1.长裂苦苣菜生物碱三级分离物,其特征在于,所述三级分离物由包括以下步骤的方法制备得到:
(1)制备长裂苦苣菜提取物;
(2)将步骤(1)得到的长裂苦苣菜提取物配制成100mg/ml的供试液,采用制备色谱法进行分离,色谱条件如下:
采用c18硅胶柱,以0.1%甲酸水溶液为流动相a,以甲醇为流动相b,流速10ml/min,柱温27-33℃,波长为255-265nm,梯度洗脱程序为:
在0-5min的时间范围内,流动相a的体积由95%变为60%,流动相b的体积由5%变为40%;
在5-15min的时间范围内,流动相a的体积由60%变为30%,流动相b的体积由40%变为70%;
在15-30min的时间范围内,流动相a的体积由30%变为20%,流动相b的体积由70%变为80%;
在30-35min的时间范围内,流动相a的体积保持为20%,流动相b的体积保持为80%;
收集峰高范围在420-2000mau的馏分,得到初级分离物;
(3)将步骤(2)得到的初级分离物浓缩、干燥后,配制成10mg/ml的供试液并采用制备色谱法分离,色谱条件如下:
采用c18硅胶柱,以0.1%甲酸水溶液为流动相a,以甲醇为流动相b,流速10ml/min,柱温27-33℃,波长为255-265nm,梯度洗脱程序为:
在0-5min的时间范围内,流动相a的体积由95%变为60%,流动相b的体积由5%变为40%;
在5-15min的时间范围内,流动相a的体积由60%变为30%,流动相b的体积由40%变为70%;
在15-30min的时间范围内,流动相a的体积由30%变为20%,流动相b的体积由70%变为80%;
在30-35min的时间范围内,流动相a的体积保持为20%,流动相b的体积保持为80%;
收集峰高范围在0.2-1.8au的馏分,得到次级分离物;
(4)采用分析色谱法分离步骤(3)得到的次级分离物,色谱条件如下:
采用c18硅胶柱,以0.1%甲酸水溶液为流动相a,以甲醇为流动相b,流速1ml/min,柱温30℃,波长为260nm,梯度洗脱程序为:
在0-8min的时间范围内,流动相a的体积由95%变为75%,流动相b的体积由5%变为25%;
在8-10min的时间范围内,流动相a的体积由75%变为65%,流动相b的体积由25%变为35%;
在10-20min的时间范围内,流动相a的体积由65%变为40%,流动相b的体积由35%变为60%;
在20-24min的时间范围内,流动相a的体积由40%变为20%,流动相b的体积有60%变为80%;
在24-27min的时间范围内,流动相a的体积保持为20%,流动相b的体积保持为80%,收集16-18min的馏分,得到三级分离物。
2.根据权利要求1所述的长裂苦苣菜生物碱三级分离物,其特征在于,步骤(2)中,柱温为30℃,波长为260nm。
3.根据权利要求1所述的长裂苦苣菜生物碱三级分离物,其特征在于,长裂苦苣菜提取物由包括以下步骤的方法制备得到:
以75%乙醇为溶剂,将长裂苦苣菜制成液料比为30ml/g的提取溶液,调节提取溶液的ph为5,进行超声提取,超声提取后,静置,取上清液,旋转蒸发后冷却干燥,即得。
4.根据权利要求3所述的长裂苦苣菜生物碱三级分离物,其特征在于,超声提取的功率为700w,温度为55℃,超声时间为30min。
5.长裂苦苣菜生物碱三级分离物的分离方法,其特征在于,所述分离方法包括以下步骤:
(1)制备长裂苦苣菜提取物;
(2)将步骤(1)得到的长裂苦苣菜提取物配制成100mg/ml的供试液,采用制备色谱法进行分离,色谱条件如下:
采用c18硅胶柱,以0.1%甲酸水溶液为流动相a,以甲醇为流动相b,流速10ml/min,柱温27-33℃,波长为255-265nm,梯度洗脱程序为:
在0-5min的时间范围内,流动相a的体积由95%变为60%,流动相b的体积由5%变为40%;
在5-15min的时间范围内,流动相a的体积由60%变为30%,流动相b的体积由40%变为70%;
在15-30min的时间范围内,流动相a的体积由30%变为20%,流动相b的体积由70%变为80%;
在30-35min的时间范围内,流动相a的体积保持为20%,流动相b的体积保持为80%;
收集峰高范围在420-2000mau的馏分,得到初级分离物;
(3)将步骤(2)得到的初级分离物浓缩、干燥后,配制成10mg/ml的供试液并采用制备色谱法分离,色谱条件如下:
采用c18硅胶柱,以0.1%甲酸水溶液为流动相a,以甲醇为流动相b,流速10ml/min,柱温27-33℃,波长为255-265nm,梯度洗脱程序为:
在0-5min的时间范围内,流动相a的体积由95%变为60%,流动相b的体积由5%变为40%;
在5-15min的时间范围内,流动相a的体积由60%变为30%,流动相b的体积由40%变为70%;
在15-30min的时间范围内,流动相a的体积由30%变为20%,流动相b的体积由70%变为80%;
在30-35min的时间范围内,流动相a的体积保持为20%,流动相b的体积保持为80%;
收集峰高范围在0.2-1.8au的馏分,得到次级分离物;
(4)采用分析色谱法分离步骤(3)得到的次级分离物,色谱条件如下:
采用c18硅胶柱,以0.1%甲酸水溶液为流动相a,以甲醇为流动相b,流速1ml/min,柱温30℃,波长为260nm,梯度洗脱程序为:
在0-8min的时间范围内,流动相a的体积由95%变为75%,流动相b的体积由5%变为25%;
在8-10min的时间范围内,流动相a的体积由75%变为65%,流动相b的体积由25%变为35%;
在10-20min的时间范围内,流动相a的体积由65%变为40%,流动相b的体积由35%变为60%;
在20-24min的时间范围内,流动相a的体积由40%变为20%,流动相b的体积有60%变为80%;
在24-27min的时间范围内,流动相a的体积保持为20%,流动相b的体积保持为80%,收集16-18min的馏分,得到三级分离物。
6.根据权利要求5所述的长裂苦苣菜生物碱三级分离物的分离方法,其特征在于,步骤(2)中,柱温为30℃,波长为260nm。
7.根据权利要求5所述的长裂苦苣菜生物碱三级分离物的分离方法,其特征在于,长裂苦苣菜提取物由包括以下步骤的方法制备得到:
以75%乙醇为溶剂,将长裂苦苣菜制成液料比为30ml/g的提取溶液,进行超声提取,超声提取后,静置,取上清液,旋转蒸发后冷却干燥即得。
8.根据权利要求5所述的长裂苦苣菜生物碱三级分离物的分离方法,其特征在于,超声提取的功率为700w,温度为55℃,超声时间为30min。
9.根据权利要求1所述的长裂苦苣菜生物碱三级分离物的应用。