本发明属于医药技术领域，具体涉及靛玉红新衍生物及其药用用途。
背景技术：
靛玉红(indirubin)(式ⅱ),属于双吲哚类生物碱是青黛、板蓝根和大青叶的主要活性成分。上世纪70年代我国科研工作者从治疗慢性粒细胞白血病的中药复方“当归芦荟丸”中分离提取出靛玉红，并成功在临床上用于治疗慢性粒细胞白血病，有效治愈率72.7％。但是靛玉红从自然资源来源有限，本课题组用仿生合成的策略解决了靛玉红的来源。可是靛玉红的溶解度很低限制了其在临床上应用。
技术实现要素：
为克服上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供靛玉红新衍生物及其药用用途，解决了靛玉红溶解度低的问题，得到生物活性更好的新衍生物，为新药开发提供基础，具有较好的抑制肿瘤细胞的活性的特点。
为此，对靛玉红3’位进行结构修饰，引入羟肟，得到靛玉红结构改造的6个新衍生物，这些衍生物具有较好的抑制肿瘤细胞的活性。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
靛玉红新衍生物，其特征在于，具有如下结构通式ⅰ：
其中，r为4-7，4’-7’位上个各自独立的取代基，r＝卤素，烷基，烷氧基中的一种或几种。
所述的靛玉红新衍生物，具体结构式如下：
当r＝氯时，所述的式ⅰ的化合物为式1所示的衍生物6,6’-二氯靛玉红-3’-羟肟：
当r＝氯时，所述的式ⅰ的化合物为式2所示的衍生物7,7’-二氯靛玉红-3’-羟肟：
当r＝三氟甲基时，所述的式ⅰ的化合物为式3所示的衍生物7,7’-二三氟甲基靛玉红-3’-羟肟：
当r＝甲基时，所述的式ⅰ的化合物为式4所示的衍生物5,5’-二甲基靛玉红-3’-羟肟：
当r＝乙基时，所述的式ⅰ的化合物为式5所示的衍生物5,5’-二乙基靛玉红-3’-羟肟(1e)：
当r＝三氟甲氧基时，所述的式ⅰ的化合物为式2所示的衍生物5,5’-二三氟甲氧基靛玉红-3’-羟肟：
所述靛玉红肟新衍生物为活性成分的药物组合物。
所述靛玉红新衍生物为原料药的药物制剂。
所述的靛玉红新衍生物在制备治疗肿瘤药物中的应用。
所述的药物制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、口服液、水针剂、输液剂、粉针剂。
所述的药物制剂为软胶囊剂。
所述的药物制剂为微丸剂。
所述的药物制剂为冻干粉针剂。
靛玉红衍生物的合成方法：
步骤1，把靛玉红衍生物0.0005mol，加入到100ml烧瓶中，再向烧瓶中加入10ml吡啶溶解原料，然后向该烧瓶中加入盐酸羟胺0.005mol，接着反应在120℃油浴中条件下回流1.5h；
步骤2，待反应结束后，对反应液进行薄层色谱tlc检测，监测结果显示出现新的点，表明有新的产物生成；反应液晾凉，向反应液中加入30ml水，有红色固体析出，过滤，用1％盐酸对析出固体进行洗涤，再用150ml水分三次进行洗涤，得红色固体，烘干、称重，计算产率。
用此方法合成了式1-式6的衍生物。
靛玉红衍生物的活性测试：
处于对数生长期的人结肠癌细胞株hct-116(肺癌细胞株a549、人慢性髓系白血病细胞k562、小鼠胚胎成骨细胞前体细胞mc-3t3-e1、小鼠单核巨噬细胞白血病细胞raw264.7a549)细胞按合适密度接种至96孔培养板中，放置于5％co2、37℃恒温培养箱中。培养过夜后，按照100μm、50μm、25μm、12.5μm、6.25μm、3.125μm及1.56μm7个浓度，每个浓度3个重复孔加药，并设空白对照，dmso对照，24h后加入5mg/ml的mtt(20μl/孔)，继续培养4.0h。弃去培养上清，然后加入dmso(200μl/孔)，用酶标仪在490nm测定每孔吸光度值，计算对肿瘤细胞抑制率。
采用以下列公式计算化合物对肿瘤细胞生长的抑制率(％)：
细胞抑制率＝(实验组od值-dmso对照组od值)/空白对照组od值×100％；然后采用spss19.0计算ic50值。
对于初步实验抑制活性较好的化合物，进一步调整浓度在20μmol/l、10μmol/l、5μmol/l、2.5μmol/l、1.25μmol/l、0.625μmol/l梯度浓度进行实验。
本发明的有益效果是：
与现有技术相比，本发明对靛玉红衍生物3’位引入羟肟，所以合成的靛玉红新衍生物具有较好的溶解性；采用mtt法对新化合物进行初步活性实验，部分化合物比靛玉红具有较好的抑制肿瘤细胞的作用，在肿瘤药物方面具有潜在的开发前景。
具体实施方式
下面结合实施例对发明作进一步详细说明。
靛玉红新衍生物，其特征在于，具有如下结构通式ⅰ：
其中，r为4-7，4’-7’位上个各自独立的取代基，r＝卤素，烷基，烷氧基中的一种或几种。
所述的靛玉红新衍生物，具体结构式如下：
当r＝氯时，所述的式ⅰ的化合物为式1所示的衍生物6,6’-二氯靛玉红-3’-羟肟：
当r＝氯时，所述的式ⅰ的化合物为式2所示的衍生物7,7’-二氯靛玉红-3’-羟肟：
当r＝三氟甲基时，所述的式ⅰ的化合物为式3所示的衍生物7,7’-二三氟甲基靛玉红-3’-羟肟：
当r＝甲基时，所述的式ⅰ的化合物为式4所示的衍生物5,5’-二甲基靛玉红-3’-羟肟：
当r＝乙基时，所述的式ⅰ的化合物为式5所示的衍生物5,5’-二乙基靛玉红-3’-羟肟(1e)：
当r＝三氟甲氧基时，所述的式ⅰ的化合物为式2所示的衍生物5,5’-二三氟甲氧基靛玉红-3’-羟肟：
所述靛玉红肟新衍生物为活性成分的药物组合物。
所述靛玉红新衍生物为原料药的药物制剂。
所述的靛玉红新衍生物在制备治疗肿瘤药物中的应用。
所述的药物制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、口服液、水针剂、输液剂、粉针剂。
所述的药物制剂为软胶囊剂。
所述的药物制剂为微丸剂。
所述的药物制剂为冻干粉针剂。
实施例1.合成6,6’-二氯靛玉红-3’-羟肟(1a)：
称取6,6’-二-氯靛玉红0.17g(0.0005mol)，加入到100ml烧瓶中，再向烧瓶中加入10ml吡啶溶解原料，然后向该烧瓶中加入0.32g(0.005mol)盐酸羟胺，接着反应在120℃油浴中条件下回流1.5h；其间对反应液进行薄层色谱(tlc)检测，监测结果显示出现新的点，表明有新的产物生成。待反应结束后，反应液晾凉，向反应液中加入30ml水，有红色固体析出，过滤，用1％盐酸对析出固体进行冲洗，再用150ml水分三次进行冲洗，得红色固体，烘干、称重0.10g，计算产率58.8％。
6,6’-二氯靛玉红-3’-羟肟(1a)：
红色粉末；产率：58.8％；熔点(m.p.)：≧330℃；ir：3499,3158,1672,1613,1573,1449,1403,1301,1241,1068,838,812,577cm-1；ei-ms(m/z):c16h9cl2n3o2,346.17；found:348.8(m+2,分子中含氯同位素峰)；1hnmr(400mhz,dmso-d6):δ11.75(s,1h,oh),10.89(s,1h,nh),8.61(d,j＝8.5hz,1h,nh),8.19(d,j＝8.2hz,1h,ch),7.54(s,1h,ch),7.38(dd,j＝7.6,5.7hz,1h,ch),7.06(d,j＝8.2hz,1h,nh),6.96(d,j＝8.5hz,1h,ch),6.90(s,1h,ch)。
实施例2.合成7,7’-二氯靛玉红-3’-羟肟(1b)：
称取7,7’-二-氯靛玉红0.17g(0.0005mol)，加入到100ml烧瓶中，再向烧瓶中加入10ml吡啶溶解原料，然后向该烧瓶中加入0.32g(0.005mol)盐酸羟胺，接着反应在120℃油浴中条件下回流1.5h。其间对反应液进行薄层色谱(tlc)检测，监测结果显示出现新的点，表明有新的产物生成。待反应结束后，反应液晾凉，向反应液中加入30ml水，有红色固体析出，过滤，用1％盐酸对析出固体进行冲洗，再用150ml水分三次进行冲洗，得红色固体，烘干、称重0.11g，计算产率64.7％。
7,7’-二氯靛玉红-3’-羟肟(1b):
红色粉末；产率：64.7％；熔点(m.p.)：≧330℃；ir:3210,1674,1617,1567,1482,1440,1386,1310,1220,1135,854,824,789,732,625cm-1；ei-ms(m/z):c16h9cl2n3o2,346.17；found:348.9(m+2,分子中含氯同位素峰)；1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.99(s,1h，oh),11.29(s,1h,nh),8.57(d,j＝7.6hz,1h,ch),8.21(d,j＝7.6hz,1h,ch),7.59–7.54(m,1h,ch),7.25–7.20(m,1h,ch),7.12(t,j＝7.9hz,1h,ch),7.01(t,j＝8.0hz,1h,ch)。
实施例3.合成7,7’-二三氟甲基靛玉红-3’-羟肟(1c)：
称取7,7’-二三氟甲基靛玉红0.20g(0.0005mol)，加入到100ml烧瓶中，再向烧瓶中加入10ml吡啶溶解原料，然后向该烧瓶中加入0.32g(0.005mol)盐酸羟胺，接着反应在120℃油浴中条件下回流1.5h；其间对反应液进行薄层色谱(tlc)检测，监测结果显示出现新的点，表明有新的产物生成。待反应结束后，反应液晾凉，向反应液中加入30ml水，有红色固体析出，过滤，用1％盐酸对析出固体进行冲洗，再用150ml水分三次进行冲洗，得红色固体，烘干、称重0.13g，计算产率65.0％。
红色粉末；产率：65.0％；熔点(m.p.)：≧330℃；ir:3146,1669,1606,1570,1444,1293,1231,916,839,810,750,703cm-1；ei-ms(m/z):c18h9f6n3o2,413.27；found:436.7(m+na)；1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:11.76(s,1h,oh),10.88(s,1h,nh),8.57(d,j＝4.2hz,1h,ch),8.12(d,j＝8.2hz,1h,ch),7.70(s,1h,ch),7.21(d,j＝8.2hz,1h,ch),7.10(d,j＝8.4hz,1h,ch),7.03(s,1h,ch)。
实施例4.合成5,5’-二甲基靛玉红-3’-羟肟(1d)：
称取5,5’-二甲基靛玉红0.15g(0.0005mol)，加入到100ml烧瓶中，再向烧瓶中加入10ml吡啶溶解原料，然后向该烧瓶中加入0.32g(0.005mol)盐酸羟胺，接着反应在120℃油浴中条件下回流1.5h；其间对反应液进行薄层色谱(tlc)检测，监测结果显示出现新的点，表明有新的产物生成。待反应结束后，反应液晾凉，向反应液中加入30ml水，有红色固体析出，过滤，用1％盐酸对析出固体进行冲洗，再用150ml水分三次进行冲洗，得红色固体，烘干、称重0.10g，计算产率66.6％。
5,5’-二甲基靛玉红-3’-羟肟(1d):
红色粉末；产率：66.6％；熔点(m.p.)：≧330℃；ir:3243,2922,2853,1660,1614,1570,1457,1308,1226,1157,1112,1059,1010,884,802,716,628,554cm-1；ei-ms(m/z):c18h15n3o2,305.33；found:303.7(m-1)；1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:11.67(s,1h,oh),10.57(s,1h,nh),8.58(d,j＝4.1hz,1h,nh),8.48(s,1h,ch),8.09(s,1h,ch),7.39(dd,j＝7.6,5.7hz,1h,ch),7.27(d,j＝8.0hz,1h,ch),6.94(d,j＝7.8hz,1h,ch),6.77(d,j＝7.8hz,1h,ch),2.34(d,j＝8.2hz,6h,ch3)。
实施例5.合成5,5’-二乙基靛玉红-3’-羟肟(1e)：
称取5,5’-二乙基靛玉红0.16g(0.0005mol)，加入到100ml烧瓶中，再向烧瓶中加入10ml吡啶溶解原料，然后向该烧瓶中加入0.32g(0.005mol)盐酸羟胺，接着反应在120℃油浴中条件下回流1.5h；其间对反应液进行薄层色谱(tlc)检测，监测结果显示出现新的点，表明有新的产物生成。待反应结束后，反应液晾凉，向反应液中加入30ml水，有红色固体析出，过滤，用1％盐酸对析出固体进行冲洗，再用150ml水分三次进行冲洗，得红色固体，烘干、称重0.09g，计算产率56.2％。
5,5’-二乙基靛玉红-3’-羟肟(1e)：
红色粉末；产率：56.2％；熔点(m.p.)：≧330℃；ir:3430,2923,2854,1657,1620,1574,1476,1401,1293,1152,1056,1006,798,613cm-1；ei-ms(m/z):c20h19n3o2,333.38；found:331.9(m-1)；1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:11.67(s,1h,oh),10.56(s,1h,nh),8.49(s,1h,ch),8.10(s,1h,ch),7.34-7.22(m,2h,ch),6.96(d,j＝7.9hz,1h,ch),6.79(d,j＝7.8hz,1h,ch),2.62(dd,j＝7.5,2.5hz,4h),1.21(dt,j＝15.4,7.6hz,6h)。
实施例6.合成5,5’-二三氟甲氧基靛玉红-3’-羟肟(1f)：
称取5,5’-二三氟甲氧基靛玉红0.22g(0.0005mol)，加入到100ml烧瓶中，再向烧瓶中加入10ml吡啶溶解原料，然后向该烧瓶中加入0.32g(0.005mol)盐酸羟胺，接着反应在120℃油浴中条件下回流1.5h；其间对反应液进行薄层色谱(tlc)检测，监测结果显示出现新的点，表明有新的产物生成。待反应结束后，反应液晾凉，向反应液中加入30ml水，有红色固体析出，过滤，用1％盐酸对析出固体进行冲洗，再用150ml水分三次进行冲洗，得红色固体，烘干、称重0.15g，计算产率68.2％。
红色粉末；产率：68.2％；熔点(m.p.)：≧330℃；ir:3412,3146,1669,1621,1575,1476,1401,892,820,618cm-1；ei-ms(m/z):c18h9f6n3o4,445.27；found:443.6(m-1)；1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:13.95(s,1h,oh),11.89(s,1h,nh),10.93(s,1h,nh),8.58(s,1h,ch),8.13(s,1h,ch),7.56(d,j＝8.7hz,1h,ch),7.47(dd,j＝8.7,1.8hz,1h,ch),7.13(dd,j＝8.5,1.2hz,1h,ch),6.95(d,j＝8.4hz,1h,ch)。
对肿瘤细胞抑制活性测试：
处于对数生长期的人结肠癌细胞株hct-116(肺癌细胞株a549、人慢性髓系白血病细胞k562、小鼠胚胎成骨细胞前体细胞mc-3t3-e1、小鼠单核巨噬细胞白血病细胞raw264.7a549)细胞按合适密度接种至96孔培养板中，放置于5％co2、37℃恒温培养箱中。培养过夜后，按照100μm、50μm、25μm、12.5μm、6.25μm、3.125μm及1.56μm7个浓度，每个浓度3个重复孔加药，并设空白对照，dmso对照，24h后加入5mg/ml的mtt(20μl/孔)，继续培养4.0h。弃去培养上清，然后加入dmso(200μl/孔)，用酶标仪在490nm测定每孔吸光度值，计算对肿瘤细胞抑制率。
采用以下列公式计算化合物对肿瘤细胞生长的抑制率(％)：
细胞抑制率＝(实验组od值-dmso对照组od值)/空白对照组od值×100％；然后采用spss19.0计算ic50值。
对于初步实验抑制活性较好的化合物，进一步调整浓度在20μmol/l、10μmol/l、5μmol/l、2.5μmol/l、1.25μmol/l、0.625μmol/l梯度浓度进行实验。
结果见表1.
表1靛玉红及其衍生物抑制肿瘤细胞的活性
本发明所设计的新型靛玉红衍生物具有抑制肿瘤细胞的作用，可以在治疗肿瘤的药物中使用。