本发明涉及芒果苷的提取方法，具体涉及一种从芒果叶中提取芒果苷的方法。
背景技术：
：芒果苷(mangiferin)，属于双苯吡酮类化合物。芒果苷存在于漆树科植物芒果mangiferaindical的叶子、果实、树皮中。近年研究表明芒果苷具有较强的止咳、化痰、抗炎作用，此外芒果苷还有抗脂质过氧化、抗病毒、抗肿瘤作用(广西中医学院学报，2003，6(2)：44)。芒果苷的结构式如下：由于芒果苷具有良好的医药用途，人们从天然植物中进行了大量提取尝试，其中多涉及采用大孔树脂进行分离纯化的方法，具有代表性的有：公开号为cn101993437a的发明专利公开了一种将芒果叶用碱水提取、凝胶柱层析、然后重结晶得到纯度达到98％的芒果苷，但芒果苷在碱性条件下易被氧化，提取率偏低。公开号为cn101759689a的发明专利公开了一种用石灰水提取，提取液调ph＝7-8后上大孔树脂柱(ab-8、ads-17或x-5)纯化的从芒果叶中提取芒果苷方法，该方法通过调节提取液的ph值使提取率提高(在79％以上)，纯度在95％以上。公开号为cn106565693a的发明专利公开了以碱性水溶液为溶媒、同时加入抗氧化剂进行提取，提取液经浓缩、醇沉后取上清液过凝胶柱，85-95％乙醇水溶液洗脱，洗脱液浓缩后再上大大孔树脂柱(ab-8、hpd100、d101、d296或h-20)纯化的从芒果叶中提取芒果苷方法，该方法由于抗氧化剂的加入，有效提高了提取率(在80％以上)，又由于凝胶柱和大孔树脂柱联用，提高了所得芒果苷的纯度(99％以上)。公开号为cn101429222a的专利，公开了一种以水或醇水溶液为溶媒，对芒果叶进行高压高热提取(温度为101-374℃、压力为3-60mpa，时间为3-120min)，提取液再上大孔树脂柱(d101、d301或d130)纯化以获得芒果苷的方法，该方法能够在相对较短的提取时间内获得较高的提高率，所得芒果苷的纯度在60％以上。公开号为cn1844133a的发明专利公开了以醇水溶液为溶媒提取，采用串联的大孔树脂柱(d101-d900、d101-d301、d101-d318或d101-296等)纯化的方法来从芒果叶中提取芒果苷，洗脱液回收溶剂后经重结晶可获得纯度在90％以上的芒果苷。现有文献有观点认为，采用d101或ab-8大孔树脂可以获得较高的吸附率和解吸率，从而获得较高的提取率。但申请人发现现有技术涉及使用大孔树脂进行纯化以获得芒果苷的方法中，要么提取率不够高，要么纯度不够高，而部分同时兼具提取高和纯度的方法则存在成本高及不易于产业化的不足。技术实现要素：本发明要解决的技术问题是提供一种提取率高且所得产品纯度高的从芒果叶中提取芒果苷的方法。为解决上述技术问题，本发明提供的从芒果叶中提取芒果苷的方法为：以芒果叶为原料，对其中的芒果苷进行提取，获得含芒果苷的提取液；所得提取液上xda-8大孔树脂柱层析，用60-80v/v％乙醇洗脱，收集含芒果苷的流份，回收乙醇，残留物用甲醇或乙醇重结晶，即得到芒果苷。本申请人在试验中惊奇的发现，xda-8大孔树脂对芒果苷具有极好的吸附作用，且当洗脱剂为60-80v/v％乙醇时，具有很好的解吸率，因而本发明所述方法能够获得相对更高的转移率和产品纯度。本发明所用xda-8大孔树脂的技术指标如下述表1所示：表1：序号项目指标1外观棕黄色至棕褐色不透明球状颗粒2粒度(0.4-1.25mm)(％)≥953含水量(％)52-624湿视密度(g/ml)0.65-0.755湿真密度(g/ml)1.05-1.156比表面积(m2/g)≥12007吸酚量(mg/ml)≥908运输密度0.695本发明所述方法中，通常是将芒果叶进行粉碎后再进行提取，具体可以是粉碎至10-100目。本发明所述方法中，对芒果叶中的芒果苷进行提取时采用的溶媒、提取的方式、时间等均与现有技术相同。具体的，对于提取所用的溶媒，优选是以醇水混合溶液对芒果叶中的芒果苷进行提取，所述的醇水混合溶液具体可以是选自甲醇、乙醇和正丙醇中的一种或两种以上与水的混合溶液，优选是乙醇与水的混合溶液；所述醇与水的体积比可以是90-0：10-100，优选为90-60：10-40。对于提取的方式，可以是常温浸提、加热浸提或回流提取等，优选采用回流提取；提取的次数通常为1-3次，每次提取时溶媒的加入量通常为原料重量的3-10倍，提取的时间通常为0.5-3h。当提取液的量较大时，可将提取液进行适当浓缩后再上大孔树脂柱，通常是浓缩至溶媒用量的1/10-5/10后再上大孔树脂柱。本发明所述方法中，用于重结晶的甲醇或乙醇为100v/v％甲醇或100v/v％乙醇。为了减少洗脱液中的杂质，优选在用60-80v/v％乙醇洗脱之前先用水洗柱，更优选是用5-8倍柱体积的水洗柱。与现有技术相比，本发明选择性的使用xda-8大孔树脂对芒果叶提取液进行吸附并结合60-80v/v％乙醇洗脱，显著的提高了转移率(85％以上)；进一步结合重结晶也保证了所得产品具有较高的纯度(96％以上，hplc)。具体实施方式下面结合具体实施例对本发明作进一步的详述，以更好地理解本发明的内容，但本发明并不限于以下实施例。以下各实施例中所采用的原料芒果叶均采自广西南宁，品种为红象牙。实施例11)取芒果叶1kg，粉碎至20目，置于提取器中，以70v/v％乙醇为溶媒，回流提取3次(第1次提取时溶媒的加入量为原料重量的10倍，提取时间为2h；第2次提取时溶媒的加入量为原料重量的5倍，提取时间为1h；第3次提取时溶媒的加入量为原料重量的5倍，提取时间为1h)，收集提取液，浓缩至溶媒用量的1/10，得到浓缩液；2)所得浓缩液上xda-8大孔树脂柱层析(上柱流速为30min/bv)，先用6倍柱体积的水洗柱，再用70v/v％乙醇洗脱，利用薄层层析检识并合并含芒果苷的流份，所得流份回收乙醇，残留物用乙醇重结晶，收集晶体，干燥，即得到淡黄色芒果苷13.57g。实施例21)取芒果叶1kg，粉碎至10目，置于提取器中，以80v/v％乙醇为溶媒，回流提取2次(第1次提取时溶媒的加入量为原料重量的8倍，提取时间为3h；第2次提取时溶媒的加入量为原料重量的5倍，提取时间为1h)，收集提取液，浓缩至溶媒用量的1/10，得到浓缩液；2)所得浓缩液上xda-8大孔树脂柱层析(上柱流速为30min/bv)，先用8倍柱体积的水洗柱，再用70v/v％乙醇洗脱，利用薄层层析检识并合并含芒果苷的流份，所得流份回收乙醇，残留物用乙醇重结晶，收集晶体，干燥，即得到淡黄色芒果苷13.58g。实施例31)取芒果叶1kg，粉碎至40目，置于提取器中，以60v/v％甲醇为溶媒，回流提取1次(溶媒的加入量为原料重量的10倍，提取时间为3h)，收集提取液；2)所得提取液上xda-8大孔树脂柱层析(上柱流速为30min/bv)，用80v/v％乙醇洗脱，利用薄层层析检识并合并含芒果苷的流份，所得流份回收乙醇，残留物用乙醇重结晶，收集晶体，干燥，即得到淡黄色芒果苷13.62g。实施例41)取芒果叶1kg，粉碎至60目，置于提取器中，以20v/v％乙醇为溶媒，回流提取3次(第1次提取是溶媒加入量为原料重量的8倍，提取时间为3h；第2次提取时溶媒的加入量为原料重量的5倍，提取时间为1h；第3次提取时溶媒的加入量为原料重量的5倍，提取时间为1h)，收集提取液，浓缩至溶媒用量的1/10，得到浓缩液；2)所得提取液上xda-8大孔树脂柱层析(上柱流速为20min/bv)，先用5倍柱体积的水洗柱，再用60v/v％乙醇洗脱，利用薄层层析检识并合并含芒果苷的流份，所得流份回收乙醇，残留物用乙醇重结晶，收集晶体，干燥，即得到淡黄色芒果苷13.48g。实施例51)取芒果叶1kg，粉碎至60目，置于提取器中，以水为溶媒，回流提取3次(第1次提取时溶媒的加入量为原料重量的8倍，提取时间为3h；第2次提取时溶媒的加入量为原料重量的5倍，提取时间为1h；第3次提取时溶媒的加入量为原料重量的5倍，提取时间为1h)，收集提取液，浓缩至溶媒用量的1/10，得到浓缩液；2)所得提取液上xda-8大孔树脂柱(上柱流速为15min/bv)层析，用60v/v％乙醇洗脱，利用薄层层析检识并合并含芒果苷的流份，所得流份回收乙醇，残留物用乙醇重结晶，收集晶体，干燥，即得到淡黄色芒果苷13.43g。实施例6：芒果苷含量比较试验1)仪器与试药：美国agilent1100series高效液相色谱仪：四元泵,在线脱气机,自动进样器(g1313a),柱温箱,可变波长检测器,超纯水系统(millipore):sb3200-t超声清洗仪(功率:250w,频率50khz)(必能信超声(上海)有限公司)。甲醇为色谱纯,其余试剂均为分析纯,水为高纯水。芒果苷对照品(中国药品生物品检定所，供含量测定用)。芒果叶样品分别采自广西亚热带作物研究所芒果园(南宁市)。2)色谱条件：美国phenomenex公司luna5μmc18(2)柱(4.6mmid×250mm)；流动相：甲醇-0.1％磷酸(30：70)，流速：1ml/min，柱温：30℃，检测波长：258nm。进样量：5μl。理论塔板数以芒果苷峰计应不低于3500。3)对照品溶液的制备：精密称取芒果苷对照品(中国药品生物制品检定所)26.3mg，置于100ml量瓶中，加40v/v％甲醇溶解并定容至刻度，即得芒果苷对照品溶液。4)供试样品溶液的制备：取实施例1-5所用的原料芒果叶粉末，分别精密称定0.12g，精密加入40v/v％甲醇20ml，称定重量，浸泡30min，超声提取40min，放冷置至室温，用40v/v％甲醇补足减失的重量，摇匀，0.45μm滤膜滤过，即得原料样品溶液。取实施例1-5制备的芒果苷，分别精密称定26.3mg，置于100ml量瓶中，加40v/v％甲醇溶解并定容至刻度，即得成品样品溶液。5)测定法取芒果苷对照品溶液和供试样品液各5μl，注入高效液相色谱仪，按所设定的hplc条件进行测定；每个样品重复测定3次,按外标两点法计算各样品中芒果苷的含量，并计算芒果苷的转移率，结果如下述表2所示。其中，转移率按下式计算：转移率＝原料中芒果苷含量/成品中芒果苷含量×100％表2：实施例7：不同树脂对芒果苷的富集1、不同树脂对芒果苷的吸附作用准确称取粉碎好的芒果叶(80目)粉末150g，分别加入10倍量的70v/v％乙醇，浸泡1h，煮沸回流提取2h，趁热过滤，滤渣继续加入10倍量的70v/v％乙醇，继续回流2h，合并2次滤液，减压浓缩至300ml，离心(转速为3000r/min，时间为15min)，收集上清液。取各种预先处理好的树脂3ml放入锥形瓶中，分别加入15ml的上清液，摇匀，置于24℃的恒温水浴锅内震荡24h，过滤，经hplc测定滤液中芒果苷的量。然后向各种大孔树脂中分别加入10ml的70v/v％乙醇，再置于24℃的恒温水浴锅内震荡24h，过滤，用70v/v％乙醇洗大孔树脂，合并滤液，量取滤液的体积，经hplc测定其中芒果苷的量。从而计算各种大孔树脂的吸附率和解吸率。结果如下述表3所示。表3：其中，吸附量、吸附率和解吸率分别按下述公式计算：吸附量(mg/ml)＝(c0v0-ceve)/v吸附率(％)＝[(c0v0-ceve)/c0v0]*100％解吸率(％)＝[cpvp/(c0v0-ceve)]*100％式中：c0—原液浓度(mg/ml)；ce—吸附平衡浓度(mg/ml)；cp—解吸平衡浓度(mg/ml)；v0—原液体积(ml)；ve—吸附平衡溶液体积(ml)；vp—解吸平衡溶液体积(ml)；v—处理后树脂体积(ml)。由表3可知，虽然d101和ab-8两种大孔树脂的吸附率和洗脱率是相对较好的，但与xda-8大孔树脂相比，仍具有极大的差异。2、洗脱液浓度将预处理过的d101、ab-8和xda-8大孔树脂分别装柱，柱床体积为80ml，取树脂型号的筛选实验中得到的芒果叶浓缩液80ml上样。依次用3倍柱床体积水(240ml)洗、6倍柱床体积(480ml)15v/v％乙醇洗脱、3倍柱床体积(240ml)70v/v％乙醇进行洗脱和2倍柱床体积(160ml)90v/v％乙醇进行洗脱，收集各部分洗脱液。对不同洗脱液分别进行芒果苷含量的测定，结果如下述表4所示。表4：当前第1页12