酸需求判定标准(强烈需求：od值低于对照0.3及以上，且ph值不低于对照ph0.15。一般满足：od值介于对照0.1之内，且ph值介于对照0.1之内。强烈抑制：od值高于对照0.3及以上，且ph值不高于对照ph0.1。易缺乏：生长情形在强烈需求、一般满足、强烈抑制等三种情况之外，od值低于对照。易过量：生长情形在强烈需求、一般满足、强烈抑制等三种情况之外，od值高于对照)对氨基酸需求判定。结果如表3所示，表3为嗜酸乳杆菌菌株009氨基酸需求检测结果数据表。

表3