六臂星型的两亲性聚合物及其制备方法和制成的纳米水凝胶载药体系与流程

本发明属于生物医用高分子聚合物材料技术领域，特别涉及一种六臂星型的两亲性聚合物及其制备方法，及基于其的纳米水凝胶载药体系。

背景技术：

水凝胶是由水或亲水溶剂配制形成的一类具有三维交联亲水性网络的材料，利用它们的结构特点，可以包载各种不同物化性质的客体分子，并以溶胀、扩散和降解等方式将其释放。在过去几十年中，水凝胶在药物释放、香水缓释、农药控释等方面被深入研究并发展了广泛应用。在制备水凝胶的多种方法中，含有聚合物纳米颗粒、树枝状聚合物和聚合物胶束的水凝胶，由于它们可以同时包载亲水性和疏水性分子，因此在诸多领域都有其独一无二的优点。具有响应性的水凝胶用于载药时，温度、ph、还原性、磁场和光照等环境的刺激，可以引起凝胶自身孔径、体积和微观结构发生变化，改变化疗药物体内循环时间，延长治疗时间并降低毒副作用，因而受到了广泛关注。

如今，关于刺激响应水凝胶的其中一个研究热点就是发展二重或多重刺激响应，因为它们可以结合两个或多个刺激(同时或逐步)，从而拓展了应用范围。其中，利用肿瘤环境ph刺激信号的变化和其他刺激响应结合进行抗肿瘤药物释放行为的可控释放，是抗肿瘤药物递送系统研究热点之一。专利申请cn106237336a公布了ph/温度双重响应性的纳米水凝胶载药体系在乳腺癌治疗中的应用。专利cn109864967a申请公布了具有ph/温度双重响应性载药水凝胶载药体系的制备方法。

而基于聚合物胶束交联的水凝胶，它们在特定条件下可展现溶胶－凝胶转变，这使得他们可以被应用于负载疏水抗肿瘤药物的递送系统。载体其中由星型聚合物形成的聚合物胶束，由于具有较小的流体力学体积与回转半径，在水溶液中粘度更低并且分子拓扑结构更加致密，有利于形成三维网络结构的水凝胶。专利申请cn109431971a公布了一种可以用于局部注的射载药水凝胶，包括但不限于瘤内注射、瘤旁注射等实体瘤的治疗，但并未针对其响应性作进一步的探究。

技术实现要素：

为了克服上述现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种六臂星型的两亲性聚合物6-as-pcl-paa-ppegma；该聚合物是二季戊四醇、ε-cl、tba、pegma依次聚合后水解得到六臂星型的两亲性聚合物6-as-pcl-paa-ppegma。

本发明另一目的在于提供一种上述六臂星型的两亲性聚合物6-as-pcl-paa-ppegma的制备方法。该方法首先用对季戊四醇的羟基引发己内酯发生开环聚合，合成一段pcl嵌段的共聚物，得到6-as-pcl，接着让其与2-溴异丁酰溴反应，对其末端功能化得到6-as-pcl-br，然后依次与单体(tba)和大分子单体甲基丙烯酸单甲氧基聚乙二醇酯(pegma)进行电子转移活化再生原子转移自由基聚合反应(argetatrp)聚合，得到6-as-pcl-ptba-ppegma，然后在此基础上，加入tfa使ptba嵌段末端发生水解，得到的产物即6-as-pcl-paa-ppegma。

本发明再一目的在于提供一种基于上述的六臂星型的两亲性聚合物6-as-pcl-paa-ppegma的胶束溶液；将本发明的六臂星型的两亲性聚合物6-as-pcl-paa-ppegma，溶于溶剂中可制备得六臂星型的两亲性聚合物胶束溶液。

本发明再一目的在于提供一种基于上述聚合物的胶束溶液的纳米水凝胶载药体系。本发明的六臂星型的两亲性聚合物胶束中，嵌段paa中的羧基可以和螯合的三价铁离子发生络合反应，最终形成结构均匀的纳米水凝胶载药体系。

本发明再一目的在于提供上述结构均匀的纳米水凝胶载药体系在负载疏水抗肿瘤药物的递送系统中的应用。

本发明的目的通过下述方案实现：

一种六臂星型的两亲性聚合物，具有如下式(一)所示结构：

r4为：

其中，x＝5～15，y＝50～70，z＝4～10。

上述的六臂星型的两亲性聚合物的制备方法，包括以下具体步骤：

(1)制备6-as-pcl：将二季戊四醇放入反应容器中，密封然后抽真空-通氩气三次；在惰性气体的环境中，加入单体ε-己内酯(ε-cl)然后通过液氮进行三次冷冻-抽气-升温循环后，在油浴中反应得到产物6-as-pcl；

(2)制备引发剂6-as-pcl-br：将步骤(1)所制得的6-as-pcl溶于溶剂中，通氩气后密封，注入三乙胺，放到冰水浴中冷却；再加入2-溴异丁酰溴，冰浴反应后再室温反应得到引发剂6-as-pcl-br；

(3)制备六臂星型的聚合物6-as-pcl-ptba-ppegma：将步骤(2)所制得的引发剂6-as-pcl-br和催化剂放入反应容器中，密封后抽真空-通氩气，依次加入溶剂、单体丙烯酸叔丁酯(tba)、部分配体六甲基三亚乙基四胺(hmteta)充分搅拌后，再加入部分还原剂，搅拌后进行油浴反应，再加入单体甲基丙烯酸单甲氧基聚乙二醇酯(pegma)、剩余的配体六甲基三亚乙基四胺(hmteta)和剩余的还原剂的混合液，继续反应；反应完成后经过过柱、旋蒸、沉淀、真空干燥后，得到六臂星型的聚合物6-as-pcl-ptba-ppegma；所述部分配体六甲基三亚乙基四胺的加入量为六甲基三亚乙基四胺总摩尔量的47％～75％，所述剩余的配体六甲基三亚乙基四胺的加入量为六甲基三亚乙基四胺总摩尔量的25％～53％；所述部分还原剂的加入量为还原剂总摩尔量的47％～75％，所述剩余的还原剂的加入量为还原剂总摩尔量的25％～53％；

(4)制备六臂星型的两亲性聚合物6-as-pcl-paa-ppegma：将步骤(3)所制得的六臂星型的聚合物加入溶剂中，搅拌至聚合物溶解，冰水浴，加入三氟乙酸(tfa)，冰浴反应后，继续室温反应，反应完成经旋转蒸发、沉淀、真空干燥，得到六臂星型的两亲性聚合物6-as-pcl-paa-ppegma。

所述步骤(1)中反应物的摩尔份数配方如下：

二季戊四醇1份

ε-己内酯30～90份；

所述步骤(2)中反应物的摩尔份数配方如下：

6-as-pcl1份

三乙胺6～10份

2-溴异丁酰溴6～10份；

所述步骤(3)中反应物的摩尔份数配方如下：

所述步骤(4)中反应物的摩尔份数配方如下：

六臂星型聚合物1份

三氟乙酸300～420份。

步骤(1)中所述的在油浴中反应是指加热到130～150℃反应24～48h。

步骤(2)中所述的冰浴反应是指反应4～6h，室温反应是指反应24～48h；

步骤(3)中所述的油浴反应是指加热到50～80℃反应24～48h；

步骤(4)中所述的冰浴反应是指反应2～5h，继续室温反应是指反应22～24h。

步骤(3)中所述的溶剂用于提供溶液反应环境，可为本领域常用有机溶剂即可，如甲苯。

步骤(3)中所述的催化剂为本领域常用二价铜催化剂即可，如cubr2，其用量为催化量即可。

步骤(3)中所述还原剂为本领域常用还原剂即可，如sn(oct)2或抗坏血酸，其用量与配体用量一致即可。

步骤(2)和(4)中所述的溶剂用于提供溶液反应环境，可为本领域常用有机溶剂即可，如四氢呋喃或二氯甲烷。

步骤(1)反应完成后，优选将反应体系纯化、干燥，得到纯化后的产物。所述的纯化优选指采用减压蒸馏的方法将甲苯蒸出，然后溶于四氢呋喃后，最后旋蒸浓缩，加入10倍体积的0℃甲醇沉淀。

步骤(2)反应完成后，优选将反应体系纯化、干燥，得到纯化后的产物。所述的纯化优选指利用中性氧化铝过柱除掉季铵盐，最后旋蒸浓缩，加入10倍体积的0℃甲醇沉淀。

步骤(3)反应完成后，优选将反应体系冷却、纯化、干燥，得到纯化后的产物。所述的纯化优选指先将产物溶解于四氢呋喃，然后过中性氧化铝层析柱除去催化剂，最后旋蒸浓缩，加入10倍体积的0℃正己烷沉淀。

步骤(4)反应完成后，优选将反应体系冷却、纯化、干燥，得到纯化后的产物。所述的纯化优选指先将产物旋蒸浓缩，然后溶解于四氢呋喃，最后加入10倍体积的0℃正己烷沉淀。

优选地，上述反应均在惰性气体保护和无水条件下进行。

一种基于上述的六臂星型的两亲性聚合物的胶束溶液，该胶束溶液通过将六臂星型的两亲性聚合物溶于溶剂中制备得到。

一种基于上述的六臂星型的两亲性聚合物的胶束溶液的纳米水凝胶载药体系，该纳米水凝胶体系通过将六臂星型的两亲性聚合物和可水溶性铁盐分别溶于同一种溶剂中后，将可水溶性铁盐溶液加入六臂星型的两亲性聚合物的胶束溶液中混合搅拌，得到纳米水凝胶载药体系。

所述的可水溶性金盐可为六水合三氯化铁等。所述的溶剂优选为水。

上述的六臂星型的两亲性聚合物的胶束溶液的纳米水凝胶载药体系在负载疏水抗肿瘤药物的递送系统中的应用。在上述混合搅拌前可通过在聚合物胶束溶液中加入疏水抗肿瘤药物，则混合搅拌后即得到纳米水凝胶载药产物。

本发明的原理：

本发明利用对季戊四醇作引发剂开环聚合(rop)和argetatrp的方法得到了适合分子量六臂星型嵌段共聚物6-as-pcl-ptba-ppegma，经水解去除ptba嵌段末端上的叔丁基，得到的产物即6-as-pcl-paa-ppegma,再利用聚合物胶束中的聚丙烯酸(paa)嵌段与三价铁离子(fe³⁺)之间的配位相互作用，在柠檬酸存在下引入三价铁离子(fe³⁺)，最后，制备成聚合物水凝胶，基于六臂星型的两亲性聚合物6-as-pcl-paa-ppegma胶束交联的水凝胶，在特定条件下可展现溶胶－凝胶转变，且其嵌段pcl具有可生物降解性，还具有良好的药物渗透性和无毒性，其嵌段pegma具有无毒性、无免疫原性和抗原性,这种聚合物有望被应用于负载疏水抗肿瘤药物的递送系统。

本发明相对于现有技术，具有如下的优点及有益效果：

(1)本发明的制备方法反应条件温和，操作简单，易于调控星形聚合物各嵌段的聚合度，分子量在较宽的范围内可调。

(2)本发明制备得到的六臂星型的两亲性聚合物所含的嵌段pcl、pegma具有无毒性。

(3)本发明制备得到的纳米可载药水凝胶可降解，且具有ph响应性，为负载疏水抗肿瘤药物的递送系统提供有价值的制备技术。

附图说明

图1为实施例1中6-as-pcl、6-as-pcl-br、6-as-pcl-ptba-ppegma、6-as-pcl-paa-ppegma的核磁氢谱，其中a为6-as-pcl，b为6-as-pcl-br，c为6-as-pcl-ptba-ppegma，d为6-as-pcl-paa-ppegma。

图2为实施例1中6-as-pcl、6-as-pcl-br、6-as-pcl-ptba-ppegma、6-as-pcl-paa-ppegma的gpc图。

图3为实施例4中六臂星型两亲性聚合物6-as-pcl-paa-ppegma胶束的dls图。

图4为实施例5中加入fe³⁺/citrate前后和空白的载药凝胶图，其中a为加入fe³⁺/citrate前，b为加入fe³⁺/citrate后，c为空白。

图5为实施例6中dox凝胶在ph7.4,ph5.0,ph5.0+vc,ph7.4+uvirradiation和ph5.0+vc+uvirradiation五种不同条件下的累计药物释放曲线图。

具体实施方式

下面结合实施例和附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

下列实施例中所用试剂来源均可从市场购得。

实施例1：六臂星型的两亲性聚合物6-as-pcl-paa-ppegma的制备

(1)制备大分子引发剂6-as-pcl：取100ml干燥反应瓶，用酒精灯烘烤10分钟后冷却，将搅拌子、引发剂二季戊四醇(1.27g，5mmol)加入反应瓶中，并用橡皮塞密封。抽真空-通氩气3次后，在氩气保护下加入单体ε-己内酯(34.22g，300mmol)，用液氮进行三次冷冻-抽气-升温循环后，在氩气保护下置于于150℃油浴中加热20分钟后，再加入sn(oct)2(0.1wt％ofε-cl，0.03g)，随后反应24h后停止加热，冷却茄形瓶，加入30ml无水thf溶解白色粘稠固体，在300ml冷甲醇/水(1:1，v/v)沉淀后过滤，以除去未反应的单体和催化剂，真空干燥后得到白色粉末状固体(或产物在40℃、35mb真空干燥24h)。合成反应式见公式(1)。利用核磁对分子结构和组成进行分析，结果见图1；利用gpc对聚合物6-as-pcl的合成进行分析，结果见图2。

r1为：

(2)制备6-as-pcl-br：取250ml三口烧瓶，加入搅拌子，称取制备的6as-pcl(13.09g，2mmol)加入反应瓶，加入溶剂thf(100ml)后通氩气10min，密封烧瓶后将tea(5.56ml，40mmol)注入烧瓶中，用冰水浴冷却至0℃，然后用注射器将2-溴异丁酰溴(4.94ml，40mmol)逐滴加入到烧瓶中，先在0℃反应5h后再在室温下反应36h。得到的反应液先通过中性氧化铝柱过滤除去季胺盐，再经旋转蒸发除去多余溶剂，接着用冷甲醇/水(1:1，v/v)沉淀后真空干燥。合成反应见公式(2)。利用核磁对分子结构和组成进行分析，结果见图1；利用gpc对聚合物6-as-pcl-br的合成进行分析，结果见图2。

r1为：

r2为：

(3)制备六臂星型聚合物6-as-pcl-ptba-ppegma：取100ml干燥茄形瓶装入搅拌子，称取制备的引发剂6-as-pcl-br(2.98g，0.4mmol)、cubr2(0.018g，0.08mmol)置于茄形瓶中然后用反口橡皮塞封口，抽真空-通氩气三次。依次用注射器将无水甲苯(20ml)、单体tba(18.45g,144mmol)和预先溶于2ml无水甲苯的配体hmteta(0.42ml，1.56mmol)加入瓶中，搅拌15min形成催化剂配合物cu/hmteta。再将还原剂sn(oct)2(0.51ml,1.56mmol)溶于甲苯(1ml)中加入反应瓶中，搅拌5min后转入70℃油浴中搅拌反应一定时间。待转化率达到80％后，加入单体pegma(5.7g,12mmol)和预先溶于2ml无水甲苯的配体hmteta(0.195ml，0.72mmol)和还原剂sn(oct)2混合液(0.24ml，0.72mmol)，继续反应24h。反应完成后冷却至室温，加入50mlthf并搅拌溶解反应液，接着用中性氧化铝柱子过滤除去催化剂(以thf作洗脱剂)。经过旋转蒸发去除多余溶剂后，将得到的浓缩液缓慢加入到300ml冷正己烷中沉淀，以除去小分子单体等杂质。产物在45℃、35mb下真空干燥24小时。合成反应式见公式(3)。利用核磁对分子结构和组成进行分析，结果见图1；利用gpc对聚合物6-as-pcl-ptba-ppegma的合成进行分析，结果见图2。

r2为：

r3为：

(4)制备六臂星型的两亲性聚合物6-as-pcl-paa-ppegma：把6-as-pcl-ptba-ppegma(3.14g,0.05mmol)加入100ml烧瓶中，加入搅拌子，加入无水二氯甲烷(20ml)溶解聚合物，用冰水浴冷却至0度(加入氯化钠延缓冰冻时间)，在快速搅拌下逐滴缓慢加入tfa(5.74ml,75mmol)，在0℃反应3h后再在室温下反应23h。得到的反应液经旋转蒸发除掉溶剂后，用thf溶解，再用冷正己烷沉淀，最后在40℃、35mb下真空干燥24h得到最终的目标聚合物。合成反应式见公式(4)。利用核磁对分子结构和组成进行分析，结果图1；利用gpc对聚合物6-as-pcl-paa-ppegma的合成进行分析，结果见图2。

r3为：

r4为：

其中公式中x＝10，y＝60，z＝5。

实施例2：六臂星型的两亲性聚合物6-as-pcl-paa-ppegma的制备

(1)制备大分子引发剂6-as-pcl：取100ml干燥反应瓶，用酒精灯烘烤10分钟后冷却，将搅拌子、引发剂二季戊四醇(1.27g，5mmol)加入反应瓶中，并用橡皮塞密封。抽真空-通氩气3次后，在氩气保护下加入单体ε-己内酯(17.11g，150mmol)，用液氮进行三次冷冻-抽气-升温循环后，在氩气保护下置于于130℃油浴中加热20分钟后，再加入sn(oct)2(0.1wt％ofε-cl,0.03g)，随后反应24h后停止加热，冷却茄形瓶，加入30ml无水thf溶解白色粘稠固体，在300ml冷甲醇/水(1:1，v/v)沉淀后过滤，以除去未反应的单体和催化剂，真空干燥后得到白色粉末状固体(或产物在40℃、35mb真空干燥24h)。合成反应式见公式(1)。

(2)制备6-as-pcl-br：取250ml三口烧瓶，加入搅拌子，称取制备的6as-pcl(13.09g，2mmol)加入反应瓶，加入溶剂thf(100ml)后通氩气10min，密封烧瓶后将tea(5.56ml，40mmol)注入烧瓶中，用冰水浴冷却至0℃，然后用注射器将2-溴异丁酰溴(4.94ml，40mmol)逐滴加入到烧瓶中，先在0℃反应4h后再在室温下反应24h。得到的反应液先通过中性氧化铝柱过滤除去季胺盐，再经旋转蒸发除去多余溶剂，接着用冷甲醇/水(1:1，v/v)沉淀后真空干燥。合成反应见公式(2)。

(3)制备六臂星型聚合物6-as-pcl-ptba-ppegma：取100ml干燥茄形瓶装入搅拌子，称取制备的引发剂6-as-pcl-br(2.98g，0.4mmol)、cubr2(0.018g，0.08mmol)置于茄形瓶中然后用反口橡皮塞封口，抽真空-通氩气三次。依次用注射器将无水甲苯(20ml)、单体tba(21.53g,168mmol)和预先溶于2ml无水甲苯的配体hmteta(0.50ml，1.84mmol)加入瓶中，搅拌15min形成催化剂配合物cu/hmteta。再将还原剂sn(oct)2(0.060ml,1.84mmol)溶于甲苯(1ml)中加入反应瓶中，搅拌5min后转入80℃油浴中搅拌反应一定时间。待转化率达到80％后，加入单体pegma(11.4g,24mmol)和预先溶于2ml无水甲苯的配体hmteta(0.39ml，1.44mmol)和还原剂sn(oct)2混合液(0.47ml，1.44mmol)，继续反应24h。反应完成后冷却至室温，加入50mlthf并搅拌溶解反应液，接着用中性氧化铝柱子过滤除去催化剂(以thf作洗脱剂)。经过旋转蒸发去除多余溶剂后，将得到的浓缩液缓慢加入到300ml冷正己烷中沉淀，以除去小分子单体等杂质。产物在45℃、35mb下真空干燥24小时。合成反应式见公式(3)。

(4)制备六臂星型的两亲性聚合物6-as-pcl-paa-ppegma：把6-as-pcl-ptba-ppegma(3.14g,0.05mmol)加入100ml烧瓶中，加入搅拌子，加入无水二氯甲烷(20ml)溶解聚合物，用冰水浴冷却至0度(加入氯化钠延缓冰冻时间)，在快速搅拌下逐滴缓慢加入tfa(5.74ml,75mmol)，在0℃反应5h后再在室温下反应24h。得到的反应液经旋转蒸发除掉溶剂后，用thf溶解，再用冷正己烷沉淀，最后在40℃、35mb下真空干燥24h得到最终的目标聚合物。合成反应式见公式(4)，其中公式中x＝5，y＝70，z＝10。

实施例3：六臂星型的两亲性聚合物6-as-pcl-paa-ppegma的制备

(1)制备大分子引发剂6-as-pcl：取100ml干燥反应瓶，用酒精灯烘烤10分钟后冷却，将搅拌子、引发剂二季戊四醇(1.27g，5mmol)加入反应瓶中，并用橡皮塞密封。抽真空-通氩气3次后，在氩气保护下加入单体ε-己内酯(51.33g，450mmol)，用液氮进行三次冷冻-抽气-升温循环后，在氩气保护下置于于130℃油浴中加热20分钟后，再加入sn(oct)2(0.1wt％ofε-cl,0.03g)，随后反应48h后停止加热，冷却茄形瓶，加入30ml无水thf溶解白色粘稠固体，在300ml冷甲醇/水(1:1，v/v)沉淀后过滤，以除去未反应的单体和催化剂，真空干燥后得到白色粉末状固体(或产物在40℃、35mb真空干燥24h)。合成反应式见公式(1)。

(2)制备6-as-pcl-br：取250ml三口烧瓶，加入搅拌子，称取制备的6as-pcl(13.09g，2mmol)加入反应瓶，加入溶剂thf(100ml)后通氩气10min，密封烧瓶后将tea(5.56ml，40mmol)注入烧瓶中，用冰水浴冷却至0℃，然后用注射器将2-溴异丁酰溴(4.94ml，40mmol)逐滴加入到烧瓶中，先在0℃反应6h后再在室温下反应48h。得到的反应液先通过中性氧化铝柱过滤除去季胺盐，再经旋转蒸发除去多余溶剂，接着用冷甲醇/水(1:1，v/v)沉淀后真空干燥。合成反应见公式(2)。

(3)制备六臂星型聚合物6-as-pcl-ptba-ppegma：取100ml干燥茄形瓶装入搅拌子，称取制备的引发剂6-as-pcl-br(2.98g，0.4mmol)、cubr2(0.018g，0.08mmol)置于茄形瓶中然后用反口橡皮塞封口，抽真空-通氩气三次。依次用注射器将无水甲苯(20ml)、单体tba(15.38g,120mmol)和预先溶于2ml无水甲苯的配体hmteta(0.36ml，1.32mmol)加入瓶中，搅拌15min形成催化剂配合物cu/hmteta。再将还原剂sn(oct)2(0.43ml,1.32mmol)溶于甲苯(1ml)中加入反应瓶中，搅拌5min后转入50℃油浴中搅拌反应一定时间。待转化率达到80％后，加入单体pegma(4.56g,9.6mmol)和预先溶于2ml无水甲苯的配体hmteta(0.16ml，0.6mmol)和还原剂sn(oct)2混合液(0.20ml，0.6mmol)，继续反应24h。反应完成后冷却至室温，加入50mlthf并搅拌溶解反应液，接着用中性氧化铝柱子过滤除去催化剂(以thf作洗脱剂)。经过旋转蒸发去除多余溶剂后，将得到的浓缩液缓慢加入到300ml冷正己烷中沉淀，以除去小分子单体等杂质。产物在45℃、35mb下真空干燥24小时。

(4)制备六臂星型的两亲性聚合物6-as-pcl-paa-ppegma：把6-as-pcl-ptba-ppegma(3.14g,0.05mmol)加入100ml烧瓶中，加入搅拌子，加入无水二氯甲烷(20ml)溶解聚合物，用冰水浴冷却至0度(加入氯化钠延缓冰冻时间)，在快速搅拌下逐滴缓慢加入tfa(5.74ml,75mmol)，在0℃反应2h后再在室温下反应22h。得到的反应液经旋转蒸发除掉溶剂后，用thf溶解，再用冷正己烷沉淀，最后在40℃、35mb下真空干燥24h得到最终的目标聚合物。合成反应式见公式(4)，其中公式中x＝15，y＝50，z＝4。

实施例4：两亲性星型聚合物6-as-pcl-paa-ppegma胶束溶液的制备

称取制备的两亲性星型聚合物6-as-pcl-paa-ppegma(687.7mg,0.015mmol)溶于30ml无水二氯甲烷中，再加入10ml去离子水，搅拌24h挥发掉二氯甲烷形成聚合物胶束溶液。

利用动态光散射(dls)测试水溶液中星型聚合物6-as-pcl-paa-ppegma的粒径和电位，取0.5ml聚合物胶束溶液稀释成1mg/ml，稳定24h后，于室温下，通过动态光散射(dls)测试水溶液中星型聚合物的粒径和电位；测得粒径为175nm(结果见图3)，pdi为0.145，电位为-30.19mv，是适用于抗肿瘤药物载体的纳米聚合物。

实施例5：制备空白和载dox纳米凝胶

取5ml聚合物胶束溶液，在快速搅拌下加入0.5ml预先用六水合三氯化铁(fecl3·6h20)和一水合柠檬酸配成的柠檬酸铁溶液(fe³⁺＝0.02mol/l，fe³⁺与citrate的摩尔比为l：2，溶液ph＝4)，迅速搅拌，几分钟后溶液粘度逐渐变大，静置后转变为凝胶，即为空白纳米凝胶；取5ml聚合物胶束溶液加入阿霉素(50mg)，在快速搅拌下加入0.5ml预先用六水合三氯化铁(fecl3·6h20)和一水合柠檬酸配成的柠檬酸铁溶液(fe³⁺＝0.02mol/l，fe³⁺与citrate的摩尔比为l：2，溶液ph＝4)，迅速搅拌，几分钟后溶液粘度逐渐变大，静置后转变为载dox的纳米凝胶，结果图4。

实施例6：体外释放实验

取25mg载dox纳米凝胶分散于10mlpbs缓冲溶液中，接着分成五等份；

(1)取两份凝胶液样品先用紫外光照射，照射功率为300mw/cm²，照射时间为15min，然后转入透析袋中，将透析袋分别放入48mlpbs磷酸盐缓冲溶液(ph7.4)和醋酸缓冲液(ph5.0+1mg/mlofvitaminc)中后置于摇床中，在37℃，100rpm转速下进行体外释放，定时取样2ml，在紫外可见分光光度计上测其480nm吸光度，为了保持溶液总体积不变，同时补充2ml新鲜缓冲液。

(2)取其他三份凝胶液样品，转入透析袋中，将透析袋分别放入48mlpbs磷酸盐缓冲溶液(ph7.4)，醋酸缓冲液(ph5.0)和醋酸缓冲液(ph5.0+1mg/mlofvitaminc)中后置于摇床中，在37℃，100rpm转速下进行体外释放，定时取样2ml，在紫外可见分光光度计上测其480nm吸光度，为了保持溶液总体积不变，同时补充2ml新鲜缓冲液。用下面公式计算dox的累积释放量er。

式中er：dox累积释放量，％；ve：缓冲液的置换体积，4.0ml；v0：释放介质的体积，100ml；ci：第i次置换取样时释放液中dox的浓度，g/ml；mdox：用于释放的载药胶束中dox的质量，g；n：n为置换缓冲液的次数。为了评价纳米凝胶6-as-pcl-paa-ppegma的药物释放性能，研究了载dox凝胶在ph7.4,ph5.0,ph5.0+vc,ph7.4+uvirradiation和ph5.0+vc+uvirradiation五种不同条件下的药物释放行为，结果见图5。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。