本发明涉及一种由藻油与卵磷脂进行酯交换反应，制备卵磷脂型多不饱和脂肪酸，目的在于得到含有dha/dpa的卵磷脂。
背景技术：
目前，二十二碳六烯酸（cis-4,7,10,13,16,19-docosahexaenoicacid，dha）和二十碳二五烯酸（docosapentaenoicacid，dpa）对人体健康，预防疾病有着重大的作用，dha和dpa都归属于多不饱和脂肪酸（pufas）。一方面，二十二碳六烯酸是重要的结构神经元膜的成分，能够直接进入大脑，促进婴幼儿的脑部发育和增强记忆，dha是大脑灰质中脂肪酸的主要成分，缺少后会影响智力发育，因此，主要是促进婴幼儿的脑部发育和预防老年的脑部萎缩和老化；另一方面，dpa是人体中许多组织的重要组成部分，具有调节血脂、软化血管，降低血液粘度，改善视力、促进生长发育和提高人体免疫功能等作用，其调节血脂的功能比有血管清道夫之称的epa还要强很多倍。
卵磷脂（lecithin）是一类含磷脂类物质，广义的卵磷脂是各种磷脂的总称，包括磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、神经鞘磷脂、肌醇磷脂、溶血磷脂酰胆碱等，狭义的卵磷脂是指磷脂酰胆碱。乙酯型和甲酯型或者是甘油三酯型pufas，在体内都是以被动扩散的方式被吸收的。乙酯型pufas吸收率仅为20%左右，甘油三酯型pufas吸收率远高于乙酯型，也没有超过50%。而近几年科学研究发现，新一代卵磷脂型pufas在体内以主动吸收的方式被吸收，吸收率接近100%，同时，卵磷脂型pufas不存在重金属污染问题，产品安全。在人体的吸收过程中，甲酯型产品分解为甲醇和dha，甲醇具有毒性；乙酯型产品分解为乙醇和dha，乙醇对胚胎和婴幼儿具有刺激性；卵磷脂型产品分解为卵磷脂和dha，但是磷脂是很好的乳化剂，能促进dha/dpa的运输能力，进而提高吸收率。因此，卵磷脂型pufas成为当下研究的热点。
传统的多不饱和脂肪酸的来源主要是深海鱼油，例如中国专利cn101161819a和cn101348807a都公开了利用鱼油n-3pufa浓缩物和甘油通过酯化反应富集dha和epa，上述两个专利均以鱼油为原料。但是，由于食物链的不断累计导致提取的鱼油中存在很多有毒有害物质，没有到达清洁安全的要求，极大的影响了产品中pufas的品质。藻油与鱼油相比，是从培养的藻类中直接提取，不经食物链的积累，安全无污染，且为可再生资源，更重要的是其脂肪酸组成较为简单，且dha和dpa的含量通常较鱼油高。因此，以藻油代替鱼油为多不饱和脂肪酸的来源是未来发展的必由趋势。
已报道的文献和专利，得到乙酯pufas、甲酯pufas以及甘油酯pufas都需要先通过水解，富集等步骤得到高纯度的pufas，工段复杂耗时，因此，极大的增加了生产成本，例如中国专利，利用动物和/或植物油制备高浓度多不饱和脂肪酸及其酯的方法,获得的混合物及其预防或治疗疾病的用途，得到乙酯pufas；例如宋诗军等研究酶法合成epa、dha甘油三酯。本发明创造性的以藻油为原料与卵磷脂直接进行转酯化反应，再经由离心，浓缩，沉淀等分离方法得到目标产物卵磷脂型pufas，工艺简单，绿色经济。
技术实现要素：
本发明属于生物分离及酶催化技术领域，本发明的目的在于得到含有dha/dpa的卵磷脂。通过脂肪酶一步催化转酯化，再经由离心，浓缩，沉淀等分离处理得到卵磷脂型pufas。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
由藻油与卵磷脂进行酯交换反应，制备卵磷脂型多不饱和脂肪酸，将卵磷脂溶于适当的溶剂，再加入一定量的藻油，在脂肪酶的催化下进行转酯化反应；取反应液进行离心，浓缩，沉淀等分离处理得到卵磷脂型pufas。其中所述溶剂为正己烷或乙醇等，优先正己烷；所述卵磷脂为大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂，优先大豆卵磷脂；脂肪酶可选自novozym435脂肪酶、rmim脂肪酶、tlim脂肪酶以及candidasp.99-125脂肪酶，优选candidasp.99-125脂肪酶，该脂肪酶是依照中国发明专利cn1948470a的方法制备。
其具体操作步骤如下：
(1)转酯化反应：将大豆卵磷脂溶于适当的正己烷溶剂中，其中，大豆卵磷脂和藻油的质量比为1:5-15，酶量为总底物质量的5%-25%，初始水量为总底物质量的0.5%-6%，反应温度为30℃-60℃，，搅拌速度200rpm/min-400rpm/min，反应时间48h-96h。
(2)分离处理：转酯化反应结束后，取出反应液，以8000rpm-12000rpm离心5min-10min，取上清，下层脂肪酶可重复利用，用真空浓缩仪35℃-55℃除去溶剂正己烷，再加入适当的丙酮进行沉淀，5000rpm-10000rpm离心5min-10min，取0.05g-0.2g沉淀，甲酯化后测气相。
与现有技术相比较，本发明具有如下有益效果：
本发明是一种通过脂肪酶一步催化转酯化，再经由离心，浓缩，沉淀等分离处理得到卵磷脂型pufas。创造性的以藻油为原料直接和卵磷脂反应，省去了水解，富集工段，工艺简单，绿色经济。
具体实施方式
实施例1
（1）将4g大豆卵磷脂溶于20ml正己烷，充分溶解后加入40g藻油，酶量为总底物质量的10%，初始水量为总底物质量的2%，反应温度为40℃，搅拌速度280rpm/min，反应时间为48h。
（2）转酯化反应结束后，取出反应液，以10000rpm离心5min，取上层清液，下层脂肪酶可重复利用，用真空浓缩仪45℃除去上清中的溶剂正己烷，再加入30ml丙酮溶剂，进行沉淀，静置20min，80000rpm离心5min，取0.1g沉淀，甲酯化后测气相。得到卵磷脂中的pufas含量为63.6%。
实施例2
（1）将4g大豆卵磷脂溶于20ml正己烷，充分溶解后加入40g藻油，酶量为总底物质量的15%，初始水量为总底物质量的3%，反应温度为42.5℃，搅拌速度280rpm/min，反应时间为72h。
（2）转酯化反应结束后，取出反应液，以10000rpm离心5min，取上层清液，下层脂肪酶可重复利用，用真空浓缩仪45℃除去上清中的溶剂正己烷，再加入40ml丙酮溶剂，进行沉淀，静置20min，80000rpm离心5min，取0.1g沉淀，甲酯化后测气相。得到卵磷脂中的pufas含量为67.8%。
实施例3
（1）将4g大豆卵磷脂溶于25ml正己烷，充分溶解后加入45g藻油，酶量为总底物质量的20%，初始水量为总底物质量的4%，反应温度为45℃，搅拌速度280rpm/min，反应时间为86h。
（2）转酯化反应结束后，取出反应液，以10000rpm离心5min，取上层清液，下层脂肪酶可重复利用，用真空浓缩仪50℃除去上清中的溶剂正己烷，再加入40ml丙酮溶剂，进行沉淀，静置20min，80000rpm离心5min，取0.1g沉淀，甲酯化后测气相。得到卵磷脂中的pufas含量为69.1%。
实施例4
（1）将4g大豆卵磷脂溶于30ml正己烷，充分溶解后加入45g藻油，酶量为总底物质量的25%，初始水量为总底物质量的5%，反应温度为45℃，搅拌速度280rpm/min，反应时间为96h。
（2）转酯化反应结束后，取出反应液，以10000rpm离心5min，取上层清液，下层脂肪酶可重复利用，用真空浓缩仪50℃除去上清中的溶剂正己烷，再加入40ml丙酮溶剂，进行沉淀，静置30min，10000rpm离心5min，取0.1g沉淀，甲酯化后测气相。得到卵磷脂中的pufas含量为72.3%。