一种从白及中提取2,7-二羟基-4-甲氧基-9,10-二氢菲的方法与流程

本发明属于中药材药物研究技术领域，特别涉及一种从白及中提取2,7-二羟基-4-甲氧基-9,10-二氢菲的方法。

背景技术：

白及(bletillastriata(thunb.)rchb.f.)亦称白芨，为兰科多年生草本植物，是我国名贵中草药。白及以干燥块茎入药：苦﹑甘﹑涩﹑微寒；收敛止血，消肿生肌；可用于咳血吐血，外伤出血，肺痨咳血，溃疡出血，是止血良药。现代药理研究表明白及具有抗菌镇痛、抗肿瘤、延缓衰老、增加机体免疫力等保健功能。化学成分研究表明9,10-二氢菲类化合物是白及中一类重要的化学成分，这类单体化学成分具有较高的开发价值和医学应用研究前景。

目前，在针对中药材白及的药物研究领域，并未见对于其中特定的2,7-二羟基-4-甲氧基-9,10-二氢菲物质进行系统性分离制备的方法。因此利用现代的分离纯化技术，对白及中2,7-二羟基-4-甲氧基-9,10-二氢菲进行提取，对于中药材白及的现代化发展具有较高的实用价值。

技术实现要素：

本发明意在提供一种适用于实验研究及工业生产的从白及中提取2,7-二羟基-4-甲氧基-9,10-二氢菲的方法。

本方案中的一种从白及中提取2,7-二羟基-4-甲氧基-9,10-二氢菲的方法，其中，2,7-二羟基-4-甲氧基-9,10-二氢菲的化学结构式为：

从白及中提取2,7-二羟基-4-甲氧基-9,10-二氢菲时，包括以下步骤：

1)取白及块茎干燥粉碎后，用体积分数为85％～100％的甲醇回流提取2～4次，每次提取2～4小时，合并提取液减压浓缩得到甲醇浸膏；

2)将步骤1)中所得的甲醇浸膏分散于水，用石油醚脱脂后再用乙酸乙酯萃取2～4次，减压浓缩后得到乙酸乙酯部位浸膏；

3)将步骤2)中乙酸乙酯部位浸膏上硅胶柱色谱，用石油醚-乙酸乙酯以不同体积比进行梯度洗脱，结合tlc检测方法，根据9,10-二氢菲类化合物极性不同分为若干个组分；

4)将步骤3)中某个组分经中压硅胶柱色谱，用石油醚-乙酸乙酯以不同体积比进行梯度洗脱，根据9,10-二氢菲类化合物极性不同分为若干个亚组分；

5)将步骤4)中得到的某个亚组分过制备hplc，用甲醇-水45％～65％等度洗脱，得到2,7-二羟基-4-甲氧基-9,10-二氢菲。

本方案的有益效果：本发明从中药白及(bletillastriata(thunb.)rchb.f.)干燥块茎中的提取2,7-二羟基-4-甲氧基-9,10-二氢菲的优点在于：首先通过硅胶柱色谱，用tlc方法结合紫外跟踪迅速找到9,10-二氢菲类化合物部位，高效富集中等极性9,10-二氢菲类化合物部位，再利用制备hplc色谱得到单体，整个过程样品损失少，分离方法可控性和重现性好，成本较低，操作简单，适合实验研究及工厂对中药白及中2,7-二羟基-4-甲氧基-9,10-二氢菲的提取。

进一步，步骤1)中甲醇的体积分数为95％～100％，回流提取为3次，提取时间为3～4小时。提取时间过少会使9,10-二氢菲类化合物的提取不够充分，而提取时间过长则会增加不必要能源消耗成本。

进一步，步骤2)中乙酸乙酯萃取3～4次。多次乙酸乙酯萃取可提高萃取效率，萃取3次以上可以达到较好的萃取效果。

进一步，步骤3)中用石油醚-乙酸乙酯以体积比10:1、5:1、2:1、1:1、1:2、ch3oh进行梯度洗脱，根据9,10-二氢菲类化合物极性不同分为5～10个组分，优选5～8个组分。

进一步，步骤4)用石油醚-乙酸乙酯以体积比1:4、3:7、2:3、1:1，优选1:1，根据9,10-二氢菲类化合物极性不同分为3～9个亚组分，优选4～5个亚组分。

进一步，步骤5)中等度洗脱时，甲醇-水的体积分数为45％～65％。采用体积分数为45％～65％甲醇-水对亚组分进行等度洗脱，目标化合物保留时间合适，峰形对称，基线分离度好。

附图说明

图1为本发明从白及中提取的2,7-二羟基-4-甲氧基-9,10-二氢菲的¹h-nmr光谱图；

图2为本发明从白及中提取的2,7-二羟基-4-甲氧基-9,10-二氢菲的¹³c-nmr光谱图。

具体实施方式

下面通过具体实施方式进一步详细说明：

实施例1：

一种从白及中提取2,7-二羟基-4-甲氧基-9,10-二氢菲的方法，其中，2,7-二羟基-4-甲氧基-9,10-二氢菲的化学结构式为：

从白及中提取2,7-二羟基-4-甲氧基-9,10-二氢菲时，包括以下步骤：

1)取白及块茎干燥粉碎后，用体积分数95％甲醇回流提取3次，每次提取3小时，合并提取液减压浓缩得到甲醇浸膏；

2)将步骤1)中所得甲醇浸膏分散于水，用石油醚脱脂后再用乙酸乙酯萃取3次，减压浓缩后得到乙酸乙酯部位浸膏；

3)将步骤2)中乙酸乙酯部位浸膏上硅胶柱色谱，用石油醚-乙酸乙酯以不同体积比10:1、5:1、2:1、1:1、1:2、ch3oh进行梯度洗脱，结合tlc检测方法，根据9,10-二氢菲类化合物极性不同分为5～8个组分；

4)将步骤3)中某个组分经经中压硅胶柱色谱，用石油醚-乙酸乙酯以1:4、3:7、2:3、1:1不同体积比进行梯度洗脱，根据9,10-二氢菲类化合物极性不同分为4～5个亚组分；

5)将步骤4)中得到的某个亚组分过制备hplc，用甲醇-水45％～65％等度洗脱，得到2,7-二羟基-4-甲氧基-9,10-二氢菲。

采用本方法提取的2,7-二羟基-4-甲氧基-9,10-二氢菲，纯度可以达到95％以上，2,7-二羟基-4-甲氧基-9,10-二氢菲占白及物质总量的0.001％左右，采用本方法提取的目标物质占2,7-二羟基-4-甲氧基-9,10-二氢菲总量的65％～70％。

进行tlc检识的条件：展开剂为石油醚-乙酸乙酯系统及二氯甲烷-甲醇系统，显色剂a：紫外灯(254nm)下观察荧光；显色剂b：5％硫酸乙醇喷洒，110℃烘烤至显色。

实施例2：

实施例2与实施例1的不同之处仅在于：步骤1)中回流提取用的含水甲醇体积分数为85％、90％或100％，回流提取2次，每次提取4小时；步骤2)中萃取2次；步骤5)中用体积分数为50％、55％或60％的乙腈-水。其他步骤同实施例1，也可以取得相应的有益效果。

实施例3：

实施例3与实施例1的不同之处仅在于：步骤1)中回流提取用的含水甲醇体积分数为85％、90％或100％，回流提取4次，每次提取2小时；步骤2)中萃取4次；步骤5)中用体积分数50％、55％或60％的乙腈-水。其他步骤同实施例1，也可以取得本发明所述的有益效果。

结构鉴定：利用的光谱技术，主要包括核磁共振谱(¹h-nmr、¹³c-nmr)。

主要核磁数据：¹h-nmr(400mhz,cd3cocd3)δ:6.37(1h,d,j＝2.3hz,h-1),8.23(2h,br.s,2,7-oh),6.44(1h,d,j＝2.3hz,h-3),3.82(3h,s,4-och3),8.04(1h,d,j＝8.0hz,h-5),6.67(1h,dd,j＝8.0,2.5hz,h-6),6.68(1h,br.s,h-8),2.63(4h,br.s,h-9,10)；¹³c-nmr(100mhz,cd3cocd3)δ:108.2(c-1),156.1(c-2),99.1(c-3),158.8(c-4),116.3(c-4a),129.9(c-5),125.7(c-5a),115.0(c-6),157.4(c-7),113.5(c-8),141.3(c-8a),30.8(c-9),31.4(c-10),140.0(c-10a),55.7(4-och3)。(图1、图2)。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。