一种手动细胞外囊泡分离系统的制作方法

本实用新型涉及细胞外囊泡分离系统，具体涉及一种手动细胞外囊泡分离系统。

背景技术：

申请号为201910156434.3的专利申请涉及一种细胞外囊泡提取方法与试剂盒，中所涉及到的细胞外囊泡提取试剂盒，由于受其包含的分离装置形制和流速限制，而必须由泵(例如：独立的蠕动泵、柱塞泵以及快速蛋白纯化系统)驱动样本流过分离柱，杂质吸附于分离柱上，细胞外囊泡直接流过，从而达到提取目的样本中的细胞外囊泡的目的。但使用中所需要的泵不是一般生物实验室的常规配置设备，而且需要电源作为动力，给常规的生物实验带来一定的不便，并且设备单独购置也需要数千到数十万成本，从而导致使用受到一定的限制。

技术实现要素：

针对以上不足，本实用新型所要解决的技术问题是提供一种手动细胞外囊泡分离系统，该系统可以在不需要电源，仅使用试剂盒所包括的手动装置，利用真空产生的压力差，即可快速分离细胞外囊泡的目的，造价低廉、使用方便。

为解决以上技术问题，本实用新型采用的技术方案是，

一种手动细胞外囊泡分离系统，包括上样器、纯化柱、出液容器和手动操作的抽吸组件，上样器和出液容器分别固定安装在纯化柱的两端，抽吸组件分别连接在纯化柱的两端。

在采用以上技术方案的同时，本实用新型还进一步采用或者组合采用了以下技术方案。

抽吸组件包括手动真空泵和抽吸管，手动真空泵固定连接在出液容器与纯化柱的连接处，抽吸管固定安装在上样器与纯化柱的连接处。

在上样器与纯化柱的连接处固定连接有三通阀，抽吸管与三通阀固定连接，在出液容器与纯化柱的连接处固定连接有出液转接头，手动真空泵与出液转接头固定连接。

出液转接头包括纯化柱连接管、外套管和真空泵连接管，纯化柱连接管与外套管固定连接，真空泵连接管与外套管连接。

纯化柱连接管伸入外套管设置，纯化柱连接管伸入外套管内侧的位置低于真空泵连接管与外导管连接的位置。

手动真空泵与出液转接头之间通过连接管路和管路转接头固定连接，管路转接头的一端与出液转接头固定连接，管路转接头的另一端与连接管路固定连接。

管路转接头的一端为鲁尔接口，鲁尔接口与出液转接头固定连接，管路转接头的另一端为宝塔头，宝塔头与连接管路固定连接。

在手动真空泵上设有气压表。

在倒置纯化柱的上下两端分别固定连接有双母鲁尔接头和双公鲁尔接头，双母鲁尔接头与三通阀固定连接，双公鲁尔接头与出液转接头固定连接。

纯化柱为多孔颗粒填料装填的层析柱。

本实用新型的有益效果是，通过手动控制抽吸组件的设置，使得纯化柱的两端产生的压力差，从而实现快速分离细胞外囊泡的目的，结构简单，造价低廉，使用简便，有利于在常规生物实验室中推广使用。

附图说明

图1是本实用新型的结构示意图；

图2是本实用新型的爆炸图；

图3是出液转接头的剖视图。

图4是本实用新型进行操作是的液流流向示意图。

附图标记：上样器1，纯化柱2，出液容器3，抽吸组件4，手动真空泵5，抽吸管6，三通阀7，出液转接头8，纯化柱连接管9，外套管10，真空泵连接管11，连接管路12，管路转接头13，气压表14。

具体实施方式

下面结合附图对本实用新型进行进一步描述。

一种手动细胞外囊泡分离系统，包括上样器1、纯化柱2、出液容器3和手动操作的抽吸组件4，上样器1和出液容器3分别固定安装在纯化柱2的两端，抽吸组件4分别连接在纯化柱2的两端，通过手动控制抽吸组件4的设置，使得纯化柱2的两端产生的压力差，从而实现快速分离细胞外囊泡的目的，结构简单，造价低廉，有利于在常规的生物实验中推广使用。

抽吸组件4包括手动真空泵5和抽吸管6，手动真空泵5固定连接在出液容器3与纯化柱2的连接处，抽吸管6固定安装在上样器1与纯化柱2的连接处，通过控制手动真空泵5对纯化柱2进行抽真空操作，抽吸管6用于上样和排空三通阀内的空气。

在上样器1与纯化柱2的连接处固定连接有三通阀7，抽吸管6与三通阀7固定连接，通过三通阀7的设置，便于进行上样和三通阀内排气的操作进行，在出液容器3与纯化柱2的连接处固定连接有出液转接头8，手动真空泵5与出液转接头8固定连接，通过出液转接头8的设置，便于将纯化柱2、手动真空泵5和出液容器3进行连接。

出液转接头8包括纯化柱连接管9、外套管10和真空泵连接管11，纯化柱连接管11与外套管10固定连接，真空泵连接管11与外套管10连接，纯化柱连接管9与纯化柱2固定连接，真空泵连接管11与手动真空泵5固定连接，外套管10与出液容器3固定连接。

在一些优选的方式中，外套管10的内壁设有螺纹，本实施例中的外套管10可以和标准50ml离心管管口密封连接；当出液后，液体进入出液容器中时，当达容器中到50ml液体时，出液管仍然和页面有足够的距离，这样通过控制纯化柱的柱体积和上样器加入的液体的体积，可以防止流出液的体积超标，避免在取下抽真空连接器8的时候，由于液体过多而外溢。

纯化柱连接管9伸入外套管10设置，纯化柱连接管9伸入外套管10内侧的位置低于真空泵连接管11与外导管10连接的位置，防止纯化柱2内流出的液体被吸入手动真空泵5中，优选的，纯化柱连接管的下端面与出液容器满容量时的液面之间设有一定间距。

手动真空泵5与出液转接头8之间通过连接管路12和管路转接头13固定连接，管路转接头13的一端与出液转接头8固定连接，管路转接头13的另一端与连接管路12固定连接。

管路转接头13的一端为鲁尔接口，鲁尔接口与出液转接头8固定连接，管路转接头13的另一端为宝塔头，宝塔头与连接管路12固定连接，提高管路转接头13与连接管路12和出液转接头8之间的连接紧密度，防止在抽中空过程中发生漏气的现象。

在手动真空泵5上设有气压表14，便于通过压力表了解出液容器3内真空度，从而维持样本流经纯化柱2的必要速率。

对纯化柱进行使用维护时，上下倒置的纯化柱2上下两端分别固定连接有双母鲁尔接头和双公鲁尔接头，双母鲁尔接头向上与三通阀3固定连接，双公鲁尔接头向下与出液转接头8固定连接。

在一些优选的方式中，上样器1的下端为收口结构，便于液体从上样器1内流入纯化柱2内，防止液体滞留。

纯化柱2为多孔颗粒填料装填的层析柱，多孔材料孔径<30nm；材料表面带有电荷；层析柱截面直径与柱床高度比例小于1/6。

本细胞外囊泡分离系统在纯化柱准备阶段的操作过程是，(1)连接抽吸管和三通阀，推注平衡液排尽其内空气，并分别向上连接上样器，向下连接纯化柱；(2)关闭三通阀，向组装完成的上样器中，加入>1.5倍纯化柱柱体积的平衡液；(3)抽吸流出液容器中的空气至近真空；(4)开启三通阀上下通路；(5)根据手动真空泵自带气压表实时观察和维持必要的真空度，并保持平衡溶液向下的流速；(6)待纯化柱经过至少1.5倍柱体积平衡液清洗后，关闭三通阀门上下通路，中止向下液流。

利用本细胞外囊泡分离系统进行细胞外囊泡分离的操作过程是，(1)更换新的流出液容器，用于接收纯化产物；(2)向上样容器中单次或者分次加入<20倍纯化柱柱体积已经澄清的待纯化样本；(3)重启三通阀上下通路；(4)根据手动真空泵自带气压表实时观察和维持流出液容器中的真空度，并保持样本向下的必要流速；(5)待上样器中样本流尽时，关闭三通阀门上下通路，中止向下液流；(6)收集流出液即为纯化后细胞外囊泡。

本细胞外囊泡分离系统在每次完成细胞外囊泡分离后进行清洗的操作过程是，(1)更换新的流出液容器，同时将出液装接口向上与双鲁尔接口连接后再与倒置的纯化柱上入口连接；(2)将三通阀与双鲁尔接口连接并排尽其中空气后，向下与倒置的纯化柱下出口连接，维持三通阀上下通路关闭；(3)向上样容器中加入>2倍纯化柱柱体积的深度清洗液；(4)开启三通阀上下通路；(5)抽吸流出液容器中空气，并根据手动真空泵自带气压表实时观察与控制真空度与液体流出速度；(5)待上样器中清洗液流出约0.5倍纯化柱体积时，关闭三通阀门上下通路，中止向下液流；(6)静置>10分钟，重启三通阀上下通路；(7)待清洗液流尽前，关闭三通阀。

本细胞外囊泡分离系统再生的操作过程是，(1)更换新的流出液容器或弃流出液；(2)纯化柱正置向上通过三通阀与上样容器连接，向下通过流出液转接头与流出液容器连接；(3)向上样容器中加入>1.5倍纯化柱体积平衡液；(3)重启三通阀上下通路；(4)抽吸流出液容器中空气，并根据手动真空泵自带气压表实时控制真空度与液体流出速度；(5)待上样器中清洗液流出至少约1.5倍纯化柱体积时，关闭三通阀门上下通路，中止向下液流；(6)系统即可进行下一轮纯化分离。

对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本实用新型。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本实用新型的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现；因此，本实用新型将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

尽管本文较多地使用了图中附图标记对应的术语，但并不排除使用其它术语的可能性；使用这些术语仅仅是为了更方便地描述和解释本实用新型的本质；把它们解释成任何一种附加的限制都是与本实用新型精神相违背的。