本发明属于病毒检测技术领域，具体地涉及一种儿童呼吸道分泌物甲型h1n1型流感病毒rna快速定量检测用引物组。
本发明还涉及利用上述的引物组检测儿童呼吸道分泌物甲型h1n1型流感病毒的方法。
本发明还涉及利用上述的引物组检测儿童呼吸道分泌物甲型h1n1型流感病毒的快速定量检测试剂盒。
背景技术：
流感和其他呼吸道感染的临床症状可能非常相似，因此很难区分，只有实验室才能对流感病毒提供准确的诊断。而甲型h1n1为最常见的易受季节影响而爆发流行，及时准确的鉴定病毒种类对疾病的治疗具有重要的意义。
目前诊断流感的常规方法包括病毒分离、抗原/抗体检测和分子生物学方法(如逆转录聚合酶链反应(rt-pcr)和实时rt-pcr(rrt-pcr)等)。病毒分离需要数天到数周才能得到结果，不适于其在流感流行期间的临床检测，且需要高度复杂的生物安全实验室；血清学检测(抗原/抗体检测)的循环周期虽然能够满足临床对及时性的需求，但是敏感性和检出率太低，只能作为辅助方法。
虽然常规pcr与实时定量pcr技术是现在使用较为广泛的分子生物学检测方法，由于需要昂贵的仪器设备、较高检测费用以及对检测人员较高的技术要求而使其不适用于现场快速检测及基层普及应用。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种儿童呼吸道分泌物甲型h1n1型流感病毒rna快速定量检测用引物组。
本发明的又一目的是提供一种儿童呼吸道分泌物甲型h1n1型流感病毒rna快速定量简便的检测方法。
本发明的再一目的是提供一种检测儿童呼吸道分泌物甲型h1n1型流感病毒的快速定量简便的检测用试剂盒。
为实现上述目的，本发明提供的儿童呼吸道分泌物甲型h1n1型流感病毒检测用引物组，由外引物对f3/b3和内引物对fip/bip组成，f3、b3、fip、bip具体如下：
本发明提供的利用上述的引物组检测儿童呼吸道分泌物甲型h1n1型流感病毒的方法，包括以下步骤：
1)提取待测样品rna；
2)配制rt-lamp检测反应体系，反应体系包括引物：f3、b3、fip、bip；
3)以步骤1中提取的rna为模版进行rt-lamp扩增反应，观察绿色荧光强度或通过琼脂糖凝胶电泳定量rna浓度。
所述的方法中，rt-lamp检测反应体系为：
dntps1.4mm，tris-hclph＝8.8,20mm，(nh4)2so410mm，kcl10mm，mgso48mm，甜菜碱0.8m，0.1％tween20，bstdna聚合酶8u，amv逆转录酶0.5u，荧光染料sybrgreeni1μl，h1n1病毒rna2μl；63摄氏度扩增1h，将反应管置于80摄氏度水浴5min终止反应。
所述的方法中，f3、b3的浓度是0.2μm，fip、bip的浓度是1.6μm。
本发明提供的利用上述的引物组检测儿童呼吸道分泌物甲型h1n1型流感病毒的快速定量检测试剂盒，试剂盒至少包括含有上述的引物或上述rt-lamp检测反应体系。
所述的快速定量检测试剂盒中，rt-lamp检测反应体系为：
dntps1.4mm，tris-hclph＝8.8,20mm，(nh4)2so410mm，kcl10mm，mgso48mm，甜菜碱0.8m，0.1％tween20，bstdna聚合酶8u，amv逆转录酶0.5u，荧光染料sybrgreeni1μl，h1n1病毒rna2μl。
本发明提出了一种操作简便、快速准确、易推广的检测方法以及检测试剂盒，具有较高的灵敏度，不需要昂贵仪器，能够在现场病原体及基层检测中使用，对儿童甲型流感病毒的监测与控制具有重要意义。
具体实施方式
以下对本发明作进一步的描述。
本发明的操作步骤是：
1、提取rna；
使用genejet病毒dna/rna纯化试剂盒(thermofisherscientific，usa)，按说明从分泌物中提取病毒rna。
2、引物序列：
3、以步骤1中提取的rna为模版进行rt-lamp扩增反应，rt-lamp检测反应体系总反应体积为25μl。
4、rt-lamp检测反应体系为：
dntps(1.4mm),tris-hcl(ph8.8,20mm),(nh4)2so4(10mm),kcl(10mm),mgso4(8mm),甜菜碱(0.8m),0.1％tween20，bstdna聚合酶(8u)，amv逆转录酶(0.5u)，荧光染料(sybrgreeni1μl)，h1n1病毒rna(2μl)。63摄氏度扩增1h，将反应管置于80摄氏度水浴5min终止反应。观察绿色荧光强度或通过琼脂糖凝胶电泳定量rna浓度。
本发明的优越之处在于可以通过颜色变化肉眼判定结果从而达到可视化的要求，使得本发明在实际应用中更加简便、快捷，并且容易操作、适用于现场操作。