一种收集鲜切果蔬中微生物的方法与流程

本发明涉及食品安全检测领域，具体地，涉及一种收集鲜切果蔬中微生物的方法。

背景技术：

食源性致病菌是危害食品安全和人类健康的主要因素，单增李斯特菌、大肠杆菌o157:h7和金黄色葡萄球均属于人畜共患病原微生物，并在自然界中广泛分布，其临床表现为恶心、呕吐、腹痛、腹泻等症状。鲜切果蔬在贮藏与运输过程中极易受其侵染，而在对病原微生物检测过程中，水果和蔬菜经过均质器拍打后会产生大量的果蔬残渣及微小果粒，其会为后续微生物菌落计数、pcr检测等带来不同程度的干扰，从而影响检测结果的准确性。

现有收集微生物的方法收集的微生物中含有水果和蔬菜的微小颗粒，该颗粒影响后续实验的进行。

技术实现要素：

针对现有技术的不足，本发明提供一种收集鲜切果蔬中微生物的方法，该方法可以在收集微生物的过程中避免水果和蔬菜中的微小颗粒的混入。

本发明解决技术问题采用的技术方案为：

将单增李斯特菌、大肠杆菌o157:h7、金黄色葡萄球菌进行活化培养，分别得到三种菌的菌液，无菌操作取新鲜水果或蔬菜，称量9-11g样品，分别按照8-9logcfu/ml人工污染三种致病菌，在无菌操作台中吹干0.5-1.5h后，放入含有85-95ml0.1wt％蛋白胨水的无菌均质袋中，在均质器上拍打混匀，将果蔬均质液倒于双层过滤装置，微生物留存在过滤装置上。

所述的双层过滤装置包括：果蔬均质液收集器、大孔径过滤膜、菌液收集器、小孔径过滤膜和滤液排出器。其中果蔬均质液收集器为圆柱状空心结构，两个底面的直径大于柱体的直径，两底面边缘突出于圆柱体侧面，两底面中心位置去掉面积与柱体直径相同大小的圆形成中空圆筒，两底周围突出于侧面的结构，并按照中心轴垂直于地面设置于顶端，果蔬均质液收集器底端设有菌液收集器，菌液收集器和果蔬均质液收集器形状、大小完全相同，果蔬均质液收集器与菌液收集器顶端之间设有大孔径过滤膜，大孔径过滤膜的面积与果蔬均质液收集器的底面面积相同，菌液收集器底端设有滤液排出器，菌液收集器底端与滤液排出器之间设有小孔径过滤膜，小孔径过滤膜的面积与菌液收集器底端面积相同，滤液排出器上端与果蔬均质液收集器的底面形状相同，滤液排出器下部主体为直径小于滤液排出器底面直径的空心管，该空心管下端为斜切状。

所述的果蔬均质液收集器、菌液收集器和滤液排出器的材质为玻璃材质，各部分通过夹子夹住突起部分进行固定，果蔬均质液收集器、菌液收集器、滤液排出器、大孔径过滤膜和小孔径过滤膜之间为可拆卸连接。

所述的大孔径过滤膜为聚丙烯或尼龙材质，小孔径过滤膜的材质为尼龙材质。

大孔径过滤膜为聚丙烯膜时，过滤孔径范围为10μm-40μm，大孔径过滤膜为尼龙过滤膜时，孔径范围为15μm-60μm；小孔径过滤膜的过滤孔径范围为0.22μm-0.45μm。

本发明的有益效果是：在对水果和蔬菜产品中微生物检测时，一步收集果蔬产品中全部微生物，省时省力，避免污染。本发明克服了无法完全、快速收集果蔬产品中微生物的困难，同时避免了果蔬残渣对后续为分子检测的影响。

附图说明

图1为双层过滤装置的结构图。

图2为大孔径过滤膜的俯视图。

图3为小孔径过滤膜的俯视图。

如图1.果蔬均质液收集器，2.大孔径过滤膜，3.菌液收集器，4.小孔径过滤膜，5.滤液排出器。

具体实施方式

下面结合实施例及附图，对发明作进一步地的详细说明，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1

将单增李斯特菌、大肠杆菌o157:h7、金黄色葡萄球菌进行活化培养，分别得到三种菌的菌液，无菌操作取新鲜哈密瓜样品，将其切分，称量10g样品，分别按照9logcfu/ml人工污染三种致病菌，在无菌操作台中吹干1h后，放入含有95ml0.1wt％蛋白胨水的无菌均质袋中，在均质器上拍打混匀，将哈密瓜均质液倒于双层过滤装置，其中，大孔径过滤膜2(聚丙烯过滤膜，孔径大小10、20、40μm)可拦截哈密瓜均质后的残渣，带有微生物的滤液通过菌液收集器3，小孔径过滤膜4(尼龙过滤膜，孔径大小为0.22μm和0.45μm)可收集全部滤过的微生物，滤液经过滤液排出器5滤过。附着微生物的小孔径滤膜4可被取下，可进行后续微生物检测。

实施例2

将单增李斯特菌、大肠杆菌o157:h7、金黄色葡萄球菌进行活化培养，分别得到三种菌的菌液，无菌操作取新鲜哈密瓜样品，将其切分，称量10g样品，分别按照9logcfu/ml人工污染三种致病菌，在无菌操作台中吹干1h后，放入含有90ml0.1wt％蛋白胨水的无菌均质袋中，在均质器上拍打混匀，将哈密瓜均质液倒于双层过滤装置中，大孔径过滤膜2(尼龙过滤膜，孔径大小15、40、60μm)可拦截哈密瓜均质后的残渣，带有微生物的滤液通过菌液收集器3，小孔径过滤膜4(尼龙过滤膜，孔径大小为0.22μm和0.45μm)可收集全部滤过的微生物，滤液经过滤液排出器滤过。附着微生物的小孔径滤膜4可被取下，可进行后续微生物检测。

实施例3

将单增李斯特菌、大肠杆菌o157:h7、金黄色葡萄球菌进行活化培养，分别得到三种菌的菌液，无菌操作取新鲜莴苣样品，将其切分，称量10g样品，分别按照9logcfu/ml人工污染三种致病菌，在无菌操作台中吹干1h后，放入含有90ml0.1wt％蛋白胨水的无菌均质袋中，在均质器上拍打混匀，将其均质液倒于双层过滤装置中，大孔径过滤膜2(尼龙过滤膜，孔径大小15、40、60μm)可拦截莴苣均质后的残渣，带有微生物的滤液通过菌液收集器3，小孔径过滤膜4(尼龙过滤膜，孔径大小为0.22μm和0.45μm)可收集全部滤过的微生物，滤液经过滤液排出器滤过。附着微生物的小孔径滤膜4可被取下，可进行后续微生物检测。

实施例4

将单增李斯特菌、大肠杆菌o157:h7、金黄色葡萄球菌进行活化培养，分别得到三种菌的菌液，无菌操作取新鲜莴苣样品，将其切分，称量10g样品，分别按照9logcfu/ml人工污染三种致病菌，在无菌操作台中吹干1h后，放入含有90ml0.1wt％蛋白胨水的无菌均质袋中，在均质器上拍打混匀，将莴苣均质液倒于双层过滤装置中，大孔径过滤膜2(尼龙过滤膜，孔径大小15、40、60μm)可拦截莴苣均质后的残渣，带有微生物的滤液通过菌液收集器3，小孔径过滤膜4(尼龙过滤膜，孔径大小为0.22μm和0.45μm)可收集全部滤过的微生物，滤液经过滤液排出器滤过。附着微生物的小孔径滤膜4可被取下，可进行后续微生物检测。

实施例1、实施例2、实施例3、实施例4的微生物检测结果如表1、2、3、4所示，表1为实施例1的检测结果，表2为实施例2的检测结果，表3为实施例3的检测结果、表4为实施例4的检测结果。

表1病原微生物接种于鲜切哈密瓜后经聚丙烯膜过滤的菌落数

表2病原微生物接种于鲜切哈密瓜后经尼龙膜过滤的菌落数

表3病原微生物接种于鲜切莴苣后经聚丙烯膜过滤的菌落数

表4病原微生物接种于鲜切莴苣后经尼龙膜过滤的菌落数