本发明涉及一种含有胶原蛋白肽的液状口服用组合物。本发明还涉及一种抑制含有胶原蛋白肽的液状口服用组合物起泡的方法。此外，本发明还涉及一种液状口服用组合物的制造方法等。
背景技术：
胶原蛋白，作为明胶，为以往在食品领域中得到广泛应用的蛋白质。通常即使口服摄取高分子量的胶原蛋白，也难以在体内有效地利用所摄取的胶原蛋白，近年来，为了适合在体内摄取，开发有对高分子量的胶原蛋白进行低分子量化而得的胶原蛋白肽，还开发有调配胶原蛋白肽的饮料。
然而，已知蛋白质通常具有容易起泡的性质。例如，专利文献1中记载有一种含有大豆乳清蛋白质而成的发泡剂。
专利文献
专利文献1：日本特表2015-528703号公报
技术实现要素：
含有胶原蛋白肽的液状口服用组合物存在因振荡等而容易起泡的问题。因此，例如将含有胶原蛋白肽的液状口服用组合物制成容器装饮料(容器填充饮料)时，在向容器的充填工序中会产生泡。若在将液状口服用组合物填充至容器中时发生起泡，则在向容器中填充规定量之前泡会喷出，对填充作业产生障碍。此外，有时若含有胶原蛋白肽的容器装饮料因搬运等而振荡产生相当量的泡，则开封时泡会喷出而会给消费者带来不快。此外，若饮料等起泡，虽然对品质无影响，也会有消费者对品质感到担忧之虞。从而，可抑制含有胶原蛋白肽的液状口服用组合物起泡的技术，在含有胶原蛋白肽的饮料的制造等中有用。
本发明的目的在于提供一种可抑制含有胶原蛋白肽的液状口服用组合物起泡的技术。
本发明者等针对可抑制含有胶原蛋白肽的液状口服用组合物起泡的技术进行反复研究，发现若将含有胶原蛋白肽的液状口服用组合物中的pro-hyp(脯氨酰羟脯氨酸，以下也称po)的量设定为特定量，则可抑制起泡。至今为止并未报告含有羟脯氨酸(hyp)的二肽即pro-hyp的起泡抑制效果。
即，本发明涉及以下液状口服用组合物及抑制液状口服用组合物起泡的方法。
[1]一种液状口服用组合物，其特征在于，含有：含有pro-hyp的胶原蛋白肽，且pro-hyp的含量为1.0～180mg/100ml。
[2]根据上述[1]所述的液状口服用组合物，其特征在于，上述pro-hyp的含量为10～180mg/100ml。
[3]根据上述[1]或[2]所述的液状口服用组合物，其特征在于，为容器装饮料。
[4]一种抑制液状口服用组合物起泡的方法，其特征在于，将含有胶原蛋白肽的液状口服用组合物中的pro-hyp含量调整为1.0～180mg/100ml。
[5]一种液状口服用组合物的制造方法，其特征在于，包含将胶原蛋白肽与水性媒介混合的工序，且向液状口服用组合物中调配1.0～180mg/100ml的pro-hyp。
根据本发明，可抑制含有胶原蛋白肽的液状口服用组合物起泡。
具体实施方式
＜液状口服用组合物＞
本发明的液状口服用组合物含有：含有pro-hyp的胶原蛋白肽，且pro-hyp的含量为1.0～180mg/100ml。
在本发明中，pro-hyp(po)表示以脯氨酸-羟脯氨酸表示的氨基酸序列所构成的肽(二肽)。本说明书中的肽的表示法依照肽表示法的惯例，左端为n末端(氨基末端)，右端为c末端(羧基末端)。在本发明中，pro-hyp优选为直链状二肽。
本发明的液状口服用组合物含有胶原蛋白肽。本发明的液状口服用组合物的pro-hyp含量为1.0～180mg/100ml。
含有胶原蛋白肽的液状口服用组合物中的pro-hyp的含量(浓度)为1.0～180mg/100ml时，该液状口服用组合物成为起泡得到抑制的物质。从抑制起泡的观点出发，液状口服用组合物的pro-hyp的含量优选5.0mg/100ml以上，更优选10mg/100ml以上。液状口服用组合物的pro-hyp的含量还优选为40mg/100ml以上。此外，在一种方式中，液状口服用组合物的pro-hyp的含量优选150mg/100ml以下，更优选100mg/100ml以下，进一步优选80mg/100ml以下，特别优选70mg/100ml以下。上限及下限也可设为基于任一种的组合的范围。在一种方式中，液状口服用组合物中的po的含量优选5.0～180mg/100ml，更优选10～180mg/100ml，进一步优选为10～150mg/100ml，更进一步优选10～100mg/100ml，特别优选10～80mg/100ml，最优选10～70mg/100ml。此外，在一种其他方式中，液状口服用组合物中的po的含量优选5.0～150mg/100ml，更优选40～150mg/100ml。
本发明的液状口服用组合物，可通过例如以使液状口服用组合物的pro-hyp含量达到上述范围的方式，使用含有pro-hyp的胶原蛋白肽进行制备，也可向胶原蛋白肽中添加pro-hyp进行制备。含有pro-hyp的胶原蛋白肽，可为仅由pro-hyp构成的物质，但通常含有pro-hyp以外的肽。在本发明中，pro-hyp的来源无特别限定。pro-hyp可通过该领域公知的方法来制备，也可适当对含有pro-hyp的胶原蛋白肽进行精制来制备。pro-hyp可通过化学合成法来制造。本发明中，pro-hyp与其来源无关，包含于胶原蛋白肽中。
含有pro-hyp的胶原蛋白肽，例如可用酶、酸、碱等对胶原蛋白或明胶等改性胶原蛋白实施水解处理而得。胶原蛋白肽的来源及制法无特别限定。也可使用人工合成的胶原蛋白肽。胶原蛋白肽可单独使用1种胶原蛋白肽，也可将2种以上的胶原蛋白肽组合使用。
作为胶原蛋白肽的原料的胶原蛋白或明胶，可来自牛、猪、鸡、鱼类等，可将它们的1种或2种以上作为原材料使用。在一种方式中，优选来自鱼类的胶原蛋白。鱼类可为海水鱼，也可为淡水鱼，可列举鲔(黄檗)、鲨鱼、鳕鱼、鲆、鳒、鲷、罗非鱼、鲑、鲇等。
作为用于制备胶原蛋白肽的酶，只要可切断胶原蛋白或明胶的肽键即可，例如，可列举胶原酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、猕猴桃碱、无花果蛋白酶、组织蛋白酶、胃蛋白酶、凝乳酶、胰蛋白酶及将这些酶混合而得的酶制剂等。作为酸，例如可使用盐酸、硫酸、硝酸等。作为碱，例如可使用氢氧化钠、氢氧化钾等。
本发明中，可直接使用水解后的胶原蛋白肽水溶液，也可使用通过干燥等而粉末化的物质。此外，也可以水溶液或粉末等方式使用对该水溶液实施通常使用的精制处理所得物质。
胶原蛋白肽也可使用市售品。胶原蛋白肽中的pro-hyp含量不满特定的量时，可适当追加pro-hyp来使用。
含有pro-hyp的胶原蛋白肽的平均分子量并无特别限定。在一种方式中，含有pro-hyp的胶原蛋白肽的平均分子量优选为300以上，更优选为350以上，进一步优选为400以上，更进一步优选为450以上，此外，优选为5000以下，更优选为4000以下，进一步优选为3000以下，更进一步优选为2000以下，特别优选为1000以下。优选为300～5000，更优选为300～4000，进一步优选为300～3000，更进一步优选为350～2000，特别优选为400～2000，特别优选为400～1000，最优选为450～1000。胶原蛋白肽的平均分子量在上述范围内时，可更充分地发挥本发明的效果。
本说明书中，胶原蛋白肽的平均分子量为重均分子量。本说明书中，胶原蛋白肽的平均分子量是指根据中国国家标准规格(gb规格)gb/t22729-2008关于鱼低聚肽粉的相对分子质量测定法测定而得的值。其中针对m，451及m，189的试剂，使用代替品。
本方法中的平均分子量，以对事先分子量已知的细胞色素c(cytochrome，m，6500)、trasylol(aprotinin，m，12500)、杆菌(bacitracin，m，1450)、甘氨酸-甘氨酸-酪氨酸-精氨酸(m，451)、甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(m，189)在同条件下测定而得的保持时间与相对分子量的对数关系的相对分子质量校正曲线为基础进行计算。本发明中的平均分子量，是指依照该方法以各标准品进行换算计算而得的重均分子量。
液状口服用组合物或胶原蛋白肽中的pro-hyp的含量可使用lc/ms/ms，以实施例中记载的方法进行测定。
就液状口服用组合物中的胶原蛋白肽的含量而言，从抑制起泡的观点出发，优选600mg/100ml以上，更优选1000mg/100ml以上，进一步优选2000mg/100ml以上，此外，优选110000mg/100ml以下，更优选20000mg/100ml以下，进一步优选11000mg/100ml以下，更进一步优选10000mg/100ml以下，特别优选7500mg/100ml以下。在一种方式中，液状口服用组合物中的胶原蛋白肽的含量优选600～110000mg/100ml，更优选600～20000mg/100ml，进一步优选1000～11000mg/100ml，更进一步优选1000～10000mg/100ml，特别优选2000～7500mg/100ml。上述含量为含有pro-hyp的胶原蛋白肽的含量，即pro-hyp及其以外的胶原蛋白肽的总含量。胶原蛋白肽的含量可通过公知的方法测定，例如可使用lc/ms/ms等装置进行测定。
从抑制起泡的观点出发，液状口服用组合物中所含的胶原蛋白肽中的pro-hyp的含量，优选0.01重量％以上，更优选0.05重量％以上，进一步优选0.20重量％以上，特别优选0.50重量％以上，此外，优选4.0重量％以下，更优选3.5重量％以下。在一种方式中，就胶原蛋白肽中的pro-hyp的含量而言，从抑制起泡的观点出发，优选0.01～4.0重量％，更优选0.05～3.5重量％，进一步优选0.20～3.5重量％，特别优选0.50～3.5重量％。胶原蛋白肽中的pro-hyp的含量在上述范围内时，可更充分地发挥本发明的效果。
本发明的液状口服用组合物，在不损害本发明的效果的范围内，也可含有1种或2种以上胶原蛋白肽以外的成分。
本发明的液状口服用组合物，例如也可含有1种或2种以上甜味剂(赤藓糖醇、乙酰磺胺酸钾、三氯蔗糖等)、酸味剂(柠檬酸等)、抗氧化剂、稳定剂、防腐剂、香料、乳化剂、色素类、调味剂、ph调节剂、营养强化剂、增粘剂(文莱胶、黄原胶等)等添加剂。此外，本发明的液状口服用组合物，除pro-hyp以外，也可含有1种或2种以上具有其他体内功能性的原料，例如，已知其皮肤改善效果的原料。作为已知其皮肤改善效果的原料，例如可列举蛋白多糖、弹性蛋白肽、神经酰胺、植物萃取物、硫酸软骨素、葡萄糖胺类、矿物质类(钙等)、维生素类(维生素c等)等。
本发明的液状口服用组合物含有水性媒介，通常为水。本发明的液状口服用组合物，优选为将水作为媒介的液状口服用组合物(水性液状口服用组合物)。
就本发明的液状口服用组合物而言，从防腐性的观点出发，ph优选为6以下，ph更优选为2～6，进一步优选为3～4.5。本说明书中，ph为25℃下的ph。ph的调节，可使用饮食品中可使用的酸或其盐。酸或其盐可使用1种，也可将2种以上组合使用。
本发明的液状口服用组合物优选作为饮料(饮料组合物)使用。
本发明的液状口服用组合物，可为非碳酸饮料或碳酸饮料，优选为非碳酸饮料。所谓碳酸饮料，为压入二氧化碳气体的饮料。非碳酸饮料为未压入二氧化碳气体的饮料。
本发明的液状口服用组合物可制成容器装。在一种方式中，本发明的液状口服用组合物优选为容器装饮料。容器的形式并无特别限定，可填充至瓶、罐、pet瓶、纸盒、铝袋、塑料袋等密封容器制成容器装饮料等。
本发明的液状口服用组合物的制造方法并无特别限定，例如优选包含将各成分混合的混合工序。混合工序中，优选向成分中加入水性媒介(通常为水)进行混合。混合各成分的顺序并无特别限定，只要各成分均一混合即可。在液状口服用组合物的制造中，也可实施调节液状口服用组合物的ph的ph调节工序。ph调节工序可与混合工序同时进行，也可在混合工序之后进行。根据需要可适当实施过滤、稀释、杀菌等工序。将液状口服用组合物制成容器装饮料时，可实施将液状口服用组合物填充至容器的工序。
本发明的液状口服用组合物例如可通过以下液状口服用组合物的制造方法来制造，该制造方法包含将胶原蛋白肽与水性媒介进行混合的工序，且向液状口服用组合物中调配1.0～180mg/100ml的pro-hyp。本发明还包含上述液状口服用组合物的制造方法。在上述制造方法中，相对于水性媒介(优选为水)100ml优选调配600～110000mg(优选为600～20000mg，更优选为1000～11000mg，进一步优选为1000～10000mg，特别优选为2000～7500mg)的胶原蛋白肽。该胶原蛋白肽的调配量，为含有pro-hyp的胶原蛋白肽的调配量。胶原蛋白肽及其优选方式等与上述相同。
向液状口服用组合物中调配1.0～180mg/100ml的pro-hyp的方法并无特别限定。例如，可采用添加pro-hyp的方法、调整在液状口服用组合物的制备中使用的胶原蛋白肽中的pro-hyp含量的方法等。在一种方式中，pro-hyp的调配量，在液状口服用组合物中优选5.0～180mg/100ml，更优选10～180mg/100ml，进一步优选10～150mg/100ml，特别优选40～150mg/100ml。上述制造方法，也可含有上述ph调节工序、将液状口服用组合物填充至容器中的工序等混合工序以外的工序。
本发明的液状口服用组合物的起泡得到抑制，例如，被振荡时不易起泡。
本发明中的起泡的抑制，例如可激烈振荡液状口服用组合物，通过振荡后一定时间后泡距离液面的高度(起泡距离)进行评价。
在本发明中，通过将含有胶原蛋白肽的液状口服用组合物中的pro-hyp含量设为特定范围，可抑制起泡，例如因振荡造成的起泡。本发明的液状口服用组合物，起泡得到抑制，因此向容器中填充而制成容器装饮料时有利。此外，本发明的液状口服用组合物，即使在用车等进行搬运等而被振荡时，起泡也得到抑制。
＜抑制含有胶原蛋白肽的液状口服用组合物起泡的方法＞
本发明的其他方式为一种抑制液状口服用组合物起泡的方法，其特征在于，将含有胶原蛋白肽的液状口服用组合物中的pro-hyp的含量调整至1.0～180mg/100ml。
通过将含有胶原蛋白肽的液状口服用组合物中的pro-hyp的含量调整至上述范围，可抑制该组合物起泡。
调整液状口服用组合物中的pro-hyp的含量的方法无特别限定，只要含有胶原蛋白肽的液状口服用组合物，最终含有上述量的pro-hyp即可。例如，可列举向含有胶原蛋白肽的液状口服用组合物中添加pro-hyp进行调整的方法、调整液状口服用组合物的制备中使用的胶原蛋白肽中的pro-hyp含量的方法等。
胶原蛋白肽及其优选方式，pro-hyp的含量等，与上述本发明的液状口服用组合物中相同。液状口服用组合物中，也可调配上述其他成分。
实施例
以下，示出更具体地说明本发明的实施例。另外，本发明并不仅限定于这些实施例。
在实施例1～8及比较例1中，作为胶原蛋白肽，使用pro-hyp(po)含量为0.01重量％(100ppm)，平均分子量为1000的胶原蛋白肽(以下记载为胶原蛋白肽(i))。胶原蛋白肽(i)为来自鱼的胶原蛋白肽。实施例1～8中，除胶原蛋白肽(i)以外，使用pro-hyp(po)制备液状口服用组合物。pro-hyp(po)使用bachem公司制的商品。实施例中po为直链状的po。
以下示出胶原蛋白肽(i)的po含量的分析方法。
(分析用样品的制备)
将5000mg胶原蛋白肽(i)混合至100ml水中制成样本。充分振荡样本，使液体均一化后，取100μl至1.5ml容量的eppentube。加入900μl的1％甲酸水溶液并用漩涡混匀仪进行充分混合，得到样本的10倍稀释液。从所得10倍稀释液中取100μl至其他eppentube，加入900μl的1％甲酸水溶液。用漩涡混匀仪进行充分混合获得样本的100倍稀释溶液。用0.45μm膜过滤器对该样本的100倍稀释液进行过滤，用以下的lc/ms/ms分析条件进行分析。
(分析装置)
使用以下的装置。
lc/ms/ms：株式会社岛津制作所制lcms-8050，泵：株式会社岛津制作所制lc-30ad，管柱箱：株式会社岛津制作所制cto-20ac
(lc分析条件)
管柱：intradaaminoacid(imtakt公司制，prodno.waa34，serno.pe09hqf)3μm，3.0mmi.d.×100mm
柱温度：35℃
流速：0.6ml/min
洗脱液a：0.1％甲酸乙腈溶液
洗脱液b：100mm甲酸铵水溶液
梯度：b液(体积％)14％(0分)-14％(6分)-100％(20分)-14％(20.1分)-14％(24分)
lc结束时间：24分
注入量：1μl
平衡化后初期压力：pumpa：6.3mpa，pumpb：6.4mpa
(ms分析条件)
离子化模式：esipositive
雾化气体流量：3l/min
干燥气体流量：10l/min
dl温度：250℃
加热器温度：400℃
接口温度：300℃
加热气体流量：10l/min
分析模式：
po的分析：mrm(+)229.10＞70.05
q1prebias(v)：-30.0，ce：-24.0，
q3prebias(v)：-30.0
＜实施例1＞
将po(0.5mg)及胶原蛋白肽(i)(5000mg)混合于100ml水中，制备液状口服用组合物。
＜实施例2、3、4及5＞
除了将po的调配量设为表1所示的量以外，以与实施例1相同的方法制备液状口服用组合物。实施例2中使用39.5mg的po，实施例3中使用79.5mg的po，实施例4中使用99.5mg的po，实施例5中使用179.5mg的po。
＜实施例6＞
除了将po及胶原蛋白肽(i)的调配量设为表1所示的量以外，以与实施例1相同的方法制备液状口服用组合物。
＜比较例1＞
将5000mg胶原蛋白肽(i)混合于100ml水中，制备液状口服用组合物。
表1示出液状口服用组合物的制备中使用的原料(po及胶原蛋白肽(i))的调配量以及液状口服用组合物中的po的含量(浓度)。表1的胶原蛋白肽(i)的调配量的括号中，示出胶原蛋白肽(i)中(来自胶原蛋白肽(i))的po量。po含量为液状口服用组合物中所含的po的量(mg/100ml)，为组合物的制备中使用的po和胶原蛋白肽(i)中的po的合计量。例如若以实施例1的液状口服用组合物为例进行说明，则使用0.5mg的po及5000mg的胶原蛋白肽(i)，由于5000mg胶原蛋白肽(i)中所含po为0.5mg，从而液状口服用组合物的po含量合计为1.0mg/100ml。
另外，就液状口服用组合物中所含的胶原蛋白肽(po及胶原蛋白肽(i)的合计)中的po含量而言，实施例1为0.02重量％，实施例2为0.79重量％，实施例3为1.57重量％，实施例4为1.96重量％，实施例5为3.48重量％，实施例6为0.18重量％。
针对实施例及比较例所得的液状口服用组合物的起泡，通过以下的方法评价因振荡造成的起泡容易程度。结果示于表1。
＜起泡的评价＞
将50ml液状口服用组合物装入100ml的共栓比色管(东京，株式会社三商制，带刻度(内径2.5cm的圆柱状))并上栓。另外就使用的玻璃瓶的刻度而言，1刻度为1ml。
将其上下激烈振荡20次，以目视测定振荡后3分钟的时间点上泡距离液面高度(起泡距离)(刻度)。关于液面的高度及起泡距离，将测定的玻璃瓶的刻度的数值(从底面开始为刻度0)示于表1的评价结果中。
[表1]
在表1中，液面的高度为振荡后3分钟的时间点上从玻璃瓶的底面至液面的距离(高度)(测定的刻度的数值)。起泡距离为振荡后3分钟的时间点上泡距离液面的高度(测定的刻度的数值)。例如，在实施例1中，振荡后3分钟的时间点上从玻璃瓶的底面至液面的距离(高度)为50刻度，泡距离液面的高度为44刻度。即，在实施例1中，振荡后3分钟的时间点上泡的最上部的高度从玻璃瓶的底面开始为第94刻度。
＜实施例7及8＞
除了将pro-hyp(po)及胶原蛋白肽(i)的调配量设为表2所示的量以外，以与实施例1相同的方法制备液状口服用组合物。实施例7中使用9.5mg的po，实施例8中使用149.5mg的po。就液状口服用组合物中所含的胶原蛋白肽(po及胶原蛋白肽(i)的合计)中的po含量而言，实施例7为0.20重量％，实施例8为2.91重量％。
实施例9～10使用后述的胶原蛋白肽(ii)或(iii)及上述的po(bachem公司制)制备液状口服用组合物。胶原蛋白肽(ii)及(iii)的po含量以与上述胶原蛋白肽(i)相同的方法进行分析。
＜实施例9＞
使用pro-hyp(po)含量为1重量％，平均分子量约为500的胶原蛋白肽(记载为胶原蛋白肽(ii))。胶原蛋白肽(ii)为来自鱼的胶原蛋白肽。将po(bachem公司制)(30.0mg)及胶原蛋白肽(ii)(5000mg)混合至100ml水中，制备液状口服用组合物。液状口服用组合物中所含的胶原蛋白肽(po及胶原蛋白肽(ii)的合计)中的po含量为1.59重量％。
＜实施例10＞
使用pro-hyp(po)含量为0.0015重量％，平均分子量约为2000的胶原蛋白肽(记载为胶原蛋白肽(iii))。胶原蛋白肽(iii)为来自猪的胶原蛋白肽。将po(bachem公司制)(49.93mg)及胶原蛋白肽(iii)(5000mg)混合至100ml水中，制备液状口服用组合物。液状口服用组合物中所含的胶原蛋白肽(po及胶原蛋白肽(iii)的合计)中的po含量为0.99重量％。
针对实施例7～10中所得的液状口服用组合物的起泡，通过上述方法评价因振荡造成的起泡容易程度。结果示于表2。
表2的胶原蛋白肽(i)～(iii)的调配量的括号中，示出胶原蛋白肽(i)～(iii)中(来自胶原蛋白肽(i)～(iii))的po量。表2记载的po含量为液状口服用组合物中所含的po的量(mg/100ml)，为组合物的制备中使用的po和胶原蛋白肽(i)～(iii)中所含的po的合计量。例如若以实施例9的液状口服用组合物为例进行说明，则使用30.0mg的po及5000mg的胶原蛋白肽(ii)，由于5000mg胶原蛋白肽(ii)中所含po为50.0mg，从而液状口服用组合物的po含量合计为80.0mg/100ml。
[表2]
与表1相同，表2中，液面的高度为振荡后3分钟的时间点上从玻璃瓶的底面至液面的距离(高度)(测定的刻度的数值)。起泡距离为振荡后3分钟的时间点上泡距离液面的高度(测定的刻度的数值)。
po的含量为1.0～180.0mg/100ml时，液状口服用组合物的起泡得到抑制。
工业实用性
本发明在饮食品领域等中有用。