用于生成CAR-T细胞的两类基因载体及其用途的制作方法

相关申请的交叉引用本申请要求于2018年11月14日提交的美国临时申请第62/767,069号的权益，本公开以其整体通过引用在此并入。序列表的引用本申请含有序列表，所述序列表以ascii格式以电子方式提交，且以全文引用的方式并入本文中。所述序列表创建于2019年11月14日，其标题为“119419-5007-wo-sequence-listing_st25.txt”，其大小为139,264字节。
背景技术：
：嵌合抗原受体(car)可以使免疫细胞重定向，以特异性识别并杀死肿瘤细胞。car是由经由跨膜结构域连接到信号传导分子的抗体单链可变区(scfv)构成的人工多分子蛋白质。当scfv接合其同源抗原时，会触发信号转导，导致肿瘤细胞被表达car的细胞毒性t淋巴细胞杀死(eshharz、wakst等人，《美国科学院院刊(pnasusa)》，90(2)：720-724，1993；geigertl等人，《免疫学杂志(jimmunol.)》，162(10)：5931-5939，1999；brentjensrj等人，《自然医学(natmed.)》9(3)：279-286，2003；cooperlj等人，《血液(blood)》101(4)：1637-1644，2003；imaic等人，《白血病(leukemia)》，18：676-684，2004)。用表达car的自体t淋巴细胞进行的临床试验在患有b细胞难治性白血病和淋巴瘤的患者中显示出正面反应(参见，例如，tillbg等人，《血液》119(17)：3940-3950，2012；maudesl等人，《新英格兰医学杂志(nengljmed.)》371(16)：1507-1517，2014)。针对t细胞恶性肿瘤为靶标的car技术的发展远远落后于b细胞所取得的进展。需要针对t细胞恶性肿瘤的新型疗法，但迄今为止进展缓慢。特别地，缺乏有效的免疫治疗选择，并且t细胞急性淋巴细胞白血病(t-all)的治疗依赖于强化学疗法和造血干细胞移植。尽管积极的治疗方案与明显的发病率相关，但这些方法的结果远不能令人满意。最近开发了car-t细胞，其中car-t的靶抗原本身在car-t细胞中表达(png等人，blood，2017，1(25)：2348-2360，wo2018/098306)。为了避免自杀(例如杀伤)，car-t细胞还表达一种pebl，该pebl可以减少目标抗原在car-t细胞表面的表达。为了产生可行的car-t细胞，首先表达蛋白表达阻断剂(pebl)蛋白以结合并螯合靶蛋白，然后再表达car。由于目标抗原在所得工程化t细胞的细胞表面上预先存在，因此car和pebl的同时表达会导致杀伤分子。特别地，预先存在的细胞表面靶抗原不易被新表达的pebl蛋白隔离，并且被新表达的car蛋白识别和靶向。同时表达的替代方法可以是顺序表达。然而，在t细胞中先表达pebl然后表达car对peblcar-t细胞的临床实施提出了一些问题。首先，t细胞的顺序工程需要单独制造和施用不同的病毒载体，一种用于pebl，另一种用于car。这增加了成本和时间，并且增加了产生工程化的car-t细胞的实验操作的复杂性。此外，t细胞的顺序工程导致最终临床产品中工程细胞的复杂混合，从而在产品表征，均匀性和功效方面带来挑战。由于在每个工程步骤中只有一部分t细胞整合引入的基因，因此最终产物(工程化t细胞)将包含一些仅接受pebl基因的细胞，一些仅接受car基因的细胞以及一些同时接受这两个基因的细胞。总之，对于患有b细胞恶性肿瘤的患者来说，对新治疗选择的需求明显未得到满足。另外，需要产生工程化的car-t细胞并消除car介导的t细胞自杀或杀伤的方法。技术实现要素：在一些方面，本发明提供了双顺反子逆转录病毒载体，其包含：(a)编码抗cd7嵌合抗原受体(car)的第一多核苷酸，所述第一多核苷酸与seqidnos：28-31中任一个的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性；(b)第二种多核苷酸，其编码内部核糖体进入位点(ires)或核糖体密码子跳跃位点；(c))编码抗cd7蛋白表达阻断剂(pebl)的第三多核苷酸，其与seqidnos：24-27的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，其中第一多核苷酸可操作地连接到第二多核苷酸，第二多核苷酸可操作地连接到第三多核苷酸。在一些实施方案中，抗cd7car包含seqidnos：28-31中任一种的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗cd7pebl包含seqidnos：24-27中任一种的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗cd7car包含seqidno：29的氨基酸序列，并且抗cd7pebl包含seqidno：25的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗cd7car包含seqidno：31的氨基酸序列，并且抗cd7pebl包含seqidno：27的氨基酸序列。在一些实施方案中，ires衍生自脑心肌炎病毒(emcv)或肠病毒。在一些实施方案中，核糖体密码子跳跃位点包含自剪切2a肽。在一些实施方案中，自剪切2a肽选自f2a肽(口蹄疫病毒2a肽)、e2a肽(马鼻炎a病毒2a肽)、p2a肽(猪破伤风病毒-12a肽)和t2a肽(tav2a)。在一些实施方案中，双顺反子逆转录病毒载体与seqidno：12的核酸序列具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，双顺反子逆转录病毒载体与seqidno：13的核酸序列具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，双顺反子逆转录病毒载体包含seqidno：13的核酸序列。在一些实施方案中，双顺反子逆转录病毒载体进一步包含启动子元件。在一些实施方案中，启动子元件选自cmv启动子、ef1α启动子、efs启动子、mscv启动子和pgk启动子。在一些实施方案中，启动子元件与选自seqidnos：6-10的任何一种的核酸序列具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，启动子元件包含选自seqidnos：6-10的任何一种的核酸序列。在一些实施方案中，双顺反子逆转录病毒载体与选自seqidno：14-16的任何一种核酸序列具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，双顺反子逆转录病毒载体包含选自seqidnos：14-16的任何一种的核酸序列。在一些实施方案中，逆转录病毒载体是慢病毒载体。在一些方面，本文提供了工程化免疫细胞，其包含本文概述的任何双顺反子逆转录病毒载体。在一些实施方式中，工程化免疫细胞是同种异体t细胞。在一些实施方式中，工程化免疫细胞是自体t细胞。在一些实施方案中，与相应的免疫细胞相比，工程化免疫细胞具有降低的cd7表面表达并表达抗cd7car。在一些方面，本文提供了一种药物组合物，其包含本文所述的任何工程化免疫细胞和药学上有效的载体。在一些方面，本文提供了一种治疗受试者中的癌症的方法，该方法包括给予治疗有效量的本文所述的任何工程化免疫细胞或其药物组合物。在一些方面，本文提供了一种产生工程化免疫细胞的方法，该方法包括用本文所述的任何一种双顺反子逆转录病毒载体转导免疫细胞并回收该工程化免疫细胞。在一些实施方案中，免疫细胞选自外周血单核细胞、分离的cd4+t细胞、分离的cd8+t细胞和分离的cd3+t细胞。在一些实施方案中，与相应的免疫细胞相比，工程化免疫细胞具有降低的cd7表面表达并表达抗cd7car。在一些方面，本文提供了一种重组逆转录病毒载体，其包含：(a)可操作地连接至编码抗cd7嵌合抗原受体(car)的第一多核苷酸的第一启动子元件，所述第一多核苷酸与seqidno：28或seqidno：30的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性；以及(b)与编码抗cd7蛋白表达阻断剂(pebl)的第二多核苷酸可操作连接的第二启动子元件，该第二多核苷酸与seqidno：24或seqidno：26的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，抗cd7car包含seqidno：28或seqidno：30的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗cd7pebl包含seqidno：24或seqidno：26的氨基酸序列。在一些实施方案中，第一启动子元件和/或第二启动子元件选自cmv启动子、ef1α启动子、efs启动子、mscv启动子和pgk启动子。在一些实施方案中，第一启动子元件和/或第二启动子元件与选自seqidno：6-10的任何一个的核酸序列具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，第一启动子元件和/或第二启动子元件包含选自由seqidnos：6-10组成的组的任何一个的核酸序列。在一些实施方案中，第一启动子和第二启动子共享小于95％的序列同一性。在一些实施方案中，可操作地连接至第一多核苷酸的第一启动子元件是可操作地连接至第二多核苷酸的第二启动子元件的5′。在一些实施方案中，可操作地连接至第二多核苷酸的第二启动子元件是可操作地连接至第一多核苷酸的第一启动子元件的5′。在一些实施方案中，重组逆转录病毒载体与选自seqidno：18-23的任何一种核酸序列具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，逆转录病毒载体是慢病毒载体。还提供了工程化的免疫细胞，其包含本文所述的任何重组逆转录病毒载体。在一些实施方式中，工程化免疫细胞是工程化t细胞。在一些实施方式中，工程化免疫细胞是自体t细胞。在一些实施方案中，与相应的免疫细胞相比，工程化免疫细胞具有降低的cd7表面表达并表达抗cd7car。在一些方面，本文提供了一种药物组合物，其包含本文所述的任何工程化免疫细胞和药学上有效的载体。在一些方面，本文提供了一种治疗受试者中的癌症的方法，该方法包括给予治疗有效量的本文所述的任何工程化免疫细胞或其药物组合物。在一些方面，本文提供了产生工程化免疫细胞的方法，该方法包括用本文所述的任何重组逆转录病毒载体转导免疫细胞并回收工程化免疫细胞。在一些实施方案中，免疫细胞选自外周血单核细胞、分离的cd4+t细胞、分离的cd8+t细胞和分离的cd3+t细胞。在一些实施方案中，与相应的免疫细胞相比，工程化免疫细胞具有降低的cd7表面表达并表达抗cd7car。附图说明图1a和图1b显示了根据流式细胞术(图1a)和蛋白质印迹(图1b)通过转导的原代t细胞表达的car和pebl。用指定的逆转录病毒(例如，依次pebl、car、pebl和car；pebl-ires-car和car-p2a-pebl)转导原代t细胞，并通过流式细胞仪分析cd7和car的表达。通过蛋白印迹分析了用所示逆转录病毒转导的原代t细胞的细胞裂解液的β-肌动蛋白、myc标签的pebl、car和内源性cd3ζ表达。图2a-图2f提供了双顺反子启动子1-car-启动子2-pebl慢病毒构建体的示意图。图2a描绘了示例性双启动子构建体的示意图，其包含mscv-启动子-抗人cd7(th69)car-efs启动子-抗人cd7(th69)pebl，例如seqidno：19之一。图2b描绘了示例性双启动子构建体的示意图，其包含mscv启动子-抗人cd7(th69)car-ef1a启动子-抗人cd7(th69)pebl，例如seqidno：18之一。图2c描绘了示例性双启动子构建体的示意图，其包含pgk启动子-抗人cd7(th69)car-efs启动子-抗人cd7(th69)pebl，例如seqidno：23之一。图2d描绘了示例性双启动子构建体的示意图，其包含pgk启动子-抗人cd7(th69)car-ef1a启动子-抗人cd7(th69)pebl，例如seqidno：22之一。图2e描绘了示例性双启动子构建体的示意图，其包含pgk启动子-抗人cd7(3a1f)car-ef1a启动子-抗人cd7(th69)pebl，例如seqidno：20之一。图2f描绘了示例性双启动子构建体的示意图，其包含pgk启动子-抗人cd7(th69)car-ef1a启动子-抗人cd7(3a1f)pebl。例如seqidno：21之一。图3显示了根据流式细胞术通过转导的原代t细胞表达的car和cd7。用所示的双启动子慢病毒转导原代t细胞，并在转导后5天和14天通过流式细胞术进行分析。图4a-图4c提供了双顺反子car-p2a-pebl慢病毒构建体的示意图。图4a描绘了示例性双顺反子构建体的示意图，其包含mscv启动子-抗人cd7(th69)car-p2a-抗人cd7(th69)pebl，例如seqidno：14之一。图4b描绘了示例性双顺反子构建体的示意图，其包含ef1a启动子-抗人cd7(th69)car-p2a-抗人cd7(th69)pebl，例如seqidno：15之一。图4c描绘了示例性双顺反子构建体的示意图，其包含efs启动子-抗人cd7(th69)car-p2a-抗人cd7(th69)pebl，例如seqidno：16之一。图5显示了用mscv-cd7car-p2a-cd7pebl慢病毒转导并在转导后3天、6天和9天通过流式细胞术分析的原代t细胞car和cd7的表达。图6显示了根据流式细胞术通过转导的原代t细胞表达car和cd7的图。用指示的双顺反子cd7car-p2a-cd7pebl和cd19car慢病毒转导原代t细胞，并在转导后5天和14天通过流式细胞仪进行分析。图7a和图7b显示了根据流式细胞术(图7a)和蛋白免疫印迹(图7b)通过转导的原代t细胞表达的car和pebl的表达。用两个独立产生的大量mscv-cd7car-p2a-cd7pebl慢病毒转导原代t细胞，并通过流式细胞仪分析cd7和car的表达。通过蛋白印迹分析来自转导细胞的细胞裂解物的β-肌动蛋白、myc标签的pebl、car和内源性cd3ζ表达。图8显示了根据流式细胞术通过转导的原代t细胞表达的car和cd7。用免疫磁珠或transact激活大量的pbmc、cd4+和cd8+阳性选择的t细胞以及cd3+阳性选择的t细胞，并用mscv-cd7car-p2a-cd7pebl慢病毒进行转导。在转导后4天、7天和10天通过流式细胞术分析细胞。图9a显示了用mscv-cd7car-p2a-cd7pebl慢病毒转导并在无血清texmacs培养基或补充有3％人ab血清的texmacs培养基中培养的原代t细胞表达car和cd7。图9b显示了活化后11天转导的细胞的总扩增倍数(生物性平均值±sem)。图10a和图10b显示了活化后11天的car+t细胞的百分比(图10a)和转导细胞的总扩增倍数(图10b)(生物性平均值±sem)。在无血清texmacs培养基中培养原代t细胞，并在激活后第1、2、3或4天用mscv-cd7car-p2a-cd7pebl慢病毒进行转导。图11显示了根据流式细胞术通过转导的原代t细胞表达car和cd7。用transact激活cd4+和cd8+阳性选择的t细胞，并以指示的感染复数(moi)转导mscv-cd7car-p2a-cd7pebl慢病毒。在转导后3天和9天通过流式细胞术分析细胞。图12a和图12b显示了活化后11天的car+t细胞的百分比(图12a)和转导细胞的转基因载体拷贝数(vcn)(图12b)(生物性平均值)。将原代t细胞在无血清texmacs培养基中培养，并以moi3、5或10转导mscv-cd7car-p2a-cd7pebl慢病毒。通过流式细胞术分析t细胞的car表达。从转导的细胞中提取基因组dna，通过rt-qpcr分析确定转基因vcn。图13a-图13e显示了在活化后11天用mscv-cd7car-p2a-cd7pebl慢病毒转导的原代t细胞上各种表面标志物的表达。通过流式细胞术分析转导的细胞中的car和cd7(图13a)、cd3和cd14/cd19/cd56(图13b)、cd4和cd8(图13c)、cd45ro和ccr7(图13d)和pd-1和tim-3(图13e)。一式三份分析是来自在moi10用mscv-cd7car-p2a-cd7pebl慢病毒转导的3个独特供体的原代t细胞。图14a和图14b显示了通过ifnγ分泌(图14a)和细胞毒性(图14b)，用mscv-cd7car-p2a-cd7pebl慢病毒产生的pebl-car-t细胞对cd7+jurkat细胞和cd7-nalm6细胞的功能应答。在指定的e：t比下，与jurkat或nalm6细胞共培养24小时的pebl-car-t细胞的培养上清液中测量了ifnγ的分泌(技术性平均值±sd)。与jurkat或nalm6细胞以指定的e：t比(技术性平均值±sd)共培养4h后，测量pebl-cart细胞的细胞溶解活性。图15描绘了cppt-cmv-mcs-pgk-gfp-wpre的核酸序列(seqidno：1)。cppt为粗体，cmv启动子为单下划线，pgk启动子为双下划线，gfp为粗体/单下划线，而wpre元素为粗体/双下划线。图16描绘了基于抗体th69的示例性抗人cd7pebl的核酸序列(seqidno：2)。cd8信号肽从1位开始，抗cd7vl结构域为粗体，vl和vh结构域之间的连接子为单下划线，抗cd7vh结构域为粗体/单下划线，myc-kdel肽为双下划线，终止密码子终止序列。图17描绘了基于抗体3a1f的示例性抗人cd7pebl的核酸序列(seqidno：3)。cd8信号肽从1位开始，抗cd7vl结构域为粗体，vl和vh结构域之间的连接子为单下划线，抗cd7vh结构域为粗体/单下划线，myc-kdel肽为双下划线，终止密码子终止序列。图18描绘了基于抗体th69的示例性抗人cd7car的核酸序列(seqidno：4)。cd8信号肽从1位开始，抗cd7vl结构域为粗体，vl和vh结构域之间的连接子为单下划线，抗cd7vh结构域为粗体/单下划线，cd8a铰链和跨膜结构域为双下划线的4-1bb信号结构域位于cd8a铰链和跨膜结构域与cd3ζ信号结构域之间，cd3ζ信号结构域以粗体/双下划线表示，终止密码子终止序列。图19描绘了基于抗体3a1f的示例性抗人cd7car的核酸序列(seqidno：5)。cd8信号肽从1位开始，抗cd7vl结构域为粗体，vl和vh结构域之间的连接子为单下划线，抗cd7vh结构域为粗体/单下划线，cd8a铰链和跨膜结构域为双下划线的4-1bb信号结构域位于cd8a铰链和跨膜结构域与cd3ζ信号结构域之间，cd3ζ信号结构域以粗体/双下划线表示，终止密码子终止序列。图20描绘了示例性cmv启动子的核酸序列(seqidno：6)。图21描绘了示例性ef1α启动子的核酸序列(seqidno：7)。图22描绘了示例性efs启动子的核酸序列(seqidno：8)。图23描绘了示例性mscv启动子的核酸序列(seqidno：9)。图24描绘了示例性pgk启动子的核酸序列(seqidno：10)。图25描绘了包含抗人cd7(th69)、pebl-ires-抗人cd7(th69)car的示例性双顺反子构建体的核酸序列(seqidno：11)。抗人cd7(th69)pebl为常规字体，ires为粗体，抗人cd7(th69)car为双下划线。图26描绘了包含抗人cd7(th69)car-ires-抗人cd7(th69)pebl的示例性双顺反子构建体的核酸序列(seqidno：12)。抗人cd7(th69)car用正常字体显示，ires用粗体显示，抗人cd7(th69)pebl用单下划线标记。图27描绘了包含抗人cd7(th69)car-p2a-抗人cd7(th69)pebl的示例性双顺反子构建体的核酸序列(seqidno：13)。抗人cd7(th69)car为常规字体，p2a为粗体，抗人cd7(th69)pebl为单下划线。图28a和图28b描述了包含mscv启动子-抗人cd7(th69)car-p2a-抗人cd7(th69)pebl的示例性双顺反子构建体的核酸序列(seqidno：14)。mscv启动子用双下划线标出，限制性酶切位点和kozak序列位于mscv启动子和car之间，抗人cd7(th69)car为粗体，p2a为正常字体，抗人cd7(th69)pebl为单下划线。图29a和图29b描绘了包含ef1a启动子-抗人cd7(th69)car-p2a-抗人cd7(th69)pebl的示例性双顺反子构建体的核酸序列(seqidno：15)。ef1α启动子用双下划线标出，限制性酶切位点和kozak序列位于ef1α启动子和car之间，抗人cd7(th69)car为粗体，p2a为常规字体，抗人cd7(th69)pebl为单下划线。图30a和图30b描绘了包含efs启动子-抗人cd7(th69)car-p2a-抗人cd7(th69)pebl的示例性双顺反子构建体的核酸序列(seqidno：16)。efs启动子用双下划线标出，限制性酶切位点和kozak序列在efs启动子和car之间，抗人cd7(th69)car为粗体，p2a为常规字体，抗人cd7(th69)pebl为单下划线。图31a和图31b描述了包含mscv启动子-抗人cd7(th69)car-pgk启动子-抗人cd7(th69)pebl的示例性双启动子构建体的核酸序列(seqidno：17)。mscv启动子用双下划线标出，限制性酶切位点(斜体)和kozak序列在mscv启动子和car之间，抗人cd7(th69)car用粗体标出，限制性酶切位点(斜体)在car和pgk启动子之间，pgk启动子用单下划线标出，限制性酶切位点(斜体)和kozak序列位于pgk启动子和pebl之间，抗人cd7(th69)pebl用粗体/单下划线标出，限制性酶切位点(斜体)终止序列。图32a和图32b描述了包含mscv启动子-抗人cd7(th69)car-ef1a启动子-抗人cd7(th69)pebl的示例性双启动子构建体的核酸序列(seqidno：18)。mscv启动子用双下划线标出，限制性酶切位点(斜体)和kozak序列在mscv启动子和car之间，抗人cd7(th69)car用粗体标出，限制性酶切位点(斜体)在car和ef1a启动子之间，ef1a启动子用单下划线标出，限制性酶切位点(斜体)和kozak序列在ef1a启动子和pebl之间，而抗人cd7(th69)pebl用黑体/单下划线标出。图33a和图33b描述了包含mscv启动子-抗人cd7(th69)car-efs启动子-抗人cd7(th69)pebl的示例性双启动子构建体的核酸序列(seqidno：19)。mscv启动子用双下划线标出，限制性酶切位点(斜体)和kozak序列在mscv启动子和car之间，抗人cd7(th69)car用粗体标出，限制性酶切位点(斜体)在car和efs启动子之间，efs启动子用单下划线标出，限制性酶切位点(斜体)和kozak序列在efs启动子和pebl之间，抗人cd7(th69)pebl用黑体/单下划线标出。图34a和图34b描绘了包含pgk启动子-抗人cd7(3a1f)car-ef1a启动子-抗人cd7(th69)pebl的示例性双启动子构建体的核酸序列(seqidno：20)。pgk启动子用双下划线标出，限制性酶切位点(斜体)和kozak序列在pgk启动子和car之间，抗人cd7(3a1f)car用粗体标出，限制性酶切位点(斜体)在car和ef1a启动子之间，ef1a启动子用单下划线标出，限制性酶切位点(斜体)和kozak序列在ef1a启动子和pebl之间，而抗人cd7(th69)pebl用黑体/单下划线标出。图35a和图35b描述了包含pgk启动子-抗人cd7(th69)car-ef1a启动子-抗人cd7(3a1f)pebl的示例性双启动子构建体的核酸序列(seqidno：21)。pgk启动子用双下划线标出，限制性酶切位点(斜体)和kozak序列在pgk启动子和car之间，抗人cd7(th69)car用粗体标出，限制性酶切位点(斜体)在car和ef1a启动子之间，ef1a启动子用单下划线标出，限制性酶切位点(斜体)和kozak序列在ef1a启动子和pebl之间，而抗人cd7(3a1f)pebl用粗体/单下划线标出。图36a-图36c描绘了包含pgk启动子-抗人cd7(th69)car-ef1a启动子-抗人cd7(th69)pebl的示例性双启动子构建体的核酸序列(seqidno：22)。pgk启动子用双下划线标出，限制性酶切位点(斜体)和kozak序列在pgk启动子和car之间，抗人cd7(th69)car用粗体标出，限制性酶切位点(斜体)在car和ef1a启动子之间，ef1a启动子用单下划线标出，限制性酶切位点(斜体)和kozak序列在ef1a启动子和pebl之间，而抗人cd7(th69)pebl用黑体/单下划线标出。图37a和图37b描述了包含pgk启动子-抗人cd7(th69)car-efs启动子-抗人cd7(th69)pebl的示例性双启动子构建体的核酸序列(seqidno：23)。pgk启动子用双下划线标出，限制性酶切位点(斜体)和kozak序列在pgk启动子和car之间，抗人cd7(th69)car用粗体标出，限制性酶切位点(斜体)在car和efs启动子之间，efs启动子用单下划线标出，限制性酶切位点(斜体)和kozak序列在efs启动子和pebl之间，抗人cd7(th69)pebl用黑体/单下划线标出。图38描绘了基于抗体th69的示例性抗人cd7pebl的氨基酸序列(seqidno：24)。cd8信号肽始于位置1且为正常类型，抗cd7vl结构域为粗体，vl和vh结构域之间的连接体为单下划线，抗cd7vh结构域为粗体/单下划线，并且myc-kdel肽用双下划线标出。图39描绘了基于抗体th69的示例性抗人cd7pebl变体的氨基酸序列(seqidno：25)。n末端脯氨酸为斜体，cd8信号肽起始于位置2且为正常类型，抗cd7vl结构域为粗体，vl和vh结构域之间的连接子用下划线标出，抗cd7vh域以粗体/单下划线标出，而myc-kdel肽则以双下划线标出。图40描绘了基于抗体3a1f的示例性抗人cd7pebl的氨基酸序列(seqidno：26)。cd8信号肽始于位置1且为正常类型，抗cd7vl结构域为粗体，vl和vh结构域之间的连接体为单下划线，抗cd7vh结构域为粗体/单下划线，并且myc-kdel肽用双下划线标出。图41描绘了基于抗体3a1f的示例性抗人cd7pebl变体的氨基酸序列(seqidno：27)。n末端脯氨酸为斜体，cd8信号肽起始于位置2且为正常类型，抗cd7vl结构域为粗体，vl和vh结构域之间的连接子用下划线标出，抗cd7vh域以粗体/单下划线标出，而myc-kdel肽则以双下划线标出。图42描绘了基于抗体th69的示例性抗人cd7car的氨基酸序列(seqidno：28)。cd8信号肽从1位开始，抗cd7vl结构域为粗体，vl和vh结构域之间的接头为单下划线，抗cd7vh结构域为粗体/单下划线，cd8a铰链和跨膜结构域双下划线的4-1bb信号结构域在cd8a铰链和跨膜结构域与cd3ζ信号结构域之间，为正常类型，cd3ζ信号结构域为粗体/双下划线。图43描绘了基于抗体th69的示例性抗人cd7car变体的氨基酸序列(seqidno：29)。cd8信号肽从1位开始，抗cd7vl结构域为粗体，vl和vh结构域之间的接头为单下划线，抗cd7vh结构域为粗体/单下划线，cd8a铰链和跨膜结构域为双下划线的4-1bb信号结构域位于cd8a铰链和跨膜结构域与cd3ζ信号结构域之间，为正常类型，cd3ζ信号结构域为粗体/双下划线，并且cd3ζ信号结构域c端的氨基酸通过在p2a位点跳过核糖体而产生。图44描绘了基于抗体3a1f的示例性抗人cd7car的氨基酸序列(seqidno：30)。cd8信号肽从1位开始，抗cd7vl结构域为粗体，vl和vh结构域之间的接头为单下划线，抗cd7vh结构域为粗体/单下划线，cd8a铰链和跨膜结构域双下划线的4-1bb信号结构域在cd8a铰链和跨膜结构域与cd3ζ信号结构域之间，为正常类型，cd3ζ信号结构域为粗体/双下划线。图45描绘了基于抗体3a1f的示例性抗人cd7car变体的氨基酸序列(seqidno：31)。cd8信号肽从1位开始，抗cd7vl结构域为粗体，vl和vh结构域之间的接头为单下划线，抗cd7vh结构域为粗体/单下划线，cd8a铰链和跨膜结构域为双下划线的4-1bb信号结构域位于cd8a铰链和跨膜结构域与cd3ζ信号结构域之间，为正常类型，cd3ζ信号结构域为粗体/双下划线，并且cd3ζ信号结构域c端的氨基酸通过在p2a位点跳过核糖体而产生。图46基于抗体th69的示例性抗人cd7car的氨基酸序列-基于抗体th69的p2a-抗人cd7pebl(seqidno：95)。cd7car是普通字体，p2a用双下划线标出，cd7pebl用粗体/单下划线标出。具体实施方式简介本发明提供了在t细胞中同时表达杀灭雌激素的嵌合抗原受体(例如，car)和杀灭雌激素的蛋白(例如，pebl)的方法，其导致靶向t细胞抗原的表达car的细胞毒性t淋巴细胞(car-t)的存活。已经产生了病毒载体，其中可以从单个构建体表达两个或更多个基因。通常，这些载体采用双顺反子元件或双启动子构型。在双顺反子载体的情况下，在两个基因之间引入了序列元件，该序列元件使得能够从单个信使rna翻译两种蛋白质。实例包括内部核糖体进入位点序列(ires)和病毒衍生的“密码子跳过”肽序列，例如p2a、t2a、f2a、e2a等。在有两个启动子设计的载体的情况下，在每个基因的上游配置独立的启动子元件，以使每个启动子转录其近端连接基因的mrna。在一些实施方案中，表达载体(例如，构建体)包含可操作地连接至car的第一启动子和可操作地连接至pebl的第二启动子。本文描述了产生和测试用于表达两个不同基因(例如，编码car的基因和编码pebl的基因)的各种双顺反子载体和两个启动子设计的载体的方法。出乎意料地发现，某些两种基因载体能够以这样的方式指导pebl和car蛋白在t细胞中的表达，使得所得的工程化的t细胞能够存活，扩增并能够杀死靶细胞。所鉴定的两个基因载体中每个基因的相对表达时间和表达水平使car能够对工程化的t细胞造成不必要的杀伤性表达之前使靶抗原下调。本文描述了表达针对cd7的car的抗杀伤的car-t细胞，并且这种car-t细胞具有降低的cd7表达或没有cd7的表面表达。本发明部分基于使用双顺反子构建体例如双顺反子病毒载体在免疫细胞(例如t细胞)中共表达针对cd7的嵌合抗原受体(car)和针对cd7的蛋白质表达阻断剂(pebl)。一方面，本发明涉及工程化的免疫细胞(例如，工程化的t细胞)，其包含双顺反子构建体，该双顺反子构建体包含编码抗cd7car的多核苷酸序列和编码抗cd7pebl的多核苷酸序列。在一些实施方案中，car包含4-1bb和cd3ζ的细胞内信号传导域，以及特异性结合cd7的抗体(例如，单链可变片段或scfv)。本发明的cd7car有时在本文中被称为“抗cd7-41bb-cd3”。在一些实施方案中，car还包含cd8α铰链和跨膜结构域。在一些实施方案中，抗cd7pebl包含特异性结合cd7和细胞内定位序列的抗体(例如，scfv)。在某些实施方案中，抗cd7pebl包含特异性结合cd7、cd8α铰链和跨膜结构域以及细胞内定位序列的抗体(例如，scfv)。cd7是一种40kda的i型跨膜糖蛋白，是t细胞恶性肿瘤的主要标志物，在所有t细胞all病例中都高度表达，包括早期t细胞祖细胞急性淋巴细胞白血病(etp-all)。抗cd7car可以诱导t细胞发挥针对t细胞恶性肿瘤的特异性细胞毒性。此外，当将抗cd7car与效应t细胞上cd7表达的下调组合使用时，已显示t细胞的细胞毒性显著增加。通过抗cd7pebl的表达，t细胞中cd7的下调(例如消除，减少和/或重新定位)阻止了相应的抗cd7car产生的杀伤作用。与保留靶抗原(例如cd7)的细胞相比，car表达后可导致更大的t细胞恢复，并且对t白血病/淋巴瘤细胞具有更有效的细胞毒性。定义除非另外定义，否则本文中所使用的所有技术术语和科学术语的含义与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的含义相同。尽管在实践中可以使用与本文描述的那些类似或等同的任何方法和材料来测试本发明，但是本文描述了优选的材料和方法。在描述和要求保护本发明时，将使用以下术语。还应理解，本文所使用的术语仅出于描述特定实施方式的目的，并且所述术语不旨在是限制性的。冠词“一”和“一个”在本文中用于指代冠词的语法对象中的一个或多个(即，至少一个)。举例来说，“一个元件”是指一个元件或一个以上元件。如本文所使用的，术语“约”及其相对于参考数值的语法等价物及其语法等价物可包括在该值的正负10％范围内的值。例如，数量“约10”包括从9到11的数量。相对于参考数值的术语“约”还可以包括该值的正负10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％。如本文所用，术语“核酸”是指包括多个核苷酸单体(例如，核糖核苷酸单体或脱氧核糖核苷酸单体)的聚合物。“核酸”包含例如基因组dna、cdna、rna和dna-rna杂交分子。核酸分子可以是天然存在的、重组的或合成的。另外，核酸分子可以是单链、双链或三链的。在一些实施方式中，核酸分子可以被改性。在双链聚合物的情况下，“核酸”可以指代分子的任一条或两条链。本文所用的核酸和多核苷酸是可互换的。关于核酸的术语“核苷酸序列”是指通过共价连接，如磷连接(例如，磷酸二酯、烷基和芳基膦酸酯、硫代磷酸酯、磷酸三酯键)和/或非磷连接(例如，肽和/或氨基磺酸酯键)连接的连续核苷酸系列。在某些实施方式中，编码例如连接到定位结构域的靶结合分子的核苷酸序列是异源序列(例如，具有不同物种或细胞类型起源的基因)。术语“核苷酸”和“核苷酸单体”是指天然存在的核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸单体，以及其非天然存在的衍生物和类似物。因此，核苷酸可以包含例如包括天然存在的碱基的核苷酸(例如，腺苷、胸苷、鸟苷、胞苷、尿苷、肌苷、脱氧腺苷、脱氧胸苷、脱氧鸟苷或脱氧胞苷)和包括本领域已知的经过改性的碱基的核苷酸。术语“可操作地连接”是指调节序列和导致后者表达的异源核酸序列之间的功能性连接。例如，当第一核酸序列与第二核酸序列处于功能关系时，第一核酸序列与第二核酸序列可操作地连接。例如，如果启动子影响编码序列的转录或表达，则该启动子可操作地连接至编码序列。通常，可操作地连接的dna序列是连续的，并且在需要连接两个蛋白质编码区的情况下，它们在同一阅读框中。术语“序列同一性”是指当两个核苷酸序列或两个氨基酸序列例如通过使用默认缺口权重的gap或bestfit程序进行最佳比对时，至少共享例如70％的序列同一性或至少80％序列同一性，或至少85％序列同一性，或至少90％序列同一性，或至少95％序列同一性或更多。为了进行序列比较，通常一个序列充当与测试序列进行比较的参考序列(例如，亲本序列)。当使用序列比较算法时，将测试序列和参考序列输入到计算机，指定子序列坐标(如有必要)，并且指定序列算法程序参数。然后，序列比较算法基于所指定的程序参数，计算一个或多个测试序列相对于参考序列的百分比序列同一性。用于比较的序列的最佳比对可以例如通过smith＆waterman，adv.appl.math.2：482(1981)，通过needleman＆wunsch的同源性比对算法，j.mol.biol.48：443(1970)，通过寻找pearson＆lipman的相似性方法，proc.nat′l.acad.sci.usa85：2444(1988)，通过这些算法的计算机化实现(遗传学计算机组，威斯康星州遗传学软件包中的gap，bestfit，fasta和tfasta，575，科学博士麦迪逊，威斯康星州)或通过目视检查(通常参见ausubel等人，《分子生物学的最新操作规程》)。适用于确定百分比序列同一性和序列相似性的算法的一个实例是blast算法，所述blast算法描述于altschul等人，《分子生物学杂志》，215：403(1990)。用于执行blast分析的软件可以通过国家生物技术信息中心(nationalcenterforbiotechnologyinformation)公开获得(通过ncbi国立卫生研究院(nationalinstitutesofhealthncbi)的互联网服务器公开获得)。通常，可以使用默认程序参数来执行序列比较，但是也可以使用自定义参数。对于氨基酸序列，blastp程序使用作为默认的字长(w)3、期望值(e)10和blosum62评分矩阵(参见henikoff＆henikoff，《美国国家科学院院刊》89：10915(1989))。如本领域的技术人员应了解的，在一些方面，核酸进一步包括质粒序列。质粒序列可包括例如启动子序列、选择标记序列或基因座靶向序列的一个或多个序列。本文所用的术语“启动子”或“启动子元件”定义为启动多核苷酸序列的特异性转录所需的细胞的合成机制或引入的合成机制识别的dna序列。术语逆转录病毒载体”可以指γ逆转录病毒载体。逆转录病毒载体可包括例如启动子，包装信号，引物结合位点(pbs)，一个或多个(例如两个)长末端重复序列(ltr)和目的多核苷酸，例如编码car的多核苷酸编码pebl的多核苷酸。逆转录病毒载体可能缺乏病毒结构基因，例如gag、pol和env。示例性逆转录病毒(例如，γ逆转录病毒)载体包括鼠胚胎干细胞病毒(mesv)、鼠干细胞病毒(mscv)、鼠白血病病毒(mlv)、脾脏形成病毒(sffv)和骨髓增生性肉瘤病毒(mpsv)，以及从中得出的载体。其他γ逆转录病毒载体例如在maetzig等人，viruses，2011；3(6)：677-713中有描述。术语“双顺反子表达”通常通过将本文所述的多核苷酸可操作地连接至启动子，并将双顺反子构建体掺入表达载体中来实现。载体可适合于复制和整合真核生物。典型的克隆载体包含可用于调节所需核酸序列表达的转录和翻译终止子、起始序列和启动子。可以将核酸克隆到多种类型的载体中。例如，可以将核酸克隆到载体中，该载体包括但不限于质粒、噬菌粒、噬菌体衍生物、动物病毒和粘粒。尤其受关注的载体包括表达载体、复制载体、探针产生载体和测序载体。“表达载体”是指包括重组多核苷酸的载体，该重组多核苷酸包括与待表达的核苷酸序列可操作地连接的表达控制序列。表达载体包括足够的顺式作用元件用于表达；其他用于表达的元件可以由宿主细胞提供或在体外表达系统中提供。表达载体包含掺入了重组多核苷酸的本领域中所有已知的载体，诸如粘粒、质粒(例如裸露的或包含在脂质体中的)和病毒(例如慢病毒、逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒)。此外，表达载体可以病毒载体的形式提供给细胞。病毒载体技术是本领域众所周知的，例如在sambrook等人，2012，分子克隆：实验室手册，第1-4卷，纽约冷泉港出版社中进行了描述，以及其他病毒学和分子生物学手册中有描述。可用作载体的病毒包括但不限于逆转录病毒、腺病毒、腺伴随病毒、疱疹病毒和慢病毒。通常，合适的载体包含在至少一种生物中起作用的复制起点，启动子序列，方便的限制性核酸内切酶位点和一种或多种选择标记(例如，wo01/96584；wo01/29058；和美国专利no.6,326,193)。另外的启动子元件，例如增强子可调节转录起始的频率。通常，它们位于起始位点上游30-110bp的区域，尽管已显示许多启动子也包含起始位点下游的功能元件。启动子元件之间的间隔通常是灵活的，因此当元件相对于彼此反转或移动时，启动子功能得以保留。在胸苷激酶(tk)启动子中，启动子元件之间的间隔可在活性开始下降之前增加到50bp。取决于启动子，似乎单个元件可以协同或独立地起作用以激活转录。示例性的启动子包括立即早期巨细胞病毒(cmv)、ef-1α、泛素c或磷酸甘油激酶(pgk)启动子。可以使用能够驱动与其有效连接的任何多核苷酸序列的高水平表达的强组成型启动子序列。可以使用其他组成型启动子序列，包括但不限于猿猴病毒40(sv40)早期启动子、小鼠乳腺肿瘤病毒(mmtv)、人免疫缺陷病毒(hiv)长末端重复(ltr)启动子、momulv启动子、禽白血病病毒启动子、爱泼斯坦-巴尔病毒立即早期启动子、劳斯肉瘤病毒启动子、以及人类基因启动子，例如但不限于肌动蛋白启动子、肌球蛋白启动子、延伸因子1禽白血病病毒启动子、爱泼斯坦-巴尔病毒立即早期启动子、劳斯肉瘤病毒启动子、以及人基因启动子，例如但不限于肌动蛋白启动子、肌球蛋白启动子等。在一些实施方案中，该启动子是诱导型启动子，其提供了一种分子开关，该开关能够在需要这种表达时开启与其可操作连接的多核苷酸序列的表达，或者在不需要表达时关闭该表达。诱导型启动子的实例包括但不限于金属硫氨酸启动子、糖皮质激素启动子、孕酮启动子和四环素启动子。如本文所用，“抗体”意指完整抗体或抗体的抗原结合片段，其包含已经被改性或工程化的完整的抗体或抗原结合片段，或者是人抗体。已经被改性或工程化的抗体的实例是嵌合抗体、人源化抗体、多互补位抗体(例如，双互补位抗体)和多特异性抗体(例如，双特异性抗体)。抗原结合片段的实例包含fab、fab′、f(ab′)2、fv、单链抗体(例如，scfv)、微抗体和双抗体。当涉及蛋白质或肽时，术语“特异性地(或选择性地)结合”或“特异性地(或选择性地)与之发生免疫反应”是指通常在蛋白质和其他生物制剂的异质群体中决定蛋白质存在的结合反应。因此，在指定的免疫测定条件下，指定的抗体与特定蛋白质的结合至少是本底的两倍，更通常是本底的10到100倍以上。在这种条件下与抗体的特异性结合需要选择针对特定蛋白质具有特异性的抗体。例如，可以选择多克隆抗体以获得仅与所选抗原而不与其他蛋白质发生特异性免疫反应的那些多克隆抗体。该选择可以通过减去与其他分子交叉反应的抗体来实现。可以使用多种免疫测定形式来选择与特定蛋白质发生特异性免疫反应的抗体。例如，常规使用固相elisa免疫测定来选择与蛋白质发生特异性免疫反应的抗体(参见例如harlow＆lane，usingantibodies，alaboratorymanual(1998)中有关可用于确定特定免疫反应性的免疫测定形式和条件的描述)。在特定实施方式中，结合cd7的抗体是单链可变片段抗体(“scfv抗体”)。scfv是指包括抗体的vh结构域和vl结构域的抗体片段，其中这些结构域存在于单多肽链中。通常，fv多肽进一步包括位于vh结构域与vl结构域之间的多肽接头，所述多肽接头使scfv能够形成用于抗原结合的所需的结构。对于scfv的综述，参见pluckthun(1994)，《单克隆抗体药理学(thepharmacologyofmonoclonalantibodies)》，第113卷，rosenburg和moore编辑，纽约，springer-verlag，第269-315页。还参见pct公开no.wo88/01649以及美国专利nos.4,946,778和第5,260,203。如本领域的技术人员将了解的，可以对各种适合的连接子进行设计和测试以实现最佳功能，如本领域所提供的并且如本文所公开的。如本文所用，“工程化”免疫细胞包含与天然存在的免疫细胞相比已经被基因修饰的免疫细胞。例如，根据本方法产生的工程化t细胞携带核酸，所述核酸包括不天然存在于其衍生自的t细胞中的核苷酸序列。如本文所用，“基本上纯化的”细胞是基本上不含其他细胞类型的细胞。基本上纯化的细胞还指已经从其通常以其天然存在状态与其结合的其他细胞类型中分离出来的细胞。在一些情况下，基本上纯化的细胞群是指同质的细胞群。在其他情况下，该术语仅指在其自然状态下已从与之天然结合的细胞中分离出来的细胞。在一些实施方案中，细胞在体外培养。在其他实施方案中，细胞不体外培养。如本文所用，“cd7car+/cd7阴性”t细胞是指表达针对人cd7的嵌合抗原受体并且具有低或无内源性cd7表面表达的t细胞。在一些实施方案中，内源性cd7的低表面表达或无表面表达是由于针对人cd7的pebl的表达，其阻止或阻碍了内源性cd7蛋白转移至t细胞的表面。在一些情况下，可以使用本领域技术人员已知的标准方法，例如但不限于免疫细胞化学、流式细胞术或facs来确定cd7的表面表达。如本文中所使用的，术语“自体的”及其语法等同物可以指源自相同的存在。例如，可以在以后的某个时间将样品(例如，细胞)取出，处理并交还给同一受试者(例如，患者)。自体过程不同于同种异体过程，在异体过程中，供体和受体是不同的受试者。“同种异体的”是指衍生自相同物种的不同动物的移植物。如本文所用，术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”是指以根据临床上可接受的标准改进医疗病症的程度使医疗病症(例如，与t细胞恶性肿瘤有关的病症)产生反作用。如本文所用，“受试者”是指哺乳动物(例如，人、非人的灵长类动物、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、豚鼠、大鼠、小鼠)。在某些实施方式中，所述受试者是人。“其有需要的受试者”是指患有或处于发展中的疾病或风险中的可通过诱导t细胞对恶性t细胞的细胞毒性发挥特异性作用而被治疗(例如，改善、改进、预防)的受试者(例如患者)。如本文所定义，“治疗量”是指当给药于受试者时，足以在给药条件下在受试者中获得期望的治疗效果(治疗与t细胞恶性肿瘤有关的病症)的量。待给药的药剂的有效量可以由本领域的普通临床医师使用本文提供的引导和本领域已知的其它方法来确定，并且取决于若干个因素，所述因素包含，例如，所选择的特定药剂、受试者的年龄、敏感性、对药物的耐受性和总体健康状况。具体实施方式如以下详细描述的，抗cd7car(也称为“cd7car”)可以包含基于th69抗体的靶向cd7的抗原结合结构域。在一些实施方案中，cd7car的抗原结合结构域基于3a1f抗体。在一些实施方案中，cd7car的抗原结合结构域基于t3-3a1抗体。在一些实施方案中，本发明的cd7car包含选自seqidno：28、seqidno：29、seqidno：30和seqidno：31的氨基酸序列。在一些实施方案中，cd7car包含与选自seqidno：28、seqidno：29、seqidno：30和seqidno：31的一个氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在某些情况下，本发明的工程化免疫细胞包含seqidno：28的cd7car。在一些情况下，工程化免疫细胞包含与seqidno：28具有至少90％序列同一性的cd7car。在一些情况下，工程化免疫细胞包含seqidno：29的cd7car。在一些情况下，工程化免疫细胞包含与seqidno：30具有至少90％序列同一性的cd7car。在一些情况下，工程化免疫细胞包含与seqidno：30具有至少90％序列同一性的cd7car。在某些情况下，工程化免疫细胞包含与seqidno：31具有至少90％序列同一性的cd7car。在某些情况下，工程化免疫细胞包含与seqidno：31具有至少90％序列同一性的cd7car。在一些实施方案中，本发明的cd7pebl包含选自seqidno：24、seqidno：25、seqidno：26和seqidno：27的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明的cd7pebl包含与选自以下的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性的氨基酸序列：seqidno：24、seqidno：25、seqidno：26和seqidno：27。在某些情况下，本发明的工程化免疫细胞包含seqidno：24的cd7pebl。在一些情况下，本发明的工程化免疫细胞包含与seqidno：25具有至少90％序列同一性的cd7pebl。在一些情况下，工程化免疫细胞包含seqidno：24的cd7pebl。在一些情况下，工程化免疫细胞包含与seqidno：25具有至少90％序列同一性的cd7pebl。在一些情况下，工程化免疫细胞包含seqidno：26的cd7pebl。在一些情况下，工程化免疫细胞包含与seqidno：26具有至少90％序列同一性的cd7pebl。在一些情况下，工程化免疫细胞包含seqidno：27的cd7pebl。在一些情况下，工程化免疫细胞包含与seqidno：27具有至少90％序列同一性的cd7pebl。在一些实施方案中，本发明的工程化免疫细胞或工程化免疫细胞群包含seqidno：24的cd7pebl和seqidno：28的cd7car。在一些实施方案中，工程化免疫细胞或工程化免疫细胞群包含与seqidno：24具有至少90％序列同一性的cd7pebl和与seqidno：28具有至少90％序列同一性的cd7car。在一些实施方案中，工程化免疫细胞或工程化免疫细胞群包含seqidno：24的cd7pebl和seqidno：30的cd7car。在一些实施方案中，工程化免疫细胞或工程化免疫细胞群包含与seqidno：24具有至少90％序列同一性的cd7pebl和与seqidno：30具有至少90％序列同一性的cd7car。在一些实施方案中，工程化免疫细胞或工程化免疫细胞群包含seqidno：26的cd7pebl和seqidno：28的cd7car。在一些实施方案中，工程化免疫细胞或工程化免疫细胞群包含与seqidno：26具有至少90％序列同一性的cd7pebl和与seqidno：28具有至少90％序列同一性的cd7car。在一些实施方案中，工程化免疫细胞或工程化免疫细胞群包含seqidno：26的cd7pebl和seqidno：308的cd7car。在一些实施方案中，工程化免疫细胞或工程化免疫细胞群包含与seqidno：26具有至少90％序列同一性的cd7pebl和与seqidno：30具有至少90％序列同一性的cd7car。在一些实施方案中，工程化免疫细胞或工程化免疫细胞群体包含seqidno：25的cd7pebl和seqidno：29的cd7car。在一些实施方案中，工程化免疫细胞或工程化免疫细胞群体包含与seqidno：25具有至少90％序列同一性的cd7pebl和与seqidno：29具有至少90％序列同一性的cd7car。在一些实施方案中，工程化免疫细胞或工程化免疫细胞群体包含seqidno：25的cd7pebl和seqidno：31的cd7car。在一些实施方案中，工程化免疫细胞或工程化免疫细胞群包含与seqidno：25具有至少90％序列同一性的cd7pebl和与seqidno：31具有至少90％序列同一性的cd7car。在一些实施方案中，工程化免疫细胞或工程化免疫细胞群体包含seqidno：27的cd7pebl和seqidno：29的cd7car。在一些实施方案中，工程化免疫细胞或工程化免疫细胞群包含与seqidno：27具有至少90％序列同一性的cd7pebl和与seqidno：29具有至少90％序列同一性的cd7car。在一些实施方案中，工程化免疫细胞或工程化免疫细胞群体包含seqidno：27的cd7pebl和seqidno：31的cd7car。在一些实施方案中，工程化免疫细胞或工程化免疫细胞群包含与seqidno：27具有至少90％序列同一性的cd7pebl和与seqidno：31具有至少90％序列同一性的cd7car。在某些实施例中，工程化免疫细胞是工程化t细胞。在一些实施方式中，工程化免疫细胞是工程化cd4+t细胞。在一些实施方式中，工程化免疫细胞是工程化cd8+t细胞。在一些实施方案中，具有双顺反子构建体或双启动子构建体的工程化免疫细胞是从pbmc产生的。在一些实施方案中，具有双顺反子构建体或双启动子构建体的工程化免疫细胞是从纯化的cd4+t细胞产生的。在一些实施方案中，具有双顺反子构建体或双启动子构建体的工程化免疫细胞是从纯化的cd8+t细胞产生的。在一些实施方案中，具有双顺反子构建体或双启动子构建体的工程化免疫细胞是从包含纯化的cd4+t细胞和纯化的cd8+t细胞的细胞群中产生的。在一些实施方案中，具有双顺反子构建体或双启动子构建体的工程化免疫细胞是从包含纯化的cd3+t细胞的细胞群中产生的。双顺反子表达构建体本文提供了重组双顺反子病毒构建体或载体，其包含如本文所述的编码car的多核苷酸和编码pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，重组双顺反子病毒构建体包括在car的核酸序列和pebl的核酸序列之间的内部核糖体进入位点(ires)序列。在一些实施方案中，重组双顺反子病毒构建体在car的核酸序列和pebl的核酸序列之间包含核糖体密码子跳跃位点序列(也称为编码2a自切割肽的序列)。在双顺反子构建体的一些实施方案中，编码car的多核苷酸位于ires序列的上游(5′端)，而编码pebl的多核苷酸位于ires序列的下游(3′端)。在一些情况下，编码car的核酸序列可操作地连接至ires序列，而ires序列可操作地连接至编码pebl的核酸序列。在一些情况下，编码pebl的核酸序列可操作地连接至ires序列，而ires序列可操作地连接至编码car的核酸序列。在双顺反子构建体的一些实施方案中，编码car的多核苷酸位于编码自剪切2a肽的多核苷酸的上游(5′端)，而编码pebl的多核苷酸位于编码自剪切2a肽的多核苷酸的下游(3′端)。在一些情况下，编码car的核酸序列与编码自剪切2a肽的核酸序列可操作地连接，该自剪切2a肽与编码pebl的核酸序列可操作地连接。在一些情况下，编码pebl的核酸序列与编码自剪切2a肽的核酸序列可操作地连接，该自剪切2a肽与编码car的核酸序列可操作地连接。通过2a肽序列跳过核糖体密码子的机制可用于从一个转录本生成两种蛋白质；正常的肽键在2a序列处受损，导致一次翻译事件产生两个不连续的蛋白质片段。自剪切2a肽(例如2a切割位点)在kim等人，《公共科学图书馆·一》(plosone)，2011，6(4)：e18556中进行了描述。在一些实施方案中，ires来自脑心肌炎病毒。在一些实施方案中，ires来自肠病毒。在一些实施方案中，ires序列的核酸序列在seqidno：62中列出(参见，例如，表1)。在一些实施方案中，核糖体密码子跳跃位点基于自剪切2a肽(参见，例如，表2)。在一些实施方案中，自剪切2a肽选自p2a、e2a、f2a和t2a。在一些情况下，p2a肽的氨基酸序列包含seqidno：67的氨基酸序列，或相对于其具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，e2a肽的氨基酸序列包含seqidno：68的氨基酸序列，或相对于其具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，f2a肽的氨基酸序列包含seqidno：69的氨基酸序列，或相对于其具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，t2a肽的氨基酸序列包含seqidno：70的氨基酸序列，或相对于其具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，病毒构建体(例如逆转录病毒构建体)包含编码选自p2a、e2a、f2a和t2a的自剪切2a肽(例如2a肽剪切位点)的核酸序列，其中编码自剪切2a肽的核苷酸连接编码car的核酸序列和编码pebl的核酸序列。换句话说，编码自剪切2a肽的多核苷酸在编码car的核酸序列和编码pebl的核酸序列之间。如上所述，在一些实施方案中，构建体包含5′端至3′端或由其组成：编码car的核酸序列、编码自剪切p2a肽的核酸序列和编码pebl的核酸序列。在一些实施方案中，所述构建体包含5′端至3′端或由其组成：编码本文所述的任何cd7car的核酸序列、编码自剪切p2a肽的核酸序列和编码本文所述的任何cd7pebl的核酸序列。如上所述，在一些实施方案中，构建体包含5′端至3′端或由其组成：编码本文所述的任何cd7car的核酸序列、编码自剪切e2a肽的核酸序列和编码本文所述的任何cd7pebl的核酸序列。在一些实施方案中，构建体包含5′端至3′端或由其组成：编码本文所述的任何cd7car的核酸序列、编码自剪切f2a肽的核酸序列和编码本文所述的任何cd7pebl的核酸序列。在一些实施方案中，构建体包含5′端至3′端或由其组成：编码本文所述的任何cd7car的核酸序列、编码自剪切t2a肽的核酸序列和编码本文所述的任何cd7pebl的核酸序列。在一些实施方案中，构建体包含5′端至3′端或由其组成：编码pebl的核酸序列、编码自剪切p2a肽的核酸序列和编码car的核酸序列。在一些实施方案中，构建体包含5′端至3′端或由其组成：编码pebl的核酸序列、编码自剪切e2a肽的核酸序列和编码car的核酸序列。在一些实施方案中，构建体包含5′端至3′端或由其组成：编码pebl的核酸序列、编码自剪切f2a肽的核酸序列和编码car的核酸序列。在一些实施方案中，构建体包含5′端至3′端或由其组成：编码pebl的核酸序列，编码自剪切t2a肽的核酸序列和编码car的核酸序列。在一些实施方案中，编码p2a的核酸序列包含与seqidno：63具有至少90％序列同一性的核酸或由其组成。在一些实施方案中，编码p2a的核酸序列包含seqidno：63的核酸或由其组成。在一些实施方案中，编码e2a的核酸序列包含与seqidno：64具有至少90％序列同一性的核酸或由其组成。在一些实施方案中，编码e2a的核酸序列包含seqidno：64的核酸或由其组成。在一些实施方案中，编码f2a的核酸序列包含与seqidno：65具有至少90％序列同一性的核酸或由其组成。在一些实施方案中，编码f2a的核酸序列包含seqidno：65的核酸或由其组成。在一些实施方案中，编码t2a的核酸序列包含与seqidno：66具有至少90％序列同一性的核酸序列或由其组成。在一些实施方案中，编码t2a的核酸序列包含seqidno：66的核酸或由其组成。在一些实施方案中，编码pebl的核酸序列布置于(例如，位于)编码car的核酸序列的5′。在一些实施方案中，编码car的核酸序列位于编码pebl的核酸序列的5′。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由5′至3′端组成：(a1)seqidno：4，seqidno：63和seqidno：2；和(a2)seqidno：4，seqidno：63和seqidno：3；(a3)seqidno：5，seqidno：63和seqidno：2；(a4)seqidno：5，seqidno：63和seqidno：3；(b1)seqidno：4，seqidno：64和seqidno：2；(b2)seqidno：4，seqidno：64和seqidno：3；(b3)seqidno：5，seqidno：64和seqidno：2；(b4)seqidno：5，seqidno：64和seqidno：3；(c1)seqidno：4，seqidno：65和seqidno：2；(c2)seqidno：4，seqidno：65和seqidno：3；(c3)seqidno：5，seqidno：65和seqidno：2；(c4)seqidno：5，seqidno：65和seqidno：3；(d1)seqidno∶4，seqidno：66和seqidno：2；(d2)seqidno：4，seqidno：66和seqidno：3；(d3)seqidno：5，seqidno：66和seqidno：2；(d4)seqidno：5，seqidno：66和seqidno：3；(e1)seqidno：2，seqidno：63和seqidno：4；(e2)seqidno：3，seqidno：63和seqidno：4；(e3)seqidno：2，seqidno：63和seqidno：5；(e4)seqidno：3，seqidno：63和seqidno：5；(f1)seqidno：2，seqidno：64和seqidno：4；(f2)seqidno：3，seqidno：64和seqidno：4；(f3)seqidno：2，seqidno：63和seqidno：5；(f4)seqidno：3，seqidno：64和seqidno：5；(g1)seqidno：2，seqidno：65和seqidno：4；(g2)seqidno：3，seqidno：65和seqidno：4；(g3)seqidno：2，seqidno：65和seqidno：5；(g4)seqidno：3，seqidno：65和seqidno：5；(h1)seqidno：2，seqidno：66和seqidno：4；(h2)seqidno：3，seqidno：66和seqidno：4；(h3)seqidno：2，seqidno：66和seqidno：5；或(h4)seqidno：3，seqidno：66和seqidno：5。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：图16的序列、seqidno：63和图18的序列。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：图16的序列、seqidnos：63-66中的任一种和图19的序列。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：图17的序列、seqidnos：63-66中的任一种和图18的序列。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：图17的序列、seqidnos：63-66中的任一种和图19的序列。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：图18的序列、seqidnos：63-66中的任一种和图16的序列。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：图19的序列、seqidnos：63-66中的任一种和图16的序列。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：图18的序列、seqidnos：63-66中的任一种和图17的序列。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：图19的序列、seqidnos：63-66中的任一种以及图17的序列。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：编码seqidno：28的cd7(th67)car的多核苷酸、编码seqidno：67的p2a肽的多核苷酸和编码seqidno：24的cd7(th67)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：编码图42的cd7(th67)car的多核苷酸、编码seqidno：67的p2a肽的多核苷酸和编码图38的cd7(th67)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：编码seqidno：28的cd7(th67)car的多核苷酸、编码seqidno：67的p2a肽的多核苷酸和编码seqidno：26的cd7(3a1f)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：编码图42的cd7(th67)car的多核苷酸、编码seqidno：67的p2a肽的多核苷酸和编码图40的cd7(3a1f)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：编码seqidno：30的cd7(3a1f)car的多核苷酸、编码seqidno：67的p2a肽的多核苷酸和编码seqidno：24的cd7(th67)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：编码图44的cd7(3a1f)car的多核苷酸、编码seqidno：67的p2a肽的多核苷酸和编码图38的cd7(th67)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：编码seqidno：30的cd7(3a1f)car的多核苷酸、编码seqidno：67的p2a肽的多核苷酸和编码seqidno：26的cd7(3a1f)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：编码图44的cd7(3a1f)car的多核苷酸、编码seqidno：67的p2a肽的多核苷酸和编码图40的cd7(3alf)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：编码seqidno：28的cd7(th67)car的多核苷酸、编码seqidno：68的p2a肽的多核苷酸和编码seqidno：24的cd7(th67)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：编码图42的cd7(th67)car的多核苷酸、编码seqidno：68的p2a肽的多核苷酸和编码图38的cd7(th67)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：编码seqidno：28的cd7(th67)car的多核苷酸、编码seqidno：68的p2a肽的多核苷酸和编码seqidno：26的cd7(3a1f)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：编码图42的cd7(th67)car的多核苷酸、编码seqidno：68的p2a肽的多核苷酸和编码图40的cd7(3a1f)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：编码seqidno：30的cd7(3a1f)car的多核苷酸、编码seqidno：68的p2a肽的多核苷酸和编码seqidno：24的cd7(th67)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由5′至3′端组成：编码图44的cd7(3a1f)car的多核苷酸、编码seqidno：68的p2a肽的多核苷酸和编码图38的cd7(th67)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：编码seqidno：30的cd7(3a1f)car的多核苷酸、编码seqidno：68的p2a肽的多核苷酸和编码seqidno：26的cd7(3a1f)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由期组成：编码图44的cd7(3a1f)car的多核苷酸、编码seqidno：68的p2a肽的多核苷酸和编码图40的cd7(3a1f)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：编码seqidno：28的cd7(th67)car的多核苷酸、编码seqidno：69的p2a肽的多核苷酸和编码seqidno：24的cd7(th67)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：编码图42的cd7(th67)car的多核苷酸、编码seqidno：69的p2a肽的多核苷酸和编码图38的cd7(th67)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：编码seqidno：28的cd7(th67)car的多核苷酸、编码seqidno：69的p2a肽的多核苷酸和编码seqidno：26的cd7(3a1f)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′末或由其组成：编码图42的cd7(th67)car的多核苷酸、编码seqidno：69的p2a肽的多核苷酸和编码图40的cd7(3a1f)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：编码seqidno：30的cd7(3a1f)car的多核苷酸、编码seqidno：69的p2a肽的多核苷酸和编码seqidno：24的cd7(th67)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：编码图44的cd7(3a1f)car的多核苷酸、编码seqidno：69的p2a肽的多核苷酸和编码图38的cd7(th67)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：编码seqidno：30的cd7(3a1f)car的多核苷酸、编码seqidno：69的p2a肽的多核苷酸和编码seqidno：26的cd7(3a1f)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：编码图44的cd7(3a1f)car的多核苷酸、编码seqidno：69的p2a肽的多核苷酸和编码图40的cd7(3a1f)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：编码seqidno：28的cd7(th67)car的多核苷酸、编码seqidno：70的p2a肽的多核苷酸和编码seqidno：24的cd7(th67)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：编码图42的cd7(th67)car的多核苷酸、编码seqidno：70的p2a肽的多核苷酸和编码图38的cd7(th67)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：编码seqidno：28的cd7(th67)car的多核苷酸、编码seqidno：70的p2a肽的多核苷酸和编码seqidno：26的cd7(3a1f)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：编码图42的cd7(th67)car的多核苷酸、编码seqidno：70的p2a肽的多核苷酸和编码图40的cd7(3a1f)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：编码seqidno：30的cd7(3a1f)car的多核苷酸、编码seqidno：70的p2a肽的多核苷酸和编码seqidno：24的cd7(th67)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：编码图44的cd7(3a1f)car的多核苷酸、编码seqidno：70的p2a肽的多核苷酸和编码图38的cd7(th67)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：编码seqidno：30的cd7(3a1f)car的多核苷酸、编码seqidno：70的p2a肽的多核苷酸和编码seqidno：26的cd7(3a1f)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，双顺反子构建体包含5′至3′端或由其组成：编码图44的cd7(3a1f)car的多核苷酸、编码seqidno：70的p2a肽的多核苷酸和编码图40的cd7(3a1f)pebl的多核苷酸。在一些实施方案中，编码pebl的多核苷酸序列位于ires位点的5′(上游)端，并且ires位点位于编码car的多核苷酸序列的5′端。在一些实施方案中，编码car的多核苷酸序列位于ires位点的5′端，而ires位点位于编码pebl的多核苷酸序列的5′端。在一些实施方案中，编码pebl的多核苷酸序列位于核糖体密码子跳跃位点的5′(上游)端，且核糖体密码子跳跃位点位于编码car的多核苷酸序列的5端′。在一些实施方案中，编码car的多核苷酸序列位于核糖体密码子跳跃位点的5′端，且核糖体密码子跳跃位点位于编码pebl的多核苷酸序列的5′端。在一些方面，本文提供了重组双顺反子构建体，其与一个或多个选自seqidno：63、seqidno：64、seqidno：65以及seqidno：66的核酸序列具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，重组双顺反子构建体与seqidno：63的核酸序列具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，重组双顺反子构建体与seqidno：64的核酸序列具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，重组双顺反子构建体与seqidno：65的核酸序列具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，重组双顺反子构建体与seqidno：66的核酸序列具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，重组双顺反子构建体包含选自seqidno：63、seqidno：64、seqidno：65和seqidno：66的一个的核酸序列。表1.核糖体密码子跳过肽和ires的核酸序列表2.核糖体密码子跳跃位点的氨基酸序列名称seqidno氨基酸序列p2aseqidno：67atnfsllkqagdveenpgpe2aseqidno：68qctnyallklagdvesnpgpf2aseqidno：69vkqtlnfdllklagdvesnpgpt2aseqidno：70egrgslltcgdveenpgp本发明提供了载体，例如表达载体，其中插入了本文所述的任何多核苷酸。在一些实施方案中，载体衍生自逆转录病毒，例如慢病毒。这样的载体是适于实现长期基因转移的工具，因为它们允许外源多核苷酸(例如，转基因)的长期、稳定整合以及其在子代细胞中的繁殖。与衍生自癌逆转录病毒的载体(例如鼠白血病病毒)不同，慢病毒载体可以转导非增殖细胞。慢病毒载体也具有低免疫原性。在其他实施方案中，载体是腺病毒载体。在某些实施方案中，载体是质粒。在一些实施方案中，启动子与cmv启动子的具有至少90％，例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或更高的序列同一性。在一些实施方式中，载体包括cmv启动子。在一些实施方案中，cmv启动子包含seqidno：6的序列。在一些实施方案中，本文所述的任何构建体包含seqidno：6的cmv启动子或由其组成。在一些实施方案中，启动子与ef1α启动子的具有至少90％，例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或更高的序列同一性。在一些实施方案中，启动子包含ef1α启动子。在一些实施方案中，ef1α启动子包含seqidno：7的序列。在一些实施方案中，cmv启动子包含seqidno：6的序列。在一些实施方案中，本文所述的任何构建体包含seqidno：7的ef1α启动子或由其组成。在一些实施方案中，启动子与efs启动子的具有至少90％，例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或更高的序列同一性。在一些实施方案中，启动子包含efs启动子。在一些实施方案中，efs启动子包含seqidno：8的序列。在一些实施方案中，cmv启动子包含seqidno：6的序列。在一些实施方案中，本文所述的任何构建体包含seqidno：8的efs启动子或由其组成。在一些实施方案中，启动子与鼠干细胞病毒(mscv)启动子的具有至少90％，例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或更高的序列同一性。在一些实施方案中，启动子包括mscv启动子。在一些实施方案中，mscv启动子包含seqidno：9的序列。在一些实施方案中，本文所述的任何构建体包含seqidno：9的mscv启动子或由其组成。在一些实施方案中，启动子与磷酸甘油酸激酶(pgk)启动子的具有至少90％，例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或更高的序列同一性。在一些实施方案中，启动子包含pgk启动子。在一些实施方案中，pgk启动子包含seqidno：10的序列。在一些实施方案中，本文所述的任何构建体包含seqidno：10的pgk启动子或由其组成。在一些实施方案中，双顺反子载体包含seqidno：11的核酸序列或由其组成。这样的序列的示例性实施例在图25中示出。在一些实施方案中，双顺反子载体与seqidno：11具有至少90％，例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或更高的序列同一性。双顺反子载体包括含从5′端至3′端的核酸序列：编码cd7pebl的核酸序列、ires序列、编码cd7car的核酸序列，以及任选地在5′端，启动子选自cmv启动子(例如，seqidno：6或图20)、ef1a启动子(例如，seqidno：7或图21)、efs启动子(例如，seqidno：8或图22)、mscv启动子(例如，seqidno：9或图23)和pgk启动子(例如，seqidno：10或图24)。在一些实施方案中，双顺反子载体包含seqidno：12的核酸序列。在一些实施方案中，双顺反子载体与seqidno：12具有至少90％，例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或更高的序列同一性。这样的序列的示例性实施例在图26中示出。双顺反子载体包括含从5′端至3′端的核酸序列：编码cd7car的核酸序列、ires序列和编码cd7pebl的核酸序列，任选地在5′端，启动子选自cmv启动子、ef1a启动子、efs启动子、mscv启动子和pgk启动子。在一些实施方案中，双顺反子载体包含seqidno：13的核酸序列。这样的序列的示例性实施例在图27中示出。在一些实施方案中，双顺反子载体与seqidno：13具有至少90％，例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或更高的序列同一性。双顺反子载体包括含从5′端至3′端的核酸序列：编码cd7car的核酸序列、编码p2a肽的核酸序列和编码cd7pebl的核酸序列，任选地在5′端，启动子选自cmv启动子、ef1a启动子、efs启动子、mscv启动子和pgk启动子。在一些实施方案中，双顺反子载体包含seqidno：14的核酸序列。在一些实施方案中，双顺反子载体与seqidno：14具有至少90％，例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或更多高的序列同一性。双顺反子载体包含包含从5′端至3′端的核酸序列：启动子、编码cd7car的核酸序列、p2a序列和编码cd7pebl的核酸序列。在一些情况下，双顺反子载体包括含从5′端至3′端的核酸序列：mscv启动子、编码cd7car的核酸序列、编码p2a肽的核酸序列和编码cd7pebl的核酸序列。这样的序列的示例性实施例在图28a-图28b中示出。在一些实施方案中，双顺反子载体包含seqidno：15的核酸序列。在一些实施方案中，双顺反子载体与seqidno：15具有至少90％，例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或更高的序列同一性。在一些情况下，双顺反子载体包括含从5′端至3′端的核酸序列：ef1α启动子、编码cd7car的核酸序列、编码p2a肽的核酸序列和编码cd7pebl的核酸序列。这样的序列的示例性实施例在图29a-图29b中示出。在一些实施方案中，双顺反子载体包含seqidno：16的核酸序列。在一些实施方案中，双顺反子载体与seqidno：16具有至少90％，例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或更高的序列同一性。在一些情况下，双顺反子载体包括含从5′端至3′端的核酸序列：efs启动子、编码cd7car的核酸序列、编码p2a肽的核酸序列和编码cd7pebl的核酸序列。这样的序列的示例性实施例在图30a-图30b中示出。双启动子逆转录病毒构建体本文提供了重组逆转录病毒构建体(或载体)，用于在细胞中同时表达car和pebl，例如t细胞。在一些实施方案中，逆转录病毒构建体包括可操作地连接至编码本文所述的任何car的多核苷酸的启动子和可操作地连接至编码本文所述的任何pebl的多核苷酸的启动子。在一些实施方案中，用于car的启动子和用于pebl的启动子共享小于90％的序列同一性，例如小于90％的同一性，小于80％的同一性，小于75％的序列同一性，小于70％的序列同一性，小于65％的序列同一性，小于60％的序列同一性，小于55％的序列同一性等。在一些实施方案中，用于car的启动子和用于pebl的启动子共享小于80％的序列同一性，例如80％的同一性，75％的序列同一性，70％的序列同一性，65％的序列同一性，60％的序列同一性，55％的序列同一性等。在一些实施方案中，用于car的启动子和用于pebl的启动子共享至少50％的序列同一性，例如50％的序列同一性，55％的序列同一性，60％的序列同一性，65％的序列同一性，70％的序列同一性，75％的序列同一性，80％的序列同一性，85％的序列同一性，90％的序列同一性，95％的序列同一性或更高的序列同一性。在一些实施方案中，用于car的启动子(称为第一启动子)不同于用于pebl的启动子(称为第二启动子)。第一启动子和第二启动子可以具有相同的序列。在其他情况下，第一启动子和第二启动子具有不同的序列。在一些实施方案中，第一启动子和/或第二启动子与cmv启动子具有至少90％，例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或更高的序列同一性。在一些实施方案中，第一启动子和/或第二启动子包括cmv启动子。在一些实施方案中，cmv启动子包含seqidno：6的序列。在一些实施方案中，第一启动子和/或第二启动子与ef1α启动子具有至少90％，例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或更高的序列同一性。在一些实施方案中，第一启动子和/或第二启动子包含ef1α启动子。在一些实施方案中，ef1α启动子包含seqidno：7的序列。在一些实施方案中，第一启动子和/或第二启动子与efs启动子具有至少90％，例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或更高的序列同一性。在一些实施方案中，第一启动子和/或第二启动子包含efs启动子。在一些实施方案中，efs启动子包含seqidno：8的序列。在一些实施方案中，第一启动子和/或第二启动子与鼠干细胞病毒(mscv)启动子具有至少90％，例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或更高的序列同一性。在一些实施方案中，第一启动子和/或第二启动子包括mscv启动子。在一些实施方案中，mscv启动子包含seqidno：9的序列。在一些实施方案中，第一启动子和/或第二启动子与磷酸甘油酸激酶(pgk)启动子具有至少90％，例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或更高的序列同一性。在一些实施方案中，第一启动子和/或第二启动子包含pgk启动子。在一些实施方案中，pgk启动子包含seqidno：10的序列。在一些实施方案中，从5′至3′的逆转录病毒构建体包括可操作地连接至编码car的多核苷酸的第一启动子和可操作地连接至编码pebl的多核苷酸的第二启动子。在各种实施方案中，从5′至3′的逆转录病毒构建体包括可操作地连接至编码pebl的多核苷酸的第二启动子和可操作地连接至编码car的多核苷酸的第一启动子。在一些实施方案中，第一启动子位于第二启动子的上游。在一些实施方案中，第一启动子是cmv启动子，第二启动子是efs启动子。在一些实施方案中，第一启动子是cmv启动子，第二启动子是ef1α启动子。在一些实施方案中，第一启动子是cmv启动子，第二启动子是pgk启动子。在一些实施方案中，第一启动子是cmv启动子，第二启动子是mscv启动子。在一些实施方案中，第一启动子是cmv启动子，第二启动子是cmv启动子。在一些实施方案中，第一启动子是mscv启动子，第二启动子是efs启动子。在一些实施方案中，第一启动子是mscv启动子，第二启动子是ef1α启动子。在一些实施方案中，第一启动子是mscv启动子，第二启动子是pgk启动子。在一些实施方案中，第一启动子是mscv启动子，第二启动子是cmv启动子。在一些实施方案中，第一启动子是mscv启动子，第二启动子是mscv启动子。在一些实施方案中，第一启动子是pgk启动子，第二启动子是efs启动子。在一些实施方案中，第一启动子是pgk启动子，第二启动子是ef1α启动子。在一些实施方案中，第一启动子是pgk启动子，第二启动子是mscv启动子。在一些实施方案中，第一启动子是pgk启动子，第二启动子是cmv启动子。在一些实施方案中，第一启动子是pgk启动子，第二启动子是pgk启动子。在一些实施方案中，第一启动子是ef1α启动子，第二启动子是mscv启动子。在一些实施方案中，第一启动子是ef1α启动子，第二启动子是pgk启动子。在一些实施方案中，第一启动子是ef1α启动子，第二启动子是efs启动子。在一些实施方案中，第一启动子是ef1α启动子，第二启动子是cmv启动子。在一些实施方案中，第一启动子是ef1α启动子，第二启动子是ef1α启动子。在一些实施方案中，第一启动子是efs启动子，第二启动子是mscv启动子。在一些实施方案中，第一启动子是efs启动子，第二启动子是ef1α启动子。在一些实施方案中，第一启动子是efs启动子，第二启动子是pgk启动子。在一些实施方案中，第一启动子是efs启动子，第二启动子是cmv启动子。在一些实施方案中，第一启动子是efs启动子，第二启动子是efs启动子。在一些实施例中，本发明的逆转录病毒构建体与seqidno：17具有至少90％，例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或更高的序列同一性。在一些实施方案中，本发明的逆转录病毒构建体包含seqidno：17的核酸序列。在一些实施例中，本发明的逆转录病毒构建体与seqidno：18具有至少90％，例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或更高的序列同一性。在一些实施方案中，本发明的逆转录病毒构建体包含seqidno：18的核酸序列。在一些实施例中，本发明的逆转录病毒构建体与seqidno：19具有至少90％，例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或更高的序列同一性。在一些实施方案中，本发明的逆转录病毒构建体包含seqidno：19的核酸序列。在一些实施例中，本发明的逆转录病毒构建体与seqidno：20具有至少90％，例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或更高的序列同一性。在一些实施方案中，本发明的逆转录病毒构建体包含seqidno：20的核酸序列。在一些实施例中，本发明的逆转录病毒构建体与seqidno：21具有至少90％，例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或更高的序列同一性。在一些实施方案中，本发明的逆转录病毒构建体包含seqidno：21的核酸序列。在一些实施例中，本发明的逆转录病毒构建体与seqidno：22具有至少90％，例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或更高的序列同一性。在一些实施方案中，本发明的逆转录病毒构建体包含seqidno：22的核酸序列。在一些实施例中，本发明的逆转录病毒构建体与seqidno：23具有至少90％，例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或更高的序列同一性。在一些实施方案中，本发明的逆转录病毒构建体包含seqidno：23的核酸序列。结合cd7的抗体在某些实施方案中，基于th69抗体的抗cd7scfv包含具有氨基酸序列的可变重链(重链可变区或vh)和可变轻链(轻链可变区或vl)，所述氨基酸序列分别与seqidno：32和33所示的vh和vl序列具有至少90％序列同一性，至少91％的序列同一性，至少92％的序列同一性，至少93％的序列同一性，至少94％的序列同一性，至少95％的序列同一性，至少96％的序列同一性，至少97％的同一性，至少98％序列同一性，至少99％序列同一性或100％序列同一性。在一些实施方式中，重链可变区与seqidno：32所示的vh序列具有至少90％的序列同一性，至少91％的序列同一性，至少92％的序列同一性，至少93％的序列同一性，至少94％的序列同一性，至少95％的序列同一性，至少96％的序列同一性，至少97％的序列同一性，至少98％的序列同一性，至少99％的序列同一性或100％的序列同一性。在一些实施方式中，轻链可变区与seqidno：33所示的vl序列具有至少90％的序列同一性，至少91％的序列同一性，至少92％的序列同一性，至少93％的序列同一性，至少94％的序列同一性，至少95％的序列同一性，至少96％的序列同一性，至少97％的序列同一性，至少98％的序列同一性，至少99％的序列同一性或100％的序列同一性。在某些情况下，重链可变区在seqidno：32所示的序列中包含至少一个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个)氨基酸置换。在某些情况下，重链可变区在seqidno：32所示的序列中包含10个或更少(例如0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)的氨基酸置换。在某些情况下，轻链可变区在seqidno：33所示的序列中包含至少一个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个)氨基酸置换。在某些情况下，轻链可变区在seqidno：33所示的序列中包含10个或更少(例如0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)的氨基酸置换。本文所述的任何氨基酸置换可以是保守或非保守置换。在一些实施方案中，抗cd7scfv包含seqidno：44的vlcdr1(sasqgisnyln)，seqidno：45的vlcdr2(ytsslhs)和seqidno：46的vlcdr3(qqysklpyt)。在一些实施方案中，抗cd7scfv包含seqidno：47的vhcdr1(syams)，seqidno：48的vhcdr2(sissggftyypdsvkg)和seqidno：49的vhcdr3(devrgyldv)。在一些实施方案中，抗cd7scfv包含seqidno：44的vlcdr1，seqidno：45的vlcdr2，seqidno：46的vlcdr3，seqidno：47的vhcdr1，seqidno：48的vhcdr2和seqidno：49的vhcdr3。在一些实施方式中，编码vh的核酸序列与seqidno：38所示的核酸序列具有至少90％的序列同一性，至少91％的序列同一性，至少92％的序列同一性，至少93％的序列同一性，至少94％的序列同一性，至少95％的序列同一性，至少96％的序列同一性，至少97％的序列同一性，至少98％的序列同一性，至少99％的序列同一性或100％的序列同一性。在一些实施方式中，编码vl的核酸序列与seqidno：39所示的核酸序列具有至少90％的序列同一性，至少91％的序列同一性，至少92％的序列同一性，至少93％的序列同一性，至少94％的序列同一性，至少95％的序列同一性，至少96％的序列同一性，至少97％的序列同一性，至少98％的序列同一性，至少99％的序列同一性或100％的序列同一性。在某些实施方案中，基于3a1f抗体的抗cd7scfv包含具有氨基酸序列的可变重链(重链可变区或vh)和可变轻链(轻链可变区或vl)，所述氨基酸序列分别与seqidno：34和35所示的vh和vl序列具有至少90％序列同一性，至少91％的序列同一性，至少92％的序列同一性，至少93％的序列同一性，至少94％的序列同一性，至少95％的序列同一性，至少96％的序列同一性，至少97％的同一性，至少98％序列同一性，至少99％序列同一性或100％序列同一性。在一些实施方式中，重链可变区与seqidno：34所示的vh序列具有至少90％的序列同一性，至少91％的序列同一性，至少92％的序列同一性，至少93％的序列同一性，至少94％的序列同一性，至少95％的序列同一性，至少96％的序列同一性，至少97％的序列同一性，至少98％的序列同一性，至少99％的序列同一性或100％的序列同一性。在一些实施方式中，轻链可变区与seqidno：35所示的vl序列具有至少90％的序列同一性，至少91％的序列同一性，至少92％的序列同一性，至少93％的序列同一性，至少94％的序列同一性，至少95％的序列同一性，至少96％的序列同一性，至少97％的序列同一性，至少98％的序列同一性，至少99％的序列同一性或100％的序列同一性。在某些情况下，重链可变区在seqidno：34所示的序列中包含至少一个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个)氨基酸置换。在某些情况下，重链可变区在seqidno：34所示的序列中包含10个或更少(例如0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)的氨基酸置换。在某些情况下，轻链可变区在seqidno：35所示的序列中包含至少一个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或更多个)氨基酸置换。在某些情况下，重链可变区在seqidno：35所示的序列中包含10个或更少(例如0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)的氨基酸置换。本文所述的任何氨基酸置换可以是保守或非保守置换。在一些实施方案中，抗cd7scfv包含seqidno：50的vlcdr1(rasqsisnnlh)，seqidno：51的vlcdr2(sasqsis)和seqidno：52的vlcdr3(qqsnswpyt)。在一些实施方案中，抗cd7scfv包含seqidno：53的vhcdr1(sywmh)，seqidno：54的vhcdr2(kinpsngrtnynekfks)和seqidno：55的vhcdr3(ggvyydlyyyaldy)。在各种实施方案中，抗cd7scfv包含seqidno：50的vlcdr1，seqidno：51的vlcdr2，seqidno：52的vlcdr3，seqidno：53的vhcdr1，seqidno：54的vhcdr2和seqidno：55的vhcdr3。在一些实施方式中，编码vh的核酸序列与seqidno：40所示的核酸序列具有至少90％的序列同一性，至少91％的序列同一性，至少92％的序列同一性，至少93％的序列同一性，至少94％的序列同一性，至少95％的序列同一性，至少96％的序列同一性，至少97％的序列同一性，至少98％的序列同一性，至少99％的序列同一性或100％的序列同一性。在一些实施方式中，编码vl的核酸序列与seqidno：41所示的核酸序列具有至少90％的序列同一性，至少91％的序列同一性，至少92％的序列同一性，至少93％的序列同一性，至少94％的序列同一性，至少95％的序列同一性，至少96％的序列同一性，至少97％的序列同一性，至少98％的序列同一性，至少99％的序列同一性或100％的序列同一性。在某些实施方案中，基于t3-3a1抗体的抗cd7scfv包含具有氨基酸序列的可变重链(重链可变区或vh)和可变轻链(轻链可变区或vl)，所述氨基酸序列分别与seqidno：36和37所示的vh和vl序列具有至少90％序列同一性，至少91％的序列同一性，至少92％的序列同一性，至少93％的序列同一性，至少94％的序列同一性，至少95％的序列同一性，至少96％的序列同一性，至少97％的同一性，至少98％序列同一性，至少99％序列同一性或100％序列同一性。在一些实施方式中，重链可变区与seqidno：36所示的vh序列具有至少90％的序列同一性，至少91％的序列同一性，至少92％的序列同一性，至少93％的序列同一性，至少94％的序列同一性，至少95％的序列同一性，至少96％的序列同一性，至少97％的序列同一性，至少98％的序列同一性，至少99％的序列同一性或100％的序列同一性。在一些实施方式中，轻链可变区与seqidno：37所示的vl序列具有至少90％的序列同一性，至少91％的序列同一性，至少92％的序列同一性，至少93％的序列同一性，至少94％的序列同一性，至少95％的序列同一性，至少96％的序列同一性，至少97％的序列同一性，至少98％的序列同一性，至少99％的序列同一性或100％的序列同一性。在某些情况下，重链可变区在seqidno：36所示的序列中包含至少一个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个)氨基酸置换。在某些情况下，重链可变区在seqidno：36所示的序列中包含13个或更少(例如0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13个)的氨基酸置换。在某些情况下，轻链可变区在seqidno：37所示的序列中包含至少一个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个)氨基酸置换。在某些情况下，重链可变区在seqidno：37所示的序列中包含5个或更少(例如0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个)的氨基酸置换。本文所述的任何氨基酸置换可以是保守或非保守置换。在一些实施方案中，抗cd7scfv包含seqidno：56的vlcdr1(rasksvsasgysymh)，seqidno：57的vlcdr2(lasnles)和seqidno：58的vlcdr3(qhsrelpyt)。在一些实施方案中，抗cd7scfv包含seqidno：59的vhcdr1(sfgmh)，seqidno：60的vhcdr2(yissgsstlhyadtvkg)和seqidno：61的vhcdr3(wgnyphyamdy)。在各种实施方案中，抗cd7scfv包含seqidno：56的vlcdr1，seqidno：57的vlcdr2，seqidno：58的vlcdr3，seqidno：59的vhcdr1，seqidno：60的vhcdr2和seqidno：61的vhcdr3。在一些实施方式中，编码vh的核酸序列与seqidno：42所示的核酸序列具有至少90％的序列同一性，至少91％的序列同一性，至少92％的序列同一性，至少93％的序列同一性，至少94％的序列同一性，至少95％的序列同一性，至少96％的序列同一性，至少97％的序列同一性，至少98％的序列同一性，至少99％的序列同一性或100％的序列同一性。在一些实施方式中，编码vl的核酸序列与seqidno：43所示的核酸序列具有至少90％的序列同一性，至少91％的序列同一性，至少92％的序列同一性，至少93％的序列同一性，至少94％的序列同一性，至少95％的序列同一性，至少96％的序列同一性，至少97％的序列同一性，至少98％的序列同一性，至少99％的序列同一性或100％的序列同一性。在一些实施方式中，本发明的scfv包含可变重链序列，其具有与抗cd7抗体的可变重链序列具有至少90％的序列同一性，至少91％的序列同一性，至少92％的序列同一性，至少93％的序列同一性，至少94％的序列同一性，至少95％的序列同一性，至少95％序列同一性，至少96％序列同一性，至少97％序列同一性，至少98％序列同一性，至少99％序列同一性或100％序列同一性。在一些实施方式中，本发明的scfv包含可变轻链序列，其具有与抗cd7抗体的可变轻链序列具有至少90％序列同一性，至少91％序列同一性，至少92％序列同一性，至少93％序列同一性，至少94％序列的可变轻链序列、同一性，至少95％序列同一性，至少95％序列同一性，至少96％序列同一性，至少97％序列同一性，至少98％序列同一性，至少99％序列同一性或100％序列同一性。例如，抗cd7抗体可以是本领域技术人员公认的任一个抗体。表3.抗cd7scfvsvh区和vl区的氨基酸序列表4.抗cd7scfvsvh区和vl区的核酸序列通过cd7pebl下调细胞内cd7如本文所述，当将抗cd7car与效应t细胞上cd7表达的下调组合使用时，t细胞的细胞毒性显示出显著增加。如本文所述，cd7的下调(例如消除，减少和/或重新定位)可防止相应的抗cd7car发挥杀伤作用，与保留靶抗原(例如cd7)的细胞相比，在car表达后允许更大的t细胞恢复，并且对t白血病/淋巴瘤细胞具有更有效的细胞毒性。如本领域技术人员将理解的，可以根据多种已知方法来实现效应t细胞上cd7表达的下调，所述方法包括：例如，针对cd7的蛋白质表达阻断剂(pebls)(如wo2016/126213中所述)，针对cd7的rnai或基因编辑方法，例如大范围核酸酶、talen、crispr/cas9和锌指核酸酶。本发明描述了结合靶抗原并且将靶抗原螯合到细胞的细胞质的pebl。靶抗原被合成并在细胞内与pebl结合。在某些实施方案中，本文提供了包含编码pebl的核酸序列的多核苷酸，该pebl包含与定位结构域连接的靶结合分子(例如，cd7抗原结合域)。在一些情况下，pebl从n末端到c末端包括：cd7抗原结合结构域、任选的结构域接头和细胞定位结构域。在一些实施方案中，pebl还包含与cd7抗原结合结构域n末端融合的信号肽。在一些实施方案中，cd7抗原结合结构域包含vl结构域、结构域接头和vh结构域。pebl的示例性实施方案在us2018/0179280的图3e和图17中示出，其通过引用并入本文。如本文所用，在蛋白质表达阻断剂的上下文中，“连接的”是指在与编码一个或多个定位结构域的一个或多个基因相邻的框中(例如，没有接头)直接编码靶结合分子的基因。可替代地，可以通过如本文所描述的接头序列将编码靶结合分子的基因连接到编码一个或多个定位结构域的一个或多个基因，例如，如wo2016/126213中所述。如本领域的技术人员将了解的，此类接头序列以及此类接头序列的变体是本领域已知的。设计并入接头序列的构建体的方法以及评估功能性的方法对于本领域的技术人员而言是容易获得的。在一些实施方案中，pebl的定位结构域包含内质网(er)或高尔基体保留序列；或蛋白体定位序列。在某些实施方案中，定位结构域包含表5的内质网(er)保留肽。在某些实施方案中，定位结构域包含表5中列出的蛋白酶体定位序列。取决于应用，定位结构域可以将pebl导向特定的细胞区室，例如高尔基体或内质网，蛋白酶体或细胞膜。在一些实施方式中，通过将scfv序列连接至包含21个(trim21)靶向结构域序列的三重基序并共表达编码人trim21e3泛素连接酶蛋白的序列来实现蛋白酶体定位。trim21以高亲和力与抗体的fc结构域结合，并可以募集泛素-蛋白体复合物以降解与抗体结合的分子(例如，蛋白质和肽)。trim21靶向结构域序列编码选自人免疫球蛋白g(igg)恒定区(fc)基因的组(例如igg1、igg2或igg4)的氨基酸序列，并用于形成包含scfv和fc结构域的融合蛋白。在该实施方式中，外源表达的trim21蛋白结合与靶蛋白(例如，cd7)结合的scfv-fc融合蛋白，并将复合物引导至蛋白酶体进行降解。人trim21e3连接酶蛋白的氨基酸序列的细节可以在例如ncbi蛋白质数据库的ncbiref.seq.no.np_003132.2中找到。编码人trim21e3连接酶蛋白的核酸酸序列的细节可以在例如ncbi蛋白质数据库的ncbiref.seq.no.nm_003141.3中找到。在某些情况下，pebl还包括衍生自cd8α、cd8β、4-1bb、cd28、cd34、cd4、fcεriγ、cd16、ox40、cd3ζ、cd3ε、cd3γ、cd38、tcra、cd32、cd64、vegfr2、fas或fgfr2b的铰链结构域和跨膜结构域序列。在一些实施方案中，pebl包含选自由cd8的铰链和跨膜结构域、cd8β的铰链和跨膜结构域、4-1bb的铰链和跨膜结构域、cd28的铰链和跨膜结构域、cd34的铰链和跨膜结构域、cd4的铰链和跨膜结构域、fcεriγ的铰链和跨膜结构域cd16的铰链和跨膜结构域、ox40的铰链和跨膜结构域、cd3ζ的铰链和跨膜结构域、cd3ε的铰链和跨膜结构域、cd3γ的铰链和跨膜结构域、cd3δ的铰链和跨膜结构域、tcrα的铰链和跨膜结构域、cd32的铰链和跨膜结构域、cd64的铰链和跨膜结构域、vegfr2的铰链和跨膜结构域、fas的铰链和跨膜结构域以及fgfr2b的铰链和跨膜结构域构成的组的铰链和跨膜结构域。在某些实施方案中，pebl包含在表5列出的一种或多种组分。表5.cd7pebl选定成分的氨基酸序列信息在一些实施方案中，cd7pebl包含cd7抗原结合结构域，其包含seqidno：32的氨基酸序列、seqidno：33的氨基酸序列和vh-vl接头。vh-vl接头可以是(g4s)n接头，其中n的范围可以是1到6，例如1、2、3、4、5或6。在一个实施方案中，cd7pebl包含seqidno：32的氨基酸序列、seqidno：33的氨基酸序列和seqidno：79的氨基酸序列。在一些实施方案中，cd7pebl包含与seqidno：32、seqidno：33的氨基酸序列和seqidno：79的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性或至少95％的序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，cd7pebl包含seqidno：32的氨基酸序列，与seqidno：33以及seqidno：79具有至少90％的序列同一性或至少95％的序列同一性的氨基酸序列。在其他实施方案中，抗cd7蛋白表达阻断剂包含与seqidno：32具有至少90％序列同一性或至少95％序列同一性的氨基酸序列，与seqidno：33具有至少90％序列同一性或至少95％的氨基酸序列，以及seqidno：79的氨基酸序列。在一些实施方案中，cd7pebl包含cd7抗原结合结构域，其包含氨基酸序列seqidno：34，氨基酸序列seqidno：35和vh-vl接头。vh-vl接头可以是(g4s)n接头，其中n的范围可以是1到6，例如1、2、3、4、5或6。在一个实施方案中，cd7pebl包含seqidno：34的氨基酸序列、seqidno：35的氨基酸序列和seqidno：79的氨基酸序列。在一些实施方案中，cd7pebl包含与seqidno：34具有至少95％序列同一性的氨基酸序列、seqidno：35的氨基酸序列和seqidno：79的氨基酸序列。在某些实施方案中，cd7pebl包含seqidno：34的氨基酸序列、与seqidno：35具有至少95％序列同一性的氨基酸序列以及seqidno：79的氨基酸序列。在其他实施方案中，cd7pebl包含与seqidno：34具有至少90％序列同一性或至少95％序列同一性的氨基酸序列、与seqidno：35具有至少90％序列同一性或至少95％序列的氨基酸序列以及seqidno：79的氨基酸序列。在一些实施方案中，cd7pebl包含cd7抗原结合结构域，其包含氨基酸序列seqidno：36、氨基酸序列seqidno：37和vh-vl接头。vh-vl接头可以是(g4s)n接头，其中n的范围可以是1到5，例如1、2、3、4、5或6。在一个实施方案中，cd7pebl包含seqidno：36的氨基酸序列、seqidno：37的氨基酸序列和seqidno：79的氨基酸序列。在一些实施方案中，cd7pebl包含与seqidno：36具有至少90％的序列同一性或至少95％的序列同一性的氨基酸序列、seqidno：37的氨基酸序列和seqidno：79的氨基酸序列。在某些实施方案中，cd7pebl包含seqidno：36的氨基酸序列、与seqidno：37具有至少90％的序列同一性或至少95％的序列同一性的氨基酸序列以及seqidno：79的氨基酸序列。在其他实施方案中，cd7pebl包含与seqidno：36具有至少90％序列同一性或至少95％序列同一性的氨基酸序列、与seqidno：37具有至少90％序列同一性或至少95％序列的氨基酸序列以及seqidno：79的氨基酸序列。在一些情况下，cd7pebl还包含选自seqidno：72-77中列出的任何序列的定位结构域。在一些情况下，cd7pebl还包含cd8α信号肽，例如但不限于seqidno：80所示的cd8α信号肽。在其他情况下，抗cd7蛋白表达阻断剂还包含cd8α铰链和跨膜结构域，例如但不限于seqidno：78所示的cd8α铰链和跨膜结构域。在一个实施方案中，由本文所述的双顺反子载体编码的cd7pebl在n-末端包含seqidno：24的序列和脯氨酸。在一些实施方案中，cd7pebl包含seqidno：25的序列。n末端脯氨酸残基来自2a裂解。在一些实施方案中，由本文所述的双顺反子载体编码的cd7pebl在n末端包含seqidno：26的序列和脯氨酸。在一些实施方案中，cd7pebl包含seqidno：27的序列。在一些实施方案中，本发明的工程化免疫细胞包含由双顺反子载体编码的cd7pebl，使得cd7pebl在n末端或seqidno：25的序列包含seqidno：24的序列和脯氨酸。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是包含由双顺反子载体编码的cd7pebl的cd4+t细胞，使得cd7pebl在n末端或seqidno：25的序列包含seqidno：24的序列和脯氨酸。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是包含由双顺反子载体编码的cd7pebl的cd8+t细胞，其中cd7pebl在n末端或seqidno：25的序列包含seqidno：24的序列和脯氨酸。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是包含由双顺反子载体编码的cd7pebl的cd3+t细胞，其中cd7pebl在n末端或seqidno：25的序列包含seqidno：24的序列和脯氨酸。在一些实施方案中，本发明的工程化免疫细胞包含由双顺反子载体编码的cd7pebl，使得cd7pebl在n末端或seqidno：27的序列包含seqidno：26的序列和脯氨酸。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是包含由双顺反子载体编码的cd7pebl的cd4+t细胞，其中cd7pebl在n末端或seqidno：27的序列包含seqidno：26的序列和脯氨酸。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是包含由双顺反子载体编码的cd7pebl的cd8+t细胞，其中cd7pebl在n末端或seqidno：27的序列包含seqidno：26的序列和脯氨酸。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是包含由双顺反子载体编码的cd7pebl的cd3+t细胞，其中cd7pebl在n末端或seqidno：27的序列包含seqidno：26的序列和脯氨酸。在一些实施方案中，由本文所述的双启动子载体编码的cd7pebl包含seqidno：24的序列。在一些实施方案中，由本文所述的双启动子载体编码的cd7pebl与cd7结合，并且与seqidno：24具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，由本文描述的双启动子载体编码的cd7pebl包含seqidno：26的序列。在一些实施方案中，由本文所述的双启动子载体编码的cd7pebl与cd7结合，并与seqidno：26具有至少90％的序列同一性。在一些实施方式中，编码抗cd7pebl的核酸序列包含表6中列出的一个或多个核酸序列。在一些实施方案中，pebl的抗cd7scfv的vh结构域包含seqidno：38的核苷酸序列，并且pebl的抗cd7scfv的vl结构域包含seqidno：39的核苷酸序列。在一些实施方式中，pebl的抗cd7scfv的vh结构域包含与seqidno：38具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或以上)的序列同一性的核苷酸序列，并且pebl的抗cd7scfv的vl结构域包含与seqidno：39具有至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或以上)的序列同一性的核苷酸序列。在一些实施方式中，pebl的抗cd7scfv的vh结构域包含与seqidno：38具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或以上)的序列同一性的核苷酸序列，并且pebl的抗cd7scfv的vl结构域包含与seqidno：39具有至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或以上)的序列同一性的核苷酸序列，或其密码子优化的变体。在一些实施方案中，pebl的抗cd7scfv的vh结构域包含seqidno：40的核苷酸序列，并且pebl的抗cd7scfv的vl结构域包含seqidno：41的核苷酸序列。在一些实施方式中，pebl的抗cd7scfv的vh结构域包含与seqidno：40具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或以上)的序列同一性的核苷酸序列，并且pebl的抗cd7scfv的vl结构域包含与seqidno：41具有至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或以上)的序列同一性的核苷酸序列。在一些实施方式中，pebl的抗cd7scfv的vh结构域包含与seqidno：40具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或以上)的序列同一性的核苷酸序列，并且pebl的抗cd7scfv的vl结构域包含与seqidno：41具有至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或以上)的序列同一性的核苷酸序列，或其密码子优化的变体。在一些实施方案中，pebl的抗cd7scfv的vh结构域包含seqidno：42的核苷酸序列，并且pebl的抗cd7scfv的vl结构域包含seqidno：43的核苷酸序列。在一些实施方式中，pebl的抗cd7scfv的vh结构域包含与seqidno：42具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或以上)的序列同一性的核苷酸序列，并且pebl的抗cd7scfv的vl结构域包含与seqidno：43具有至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或以上)的序列同一性的核苷酸序列。在一些实施方式中，pebl的抗cd7scfv的vh结构域包含与seqidno：42具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或以上)的序列同一性的核苷酸序列，并且pebl的抗cd7scfv的vl结构域包含与seqidno：43具有至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或以上)的序列同一性的核苷酸序列，或其密码子优化的变体。表6.cd7pebl选定成分的核酸序列信息在本发明的某些方面，pebl可以结合在细胞表面表达的分子，包括但不限于以下成员：糖蛋白的cd1家族、cd2、cd3、cd4、cd5、cd7、cd8、cd25、cd28、cd30、cd38、cd45、cd45ra、cd45ro、cd52、cd56、cd57、cd99、cd127和cd137。在一些实施方案中，cd7pebl包含与seqidno：2具有至少85％(例如85％、86％、87％、88％、89％、90％或更高)序列同一性的核酸序列并结合到cd7。在一些实施方案中，cd7pebl包含与seqidno：2具有至少90％(例如90％、91％、92％、94％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)的序列同一性的核酸序列并结合到cd7。在一些实施方案中，cd7pebl包含与seqidno：2具有至少90％(例如90％、91％、92％、94％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)的序列同一性的核酸序列。在一些实施方案中，cd7pebl包含与seqidno：3具有至少85％(例如85％，86％，87％，88％，89％，90％或更高)序列同一性的核酸序列并结合到cd7。在一些实施方案中，cd7pebl包含与seqidno：3具有至少90％(例如90％、91％、92％、94％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)的序列同一性的核酸序列并结合到cd7。在一些实施方案中，cd7pebl包含与seqidno：3具有至少90％(例如90％、91％、92％、94％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)的序列同一性的核酸序列。在一些实施方案中，本发明的工程化免疫细胞包含由双顺反子构建体编码的cd7pebl，该双顺反子构建体包含与seqidno：2具有至少90％(例如90％、91％、92％、94％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)序列同一性的cd7pebl的核酸序列。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是包含由双顺反子载体构建体编码的cd7pebl的cd4+t细胞，该双顺反子载体构建体包含与seqidno：2具有至少90％序列同一性的cd7pebl的核酸序列。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是包含由双顺反子构建体编码的cd7pebl的cd8+t细胞，该双顺反子构建体包含与seqidno：2具有至少90％序列同一性的cd7pebl的核酸序列。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是包含由双顺反子构建体编码的cd7pebl的cd3+t细胞，该双顺反子构建体包含与seqidno：2具有至少90％序列同一性的cd7pebl的核酸序列。另外，本文提供了包含此类细胞的群体。在一些实施方案中，本发明的工程化免疫细胞包含由双顺反子构建体编码的cd7pebl，该双顺反子构建体包含与seqidno：3具有至少90％(例如90％、91％、92％、94％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)序列同一性的cd7pebl的核酸序列。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是包含由双顺反子载体构建体编码的cd7pebl的cd4+t细胞，该双顺反子载体构建体具有与seqidno：3具有至少90％序列同一性的cd7pebl的核酸序列。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是包含由双顺反子构建体编码的cd7pebl的cd8+t细胞，该双顺反子构建体包含与seqidno：3具有至少90％序列同一性的cd7pebl的核酸序列。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是包含由双顺反子构建体编码的cd7pebl的cd3+t细胞，该双顺反子构建体包含与seqidno：3具有至少90％序列同一性的cd7pebl的核酸序列。另外，本文提供了包含此类细胞的群体。结合cd7的嵌合抗原受体在一些实施方案中，本发明的car包含4-1bb和cd3ζ的细胞内信号传导域，以及特异性结合cd7的抗原结合域(例如，单链可变片段或scfv)。本发明的cd7car有时在本文中被称为“抗cd7-41bb-cd3”。在一些实施方案中，car还包括cd8α铰链结构域和跨膜结构域，例如但不限于seqidno：84的氨基酸序列。本领域技术人员将理解的，在某些实施方案中，本文公开的各种组分的任何氨基酸序列(例如，scfv、细胞内信号传导域、接头及其组合)可以具有至少90％的序列同一性，至少91％序列同一性，至少92％序列同一性，至少93％序列同一性，至少94％序列同一性，至少95％序列同一性，至少96％序列同一性，至少97％序列同一性，至少与本文公开的特定对应序列的98％的序列同一性，至少99％的序列同一性或100％的序列同一性。在一些实施方式中，4-1bb细胞内信号传导结构域可与seqidno：85的具有至少90％的序列同一性，至少91％的序列同一性，至少92％的序列同一性，至少93％的序列同一性，至少94％的序列同一性，至少95％序列同一性，至少95％序列同一性，至少96％序列同一性，至少97％序列同一性，至少98％序列同一性，至少99％序列同一性或100％序列同一性，只要其具有所需的功能。在某些实施方案中，4-1bb的细胞内信号传导结构域包含seqidno：85所示的氨基酸序列。在某些实施方式中，4-1bb细胞内信号传导结构域可以被来自共刺激分子的另一个细胞内信号传导结构域置换，所述共刺激分子为如cd28、ox40、icos、cd27、gitr、hvem、tim1、lfa1或cd2。在一些实施方式中，car的细胞内信号传导结构域可具有与cd28、ox40、icos、cd27、gitr、hvem、tim1、lfa1或cd2的细胞内信号传导结构域的至少90％的序列同一性，至少91％的序列同一性，至少92％的序列同一性，至少93％的序列同一性，至少94％的序列同一性，至少95％序列同一性，至少96％序列同一性，至少97％序列同一性，至少98％序列同一性，至少99％序列同一性或100％序列同一性。作为另一个例子，在某些情况下，4-1bb细胞内信号传导结构域还可以包括来自共刺激分子例如cd28、ox40、icos、cd27、gitr、hvem、tim1、lfa1或cd2的另一个细胞内信号传导结构域(或其一部分)。在一些实施方式中，另外的细胞内信号传导结构域可以与cd28、ox40、icos、cd27、gitr、hvem、tim1、lfa1或cd2的细胞内信号传导结构域具有至少90％的序列同一性，至少91％的序列同一性，至少92％的序列同一性，至少93％的序列同一性，至少94％的序列同一性，至少95％的序列同一性，至少96％序列同一性，至少97％序列同一性，至少98％序列同一性，至少99％序列同一性或100％序列同一性。在一些实施方式中，另外的细胞内信号传导结构域可以与cd28、ox40、icos、cd27、gitr、hvem、tim1、lfa1或cd2的细胞内信号传导结构域具有至少90％的序列同一性，至少91％的序列同一性，至少92％的序列同一性，至少93％的序列同一性，至少94％的序列同一性，至少95％的序列同一性，至少96％的序列同一性，至少97％的序列同一性，至少98％的序列同一性，至少99％的序列同一性或100％的序列同一性。作为另一个示例，在某些实施例中，cd3ζ细胞内信号传导结构域可与seqidno：86具有至少90％的序列同一性，至少91％的序列同一性，至少92％的序列同一性，至少93％的序列同一性，至少94％的序列同一性，至少95％的序列同一性，至少95％的序列同一性，至少96％的序列同一性，至少97％的序列同一性，至少98％的序列同一性，至少99％的序列同一性或100％的序列同一性，只要其具有所需的功能。在某些实施方案中，cd3ζ的细胞内信号传导结构域包含seqidno：86所示的氨基酸序列。在一些情况下，细胞内信号传导结构域包含基于免疫受体酪氨酸的活化基序(itam)或其一部分，只要它具有所需的功能即可。car的细胞内信号传导结构域可以包括具有与itam的至少90％的序列同一性，至少91％的序列同一性，至少92％的序列同一性，至少93％的序列同一性，至少94％的序列同一性，至少95％的序列同一性，至少96％序列同一性，至少97％序列同一性，至少98％序列同一性，至少99％序列同一性或100％序列同一性。在某些实施方式中，细胞内信号传导结构域可以与fcεriγ、cd4、cd7、cd8、cd28、ox40或h2-kb具有至少95％的序列同一性，至少96％的序列同一性，至少97％的序列同一性，至少98％的序列同一性，至少99％的序列同一性或100％的序列同一性，只要其具有所需的功能。在某些实施方案中，抗cd7car进一步包含铰链结构域和/或跨膜结构域。适用于本发明的铰链和跨膜序列是本领域已知的，并且提供在例如出版物wo2016/126213中，其通过引用整体并入本文。在一些实施方式中，抗cd7car的铰链和跨膜结构域可以包括来自cd8β、4-1bb、cd28、cd34、cd4、fcεriγ、cd16、ox40、cd3ζ、cd3ε、cd3γ、cd3δ、tcrα、cd32、cd64、vegfr2、fas、fgfr2b或其他跨膜蛋白的信号传导结构域(例如铰链和跨膜结构域)。在某些实施方案中，抗cd7car进一步包含cd8号肽。包含本文描述的实施方案的抗cd7car的示意图显示在us2018/0179280的图17中。在一些实施方案中，嵌合抗原受体(car)可以结合到在细胞的表面上表达的分子，所述分子包含但不限于以下的成员：糖蛋白的cd1家族、cd2、cd3、cd4、cd5、cd7、cd8、cd25、cd28、cd30、cd38、cd45、cd45ra、cd45ro、cd52、cd56、cd57、cd99、cd127和cd137。在某些实施方案中，本发明的分离的多核苷酸包含编码根据表7的car的核酸序列。在一些实施方案中，多核苷酸包含编码根据表7的car的组分的核酸序列。表7.cd7car选定组件的氨基酸序列信息在一些实施方案中，cd7car包含cd7抗原结合结构域、4-1bb细胞内信号传导结构域、cd3ζ细胞内信号传导结构域以及cd8铰链和跨膜结构域。在一些实施方案中，cd7抗原结合结构域包含vh结构域和vl结构域，以及vh-vl接头，例如但不限于(g4s)n接头，其中n可以为1至6，例如，1、2、3、4、5或6。在一些实施方案中，cd7car从n末端到c末端包含：cd8信号肽、cd7抗原结合结构域、cd8铰链和跨膜结构域、4-1bb细胞内信号传导域和cd3ζ细胞内信号传导域。在一些实施方案中，本文所述的双顺反子载体编码的cd7car包含seqidno：28的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的双顺反子载体编码的cd7car包含seqidno：29的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的双顺反子载体编码的cd7car包含seqidno：30的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的双顺反子载体编码的cd7car包含seqidno：31的氨基酸序列。本发明的cd7car的示例性实施方案在图42-45中示出。在一些实施方案中，本发明的工程化免疫细胞包含由双顺反子载体编码的cd7car，使得cd7car包含seqidno：28的序列以及自剪切2a肽的剪切产生的n末端的其他氨基酸残基，或cd7car包含seqidno：29的序列。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是包含由双顺反子载体编码的cd7car的cd4+t细胞，使得cd7car包含seqidno：28的序列以及自剪切2a肽的剪切产生的n末端的其他氨基酸残基，或cd7car包含seqidno：29的序列。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是包含由双顺反子载体编码的cd7car的cd8t细胞，使得cd7car包含seqidno：28的序列以及自剪切2a肽的剪切产生的n末端的其他氨基酸残基，或cd7car包含seqidno：29的序列。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是包含双顺反子载体编码的cd7car的cd3+t细胞，使得cd7car包含seqidno：28的序列以及自剪切2a肽的剪切产生的n末端的其他氨基酸残基，或cd7car包含seqidno：29的序列。另外，本文提供了包含此类细胞的群体。在一些实施方案中，本发明的工程化免疫细胞包含由双顺反子载体编码的cd7car，使得cd7car包含seqidno：30的序列以及自剪切2a肽的剪切产生的n末端的其他氨基酸残基，或cd7car包含seqidno：31的序列。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是包含由双顺反子载体编码的cd7car的cd4+t细胞，使得cd7car包含seqidno：30的序列以及自剪切2a肽的剪切产生的n末端的其他氨基酸残基，或cd7car包含seqidno：31的序列。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是包含由双顺反子载体编码的cd7car的cd8+t细胞，使得cd7car包含seqidno：30的序列以及自剪切2a肽的剪切产生的n末端的其他氨基酸残基，或cd7car包含seqidno：31的序列。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是包含由双顺反子载体编码的cd7car的cd3+细胞，使得cd7car包含seqidno：30的序列以及自剪切2a肽的剪切产生的n末端的其他氨基酸残基，或cd7car包含seqidno：31的序列。另外，本文提供了此类细胞的群体。在一些实施方案中，由本文所述的双启动子载体编码的cd7car包含seqidno：28的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明的工程化免疫细胞包含由双启动子载体编码的cd7car，使得cd7car包含seqidno：28的序列。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是包含由双启动子载体编码的cd7car的cd4+t细胞，使得cd7car包含seqidno：28的序列。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是包含由双启动子载体编码的cd7car的cd8+t细胞，使得cd7car包含seqidno：28的序列。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是包含由双启动子载体编码的cd7car的cd3+t细胞，使得cd7car包含seqidno：28的序列。在一些实施方案中，本文所述的双顺反子载体编码的cd7car包含seqidno：30的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明的工程化免疫细胞包含由双启动子载体编码的cd7car，使得cd7car包含seqidno：30的序列。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是包含由双启动子载体编码的cd7car的cd4+t细胞，使得cd7car包含seqidno：30的序列。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是包含由双启动子载体编码的cd7car的cd8+t细胞，使得cd7car包含seqidno：30的序列。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是包含由双启动子载体编码的cd7car的cd3+t细胞，使得cd7car包含seqidno：30的序列。另外，本文提供了此类细胞的群体。在某些实施方案中，本发明的cd7car的分离的多核苷酸包含表8的一个或多个核酸序列。在一些实施方案中，核酸序列包含编码表8所列的car的一种或多种组分的序列。表8.cd7car选定组件的核酸序列信息在一些实施方案中，编码cd7car的多核苷酸包含一个与cd7结合的抗原结合结构域的核酸序列，一个cd8α铰链和跨膜结构域的核酸序列，一个4-1bb细胞内信号传导域的核酸序列和cd3ζ的细胞内信号传导域。在某些实施方案中，多核苷酸还包括cd8信号肽的核酸序列。在某些实施方案中，抗原结合结构域是抗cd7scfv。在一些实施方式中，scfv的vh结构域包含与seqidno：38具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)的序列同一性的核酸序列，并且scfv的vl结构域包含与seqidno：39具有至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)的序列同一性的核酸序列。在一些实施方式中，scfv的vh结构域包含与seqidno：40具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多)的序列同一性的核酸序列，并且scfv的vl结构域包含与seqidno：41具有至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)的序列同一性的核酸序列。在一些实施方式中，scfv的vh结构域包含与seqidno：42具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多)的序列同一性的核酸序列，并且scfv的vl结构域包含与seqidno：43具有至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)的序列同一性的核酸序列。在一些实施方案中，编码cd7car的多核苷酸从5′端至3′端包含：结合cd7的抗原结合域的核酸序列、seqidno：96、seqidno：97和seqidno：98。在一些实施方案中，编码cd7car的多核苷酸从5′端至3′端包含：seqidno：81，结合cd7的抗原结合域的核酸序列、seqidno：96、seqidno：97和seqidno：98。在一些实施方案中，cd7car包含与seqidno：4具有至少85％(例如，85％、86％、87％、88％、89％、90％或更高)的序列同一性并结合cd7的核酸序列。在一些实施方案中，cd7car包含与seqidno：3具有至少90％(例如，90％、91％、92％、94％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)的序列同一性并结合cd7的核酸序列。在一些实施方案中，cd7car包含与seqidno：4具有至少90％(例如，90％、91％、92％、94％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)的序列同一性的核酸序列。在一些实施方案中，cd7car包含与seqidno：5具有至少85％(例如，85％、86％、87％、88％、89％、90％或更高)的序列同一性并结合cd7的核酸序列。在一些实施方案中，cd7car包含与seqidno：3具有至少90％(例如，90％、91％、92％、94％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)的序列同一性并结合cd7的核酸序列。在一些实施方案中，cd7pebl包含与seqidno：5具有至少90％(例如，90％、91％、92％、94％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)的序列同一性的核酸序列。在一些实施方案中，本发明的工程化免疫细胞包含由双顺反子构建体或双启动子构建体编码的cd7car，该双启动子构建体包含与seqidno：4具有至少90％(例如，90％、91％、92％、94％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)序列同一性的cd7car的核酸序列。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是包含由双顺反子载体构建体编码的cd7car的cd4+t细胞或包含与seqidno：4具有至少90％序列同一性的cd7pebl的核酸序列的双启动子构建体。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是包含由双顺反子构建体编码的cd7pebl的cd8+t细胞，该双顺反子构建体包含与seqidno：4具有至少90％序列同一性的cd7pebl的核酸序列。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是包含由双顺反子构建体编码的cd7pebl的cd3+t细胞，该双顺反子构建体包含与seqidno：4具有至少90％序列同一性的cd7pebl的核酸序列。另外，本文提供了包含此类细胞的群体。在一些实施方案中，本发明的工程化免疫细胞包含由双顺反子构建体或双启动子构建体编码的cd7car，该双启动子构建体包含与seqidno：5具有至少90％(例如，90％、91％、92％、94％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)序列同一性的cd7car的核酸序列。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是包含由双顺反子载体构建体编码的cd7car的cd4+t细胞，该双顺反子载体构建体包含与seqidno：5具有至少90％序列同一性的cd7pebl的核酸序列。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是包含由双顺反子构建体编码的cd7pebl的cd8+t细胞，该双顺反子构建体包含与seqidno：5具有至少90％序列同一性的cd7pebl的核酸序列。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是包含由双顺反子构建体编码的cd7pebl的cd3+t细胞，该双顺反子构建体包含与seqidno：5具有至少90％序列同一性的cd7pebl的核酸序列。另外，本文提供了包含此类细胞的群体。表达双顺反子载体的工程化免疫细胞在某些实施方案中，提供了一种工程化的免疫细胞，其包含双顺反子构建体，该双顺反子构建体包含：(i)编码嵌合抗原受体(car)的多核苷酸，其中所述car包含4-1bb和cd3ζ的细胞内信号传导域，以及特异性结合cd7；(ii)编码与定位域连接的靶结合分子的多核苷酸，其中该靶结合分子是结合cd7的抗原结合域，并且该定位域包含内质网保留序列；(iii)如本文所例示的，编码自剪切2a肽或ires序列的核酸序列。在某些实施方案中，在car的情况下以及在针对cd7的抗原结合结构域的情况下结合cd7的抗原结合结构域包括：seqidno：32所示的vh序列和seqidno：33所示的vl序列；seqidno：34所示的vh序列和seqidno：35所示的vl序列；seqidno：36所示的vh序列或seqidno：37所示的vl序列。如本文所述，在某些实施方案中，抗原结合结构域包含vh和vl，所述vh和vl的序列分别与seqidno：32和33所示的vh和vl序列、分别与seqidno：34和35所示的vh和vl序列以及分别与seqidno：36和37所示的vh和vl序列具有至少90％的序列同一性，至少91％的序列同一性，至少92％的序列同一性，至少93％的序列同一性，至少94％的序列同一性，至少95％的序列同一性，至少96％的序列同一性，至少97％的序列同一性，至少98％的的序列同一性，至少99％序列同一性或100％得序列同一性。在某些实施方案中，如本文所述，在car的情况下结合cd7的抗原结合结构域可以与在靶结合分子(蛋白质表达阻断剂或pebl)的情况下结合cd7的抗体不同。在一些实施方案中，工程化免疫细胞包含双顺反子构建体，该双顺反子构建体包含核酸构建体，该核酸构建体从5′端至3′端包含：编码与定位域连接的靶标结合分子的多核苷酸，其中靶标结合分子结合cd7(例如，cd7pebl)，ires序列和编码针对cd7的嵌合抗原受体的多核苷酸(例如，cd7car)。在一些情况下，工程化免疫细胞包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：11。在一些实施方案中，本文提供了工程化的cd4+细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：11。在其他实施方案中，本文提供了工程化的cd8+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：11。在一些实施方案中，本文提供了工程化的cd3+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：11。在一些实施方案中，工程化免疫细胞包含双顺反子构建体，该双顺反子构建体包含核酸构建体，该核酸构建体从5′端至3′端包含：编码针对cd7的嵌合抗原受体的多核苷酸，ires序列和编码靶标结合的多核苷酸与定位域结合的分子，其中靶结合分子结合cd7(例如，针对cd7的pebl)。在一些情况下，工程化的免疫细胞包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：12或图26所示的序列。在一个实施方案中，本文提供了工程化的cd4+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：12或图26所示的序列。在一些实施方案中，本文提供了工程化的cd8+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：12或图26所示的序列。在一些实施方案中，本文提供了工程化的cd3+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：12或图26所示的序列。在一些实施方案中，工程化的免疫细胞包含双顺反子构建体，该双顺反子构建体包含核酸构建体，该核酸构建体包含从5′端至3′端包含：编码针对cd7的嵌合抗原受体的多核苷酸(例如，cd7car)，编码自剪切2a肽和编码连接到定位域的靶结合分子的多核苷酸，其中该靶结合分子结合cd7(例如，cd7pebl)。在一些情况下，工程化的免疫细胞包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：13或图27所示的序列。在一个实施方案中，本文提供了工程化的cd4+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：13或图27所示的序列。在一些实施方案中，本文提供了工程化的cd8+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：13或图27所示的序列。在一些实施方案中，本文提供了工程化的cd3+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：13或图27所示的序列。在一些实施方案中，工程化免疫细胞包含双顺反子构建体，该双顺反子构建体包含核酸构建体，该核酸构建体从5′端至3′端包含：编码与定位域连接的靶结合分子的多核苷酸，其中该靶结合分子结合cd7，编码自剪切2a肽的核酸序列和编码针对cd7的嵌合抗原受体的多核苷酸。在一些实施方案中，工程化免疫细胞包含双顺反子构建体，该双顺反子构建体包含核酸构建体，该核酸构建体从5′端至3′端包含：启动子，编码针对cd7的嵌合抗原受体的多核苷酸(例如，cd7car)，编码自剪切2a肽的核酸序列，以及编码与定位域连接的靶结合分子的多核苷酸，其中该靶结合分子结合cd7(例如，cd7pebl)。在一些情况下，工程化免疫细胞包含核酸构建体，该核酸构建体与seqidnos：14-16的任一核酸序列具有至少85％的序列同一性。在一些情况下，工程化免疫细胞包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidnos：14-16的任一核酸序列。在一些实施方案中，工程化免疫细胞包含核酸构建体，该核酸构建体与seqidno：14具有至少85％(例如85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、94％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)的序列同一性。在一些实施方案中，工程化免疫细胞包含核酸构建体，该核酸构建体与seqidno：15具有至少85％(例如85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、94％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)的序列同一性。在一些实施方案中，工程化免疫细胞包含核酸构建体，该核酸构建体与seqidno：16具有至少85％(例如85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、94％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)的序列同一性。在一些实施方案中，工程化免疫细胞包含双顺反子构建体，该双顺反子构建体包含核酸构建体，该核酸构建体从5′端至3′端包含：启动子，编码针对cd7的嵌合抗原受体的多核苷酸，编码自剪切2a肽的核酸序列和编码连接到定位域的靶结合分子的多核苷酸，其中靶结合分子结合cd7。在一些情况下，启动子选自mscv启动子、pgk启动子、ef1α启动子和efs启动子。在一些情况下，工程化免疫细胞包含多核苷酸，该多核苷酸包含seqidno：14或图28a-28b所示的序列。在一个实施方案中，本文提供了工程化的cd4+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：14或图28a-b所示的序列。在一些实施方案中，本文提供了工程化的cd8+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：14或图28a-b所示的序列。在一些实施方案中，本文提供了工程化的cd3+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：14或图28a-b所示的序列。在一些情况下，工程化免疫细胞包含多核苷酸，该多核苷酸包含seqidno：15。在一个实施方案中，本文提供了工程化的cd4+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：15或图29a-b所示的序列。在一些实施方案中，本文提供了工程化的cd8+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：15或图29a-b所示的序列。在一个实施方案中，本文提供了工程化的cd4+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：15或图29a-b所示的序列。在一些实施方案中，本文提供了工程化的cd3+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：15或图29a-b所示的序列。在一些情况下，工程化免疫细胞包含多核苷酸，该多核苷酸包含seqidno：16或图30a-b所示的序列。在一个实施方案中，本文提供了工程化的cd4+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：16或图30a-b所示的序列。在一些实施方案中，本文提供了工程化的cd8+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：16或图30a-b所示的序列。在一些实施方案中，本文提供了工程化的cd3+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：16或图30a-b所示的序列。在一些实施方案中，本文所述的工程化免疫细胞或其群体包含至少10％的cd7car+/cd7阴性t细胞，至少15％的cd7car+/cd7阴性t细胞，至少20％的cd7car+/cd7阴性t细胞，至少25％cd7car+/cd7阴性t细胞，至少30％cd7car+/cd7阴性t细胞，至少35％cd7car+/cd7阴性t细胞，至少40％cd7car+/cd7阴性t细胞，至少45％cd7car+/cd7阴性t细胞，至少50％cd7car+/cd7阴性t细胞，至少55％cd7car+/cd7阴性t细胞，至少60％cd7car+/cd7阴性t细胞，至少65％cd7car+/cd7阴性t细胞，至少70％cd7car+/cd7阴性t细胞，至少75％cd7car+/cd7阴性t细胞，至少80％％的cd7car+/cd7阴性t细胞，至少85％的cd7car+/cd7阴性t细胞，至少90％的cd7car+/cd7阴性t细胞，至少95％的cd7car+/cd7阴性t细胞至少96％cd7car+/cd7阴性t细胞，至少97％cd7car+/cd7阴性t细胞，至少98％cd7car+/cd7阴性t细胞，至少99％cd7car+/cd7阴性t细胞或100％cd7car+/cd7阴性t细胞。在一些实施方案中，本文概述的工程化免疫细胞包括基本上纯化的cd7car/cd7阴性t细胞群，其中此类细胞表达所述双顺反子构建体中的任何一种。表达双启动子载体的工程化免疫细胞在一些实施方案中，提供了一种工程化免疫细胞，其包含重组逆转录病毒载体，所述重组逆转录病毒载体包含(a)与编码本文所述任何car的第一多核苷酸可操作地连接的第一启动子，和(b)与编码本文所述任何pebl的第二多核苷酸可操作地连接的第二启动子。在一些实施方案中，工程化免疫细胞包含本文所述的任何重组逆转录病毒载体，其包含驱动car表达的启动子和另一个驱动pebl表达的启动子。在一些实施方案中，工程化的免疫细胞包含重组逆转录病毒载体，其包含与seqidno：17具有至少85％(例如85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、94％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)序列同一性的核酸序列。在一些实施方案中，工程化的免疫细胞包含重组逆转录病毒载体，其包含与seqidno：18具有至少85％(例如85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、94％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)序列同一性的核酸序列。在一些实施方案中，工程化的免疫细胞包含重组逆转录病毒载体，其包含与seqidno：19具有至少85％(例如85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、94％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)序列同一性的核酸序列。在一些实施方案中，工程化的免疫细胞包含重组逆转录病毒载体，其包含与seqidno：20具有至少85％(例如85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、94％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)序列同一性的核酸序列。在一些实施方案中，工程化的免疫细胞包含重组逆转录病毒载体，其包含与seqidno：21具有至少85％(例如85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、94％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)序列同一性的核酸序列。在一些实施方案中，工程化的免疫细胞包含重组逆转录病毒载体，其包含与seqidno：22具有至少85％(例如85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、94％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)序列同一性的核酸序列。在一些实施方案中，工程化的免疫细胞包含重组逆转录病毒载体，其包含与seqidno：23具有至少85％(例如85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、94％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)序列同一性的核酸序列。在一些情况下，工程化免疫细胞是工程cd4+t细胞或其群体或包含其的群体。在一些情况下，工程化免疫细胞是工程cd8+t细胞或其群体或包含其的群体。在一些情况下，工程化的免疫细胞包含多核苷酸，该多核苷酸包含seqidno：17或图31a-b所示的序列。在一个实施方案中，本文提供了工程化的cd4+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：17或图31a-b所示的序列。在一些实施方案中，本文提供了工程化的cd8+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：17或图31a-b所示的序列。在一些实施方案中，本文提供了工程化的cd3+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：17或图31a-b所示的序列。在一些情况下，工程化的免疫细胞包含多核苷酸，该多核苷酸包含seqidno：18。在一个实施方案中，本文提供了工程化的cd4+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：18或图32a-b所示的序列。在一些实施方案中，本文提供了工程化的cd8+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：18或图32a-b所示的序列。在一些实施方案中，本文提供了工程化的cd3+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：18或图32a-b所示的序列。在一些情况下，工程化免疫细胞包含多核苷酸，该多核苷酸包含seqidno：19或图33a-b所示的序列。在一个实施方案中，本文提供了工程化的cd4+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：19或图33a-b所示的序列。在一些实施方案中，本文提供了工程化的cd8+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：19或图33a-b所示的序列。在一些实施方案中，本文提供了工程化的cd3+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：19或图33a-b所示的序列。在一些情况下，工程化的免疫细胞包含多核苷酸，该多核苷酸包含seqidno：20或图34a-b所示的序列。在一个实施方案中，本文提供了工程化的cd4+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：20或图34a-b所示的序列。在一些实施方案中，本文提供了工程化的cd8+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：20或图34a-b所示的序列。在一些实施方案中，本文提供了工程化的cd3+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：20或图34a-b所示的序列。在一些情况下，工程化的免疫细胞包含多核苷酸，该多核苷酸包含seqidno：21或图35a-b所示的序列。在一个实施方案中，本文提供了工程化的cd4+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：21或图35a-b所示的序列。在一些实施方案中，本文提供了工程化的cd8+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：21或图35a-b所示的序列。在一些实施方案中，本文提供了工程化的cd3+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：21或图35a-b所示的序列。在一些情况下，工程化的免疫细胞包含多核苷酸，该多核苷酸包含seqidno：22或图36a-b所示的序列。在一个实施方案中，本文提供了工程化的cd4+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：22或图36a-b所示的序列。在一些实施方案中，本文提供了工程化的cd8+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：22或图36a-b所示的序列。在一些实施方案中，本文提供了工程化的cd3+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：22或图36a-b所示的序列。在一些情况下，工程化的免疫细胞包含多核苷酸，该多核苷酸包含seqidno：23或图37a-b所示的序列。在一个实施方案中，本文提供了工程化的cd4+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：23或图37a-b所示的序列。在一些实施方案中，本文提供了工程化的cd8+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：23或图37a-b所示的序列。在一些实施方案中，本文提供了工程化的cd3+t细胞或其群体，其包含核酸构建体，该核酸构建体包含seqidno：23或图37a-b所示的序列。在一些实施方案中，本文所述的工程化免疫细胞或其群体包含至少10％的cd7car+/cd7阴性t细胞，至少15％的cd7car+/cd7阴性t细胞，至少20％的cd7car+/cd7阴性t细胞，至少25％cd7car+/cd7阴性t细胞，至少30％cd7car+/cd7阴性t细胞，至少35％cd7car+/cd7阴性t细胞，至少40％cd7car+/cd7阴性t细胞，至少45％cd7car+/cd7阴性t细胞，至少50％cd7car+/cd7阴性t细胞，至少55％cd7car+/cd7阴性t细胞，至少60％cd7car+/cd7阴性t细胞，至少65％cd7car+/cd7阴性t细胞，至少70％cd7car+/cd7阴性t细胞，至少75％cd7car+/cd7阴性t细胞，至少80％％的cd7car+/cd7阴性t细胞，至少85％的cd7car+/cd7阴性t细胞，至少90％的cd7car+/cd7阴性t细胞，至少95％的cd7car+/cd7阴性t细胞至少96％cd7car+/cd7阴性t细胞，至少97％cd7car+/cd7阴性t细胞，至少98％cd7car+/cd7阴性t细胞，至少99％cd7car+/cd7阴性t细胞或100％cd7car+/cd7阴性t细胞。在一些实施方案中，本文概述的工程化免疫细胞包括基本上纯化的cd7car/cd7阴性t细胞群，其中此类细胞表达所描述的双启动子构建体中的任何一个。具有减少的内源性cd7表达的cd7car+工程化免疫细胞在一些实施方案中，与非工程化免疫细胞相比，本文所述的工程化免疫细胞表达cd7car并且具有减少的内源cd7表达或没有内源cd7表达。这样的工程化免疫细胞表达cd7pebl，其最小化或消除了免疫细胞表面上cd7的内源性表达。在一些实施方案中，cd7表达降低是指细胞对表面cd7的下调或部分下调。在某些情况下，与可比较的野生型或非工程化细胞的表达水平相比，降低的表达包括表达水平至少降低5％(例如，至少5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、24％、25％、28％、40％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)。在一些实施方案中，本文概述的工程化免疫细胞包括基本上纯化的cd7car/cd7阴性t细胞群。在一些实施方案中，本文所述的工程化免疫细胞表达与seqidno：24具有至少90％序列同一性的cd7pebl。在一些实施方案中，工程化免疫细胞表达与seqidno：25具有至少90％序列同一性的cd7pebl。在一些实施方案中，工程化的免疫细胞表达与seqidno：26具有至少90％序列同一性的cd7pebl。在一些实施方案中，工程化的免疫细胞表达与seqidno：27具有至少90％序列同一性的cd7pebl。在一些实施方案中，本文所述的工程化免疫细胞表达与seqidno：28具有至少90％序列同一性的cd7car。在一些实施方案中，工程化免疫细胞表达与seqidno：29具有至少90％序列同一性的cd7car。在一些实施方案中，工程化免疫细胞表达与seqidno：30具有至少90％序列同一性的cd7car。在一些实施方案中，工程化免疫细胞表达与seqidno：31具有至少90％序列同一性的cd7car。在一些实施方案中，本文所述的工程化免疫细胞表达与seqidno：24具有至少90％序列同一性的cd7pebl和与seqidno：28具有至少90％序列同一性的cd7car。在一些实施方案中，本文所述的工程化免疫细胞表达与seqidno：24具有至少90％序列同一性的cd7pebl和与seqidno：30具有至少90％序列同一性的cd7car。在一些实施方案中，工程化免疫细胞表达与seqidno：25具有至少90％序列同一性的cd7pebl和与seqidno：29具有至少90％序列同一性的cd7car。在一些实施方案中，工程化免疫细胞表达与seqidno：25具有至少90％序列同一性的cd7pebl和与seqidno：31具有至少90％序列同一性的cd7carb。在一些实施方案中，工程化免疫细胞表达与seqidno：26具有至少90％序列同一性的cd7pebl和与seqidno：28具有至少90％序列同一性的cd7car。在一些实施方案中，工程化免疫细胞表达与seqidno：26具有至少90％序列同一性的cd7pebl和与seqidno：30具有至少90％序列同一性的cd7car。在一些实施方案中，工程化免疫细胞表达与seqidno：27具有至少90％序列同一性的cd7pebl和与seqidno：29具有至少90％序列同一性的cd7car。在一些实施方案中，工程化免疫细胞表达与seqidno：27具有至少90％序列同一性的cd7pebl和与seqidno：31具有至少90％序列同一性的cd7car。在某些实施方式中，工程化免疫细胞是工程化t细胞、工程化自然杀伤(nk)细胞、工程化nk/t细胞、工程化单核细胞，工程化巨噬细胞或工程化树突细胞。在一些实施方式中，工程化免疫细胞是工程化cd4+t细胞。在一些实施方式中，工程化免疫细胞是工程化cd8+t细胞。在一些实施方案中，工程化免疫细胞是工程cd3+t细胞。还提供了本文所述的任何一种工程化细胞的群体。在一些实施方案中，本文提供了工程化免疫细胞(例如，cd3+t细胞、cd4+t细胞或cd8+t细胞)群，其包含至少约50％(例如，约50％、55％、58％、60％、62％、64％、66％、68％、70％、71％、73％、75％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、90％、91％、92％、94％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)的cd7car阳性、内源性cd7阴性细胞。在一些实施方案中，本文提供了工程化免疫细胞群，其包含至少约50％(例如，约50％、55％、58％、60％、62％、64％、66％、68％、70％、71％、73％、75％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、90％、91％、92％、94％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)的cd7car阳性、内源性cd7阴性cd4+t细胞。在一些实施方案中，本文提供了工程化免疫细胞群，其包含至少约50％(约50％、55％、58％、60％、62％、64％、66％、68％、70％、71％、73％、75％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、90％、91％、92％、94％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)cd7car阳性、内源性cd7阴性cd8+t细胞。这样的细胞群体可以由外周血单核细胞(pbmc)、纯化的cd4+t细胞、纯化的cd8+t细胞或包含纯化的cd4+t细胞和纯化的cd8+t细胞的群产生。在一些实施方案中，培养本文所述的工程化免疫细胞以产生高纯度的cd7car-t细胞群，所述cd7car-t细胞具有减少的内源性cd7表达。纯度水平可以是至少约75(例如，约75％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、90％、91％、92％、94％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)％的cd7car-t细胞，而没有cd7的表面表达。可以根据本领域技术人员已知的标准方法确定表达水平cd7，包括但不限于免疫细胞化学、流式细胞术和facs分析。在一些实施方案中，本发明的工程化免疫细胞包括cd45ro+细胞。在一些实施方案中，工程化免疫细胞包括ccr7阴性细胞。在一些实施方案中，工程化免疫细胞包括中央记忆t细胞。在一些实施方案中，工程化免疫细胞包括效应记忆t细胞。在一些实施方案中，工程化的免疫细胞包括效应t细胞。在一些实施方案中，工程化免疫细胞包括幼稚t细胞。在一些情况下，工程化免疫细胞群包括效应记忆t细胞、中枢记忆t细胞、效应t细胞和幼稚t细胞。在一些实施方案中，工程化免疫细胞群包含比效应t细胞和幼稚t细胞更高百分比的效应记忆t细胞和中枢记忆t细胞。在一些实施方案中，工程化免疫细胞群包含约40％或更多的效应记忆t细胞。在一些情况下，工程化免疫细胞群包含pd1阴性细胞。在一些情况下，工程化免疫细胞群包含tim-1阴性细胞。在一些实施方案中，群包含约60％或更多的pd1阴性、tim-1阴性细胞。在一些实施方案中，群包含约4％至约20％的pd1阳性、tim-1阳性细胞。在一些实施方案中，工程化的免疫细胞产生免疫应答并分泌干扰素-γ。工程化免疫细胞响应于诸如表达cd7的癌细胞的癌细胞而诱导t细胞介导的细胞毒性。在一些实施方案中，本文所述的包含双顺反子表达载体的细胞可用于产生cd7car+/cd7阴性细胞的群。cd7car+/cd7-阴性t细胞可以随时间扩展和富集。cd7car+/cd7-阴性t细胞可以从以下细胞中产生，这些细胞包括但不限于大量pbmc，包含cd4和cd8+t细胞的纯化t细胞以及纯化的cd3+t细胞。cd7car+/cd7-阴性t细胞可用于产生t细胞的不同子集，包括tem细胞、tcm细胞、teff细胞和幼稚t细胞。在另一方面，还提供了用于产生具有本文所述的任何实施方案的工程化的免疫细胞(例如，工程化cd3+t细胞、工程化cd4+t细胞和工程化cd8+t细胞)的方法，该方法包括将本发明的任何双顺反子构建体或双启动子构建体引入免疫细胞。在一些实施方案中，工程化免疫细胞衍生自得自受试者的免疫细胞，该受试者将接受工程化免疫细胞作为疗法。在一些实施方案中，工程化免疫细胞衍生自获自供体的免疫细胞，并且将所得工程化免疫细胞作为疗法施用于受试者。在各个方面，还提供了用于产生本文所描述的工程化免疫细胞的试剂盒。本试剂盒可用于产生例如具有抗cd7car介导的细胞毒性活性的同种异体或自体t细胞。在一些实施方案中，该试剂盒可用于产生具有抗cd7car介导的细胞毒性活性的同种异体效应t细胞。在某些实施方案中，该试剂盒可用于产生具有抗cd7car介导的细胞毒性活性的自体效应t细胞。因此，本文提供的试剂盒包含本文所述的双顺反子构建体或双启动子构建体中的任一个。在某些实施方案中，双顺反子构建体还包含允许例如克隆和/或表达的序列(例如质粒或载体序列)。例如，核苷酸序列可以作为质粒的一部分提供，以便于克隆到其他质粒和/或载体(表达载体或病毒表达载体)中，例如用于转染\转导或电穿孔到细胞中(例如，免疫细胞)。通常，试剂盒被隔区化以便于使用，并且可以包含一个或多个装有试剂的容器。在某些实施方式中，试剂盒组分中的所有试剂盒组分一起包装。可替代地，试剂盒的一个或多个单独组分可以提供在与其它试剂盒组分分开的包装中。试剂盒也可以包含使用试剂盒组件的说明。给药工程化免疫细胞在其他方面，还提供了一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，该方法包括向该受试者施用治疗量的具有本文所述的任何实施方案的工程化免疫细胞，从而在有此需要的受试者中治疗癌症。在某些实施方案中，该方法包括给予治疗量的工程化免疫细胞，该工程化免疫细胞包含双顺反子病毒构建体，该双顺反子病毒构建体包含多核苷酸，该核苷酸包含编码car的核酸序列的多核苷酸和包含编码pebl的核酸序列。在各种实施方案中，该方法包括施用治疗量的本文所述的任何工程化的免疫细胞，其包含重组逆转录病毒载体，所述重组逆转录病毒载体包含：(a)与编码本文所述的cd7嵌合抗原受体(cd7car)的第一多核苷酸可操作地连接的第一启动子；(b)第二启动子，其可操作地连接至编码如本文概述的cd7蛋白表达阻滞剂(cd7pebl)的第二多核苷酸。在一些实施方案中，将治疗量的包含核酸构建体的工程化的免疫细胞(例如，工程化cd3+t细胞、工程化cd4+t细胞或工程化cd8+t细胞)或其群体施用于患有癌症的受试者，该核酸构建体包含seqidno：11或图25所示的序列。在一些实施方案中，将治疗量的包含核酸构建体的工程化的免疫细胞(例如，工程化cd3+t细胞、工程化cd4+t细胞或工程化cd8+t细胞)或其群体施用于患有癌症的受试者，该核酸构建体包含seqidno：12或图26所示的序列。在一些实施方案中，将治疗量的包含核酸构建体的工程化的免疫细胞(例如，工程化cd3+t细胞、工程化cd4+t细胞或工程化cd8+t细胞)或其群体施用于患有癌症的受试者，该核酸构建体包含seqidno：13或图27所示的序列。在一些实施方案中，将治疗量的包含核酸构建体的工程化的免疫细胞(例如，工程化cd3+t细胞、工程化cd4+t细胞或工程化cd8+t细胞)或其群体施用于患有癌症的受试者，该核酸构建体包含seqidno：14或图28a-28b所示的序列。在一些实施方案中，将治疗量的包含核酸构建体的工程化的免疫细胞(例如，工程化cd3+t细胞、工程化cd4+t细胞或工程化cd8+t细胞)或其群体施用于患有癌症的受试者，该核酸构建体包含seqidno：15或图29a-29b所示的序列。在一些实施方案中，将治疗量的包含核酸构建体的工程化的免疫细胞(例如，工程化cd3+t细胞、工程化cd4+t细胞或工程化cd8+t细胞)或其群体施用于患有癌症的受试者，该核酸构建体包含seqidno：16或图30a-30b所示的序列。在一些实施方案中，将治疗量的包含核酸构建体的工程化的免疫细胞(例如，工程化cd3+t细胞、工程化cd4+t细胞或工程化cd8+t细胞)或其群体施用于患有癌症的受试者，该核酸构建体包含seqidno：17或图31a-31b所示的序列。在一些实施方案中，将治疗量的包含核酸构建体的工程化的免疫细胞(例如，工程化cd3+t细胞、工程化cd4+t细胞或工程化cd8+t细胞)或其群体施用于患有癌症的受试者，该核酸构建体包含seqidno：18或图32a-b所示的序列。在一些实施方案中，将治疗量的包含核酸构建体的工程化的免疫细胞(例如，工程化cd3+t细胞、工程化cd4+t细胞或工程化cd8+t细胞)或其群体施用于患有癌症的受试者，该核酸构建体包含seqidno：19或图33a-b所示的序列。在一些实施方案中，将治疗量的包含核酸构建体的工程化的免疫细胞(例如，工程化cd3+t细胞、工程化cd4+t细胞或工程化cd8+t细胞)或其群体施用于患有癌症的受试者，该核酸构建体包含seqidno：20或图34a-b所示的序列。在一些实施方案中，将治疗量的包含核酸构建体的工程化的免疫细胞(例如，工程化cd3+t细胞、工程化cd4+t细胞或工程化cd8+t细胞)或其群体施用于患有癌症的受试者，该核酸构建体包含seqidno：21或图35a-b所示的序列。在一些实施方案中，将治疗量的包含核酸构建体的工程化的免疫细胞(例如，工程化cd3+t细胞、工程化cd4+t细胞或工程化cd8+t细胞)或其群体施用于患有癌症的受试者，该核酸构建体包含seqidno：22或图36a-b所示的序列。在一些实施方案中，将治疗量的包含核酸构建体的工程化的免疫细胞(例如，工程化cd3+t细胞、工程化cd4+t细胞或工程化cd8+t细胞)或其群体施用于患有癌症的受试者，该核酸构建体包含seqidno：23或图37a-b所示的序列。在一些实施方案中，将治疗量的包含seqidno：25的cd7pebl的工程化免疫细胞(例如，工程化cd3+t细胞、工程化cd4+t细胞或工程cd8+t细胞)群体施用给患有癌症的受试者。在一些实施方案中，将治疗量的包含seqidno：27的cd7pebl的工程化免疫细胞(例如，工程化cd3+t细胞、工程化cd4+t细胞或工程cd8+t细胞)群体施用给患有癌症的受试者。在一些实施方案中，将治疗量的包含seqidno：29的cd7car的工程化免疫细胞(例如，工程化cd3+t细胞、工程化cd4+t细胞或工程cd8+t细胞)群体施用给患有癌症的受试者。在一些实施方案中，将治疗量的包含seqidno：31的cd7car的工程化免疫细胞(例如，工程化cd3+t细胞、工程化cd4+t细胞或工程cd8+t细胞)群体施用给患有癌症的受试者。在一些实施方案中，将治疗量的包含seqidno：25的cd7pebl和seqidno：29的cd7car的工程化免疫细胞群(例如，工程化cd3+t细胞、工程化cd4+t细胞或工程化cd8+t细胞)施用于患有癌症的受试者。在一些实施方案中，将治疗量的包含seqidno：27的cd7pebl和seqidno：29的cd7car的工程化免疫细胞群(例如，工程化cd3+t细胞、工程化cd4+t细胞或工程化cd8+t细胞)施用于患有癌症的受试者。在一些实施方案中，将治疗量的包含seqidno：25的cd7pebl和seqidno：31的cd7car的工程化免疫细胞群(例如，工程化cd3+t细胞、工程化cd4+t细胞或工程化cd8+t细胞)施用于患有癌症的受试者。在一些实施方案中，将治疗量的包含seqidno：27的cd7pebl和seqidno：31的cd7car的工程化免疫细胞群(例如，工程化cd3+t细胞、工程化cd4+t细胞或工程化cd8+t细胞)施用于患有癌症的受试者。在一些实施方案中，将治疗量的包含seqidno：95的工程化免疫细胞群(例如，工程化cd3+t细胞、工程化cd4+t细胞或工程化cd8+t细胞)施用给患有癌症的受试者。在某些实施方案中，癌症是t细胞恶性肿瘤，例如t细胞白血病或t细胞淋巴瘤，如t细胞急性淋巴细胞白血病、t细胞淋巴细胞白血病、t细胞大颗粒性淋巴细胞白血病、肠病相关t细胞淋巴瘤、肝脾t细胞淋巴瘤、皮下脂膜炎样t细胞淋巴瘤、蕈样真菌病、塞萨里综合征、原发性皮肤γ-t细胞淋巴瘤、外周t细胞淋巴瘤-非特指型、血管免疫母细胞性t细胞淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤。在某些实施方式中，t细胞恶性肿瘤是早期t细胞祖细胞急性淋巴细胞白血病(etp-all)。在一些实施方式中，工程化的免疫细胞对于需要治疗例如癌症治疗的受试者是自体的。在其它实施方式中，工程化免疫细胞对需要治疗的受试者是同种异体的。在某些实施方式中，工程化免疫细胞通过以下方式给药到受试者体内：静脉内输注、动脉内输注、直接注射入肿瘤和/或手术后灌注肿瘤床、在肿瘤部位植入人工支架中、鞘内给药以及眼内给药。在某些实施方式中，工程化免疫细胞通过输注给药到受试者。输注免疫细胞(例如，同种异体免疫细胞或自体免疫细胞)的方法是本领域已知的。为了改善疾病的症状，向受体给药充足数量的细胞。通常，在单次设置中输注107到1010个细胞的剂量，例如，109个细胞的剂量。输注以单次109个细胞剂量或被分成若干个109个细胞剂量的形式给药。输注频率可以是每天、每2天到30天一次或甚至更长的间隔(如果需要或指示)。输注的量通常是每位受试者至少1次输注，并且优选地，在耐受的情况下至少3次输注或者直到疾病症状已改善。细胞可以以50-250ml/hr的速率静脉内注入。其它合适的给药方式包含动脉内输注、腹膜内输注、直接注射到肿瘤中和/或外科手术后灌注肿瘤床、在肿瘤部位植入人工支架、鞘内给药。使本发明适应此种递送方式的方法对于本领域的技术人员是容易获得的。在某些实施方案中，根据本发明的治疗癌症的方法与至少一种其他已知的癌症疗法例如放射疗法、化学疗法或其他免疫疗法组合。在其他方面，还提供了具有本文所述的任何实施方式的工程化免疫细胞用于治疗癌症的用途，包括将治疗量的工程化免疫细胞给药于需要其的受试者。在某些实施方案中，癌症是t细胞恶性肿瘤。在某些实施方式中，t细胞恶性肿瘤是早期t细胞祖细胞急性淋巴细胞白血病(etp-all)。在某些实施方式中，工程化免疫细胞通过静脉内输注、动脉内输注、腹膜内输注、手术后直接注射入肿瘤和/或肿瘤床灌注、在肿瘤部位植入人工支架、鞘内注射而给药给受试者。实例实施例1：使用双生表达载体阻断嵌合抗原受体t细胞中cd7的表达该实施例说明了使用双顺反子表达构建体对抗cd7car-t细胞中cd7表达的阻断。方法细胞培养将293t细胞(atcccrl-3216)保持在dmem(gibco)中，其中含有10％fbs(hyclone)，100u/ml青霉素和100ug/ml链霉素(gibco)。将jurkat克隆e6-1细胞(atcctib-152)和nalm6克隆g5细胞(crl-3273)保存在rpmi1640(gibco)中，其中含有10％fbs(hyclone)、100u/ml青霉素、100ug/ml链霉素(gibco)和1个glutamax(gibco)。慢病毒生产使用lipofectamine2000(invitrogen)将慢病毒转移载体和virapower包装质粒混合物(invitrogen)以1∶3的比例共转染293t细胞。转染后6小时，将新鲜的dmem(gibco)和10％fbs(hyclone)替换为转染培养基。48小时后，收集病毒上清液，通过0.45μm过滤器，然后使用lenti-x浓缩器(clontech)浓缩100倍。将浓缩的病毒原种保存在-150℃下直至使用。逆转录病毒生产使用x-tremegene9dna转染试剂(roche)将逆转录病毒转移载体和peq和prdf包装质粒共转染293t细胞。转染后6小时，将新鲜的dmem(gibco)和10％fbs(hyclone)替换为转染培养基。24小时和48小时后，收集病毒上清液并通过0.45μm过滤器。逆转录病毒可新鲜使用或在-150℃下保存直至使用。293t细胞的慢病毒滴定在5μg/ml聚丙烯(sigma)存在下，用不同体积的慢病毒转导293t细胞。过夜培养15小时后，去除转导培养基，并在37℃下在新鲜培养基中用10u/mldnasei(newenglandbiolabs)处理细胞15分钟。然后将培养基替换为新鲜的含10％fbs的dmem，以进行进一步培养。在转导后≥72h收集转导的细胞用于分析。使用流式细胞仪和rt-qpcr测定病毒滴度。使用以下公式从流式细胞仪数据计算转导单位(tu)滴度：[tu/ml＝(每个样品中293t细胞的数量×％car+细胞)÷以ml为单位的病毒体积]。使用％car+细胞和病毒体积的线性范围内的样品计算tu效价。使用以下公式从基因组dna的rt-qpcr数据计算出整合单位(iu)滴度：[iu/ml＝(每个样品中293t细胞的数量×每个基因组中前病毒基因拷贝的数量)÷以毫升为单位的病毒体积]。使用在前病毒基因拷贝数和病毒量的线性范围内的样品计算iu滴度。jurkat细胞的慢病毒转导将慢病毒直接添加到有或没有8μg/ml聚丙烯(sigma)的jurkat细胞中。两天后进行了彻底的培养基更换，以从培养物中去除慢病毒。在转导后≥2天收集转导的细胞用于分析。原代t细胞培养将冷冻的人类原代外周血单核细胞(pbmc)(atcccat#pcs-800-011和stemcelltechnologiescat#70025)解冻，过夜回收，并在含10％fbs的rpmi1640(gibco)中维持在1百万个细胞/ml(hyclone)，100u/ml青霉素，100ug/ml链霉素(gibco)和1xglutamax(gibco)，texmacs培养基(miltenyibiotec)补充3％人ab血清(sigma)或无血清texmacs培养基。每2至3天向培养基补充120iu/ml白细胞介素2(miltenyibiotec)。pbmc无需进一步选择即可进行批量培养，或者在过夜回收后用于t细胞纯化。使用cd4微珠(miltenyibiotec)和cd8微珠(miltenyibiotec)分离cd4+和cd8+t细胞。使用cd3微珠(miltenyibiotec)分离cd3+t细胞。根据制造商的建议，使用t细胞transact(miltenyibiotec)或免疫磁珠人t-活化剂cd3/cd28激活t细胞，以进行t细胞扩增和活化。以珠与细胞的比例为1∶1添加免疫磁珠。4天后进行珠清除。慢病毒转导原代t细胞激活后1至4天转导原代t细胞。将慢病毒直接添加到t细胞中进行静态转导。两天后进行了彻底的培养基更换，以从培养物中去除慢病毒。在转导后≥3天，通过流式细胞术分析转导的细胞。逆转录病毒转导原代t细胞在原代t细胞上进行了基于逆转录素的逆转录病毒转导。未处理的组织培养板根据制造商的建议涂有2.5μg/cm2的retronectin重组人纤连蛋白片段(takara)。将逆转录病毒上清液添加至涂有反转录素的平板中，并在32℃下以1000xg离心2h。然后从孔中除去病毒上清液。在添加t细胞之前，用培养基冲洗孔。在转导后≥3天，通过流式细胞术分析转导的细胞。流式细胞仪用染色缓冲液(1xpbsph7.4、0.2％bsa，0.02％叠氮化钠)进行抗体染色和洗涤。将细胞与抗体在冰上孵育15分钟，并洗涤3次。使用以下抗体进行染色：抗小鼠f(ab′)2-生物素(jacksonimmunoresearch115-066-072)、链霉亲和素apc(jacksonimmunoresearch016-130-084)、抗人cd7-pe(bd555361)、抗人cd3efluor780(ebioscience47-0037-42)。加入3μg小鼠igg1同种型对照抗体(bioxcell)，将抗小鼠f(ab′)2-生物素染色的细胞封闭5分钟，然后添加其余抗体。dapi以1μg/ml的浓度用于活/死鉴别。在invitrogenattunenxt流式细胞仪上收集染色的细胞，并用flowjov10软件进行分析。实时定量pcr(rt-qpcr)使用dneasy血液和组织试剂盒(qiagen)和rnasea(qiagen)从细胞中提取基因组dna。使用mnnucleospinrna试剂盒(macherey-nagel)从细胞中提取总rna，并使用maximafirststrandcdna合成试剂盒(thermoscientific)合成cdna。所有试剂盒均根据制造商的建议使用。使用itaquniversalsybrgreensupermix(bio-rad)在cfx96touchtm实时pcr检测体系(bio-rad)上进行rt-qpcr。使用的引物是：rpph1-f：5’-gagggaagctcatcagtggg-3’(seqidno：87)rpph1-r：5’-catctcctgcccagtctgac-3’(seqidno：88)wpre-f：5’-cctttccgggactttcgcttt-3’(seqidno：89)wpre-r：5’-gcagaatccaggtggcaaca-3’(seqidno：90)th69cd7car-f：5’-gcagcctttcatgagaccag-3’(seqidno：91)th69cd7car-r：5’-tgcccaggttcagctcatta-3’(seqidno：92)th69cd7pebl-f：5'-acctgccgcatacaaggata-3’(seqidno：93)th69cd7pebl-r：5’-ccactgtgcagactagaggt-3’(seqidno：94)所有测定引物的引物效率在90％至110％之间。使用等式将所有基因的折叠变化标准化为管家基因：[折叠变化＝2^-(ct(靶基因)-ct(管家基因))]。将靶基因的拷贝数标准化为293t细胞中rnasep的基因组拷贝数。蛋白免疫印迹用ripa缓冲液(pierce)和蛋白酶抑制剂(pierce)裂解细胞。根据制造商的建议，使用bradfordcoomassie蛋白质测定试剂盒(thermoscientific)对细胞溶解产物进行蛋白质定量。使用具有12-230kdawes分离模块的自动化蛋白免疫印迹系统simplewesternwes(proteinsimple)进行蛋白免疫印迹。使用了以下一级抗体：抗β-肌动蛋白，克隆13e5(细胞信号技术)；抗myc标签，克隆71d10(细胞信号技术)；和抗cd3ζ多克隆抗体，目录号ab226475(abcam)。使用了来自wes抗兔检测模块的二抗。使用compass的simplewestern软件对数据进行了分析。ifnγ分泌将效应物car-t细胞以106细胞/ml的细胞密度重悬，并将100,000个car-t细胞在96孔圆底平板中每孔铺板。将靶细胞与效应car-t细胞以各种效应子∶靶(e∶t)比例共培养24小时。24小时后，离心分离细胞并收集上清液并保存在-150℃。根据制造商的建议，使用elisamaxstandardsethumanifn-γ试剂盒(biolegend)对上清液的ifnγ分泌进行评估。细胞毒性测定将靶细胞以106细胞/ml的细胞密度重悬，并用0.4μg/ml钙黄绿素橙红am(invitrogen)加载10分钟。然后将加载的细胞洗涤三次以除去过量的钙黄绿素。在96孔圆底板中每孔接种100,000个靶细胞。将靶细胞与效应car-t细胞以各种效应子∶靶(e∶t)比率共培养4h。4小时后，将dapi添加到所有孔中，并在流式细胞仪上收集细胞。在所有孔中计数剩余的活靶细胞的数量。细胞毒性百分比用以下方程式计算：细胞毒性百分比＝[(se)/s]*100％s＝靶细胞中剩余的活靶细胞仅能控制孔e＝在实验孔中与效应t细胞共培养后剩余的活靶细胞结果用表达(1)pebl、(2)car、(3)依次pebl和cary、(4)pebl-ires-car或(5)car-p2a-pebl的不同逆转录病毒转导原代t细胞。通过流式细胞术分析转导的细胞的cd7和car表达(图1a)。通过蛋白免疫印迹分析了来自用指定的逆转录病毒转导的原代t细胞的细胞裂解物的β-肌动蛋白、myc标记的pebl、car和内源性cd3ζ表达(图1b)。制备双启动子慢病毒构建体以从单个载体表达抗cd7car和抗cd7pebl。如图2a-2f所示，从5′端到3′端的双启动子构建体的一般形式包括第一个启动子抗cd7car-第二个启动抗cd7pebl。测试的启动子包括mscv启动子、efs启动子、pgk启动子和ef1a启动子。示例性双启动子构建体的核酸序列提供为seqidno：19-23，并显示在图33a-33b、图34a-34b、图35a-35b、图36a-36b和图37a-37b中。此类构建体编码抗cd7car，包括基于th69抗体的抗cd7car和基于3a1f抗体的抗cd7car，以及抗cd7pebl，包括基于th69抗体的抗cd7pebl和基于3a1f抗体的抗cd7pebl。将双启动子慢病毒载体转导到细胞中，以产生表面cd7表达部分下调而抗cd7car表达低的细胞。培养较长时间后，表达car的细胞百分比仍然很低。图3显示了转导后5天和转导后14天细胞中car的表达(y轴)和cd7的表达(x轴)。该图显示了由示例性双启动子构建体转导的细胞(例如，健康供体细胞，包括健康供体淋巴细胞)的表达，其提供为seqidno：18-23，并在图32a-32b、33a-33b、34a-34b、35a-35b、36a-36b、37a-37b中示出。例如，用包含mscv启动子-cd7(th69)car-ef1a启动子-cd7(th69)pebl的双启动子慢病毒载体转导的细胞在转导后第5天产生了cd7car-阴性/cd7-阴性细胞的细胞(52.8％)、cd7car+/cd7-阴性细胞(2.98％)、cd7car-阴性/cd7+细胞(40.4％)和cd7car+/cd7+细胞(3.84％)。转导后第14天，mscv启动子-cd7(th69)car-ef1a启动子-cd7(th69)pebl转导的细胞包含一群cd7car-阴性/cd7-阴性细胞(42.6％)、cd7car+/cd7-阴性细胞(0.14％)、cd7car-阴性/cd7+细胞(54.9％)和cd7car+/cd7+细胞(2.37％)。为了优化cd7car和cd7pebl的表达，产生了单启动子双顺反子慢病毒构建体。在图4b、图4b、4c中提供了这种构造的示例性示意图。图4a描绘了示例性双顺反子构建体的示意图，其包含mscv启动子-抗人cd7(th69)car-p2a-抗人cd7(th69)pebl，例如seqidno：14之一。图4b描绘了示例性双顺反子构建体的示意图，其包含ef1a启动子-抗人cd7(th69)car-p2a-抗人cd7(th69)pebl，例如seqidno：15之一。图4c描绘了示例性双顺反子构建体的示意图，其包含efs启动子-抗人cd7(th69)car-p2a-抗人cd7(th69)pebl，例如seqidno：16之一。用mscv启动子-抗人cd7(th69)car-p2a-抗人cd7(th69)pebl慢病毒转导的细胞产生了cd7car+/cd-阴性t细胞。图5显示了从转导后第0天到第9天cd7car+/cd7-阴性t细胞的扩增和富集。例如，在第0天，有10.9％的细胞是cd7car-阴性/cd7-阴性细胞，0.016％是cd7car+/cd7-阴性细胞，87.9％是cd7car-阴性/cd7+细胞，1.21％是cd7car+/cd7+细胞。在第3天，有24.1％的细胞是cd7car-阴性/cd7-阴性细胞，17.7％是cd7car+/cd7-阴性细胞，53.8％是cd7car-阴性/cd7+细胞，4.33％是cd7car+/cd7+细胞。在第6天，有27.5％的细胞是cd7car-neg/cd7-细胞，63.7％是cd7car+/cd7-neg细胞，6.25％是cd7car-neg/cd7+细胞，2.57％是cd7car+/cd7+细胞。在第9天，有16.1％的细胞是cd7car-阴性/cd7-阴性细胞，83.7％是cd7car+/cd7-细胞，0.012％是cd7car-阴性/cd7+细胞，0.095％是cd7car+/cd7+细胞。用具有不同启动子的抗人cd7(th69)car-p2a-抗人cd7(th69)pebl双顺反子慢病毒载体转导的细胞产生的cd7car+/cd7-阴性细胞随着时间的流逝而富集。如图6显示了在转导后5天和转导后14天cd7car+/cd7-阴性细胞的百分比增加。例如，用efs启动子抗人cd7(th69)car-p2a-抗人cd7(th69)pebl慢病毒载体转导的细胞在转导后第5天产生了67.3％的cd7car-阴性/cd7-细胞，31.2％是cd7car+/cd7-阴性细胞，0.44％是cd7car-n阴性/cd7+细胞，1.06％是cd7car+/cd7+细胞。转导后第14天，25.0％是cd7car-阴性/cd7-细胞，73.8％是cd7car+/cd7-阴性细胞，0.80％是cd7car-阴性/cd7+细胞，0.46％是cd7car+/cd7+细胞。作为对照，转导后第5天用抗ef19启动子上游的ef1a启动子的慢病毒载体转导细胞，其中cd19car+/cd7+为34.7％，cd19car-阴性/cd7+为60.1％，4.58％均为双重阴性，而cd19car+/cd7-阴性为0.68％。转导后第14天，47.5％的细胞为cd19car+/cd7+，50.4％为cd19car-阴性/cd7+，1.01％为双重阴性，1.06％为cd19car+/cd7-阴性。因此，随着时间的流逝，几乎没有检测到cd19car表达细胞的富集。为了评估单启动子双顺反子载体的一致性和可重复性，用两个独立批次的mscv启动子-抗人cd7(th69)car-p2a-抗人cd7(th69)pebl慢病毒转导细胞。cd7pebl被myc标记并通过蛋白免疫印迹检测。还检测到cd7car(图7b)。图7a显示了在转导的细胞中cd7car和cd7表达的流式细胞术分析。第一批产生了一组转导的细胞，包括53.8％的cd7car+/cd7-阴性细胞和46.1％的cd7-阴性/cd7-阴性细胞。第二批产生转导的细胞，其包含65.5％cd7car+/cd7-阴性细胞和34.5％cd7-阴性/cd7-阴性细胞。注意到未转导的细胞包括98.6％的car-阴性/cd7+细胞。应当注意，本文所述的单启动子双顺反子载体已成功用于从不同的起始细胞产生cd7pebl-car-t细胞，所述起始细胞包括大量pbmc、包含cd4+和cd8+t细胞的纯化的t细胞和纯化的cd3+t细胞。另外，使用了不同的t细胞活化试剂，包括用于t细胞扩增和活化的人t活化剂cd3/cd28(gibco)和tcelltransacttm(miltenyibiotec)。图8显示了当抗人cd7(th69)car-p2a-抗人cd7(th69)pebl转导的细胞随时间培养时，cd7car+/cd7-阴性t细胞的百分比增加。在不同的起始细胞类型之间以及两种活化剂之间检测到了cd7car+/cd7-阴性t细胞的可比扩增。本文所述的细胞(例如，cd7car+/cd7-阴性t细胞)是由在无血清texmacs培养基或补充3％人ab血清的texmacs培养基中培养的cd4+阳性选择的cd4+和cd8+阳性选择的t细胞产生的。用moi10的cd7car-p2a-cd7pebl慢病毒转导t细胞以产生cd7-car+t细胞。在细胞活化后第11天，用补充了血清的培养基，转导的细胞的总倍数变化更高(图9a和图9b)。在活化后不同天(第1天至第4天)用cd7car-p2a-cd7pebl慢病毒转导的纯化的cd4+和cd8+选择的t细胞产生了高纯度的car+t细胞(图10a和图10b)。在制造过程中，不同日期转导的细胞会扩增和增殖。图10b显示了当在活化后1、2、3或4天转导细胞时，转导的t细胞表现出平均约5倍至10倍的扩增。通过facs测量了用cd7car-p2a-cd7pebl慢病毒的不同moi转导的t细胞中car和内源性cd7的表达。在较低moi时转导的t细胞在转导过程的早期具有较低百分比的cd7car+/cd7-阴性t细胞，但增加以与在较高moi时获得的cd7car+/cd7-阴性t细胞的百分比相匹配(参见，例如，图11)。例如，用慢病毒以3的moi转导的来自供体1的t细胞在转导后3天为9.76％cd7car+/cd7-阴性t细胞，在转导后9天为69.9％cd7car+/cd7-阴性t细胞。用慢病毒以10的moi转导的来自供体1的t细胞在转导后3天为17.7％cd7car+/cd7-阴性，在转导后9天为83.7％cd7car+/cd7-阴性。在两个单独的孔中，以指定的moi用cd7car-p2a-cd7pebl慢病毒转导来自三个独特供体的纯化cd4+和cd8+t细胞。通过流式细胞术分析car+细胞的百分比。收集细胞沉淀并提取基因组dna，以通过rt-qpcr分析确定载体拷贝数(vcn)。较高的moi与较高的vcn相关(图12b)，但是cd7car+t细胞的百分比在moi5和10处相似(图12a)。在活化后11天，在用mscv-cd7car-p2a-cd7pebl慢病毒转导的原代t细胞中测量了各种表面标志物的表达。图13a显示了来自三个不同供体的转导细胞中的cd7car和内源性cd7表达。与cd14/cd19/cd56相比，cd3的表达在图13b中示出。cd4和cd8表达在图13c中示出。图13d显示了转导的细胞产生了不同的t细胞亚群，包括由cd45ro和ccr7表达确定的tem细胞、tcm细胞、teff细胞和幼稚t细胞。图13d显示了在转导的t细胞中pd-1和tim-3的表达。通过ifnγ分泌(图14a)和细胞毒性(图14b)确定转导的pebl-cart细胞对cd7+jurkat细胞和cd7阴性nalm6细胞的应答。在指定的e：t比下，与jurkat或nalm6细胞共培养24小时的pebl-cart细胞的培养上清液中测量到的ifn-g分泌(技术复制的平均值±sd)。pebl-car-t细胞表现出靶标特异性功能反应，因为与cd7+jurkat细胞(而不是nalm6细胞)一起培养时，pebl-car-t细胞分泌ifnγ。此外，在细胞毒性试验中，pebl-car-t细胞杀死了cd7+jurkat细胞，但未杀死cd7阴性的nalm6细胞。该实施例证实了使用cd7car-p2a-cd7pebl双顺反子慢病毒载体产生的pebl-car-t细胞的产生和扩增。此类细胞显示出抗原特异性t细胞功能反应(例如ifnγ分泌)和针对cd7+靶细胞系的特异性毒性。pebl-car-t细胞表现出高百分比的cd7阴性car+t细胞纯度。本文引用的所有专利、公开的申请和参考文献的教导均通过引用整体并入本文。虽然通过参考这些示例实施例具体地示出和描述了本发明，但本领域的技术人员应当理解的是，在不脱离由所附权利要求涵盖的本发明的范围的情况下，可以在其中做出形式和细节方面的各种改变。序列表<110>麦迪赛克斯医疗私人有限公司<120>用于生成car-t细胞的两类基因载体及其用途<130>119419-5007-wo<140>在此提交<141>2019-11-13<150>62/767,069<151>2018-11-14<160>98<170>patentinversion3.5<210>1<211>2708<212>dna<213>人工序列<220><223>cppt-cmv-mcs-pgk-gfp-wpre的合成多核苷酸<400>1atcgattttaaaagaaaaggggggattggggggtacagtgcaggggaaagaatagtagac60ataatagcaacagacatacaaactaaagaattacaaaaacaaattacaaaaattcaaaat120tttcgggtttattaattaacagggacatgcagagatccagtttaagcttgggagttccgc180gttacataacttacggtaaatggcccgcctggctgaccgcccaacgacccccgcccattg240acgtcaataatgacgtatgttcccatagtaacgccaatagggactttccattgacgtcaa300tgggtggagtatttacggtaaactgcccacttggcagtacatcaagtgtatcatatgcca360agtacgccccctattgacgtcaatgacggtaaatggcccgcctggcattatgcccagtac420atgaccttatgggactttcctacttggcagtacatctacgtattagtcatcgctattacc480atggtgatgcggttttggcagtacatcaatgggcgtggatagcggtttgactcacgggga540tttccaagtctccaccccattgacgtcaatgggagtttgttttggcaccaaaatcaacgg600gactttccaaaatgtcgtaacaactccgccccattgacgcaaatgggcggtaggcgtgta660cggtgggaggtctatataagcagagctcgtttagtgaaccgtcagatcgcctggagacgc720catccacgctgttttgacctccatagaagacaccgactctactagaggatcgctagcgct780accggactcagatcgaattcctcaagcttcctcgagtgcagtcgacgcgggcccgggatc840ccgcgactctagataattctaccgggtaggggaggcgcttttcccaaggcagtctggagc900atgcgctttagcagccccgctgggcacttggcgctacacaagtggcctctggcctcgcac960acattccacatccaccggtaggcgccaaccggctccgttctttggtggccccttcgcgcc1020accttctactcctcccctagtcaggaagttcccccccgccccgcagctcgcgtcgtgcag1080gacgtgacaaatggaagtagcacgtctcactagtctcgtgcagatggacagcaccgctga1140gcaatggaagcgggtaggcctttggggcagcggccaatagcagctttgctccttcgcttt1200ctgggctcagaggctgggaaggggtgggtccgggggcgggctcaggggcgggctcagggg1260cggggcgggcgcccgaaggtcctccggaggcccggcattctgcacgcttcaaaagcgcac1320gtctgccgcgctgttctcctcttcctcatctccgggcctttcgactggccaccggcttcc1380accatggtgagcaagggcgaggagctgttcaccggggtggtgcccatcctggtcgagctg1440gacggcgacgtaaacggccacaagttcagcgtgtccggcgagggcgagggcgatgccacc1500tacggcaagctgaccctgaagttcatctgcaccaccggcaagctgcccgtgccctggccc1560accctcgtgaccaccctgacctacggcgtgcagtgcttcagccgctaccccgaccacatg1620aagcagcacgacttcttcaagtccgccatgcccgaaggctacgtccaggagcgcaccatc1680ttcttcaaggacgacggcaactacaagacccgcgccgaggtgaagttcgagggcgacacc1740ctggtgaaccgcatcgagctgaagggcatcgacttcaaggaggacggcaacatcctgggg1800cacaagctggagtacaactacaacagccacaacgtctatatcatggccgacaagcagaag1860aacggcatcaaggtgaacttcaagatccgccacaacatcgaggacggcagcgtgcagctc1920gccgaccactaccagcagaacacccccatcggcgacggccccgtgctgctgcccgacaac1980cactacctgagcacccagtccgccctgagcaaagaccccaacgagaagcgcgatcacatg2040gtcctgctggagttcgtgaccgccgccgggatcactctcggcatggacgagctgtacaag2100taacgcgtctggaacaatcaacctctggattacaaaatttgtgaaagattgactggtatt2160cttaactatgttgctccttttacgctatgtggatacgctgctttaatgcctttgtatcat2220gctattgcttcccgtatggctttcattttctcctccttgtataaatcctggttgctgtct2280ctttatgaggagttgtggcccgttgtcaggcaacgtggcgtggtgtgcactgtgtttgct2340gacgcaacccccactggttggggcattgccaccacctgtcagctcctttccgggactttc2400gctttccccctccctattgccacggcggaactcatcgccgcctgccttgcccgctgctgg2460acaggggctcggctgttgggcactgacaattccgtggtgttgtcggggaagctgacgtcc2520tttccatggctgctcgcctgtgttgccacctggattctgcgcgggacgtccttctgctac2580gtcccttcggccctcaatccagcggaccttccttcccgcggcctgctgccggctctgcgg2640cctcttccgcgtcttcgccttcgccctcagacgagtcggatctccctttgggccgcctcc2700ccgcctgg2708<210>2<211>855<212>dna<213>人工序列<220><223>抗人cd7（th69）pebl的合成多核苷酸<400>2atggctctgcctgtgaccgcactgctgctgcccctggctctgctgctgcacgccgcaaga60cctgccgcatacaaggatattcagatgactcagaccacaagctccctgagcgcctccctg120ggagaccgagtgacaatctcttgcagtgcatcacagggaattagcaactacctgaattgg180tatcagcagaagccagatggcactgtgaaactgctgatctactatacctctagtctgcac240agtggggtcccctcacgattcagcggatccggctctgggacagactacagcctgactatc300tccaacctggagcccgaagatattgccacctactattgccagcagtactccaagctgcct360tatacctttggcgggggaacaaagctggagattaaaaggggaggaggaggaagcggagga420ggaggatccggaggcgggggatctggaggaggaggaagtgaggtgcagctggtcgaatct480ggaggaggactggtgaagccaggaggatctctgaaactgagttgtgccgcttcaggcctg540accttctcaagctacgccatgagctgggtgcgacagacacctgagaagcggctggaatgg600gtcgctagcatctcctctggcgggttcacatactatccagactccgtgaaaggcagattt660actatctctcgggataacgcaagaaatattctgtacctgcagatgagttcactgaggagc720gaggacaccgcaatgtactattgtgccagggacgaagtgcgcggctatctggatgtctgg780ggagctggcactaccgtcaccgtctccagcgagcagaaactgattagcgaagaggacctg840aaagatgaactgtaa855<210>3<211>846<212>dna<213>人工序列<220><223>抗人cd7（3a1f）pebl的合成多核苷酸<400>3atggctctgcccgtcaccgctctgctgctgcctctggctctgctgctgcacgccgcaaga60ccccaggtccagctgcaggagtcaggggcagagctggtgaaacccggagccagtgtcaaa120ctgtcctgtaaggccagcggctatactttcaccagctactggatgcactgggtgaaacag180aggccaggacagggcctggagtggatcggcaagattaaccccagcaatgggcgcaccaac240tacaacgaaaagtttaaatccaaggctacactgactgtggacaagagctcctctaccgca300tacatgcagctgagttcactgacatctgaagatagtgccgtgtactattgcgccagaggc360ggggtctactatgacctgtactattacgcactggattattgggggcagggaaccacagtg420actgtcagctccggaggaggaggatccggcggaggaggctctgggggaggcgggagtgac480atcgagctgacacagtctccagccactctgagcgtgacccctggcgattctgtcagtctg540tcatgtagagctagccagtccatctctaacaatctgcactggtaccagcagaaatcacat600gaaagccctcggctgctgattaagagtgcttcacagagcatctccgggattccaagcaga660ttctctggcagtgggtcaggaaccgactttacactgtccattaactctgtggagaccgaa720gatttcggcatgtatttttgccagcagagcaattcctggccttacacattcggaggcggg780actaaactggagattaagagggagcagaaactgattagcgaagaggacctgaaggacgaa840ctgtga846<210>4<211>1482<212>dna<213>人工序列<220><223>抗人cd7（th69）car的合成多核苷酸<400>4atggctctgcctgtgactgccctgctgctgcccctggccctgctgctgcacgctgctaga60cccgccgcatacaaggacattcagatgactcagactacatccagcctgtcagcttccctg120ggcgatcgagtgactatcagctgttcagcaagccaggggatcagcaattacctgaactgg180taccagcagaagcccgacggaactgtcaagctgctgatctactatacttccagtctgcat240agcggggtccctagccgattctctgggagtggaagcggcaccgactatagcctgaccatt300tccaacctggaaccagaggacattgccacctattactgtcagcagtattcaaagctgccc360tatacctttggcggagggactaagctggagatcaagcgaggagggggaggatcaggggga420ggggggagcggaggcggggggagtggcggcggagggtcagaagtccagctggtcgagagt480gggggcggactggtgaaacctgggggctctctgaaactgagctgtgcagccagtggcctg540acattctcctcatatgctatgtcttgggtgcggcagaccccagaaaagagactggagtgg600gtggcttcaatctcttccgggggcttcacttactatcctgacagcgtgaaaggcagattc660actatctccagggataacgcacggaatatcctgtatctgcagatgagctcactgagatcc720gaggacaccgcaatgtactactgcgcaagagacgaagtgcgggggtatctggacgtgtgg780ggagcaggcactaccgtcaccgtgtctagcaccactacacctgcaccaaggcctcccaca840cccgctcccactatcgcttcccagccactgtccctgaggcccgaggcctgcaggccagca900gctggcggagccgtgcatactagggggctggacttcgcttgcgacatctacatctgggcc960ccactggcagggacatgcggagtcctgctgctgtccctggtcatcacactgtactgcaag1020cgggggcgcaaaaaactgctgtatatctttaagcagcctttcatgagaccagtgcagaca1080acccaggaggaagatgggtgctcatgccggtttcccgaggaggaggaaggcggctgcgag1140ctgagggtgaagttttcccgctcagcagatgctcctgcctaccagcagggccagaaccag1200ctgtataatgagctgaacctgggcagacgcgaagagtatgatgtgctggacaaaaggcgg1260ggaagagaccccgaaatgggagggaagccaaggcggaaaaacccccaggagggcctgtac1320aatgagctgcagaaggacaaaatggcagaggcttacagtgagattgggatgaagggagag1380agacggaggggaaaagggcacgatggcctgtaccaggggctgagcacagcaaccaaagat1440acttatgacgcactgcacatgcaggcactgccacccagatga1482<210>5<211>1476<212>dna<213>人工序列<220><223>抗人cd7（3a1f）car的合成多核苷酸<400>5atggctctgcccgtcaccgctctgctgctgcctctggctctgctgctgcacgctgctcga60ccacaggtccagctgcaggagtcaggagctgagctggtgaagccaggggcaagcgtcaaa120ctgtcctgcaaggcctctggatatacattcactagctactggatgcactgggtgaaacag180agacccggacagggcctggagtggatcggaaagattaaccctagcaatggcaggaccaac240tacaacgaaaagtttaaatccaaggcaaccctgacagtggacaagagctcctctacagcc300tacatgcagctgagttcactgacttcagaggatagcgcagtgtactattgcgccagaggc360ggggtctactatgacctgtactattacgccctggattattgggggcagggaaccacagtg420actgtcagctccggaggaggaggaagcggaggaggaggatccggaggaggaggatctgac480atcgagctgacccagagtcctgctacactgagcgtgactccaggcgattctgtcagtctg540tcatgtcgggcaagccagtccatctctaacaatctgcactggtaccagcagaaatcccat600gaatctccacgactgctgattaagagtgcctcacagagcatctccggcattccctcccgg660ttctctggcagtgggtcaggaactgactttaccctgagtattaactcagtggagacagaa720gatttcggcatgtatttttgccagcagagcaattcctggccctacactttcggaggcggg780accaaactggagatcaagcggactaccacaccagctccaagaccacctacccctgcacca840acaattgctagtcagccactgtcactgagaccagaagcatgtaggcctgcagctggagga900gctgtgcacaccagaggcctggactttgcctgcgatatctacatttgggctcctctggca960ggaacctgtggcgtgctgctgctgtctctggtcatcacactgtattgcaaacgagggcgg1020aagaaactgctgtacattttcaagcagccctttatgaggcctgtgcagactacccaggag1080gaagacggctgcagctgtcgcttccctgaggaagaggaagggggatgtgagctgcgcgtc1140aaattttctcgaagtgcagatgccccagcttatcagcagggccagaaccagctgtacaac1200gagctgaatctggggcggagagaggaatatgacgtgctggataagaggcgaggaagggac1260ccagaaatgggagggaaaccacgacggaagaacccccaggagggcctgtataatgaactg1320cagaaagacaagatggcagaggcctactctgaaatcgggatgaaaggagagagaaggcgc1380ggcaaggggcatgatggcctgtaccaggggctgagcacagcaaccaaagacacctatgac1440gcactgcacatgcaggcactgccaccacggtaatga1476<210>6<211>255<212>dna<213>人工序列<220><223>cmv启动子的合成多核苷酸<400>6aagcttgggagttccgcgttacataacttacggtaaatggcccgcctggctgaccgccca60acgacccccgcccattgacgtcaataatgacgtatgttcccatagtaacgccaataggga120ctttccattgacgtcaatgggtggagtatttacggtaaactgcccacttggcagtacatc180aagtgtatcatatgccaagtacgccccctattgacgtcaatgacggtaaatggcccgcct240ggcattatgcccagt255<210>7<211>1179<212>dna<213>人工序列<220><223>ef1a启动子的合成多核苷酸<400>7ggctccggtgcccgtcagtgggcagagcgcacatcgcccacagtccccgagaagttgggg60ggaggggtcggcaattgaaccggtgcctagagaaggtggcgcggggtaaactgggaaagt120gatgtcgtgtactggctccgcctttttcccgagggtgggggagaaccgtatataagtgca180gtagtcgccgtgaacgttctttttcgcaacgggtttgccgccagaacacaggtaagtgcc240gtgtgtggttcccgcgggcctggcctctttacgggttatggcccttgcgtgccttgaatt300acttccacctggctgcagtacgtgattcttgatcccgagcttcgggttggaagtgggtgg360gagagttcgaggccttgcgcttaaggagccccttcgcctcgtgcttgagttgaggcctgg420cctgggcgctggggccgccgcgtgcgaatctggtggcaccttcgcgcctgtctcgctgct480ttcgataagtctctagccatttaaaatttttgatgacctgctgcgacgctttttttctgg540caagatagtcttgtaaatgcgggccaagatctgcacactggtatttcggtttttggggcc600gcgggcggcgacggggcccgtgcgtcccagcgcacatgttcggcgaggcggggcctgcga660gcgcggccaccgagaatcggacgggggtagtctcaagctggccggcctgctctggtgcct720ggcctcgcgccgccgtgtatcgccccgccctgggcggcaaggctggcccggtcggcacca780gttgcgtgagcggaaagatggccgcttcccggccctgctgcagggagctcaaaatggagg840acgcggcgctcgggagagcgggcgggtgagtcacccacacaaaggaaaagggcctttccg900tcctcagccgtcgcttcatgtgactccacggagtaccgggcgccgtccaggcacctcgat960tagttctcgagcttttggagtacgtcgtctttaggttggggggaggggttttatgcgatg1020gagtttccccacactgagtgggtggagactgaagttaggccagcttggcacttgatgtaa1080ttctccttggaatttgccctttttgagtttggatcttggttcattctcaagcctcagaca1140gtggttcaaagtttttttcttccatttcaggtgtcgtga1179<210>8<211>373<212>dna<213>人工序列<220><223>efs启动子的合成多核苷酸<400>8gggcagagcgcacatcgcccacagtccccgagaagttggggggaggggtcggcaattgaa60ccggtgcctagagaaggtggcgcggggtaaactgggaaagtgatgtcgtgtactggctcc120gcctttttcccgagggtgggggagaaccgtatataagtgcagtagtcgccgtgaacgttc180tttttcgcaacgggtttgccgccagaacacaggtgtcgtgaccgcgggtctagaggatcc240ggtactcgaggaactgaaaaaccagaaagttaactggtaagtttagtctttttgtctttt300atttcaggtcccggatccggtggtggtgcaaatcaaagaactgctcctcagtggatgttg360cctttacttctag373<210>9<211>384<212>dna<213>人工序列<220><223>mscv启动子的合成多核苷酸<400>9ggaatgaaagaccccacctgtaggtttggcaagctagcttaagtaacgccattttgcaag60gcatggaaaatacataactgagaatagagaagttcagatcaaggttaggaacagagagac120agcagaatatgggccaaacaggatatctgtggtaagcagttcctgccccggctcagggcc180aagaacagatggtccccagatgcggtcccgccctcagcagtttctagagaaccatcagat240gtttccagggtgccccaaggacctgaaatgaccctgtgccttatttgaactaaccaatca300gttcgcttctcgcttctgttcgcgcgcttctgctccccgagctcaataaaagagcccaca360acccctcactcggcgcgccagtcc384<210>10<211>509<212>dna<213>人工序列<220><223>pgk启动子的合成多核苷酸<400>10attctaccgggtaggggaggcgcttttcccaaggcagtctggagcatgcgctttagcagc60cccgctgggcacttggcgctacacaagtggcctctggcctcgcacacattccacatccac120cggtaggcgccaaccggctccgttctttggtggccccttcgcgccaccttctactcctcc180cctagtcaggaagttcccccccgccccgcagctcgcgtcgtgcaggacgtgacaaatgga240agtagcacgtctcactagtctcgtgcagatggacagcaccgctgagcaatggaagcgggt300aggcctttggggcagcggccaatagcagctttgctccttcgctttctgggctcagaggct360gggaaggggtgggtccgggggcgggctcaggggcgggctcaggggcggggcgggcgcccg420aaggtcctccggaggcccggcattctgcacgcttcaaaagcgcacgtctgccgcgctgtt480ctcctcttcctcatctccgggcctttcga509<210>11<211>2974<212>dna<213>人工序列<220><223>抗人cd7（th69）的合成多核苷酸pebl-ires-抗人cd7（th69）car<400>11atggctctgcctgtgaccgcactgctgctgcccctggctctgctgctgcacgccgcaaga60cctgccgcatacaaggatattcagatgactcagaccacaagctccctgagcgcctccctg120ggagaccgagtgacaatctcttgcagtgcatcacagggaattagcaactacctgaattgg180tatcagcagaagccagatggcactgtgaaactgctgatctactatacctctagtctgcac240agtggggtcccctcacgattcagcggatccggctctgggacagactacagcctgactatc300tccaacctggagcccgaagatattgccacctactattgccagcagtactccaagctgcct360tatacctttggcgggggaacaaagctggagattaaaaggggaggaggaggaagcggagga420ggaggatccggaggcgggggatctggaggaggaggaagtgaggtgcagctggtcgaatct480ggaggaggactggtgaagccaggaggatctctgaaactgagttgtgccgcttcaggcctg540accttctcaagctacgccatgagctgggtgcgacagacacctgagaagcggctggaatgg600gtcgctagcatctcctctggcgggttcacatactatccagactccgtgaaaggcagattt660actatctctcgggataacgcaagaaatattctgtacctgcagatgagttcactgaggagc720gaggacaccgcaatgtactattgtgccagggacgaagtgcgcggctatctggatgtctgg780ggagctggcactaccgtcaccgtctccagcgagcagaaactgattagcgaagaggacctg840aaagatgaactgtaacgggatcaattccgccccccccctaacgttactggccgaagccgc900ttggaataaggccggtgtgcgtttgtctatatgttattttccaccatattgccgtctttt960ggcaatgtgagggcccggaaacctggccctgtcttcttgacgagcattcctaggggtctt1020tcccctctcgccaaaggaatgcaaggtctgttgaatgtcgtgaaggaagcagttcctctg1080gaagcttcttgaagacaaacaacgtctgtagcgaccctttgcaggcagcggaacccccca1140cctggcgacaggtgcctctgcggccaaaagccacgtgtataagatacacctgcaaaggcg1200gcacaaccccagtgccacgttgtgagttggatagttgtggaaagagtcaaatggctctcc1260tcaagcgtattcaacaaggggctgaaggatgcccagaaggtaccccattgtatgggatct1320gatctggggcctcggtgcacatgctttacatgtgtttagtcgaggttaaaaaaacgtcta1380ggccccccgaaccacggggacgtggttttcctttgaaaaacacgataataccatggctct1440gcctgtgactgccctgctgctgcccctggccctgctgctgcacgctgctagacccgccgc1500atacaaggacattcagatgactcagactacatccagcctgtcagcttccctgggcgatcg1560agtgactatcagctgttcagcaagccaggggatcagcaattacctgaactggtaccagca1620gaagcccgacggaactgtcaagctgctgatctactatacttccagtctgcatagcggggt1680ccctagccgattctctgggagtggaagcggcaccgactatagcctgaccatttccaacct1740ggaaccagaggacattgccacctattactgtcagcagtattcaaagctgccctatacctt1800tggcggagggactaagctggagatcaagcgaggagggggaggatcagggggaggggggag1860cggaggcggggggagtggcggcggagggtcagaagtccagctggtcgagagtgggggcgg1920actggtgaaacctgggggctctctgaaactgagctgtgcagccagtggcctgacattctc1980ctcatatgctatgtcttgggtgcggcagaccccagaaaagagactggagtgggtggcttc2040aatctcttccgggggcttcacttactatcctgacagcgtgaaaggcagattcactatctc2100cagggataacgcacggaatatcctgtatctgcagatgagctcactgagatccgaggacac2160cgcaatgtactactgcgcaagagacgaagtgcgggggtatctggacgtgtggggagcagg2220cactaccgtcaccgtgtctagcaccactacacctgcaccaaggcctcccacacccgctcc2280cactatcgcttcccagccactgtccctgaggcccgaggcctgcaggccagcagctggcgg2340agccgtgcatactagggggctggacttcgcttgcgacatctacatctgggccccactggc2400agggacatgcggagtcctgctgctgtccctggtcatcacactgtactgcaagcgggggcg2460caaaaaactgctgtatatctttaagcagcctttcatgagaccagtgcagacaacccagga2520ggaagatgggtgctcatgccggtttcccgaggaggaggaaggcggctgcgagctgagggt2580gaagttttcccgctcagcagatgctcctgcctaccagcagggccagaaccagctgtataa2640tgagctgaacctgggcagacgcgaagagtatgatgtgctggacaaaaggcggggaagaga2700ccccgaaatgggagggaagccaaggcggaaaaacccccaggagggcctgtacaatgagct2760gcagaaggacaaaatggcagaggcttacagtgagattgggatgaagggagagagacggag2820gggaaaagggcacgatggcctgtaccaggggctgagcacagcaaccaaagatacttatga2880cgcactgcacatgcaggcactgccacccagatgacagccaggggatttcaccactcaaag2940gccagacctgcagacgcccagattatgagacaca2974<210>12<211>2974<212>dna<213>人工序列<220><223>抗人cd7（th69）的合成多核苷酸car-ires-抗人cd7（th69）pebl<400>12atggctctgcctgtgactgccctgctgctgcccctggccctgctgctgcacgctgctaga60cccgccgcatacaaggacattcagatgactcagactacatccagcctgtcagcttccctg120ggcgatcgagtgactatcagctgttcagcaagccaggggatcagcaattacctgaactgg180taccagcagaagcccgacggaactgtcaagctgctgatctactatacttccagtctgcat240agcggggtccctagccgattctctgggagtggaagcggcaccgactatagcctgaccatt300tccaacctggaaccagaggacattgccacctattactgtcagcagtattcaaagctgccc360tatacctttggcggagggactaagctggagatcaagcgaggagggggaggatcaggggga420ggggggagcggaggcggggggagtggcggcggagggtcagaagtccagctggtcgagagt480gggggcggactggtgaaacctgggggctctctgaaactgagctgtgcagccagtggcctg540acattctcctcatatgctatgtcttgggtgcggcagaccccagaaaagagactggagtgg600gtggcttcaatctcttccgggggcttcacttactatcctgacagcgtgaaaggcagattc660actatctccagggataacgcacggaatatcctgtatctgcagatgagctcactgagatcc720gaggacaccgcaatgtactactgcgcaagagacgaagtgcgggggtatctggacgtgtgg780ggagcaggcactaccgtcaccgtgtctagcaccactacacctgcaccaaggcctcccaca840cccgctcccactatcgcttcccagccactgtccctgaggcccgaggcctgcaggccagca900gctggcggagccgtgcatactagggggctggacttcgcttgcgacatctacatctgggcc960ccactggcagggacatgcggagtcctgctgctgtccctggtcatcacactgtactgcaag1020cgggggcgcaaaaaactgctgtatatctttaagcagcctttcatgagaccagtgcagaca1080acccaggaggaagatgggtgctcatgccggtttcccgaggaggaggaaggcggctgcgag1140ctgagggtgaagttttcccgctcagcagatgctcctgcctaccagcagggccagaaccag1200ctgtataatgagctgaacctgggcagacgcgaagagtatgatgtgctggacaaaaggcgg1260ggaagagaccccgaaatgggagggaagccaaggcggaaaaacccccaggagggcctgtac1320aatgagctgcagaaggacaaaatggcagaggcttacagtgagattgggatgaagggagag1380agacggaggggaaaagggcacgatggcctgtaccaggggctgagcacagcaaccaaagat1440acttatgacgcactgcacatgcaggcactgccacccagatgacagccaggggatttcacc1500actcaaaggccagacctgcagacgcccagattatgagacacacgggatcaattccgcccc1560ccccctaacgttactggccgaagccgcttggaataaggccggtgtgcgtttgtctatatg1620ttattttccaccatattgccgtcttttggcaatgtgagggcccggaaacctggccctgtc1680ttcttgacgagcattcctaggggtctttcccctctcgccaaaggaatgcaaggtctgttg1740aatgtcgtgaaggaagcagttcctctggaagcttcttgaagacaaacaacgtctgtagcg1800accctttgcaggcagcggaaccccccacctggcgacaggtgcctctgcggccaaaagcca1860cgtgtataagatacacctgcaaaggcggcacaaccccagtgccacgttgtgagttggata1920gttgtggaaagagtcaaatggctctcctcaagcgtattcaacaaggggctgaaggatgcc1980cagaaggtaccccattgtatgggatctgatctggggcctcggtgcacatgctttacatgt2040gtttagtcgaggttaaaaaaacgtctaggccccccgaaccacggggacgtggttttcctt2100tgaaaaacacgataataccatggctctgcctgtgaccgcactgctgctgcccctggctct2160gctgctgcacgccgcaagacctgccgcatacaaggatattcagatgactcagaccacaag2220ctccctgagcgcctccctgggagaccgagtgacaatctcttgcagtgcatcacagggaat2280tagcaactacctgaattggtatcagcagaagccagatggcactgtgaaactgctgatcta2340ctatacctctagtctgcacagtggggtcccctcacgattcagcggatccggctctgggac2400agactacagcctgactatctccaacctggagcccgaagatattgccacctactattgcca2460gcagtactccaagctgccttatacctttggcgggggaacaaagctggagattaaaagggg2520aggaggaggaagcggaggaggaggatccggaggcgggggatctggaggaggaggaagtga2580ggtgcagctggtcgaatctggaggaggactggtgaagccaggaggatctctgaaactgag2640ttgtgccgcttcaggcctgaccttctcaagctacgccatgagctgggtgcgacagacacc2700tgagaagcggctggaatgggtcgctagcatctcctctggcgggttcacatactatccaga2760ctccgtgaaaggcagatttactatctctcgggataacgcaagaaatattctgtacctgca2820gatgagttcactgaggagcgaggacaccgcaatgtactattgtgccagggacgaagtgcg2880cggctatctggatgtctggggagctggcactaccgtcaccgtctccagcgagcagaaact2940gattagcgaagaggacctgaaagatgaactgtaa2974<210>13<211>2400<212>dna<213>人工序列<220><223>抗人cd7（th69）的合成多核苷酸car-p2a-抗人cd7（th69）pebl<400>13atggctctgcctgtgactgccctgctgctgcccctggccctgctgctgcacgctgctaga60cccgccgcatacaaggacattcagatgactcagactacatccagcctgtcagcttccctg120ggcgatcgagtgactatcagctgttcagcaagccaggggatcagcaattacctgaactgg180taccagcagaagcccgacggaactgtcaagctgctgatctactatacttccagtctgcat240agcggggtccctagccgattctctgggagtggaagcggcaccgactatagcctgaccatt300tccaacctggaaccagaggacattgccacctattactgtcagcagtattcaaagctgccc360tatacctttggcggagggactaagctggagatcaagcgaggagggggaggatcaggggga420ggggggagcggaggcggggggagtggcggcggagggtcagaagtccagctggtcgagagt480gggggcggactggtgaaacctgggggctctctgaaactgagctgtgcagccagtggcctg540acattctcctcatatgctatgtcttgggtgcggcagaccccagaaaagagactggagtgg600gtggcttcaatctcttccgggggcttcacttactatcctgacagcgtgaaaggcagattc660actatctccagggataacgcacggaatatcctgtatctgcagatgagctcactgagatcc720gaggacaccgcaatgtactactgcgcaagagacgaagtgcgggggtatctggacgtgtgg780ggagcaggcactaccgtcaccgtgtctagcaccactacacctgcaccaaggcctcccaca840cccgctcccactatcgcttcccagccactgtccctgaggcccgaggcctgcaggccagca900gctggcggagccgtgcatactagggggctggacttcgcttgcgacatctacatctgggcc960ccactggcagggacatgcggagtcctgctgctgtccctggtcatcacactgtactgcaag1020cgggggcgcaaaaaactgctgtatatctttaagcagcctttcatgagaccagtgcagaca1080acccaggaggaagatgggtgctcatgccggtttcccgaggaggaggaaggcggctgcgag1140ctgagggtgaagttttcccgctcagcagatgctcctgcctaccagcagggccagaaccag1200ctgtataatgagctgaacctgggcagacgcgaagagtatgatgtgctggacaaaaggcgg1260ggaagagaccccgaaatgggagggaagccaaggcggaaaaacccccaggagggcctgtac1320aatgagctgcagaaggacaaaatggcagaggcttacagtgagattgggatgaagggagag1380agacggaggggaaaagggcacgatggcctgtaccaggggctgagcacagcaaccaaagat1440acttatgacgcactgcacatgcaggcactgccacccagaggcagcggcgccacaaacttc1500tctctgctaaagcaagcaggtgatgttgaagaaaaccccgggcctatggctctgcctgtg1560accgcactgctgctgcccctggctctgctgctgcacgccgcaagacctgccgcatacaag1620gatattcagatgactcagaccacaagctccctgagcgcctccctgggagaccgagtgaca1680atctcttgcagtgcatcacagggaattagcaactacctgaattggtatcagcagaagcca1740gatggcactgtgaaactgctgatctactatacctctagtctgcacagtggggtcccctca1800cgattcagcggatccggctctgggacagactacagcctgactatctccaacctggagccc1860gaagatattgccacctactattgccagcagtactccaagctgccttatacctttggcggg1920ggaacaaagctggagattaaaaggggaggaggaggaagcggaggaggaggatccggaggc1980gggggatctggaggaggaggaagtgaggtgcagctggtcgaatctggaggaggactggtg2040aagccaggaggatctctgaaactgagttgtgccgcttcaggcctgaccttctcaagctac2100gccatgagctgggtgcgacagacacctgagaagcggctggaatgggtcgctagcatctcc2160tctggcgggttcacatactatccagactccgtgaaaggcagatttactatctctcgggat2220aacgcaagaaatattctgtacctgcagatgagttcactgaggagcgaggacaccgcaatg2280tactattgtgccagggacgaagtgcgcggctatctggatgtctggggagctggcactacc2340gtcaccgtctccagcgagcagaaactgattagcgaagaggacctgaaagatgaactgtaa2400<210>14<211>2803<212>dna<213>人工序列<220><223>mscv启动子-抗人cd7（th69）的合成多核苷酸car-p2a-抗人cd7（th69）pebl<400>14ggaatgaaagaccccacctgtaggtttggcaagctagcttaagtaacgccattttgcaag60gcatggaaaatacataactgagaatagagaagttcagatcaaggttaggaacagagagac120agcagaatatgggccaaacaggatatctgtggtaagcagttcctgccccggctcagggcc180aagaacagatggtccccagatgcggtcccgccctcagcagtttctagagaaccatcagat240gtttccagggtgccccaaggacctgaaatgaccctgtgccttatttgaactaaccaatca300gttcgcttctcgcttctgttcgcgcgcttctgctccccgagctcaataaaagagcccaca360acccctcactcggcgcgccagtccgaattcggcttccaccatggctctgcctgtgactgc420cctgctgctgcccctggccctgctgctgcacgctgctagacccgccgcatacaaggacat480tcagatgactcagactacatccagcctgtcagcttccctgggcgatcgagtgactatcag540ctgttcagcaagccaggggatcagcaattacctgaactggtaccagcagaagcccgacgg600aactgtcaagctgctgatctactatacttccagtctgcatagcggggtccctagccgatt660ctctgggagtggaagcggcaccgactatagcctgaccatttccaacctggaaccagagga720cattgccacctattactgtcagcagtattcaaagctgccctatacctttggcggagggac780taagctggagatcaagcgaggagggggaggatcagggggaggggggagcggaggcggggg840gagtggcggcggagggtcagaagtccagctggtcgagagtgggggcggactggtgaaacc900tgggggctctctgaaactgagctgtgcagccagtggcctgacattctcctcatatgctat960gtcttgggtgcggcagaccccagaaaagagactggagtgggtggcttcaatctcttccgg1020gggcttcacttactatcctgacagcgtgaaaggcagattcactatctccagggataacgc1080acggaatatcctgtatctgcagatgagctcactgagatccgaggacaccgcaatgtacta1140ctgcgcaagagacgaagtgcgggggtatctggacgtgtggggagcaggcactaccgtcac1200cgtgtctagcaccactacacctgcaccaaggcctcccacacccgctcccactatcgcttc1260ccagccactgtccctgaggcccgaggcctgcaggccagcagctggcggagccgtgcatac1320tagggggctggacttcgcttgcgacatctacatctgggccccactggcagggacatgcgg1380agtcctgctgctgtccctggtcatcacactgtactgcaagcgggggcgcaaaaaactgct1440gtatatctttaagcagcctttcatgagaccagtgcagacaacccaggaggaagatgggtg1500ctcatgccggtttcccgaggaggaggaaggcggctgcgagctgagggtgaagttttcccg1560ctcagcagatgctcctgcctaccagcagggccagaaccagctgtataatgagctgaacct1620gggcagacgcgaagagtatgatgtgctggacaaaaggcggggaagagaccccgaaatggg1680agggaagccaaggcggaaaaacccccaggagggcctgtacaatgagctgcagaaggacaa1740aatggcagaggcttacagtgagattgggatgaagggagagagacggaggggaaaagggca1800cgatggcctgtaccaggggctgagcacagcaaccaaagatacttatgacgcactgcacat1860gcaggcactgccacccagatgaggcagcggcgccacaaacttctctctgctaaagcaagc1920aggtgatgttgaagaaaaccccgggcctatggctctgcctgtgaccgcactgctgctgcc1980cctggctctgctgctgcacgccgcaagacctgccgcatacaaggatattcagatgactca2040gaccacaagctccctgagcgcctccctgggagaccgagtgacaatctcttgcagtgcatc2100acagggaattagcaactacctgaattggtatcagcagaagccagatggcactgtgaaact2160gctgatctactatacctctagtctgcacagtggggtcccctcacgattcagcggatccgg2220ctctgggacagactacagcctgactatctccaacctggagcccgaagatattgccaccta2280ctattgccagcagtactccaagctgccttatacctttggcgggggaacaaagctggagat2340taaaaggggaggaggaggaagcggaggaggaggatccggaggcgggggatctggaggagg2400aggaagtgaggtgcagctggtcgaatctggaggaggactggtgaagccaggaggatctct2460gaaactgagttgtgccgcttcaggcctgaccttctcaagctacgccatgagctgggtgcg2520acagacacctgagaagcggctggaatgggtcgctagcatctcctctggcgggttcacata2580ctatccagactccgtgaaaggcagatttactatctctcgggataacgcaagaaatattct2640gtacctgcagatgagttcactgaggagcgaggacaccgcaatgtactattgtgccaggga2700cgaagtgcgcggctatctggatgtctggggagctggcactaccgtcaccgtctccagcga2760gcagaaactgattagcgaagaggacctgaaagatgaactgtaa2803<210>15<211>3598<212>dna<213>人工序列<220><223>ef1a启动子-抗人cd7（th69）的合成多核苷酸car-p2a-抗人cd7（th69）pebl<400>15ggctccggtgcccgtcagtgggcagagcgcacatcgcccacagtccccgagaagttgggg60ggaggggtcggcaattgaaccggtgcctagagaaggtggcgcggggtaaactgggaaagt120gatgtcgtgtactggctccgcctttttcccgagggtgggggagaaccgtatataagtgca180gtagtcgccgtgaacgttctttttcgcaacgggtttgccgccagaacacaggtaagtgcc240gtgtgtggttcccgcgggcctggcctctttacgggttatggcccttgcgtgccttgaatt300acttccacctggctgcagtacgtgattcttgatcccgagcttcgggttggaagtgggtgg360gagagttcgaggccttgcgcttaaggagccccttcgcctcgtgcttgagttgaggcctgg420cctgggcgctggggccgccgcgtgcgaatctggtggcaccttcgcgcctgtctcgctgct480ttcgataagtctctagccatttaaaatttttgatgacctgctgcgacgctttttttctgg540caagatagtcttgtaaatgcgggccaagatctgcacactggtatttcggtttttggggcc600gcgggcggcgacggggcccgtgcgtcccagcgcacatgttcggcgaggcggggcctgcga660gcgcggccaccgagaatcggacgggggtagtctcaagctggccggcctgctctggtgcct720ggcctcgcgccgccgtgtatcgccccgccctgggcggcaaggctggcccggtcggcacca780gttgcgtgagcggaaagatggccgcttcccggccctgctgcagggagctcaaaatggagg840acgcggcgctcgggagagcgggcgggtgagtcacccacacaaaggaaaagggcctttccg900tcctcagccgtcgcttcatgtgactccacggagtaccgggcgccgtccaggcacctcgat960tagttctcgagcttttggagtacgtcgtctttaggttggggggaggggttttatgcgatg1020gagtttccccacactgagtgggtggagactgaagttaggccagcttggcacttgatgtaa1080ttctccttggaatttgccctttttgagtttggatcttggttcattctcaagcctcagaca1140gtggttcaaagtttttttcttccatttcaggtgtcgtgagaattcggcttccaccatggc1200tctgcctgtgactgccctgctgctgcccctggccctgctgctgcacgctgctagacccgc1260cgcatacaaggacattcagatgactcagactacatccagcctgtcagcttccctgggcga1320tcgagtgactatcagctgttcagcaagccaggggatcagcaattacctgaactggtacca1380gcagaagcccgacggaactgtcaagctgctgatctactatacttccagtctgcatagcgg1440ggtccctagccgattctctgggagtggaagcggcaccgactatagcctgaccatttccaa1500cctggaaccagaggacattgccacctattactgtcagcagtattcaaagctgccctatac1560ctttggcggagggactaagctggagatcaagcgaggagggggaggatcagggggaggggg1620gagcggaggcggggggagtggcggcggagggtcagaagtccagctggtcgagagtggggg1680cggactggtgaaacctgggggctctctgaaactgagctgtgcagccagtggcctgacatt1740ctcctcatatgctatgtcttgggtgcggcagaccccagaaaagagactggagtgggtggc1800ttcaatctcttccgggggcttcacttactatcctgacagcgtgaaaggcagattcactat1860ctccagggataacgcacggaatatcctgtatctgcagatgagctcactgagatccgagga1920caccgcaatgtactactgcgcaagagacgaagtgcgggggtatctggacgtgtggggagc1980aggcactaccgtcaccgtgtctagcaccactacacctgcaccaaggcctcccacacccgc2040tcccactatcgcttcccagccactgtccctgaggcccgaggcctgcaggccagcagctgg2100cggagccgtgcatactagggggctggacttcgcttgcgacatctacatctgggccccact2160ggcagggacatgcggagtcctgctgctgtccctggtcatcacactgtactgcaagcgggg2220gcgcaaaaaactgctgtatatctttaagcagcctttcatgagaccagtgcagacaaccca2280ggaggaagatgggtgctcatgccggtttcccgaggaggaggaaggcggctgcgagctgag2340ggtgaagttttcccgctcagcagatgctcctgcctaccagcagggccagaaccagctgta2400taatgagctgaacctgggcagacgcgaagagtatgatgtgctggacaaaaggcggggaag2460agaccccgaaatgggagggaagccaaggcggaaaaacccccaggagggcctgtacaatga2520gctgcagaaggacaaaatggcagaggcttacagtgagattgggatgaagggagagagacg2580gaggggaaaagggcacgatggcctgtaccaggggctgagcacagcaaccaaagatactta2640tgacgcactgcacatgcaggcactgccacccagatgaggcagcggcgccacaaacttctc2700tctgctaaagcaagcaggtgatgttgaagaaaaccccgggcctatggctctgcctgtgac2760cgcactgctgctgcccctggctctgctgctgcacgccgcaagacctgccgcatacaagga2820tattcagatgactcagaccacaagctccctgagcgcctccctgggagaccgagtgacaat2880ctcttgcagtgcatcacagggaattagcaactacctgaattggtatcagcagaagccaga2940tggcactgtgaaactgctgatctactatacctctagtctgcacagtggggtcccctcacg3000attcagcggatccggctctgggacagactacagcctgactatctccaacctggagcccga3060agatattgccacctactattgccagcagtactccaagctgccttatacctttggcggggg3120aacaaagctggagattaaaaggggaggaggaggaagcggaggaggaggatccggaggcgg3180gggatctggaggaggaggaagtgaggtgcagctggtcgaatctggaggaggactggtgaa3240gccaggaggatctctgaaactgagttgtgccgcttcaggcctgaccttctcaagctacgc3300catgagctgggtgcgacagacacctgagaagcggctggaatgggtcgctagcatctcctc3360tggcgggttcacatactatccagactccgtgaaaggcagatttactatctctcgggataa3420cgcaagaaatattctgtacctgcagatgagttcactgaggagcgaggacaccgcaatgta3480ctattgtgccagggacgaagtgcgcggctatctggatgtctggggagctggcactaccgt3540caccgtctccagcgagcagaaactgattagcgaagaggacctgaaagatgaactgtaa3598<210>16<211>2792<212>dna<213>人工序列<220><223>ef1a启动子-抗人cd7（th69）的合成多核苷酸car-p2a-抗人cd7（th69）pebl<400>16gggcagagcgcacatcgcccacagtccccgagaagttggggggaggggtcggcaattgaa60ccggtgcctagagaaggtggcgcggggtaaactgggaaagtgatgtcgtgtactggctcc120gcctttttcccgagggtgggggagaaccgtatataagtgcagtagtcgccgtgaacgttc180tttttcgcaacgggtttgccgccagaacacaggtgtcgtgaccgcgggtctagaggatcc240ggtactcgaggaactgaaaaaccagaaagttaactggtaagtttagtctttttgtctttt300atttcaggtcccggatccggtggtggtgcaaatcaaagaactgctcctcagtggatgttg360cctttacttctaggaattcggcttccaccatggctctgcctgtgactgccctgctgctgc420ccctggccctgctgctgcacgctgctagacccgccgcatacaaggacattcagatgactc480agactacatccagcctgtcagcttccctgggcgatcgagtgactatcagctgttcagcaa540gccaggggatcagcaattacctgaactggtaccagcagaagcccgacggaactgtcaagc600tgctgatctactatacttccagtctgcatagcggggtccctagccgattctctgggagtg660gaagcggcaccgactatagcctgaccatttccaacctggaaccagaggacattgccacct720attactgtcagcagtattcaaagctgccctatacctttggcggagggactaagctggaga780tcaagcgaggagggggaggatcagggggaggggggagcggaggcggggggagtggcggcg840gagggtcagaagtccagctggtcgagagtgggggcggactggtgaaacctgggggctctc900tgaaactgagctgtgcagccagtggcctgacattctcctcatatgctatgtcttgggtgc960ggcagaccccagaaaagagactggagtgggtggcttcaatctcttccgggggcttcactt1020actatcctgacagcgtgaaaggcagattcactatctccagggataacgcacggaatatcc1080tgtatctgcagatgagctcactgagatccgaggacaccgcaatgtactactgcgcaagag1140acgaagtgcgggggtatctggacgtgtggggagcaggcactaccgtcaccgtgtctagca1200ccactacacctgcaccaaggcctcccacacccgctcccactatcgcttcccagccactgt1260ccctgaggcccgaggcctgcaggccagcagctggcggagccgtgcatactagggggctgg1320acttcgcttgcgacatctacatctgggccccactggcagggacatgcggagtcctgctgc1380tgtccctggtcatcacactgtactgcaagcgggggcgcaaaaaactgctgtatatcttta1440agcagcctttcatgagaccagtgcagacaacccaggaggaagatgggtgctcatgccggt1500ttcccgaggaggaggaaggcggctgcgagctgagggtgaagttttcccgctcagcagatg1560ctcctgcctaccagcagggccagaaccagctgtataatgagctgaacctgggcagacgcg1620aagagtatgatgtgctggacaaaaggcggggaagagaccccgaaatgggagggaagccaa1680ggcggaaaaacccccaggagggcctgtacaatgagctgcagaaggacaaaatggcagagg1740cttacagtgagattgggatgaagggagagagacggaggggaaaagggcacgatggcctgt1800accaggggctgagcacagcaaccaaagatacttatgacgcactgcacatgcaggcactgc1860cacccagatgaggcagcggcgccacaaacttctctctgctaaagcaagcaggtgatgttg1920aagaaaaccccgggcctatggctctgcctgtgaccgcactgctgctgcccctggctctgc1980tgctgcacgccgcaagacctgccgcatacaaggatattcagatgactcagaccacaagct2040ccctgagcgcctccctgggagaccgagtgacaatctcttgcagtgcatcacagggaatta2100gcaactacctgaattggtatcagcagaagccagatggcactgtgaaactgctgatctact2160atacctctagtctgcacagtggggtcccctcacgattcagcggatccggctctgggacag2220actacagcctgactatctccaacctggagcccgaagatattgccacctactattgccagc2280agtactccaagctgccttatacctttggcgggggaacaaagctggagattaaaaggggag2340gaggaggaagcggaggaggaggatccggaggcgggggatctggaggaggaggaagtgagg2400tgcagctggtcgaatctggaggaggactggtgaagccaggaggatctctgaaactgagtt2460gtgccgcttcaggcctgaccttctcaagctacgccatgagctgggtgcgacagacacctg2520agaagcggctggaatgggtcgctagcatctcctctggcgggttcacatactatccagact2580ccgtgaaaggcagatttactatctctcgggataacgcaagaaatattctgtacctgcaga2640tgagttcactgaggagcgaggacaccgcaatgtactattgtgccagggacgaagtgcgcg2700gctatctggatgtctggggagctggcactaccgtcaccgtctccagcgagcagaaactga2760ttagcgaagaggacctgaaagatgaactgtaa2792<210>17<211>3346<212>dna<213>人工序列<220><223>mscv启动子-抗人cd7（th69）的合成多核苷酸car-pgk启动子-抗人cd7（th69）pebl<400>17ttaattaatttatttagtctccagaaaaaggggggaatgaaagaccccacctgtaggttt60ggcaagctagcttaagtaacgccattttgcaaggcatggaaaatacataactgagaatag120agaagttcagatcaaggttaggaacagagagacagcagaatatgggccaaacaggatatc180tgtggtaagcagttcctgccccggctcagggccaagaacagatggtccccagatgcggtc240ccgccctcagcagtttctagagaaccatcagatgtttccagggtgccccaaggacctgaa300atgaccctgtgccttatttgaactaaccaatcagttcgcttctcgcttctgttcgcgcgc360ttctgctccccgagctcaataaaagagcccacaacccctcactcggcgcgccagtccgaa420ttcggcttccaccatggctctgcctgtgactgccctgctgctgcccctggccctgctgct480gcacgctgctagacccgccgcatacaaggacattcagatgactcagactacatccagcct540gtcagcttccctgggcgatcgagtgactatcagctgttcagcaagccaggggatcagcaa600ttacctgaactggtaccagcagaagcccgacggaactgtcaagctgctgatctactatac660ttccagtctgcatagcggggtccctagccgattctctgggagtggaagcggcaccgacta720tagcctgaccatttccaacctggaaccagaggacattgccacctattactgtcagcagta780ttcaaagctgccctatacctttggcggagggactaagctggagatcaagcgaggaggggg840aggatcagggggaggggggagcggaggcggggggagtggcggcggagggtcagaagtcca900gctggtcgagagtgggggcggactggtgaaacctgggggctctctgaaactgagctgtgc960agccagtggcctgacattctcctcatatgctatgtcttgggtgcggcagaccccagaaaa1020gagactggagtgggtggcttcaatctcttccgggggcttcacttactatcctgacagcgt1080gaaaggcagattcactatctccagggataacgcacggaatatcctgtatctgcagatgag1140ctcactgagatccgaggacaccgcaatgtactactgcgcaagagacgaagtgcgggggta1200tctggacgtgtggggagcaggcactaccgtcaccgtgtctagcaccactacacctgcacc1260aaggcctcccacacccgctcccactatcgcttcccagccactgtccctgaggcccgaggc1320ctgcaggccagcagctggcggagccgtgcatactagggggctggacttcgcttgcgacat1380ctacatctgggccccactggcagggacatgcggagtcctgctgctgtccctggtcatcac1440actgtactgcaagcgggggcgcaaaaaactgctgtatatctttaagcagcctttcatgag1500accagtgcagacaacccaggaggaagatgggtgctcatgccggtttcccgaggaggagga1560aggcggctgcgagctgagggtgaagttttcccgctcagcagatgctcctgcctaccagca1620gggccagaaccagctgtataatgagctgaacctgggcagacgcgaagagtatgatgtgct1680ggacaaaaggcggggaagagaccccgaaatgggagggaagccaaggcggaaaaaccccca1740ggagggcctgtacaatgagctgcagaaggacaaaatggcagaggcttacagtgagattgg1800gatgaagggagagagacggaggggaaaagggcacgatggcctgtaccaggggctgagcac1860agcaaccaaagatacttatgacgcactgcacatgcaggcactgccacccagatgactcga1920gtgcagtcgacgcgggcccgggatcccgcgactctagataattctaccgggtaggggagg1980cgcttttcccaaggcagtctggagcatgcgctttagcagccccgctgggcacttggcgct2040acacaagtggcctctggcctcgcacacattccacatccaccggtaggcgccaaccggctc2100cgttctttggtggccccttcgcgccaccttctactcctcccctagtcaggaagttccccc2160ccgccccgcagctcgcgtcgtgcaggacgtgacaaatggaagtagcacgtctcactagtc2220tcgtgcagatggacagcaccgctgagcaatggaagcgggtaggcctttggggcagcggcc2280aatagcagctttgctccttcgctttctgggctcagaggctgggaaggggtgggtccgggg2340gcgggctcaggggcgggctcaggggcggggcgggcgcccgaaggtcctccggaggcccgg2400cattctgcacgcttcaaaagcgcacgtctgccgcgctgttctcctcttcctcatctccgg2460gcctttcgactggccaggcttccaccatggctctgcctgtgaccgcactgctgctgcccc2520tggctctgctgctgcacgccgcaagacctgccgcatacaaggatattcagatgactcaga2580ccacaagctccctgagcgcctccctgggagaccgagtgacaatctcttgcagtgcatcac2640agggaattagcaactacctgaattggtatcagcagaagccagatggcactgtgaaactgc2700tgatctactatacctctagtctgcacagtggggtcccctcacgattcagcggatccggct2760ctgggacagactacagcctgactatctccaacctggagcccgaagatattgccacctact2820attgccagcagtactccaagctgccttatacctttggcgggggaacaaagctggagatta2880aaaggggaggaggaggaagcggaggaggaggatccggaggcgggggatctggaggaggag2940gaagtgaggtgcagctggtcgaatctggaggaggactggtgaagccaggaggatctctga3000aactgagttgtgccgcttcaggcctgaccttctcaagctacgccatgagctgggtgcgac3060agacacctgagaagcggctggaatgggtcgctagcatctcctctggcgggttcacatact3120atccagactccgtgaaaggcagatttactatctctcgggataacgcaagaaatattctgt3180acctgcagatgagttcactgaggagcgaggacaccgcaatgtactattgtgccagggacg3240aagtgcgcggctatctggatgtctggggagctggcactaccgtcaccgtctccagcgagc3300agaaactgattagcgaagaggacctgaaagatgaactgtaacgcgt3346<210>18<211>3938<212>dna<213>人工序列<220><223>mscv启动子-抗人cd7car的合成多核苷酸（th69）-ef1a启动子-抗人cd7<400>18ggaatgaaagaccccacctgtaggtttggcaagctagcttaagtaacgccattttgcaag60gcatggaaaatacataactgagaatagagaagttcagatcaaggttaggaacagagagac120agcagaatatgggccaaacaggatatctgtggtaagcagttcctgccccggctcagggcc180aagaacagatggtccccagatgcggtcccgccctcagcagtttctagagaaccatcagat240gtttccagggtgccccaaggacctgaaatgaccctgtgccttatttgaactaaccaatca300gttcgcttctcgcttctgttcgcgcgcttctgctccccgagctcaataaaagagcccaca360acccctcactcggcgcgccagtccgaattcggcttccaccatggctctgcctgtgactgc420cctgctgctgcccctggccctgctgctgcacgctgctagacccgccgcatacaaggacat480tcagatgactcagactacatccagcctgtcagcttccctgggcgatcgagtgactatcag540ctgttcagcaagccaggggatcagcaattacctgaactggtaccagcagaagcccgacgg600aactgtcaagctgctgatctactatacttccagtctgcatagcggggtccctagccgatt660ctctgggagtggaagcggcaccgactatagcctgaccatttccaacctggaaccagagga720cattgccacctattactgtcagcagtattcaaagctgccctatacctttggcggagggac780taagctggagatcaagcgaggagggggaggatcagggggaggggggagcggaggcggggg840gagtggcggcggagggtcagaagtccagctggtcgagagtgggggcggactggtgaaacc900tgggggctctctgaaactgagctgtgcagccagtggcctgacattctcctcatatgctat960gtcttgggtgcggcagaccccagaaaagagactggagtgggtggcttcaatctcttccgg1020gggcttcacttactatcctgacagcgtgaaaggcagattcactatctccagggataacgc1080acggaatatcctgtatctgcagatgagctcactgagatccgaggacaccgcaatgtacta1140ctgcgcaagagacgaagtgcgggggtatctggacgtgtggggagcaggcactaccgtcac1200cgtgtctagcaccactacacctgcaccaaggcctcccacacccgctcccactatcgcttc1260ccagccactgtccctgaggcccgaggcctgcaggccagcagctggcggagccgtgcatac1320tagggggctggacttcgcttgcgacatctacatctgggccccactggcagggacatgcgg1380agtcctgctgctgtccctggtcatcacactgtactgcaagcgggggcgcaaaaaactgct1440gtatatctttaagcagcctttcatgagaccagtgcagacaacccaggaggaagatgggtg1500ctcatgccggtttcccgaggaggaggaaggcggctgcgagctgagggtgaagttttcccg1560ctcagcagatgctcctgcctaccagcagggccagaaccagctgtataatgagctgaacct1620gggcagacgcgaagagtatgatgtgctggacaaaaggcggggaagagaccccgaaatggg1680agggaagccaaggcggaaaaacccccaggagggcctgtacaatgagctgcagaaggacaa1740aatggcagaggcttacagtgagattgggatgaagggagagagacggaggggaaaagggca1800cgatggcctgtaccaggggctgagcacagcaaccaaagatacttatgacgcactgcacat1860gcaggcactgccacccagatgagtcgacggctccggtgcccgtcagtgggcagagcgcac1920atcgcccacagtccccgagaagttggggggaggggtcggcaattgaaccggtgcctagag1980aaggtggcgcggggtaaactgggaaagtgatgtcgtgtactggctccgcctttttcccga2040gggtgggggagaaccgtatataagtgcagtagtcgccgtgaacgttctttttcgcaacgg2100gtttgccgccagaacacaggtaagtgccgtgtgtggttcccgcgggcctggcctctttac2160gggttatggcccttgcgtgccttgaattacttccacctggctgcagtacgtgattcttga2220tcccgagcttcgggttggaagtgggtgggagagttcgaggccttgcgcttaaggagcccc2280ttcgcctcgtgcttgagttgaggcctggcctgggcgctggggccgccgcgtgcgaatctg2340gtggcaccttcgcgcctgtctcgctgctttcgataagtctctagccatttaaaatttttg2400atgacctgctgcgacgctttttttctggcaagatagtcttgtaaatgcgggccaagatct2460gcacactggtatttcggtttttggggccgcgggcggcgacggggcccgtgcgtcccagcg2520cacatgttcggcgaggcggggcctgcgagcgcggccaccgagaatcggacgggggtagtc2580tcaagctggccggcctgctctggtgcctggcctcgcgccgccgtgtatcgccccgccctg2640ggcggcaaggctggcccggtcggcaccagttgcgtgagcggaaagatggccgcttcccgg2700ccctgctgcagggagctcaaaatggaggacgcggcgctcgggagagcgggcgggtgagtc2760acccacacaaaggaaaagggcctttccgtcctcagccgtcgcttcatgtgactccacgga2820gtaccgggcgccgtccaggcacctcgattagttctcgagcttttggagtacgtcgtcttt2880aggttggggggaggggttttatgcgatggagtttccccacactgagtgggtggagactga2940agttaggccagcttggcacttgatgtaattctccttggaatttgccctttttgagtttgg3000atcttggttcattctcaagcctcagacagtggttcaaagtttttttcttccatttcaggt3060gtcgtgacccgggggcttccaccatggctctgcctgtgaccgcactgctgctgcccctgg3120ctctgctgctgcacgccgcaagacctgccgcatacaaggatattcagatgactcagacca3180caagctccctgagcgcctccctgggagaccgagtgacaatctcttgcagtgcatcacagg3240gaattagcaactacctgaattggtatcagcagaagccagatggcactgtgaaactgctga3300tctactatacctctagtctgcacagtggggtcccctcacgattcagcggatccggctctg3360ggacagactacagcctgactatctccaacctggagcccgaagatattgccacctactatt3420gccagcagtactccaagctgccttatacctttggcgggggaacaaagctggagattaaaa3480ggggaggaggaggaagcggaggaggaggatccggaggcgggggatctggaggaggaggaa3540gtgaggtgcagctggtcgaatctggaggaggactggtgaagccaggaggatctctgaaac3600tgagttgtgccgcttcaggcctgaccttctcaagctacgccatgagctgggtgcgacaga3660cacctgagaagcggctggaatgggtcgctagcatctcctctggcgggttcacatactatc3720cagactccgtgaaaggcagatttactatctctcgggataacgcaagaaatattctgtacc3780tgcagatgagttcactgaggagcgaggacaccgcaatgtactattgtgccagggacgaag3840tgcgcggctatctggatgtctggggagctggcactaccgtcaccgtctccagcgagcaga3900aactgattagcgaagaggacctgaaagatgaactgtaa3938<210>19<211>3132<212>dna<213>人工序列<220><223>mscv启动子-抗人cd7car的合成多核苷酸（th69）-efs启动子-抗人cd7（th69）pebl<400>19ggaatgaaagaccccacctgtaggtttggcaagctagcttaagtaacgccattttgcaag60gcatggaaaatacataactgagaatagagaagttcagatcaaggttaggaacagagagac120agcagaatatgggccaaacaggatatctgtggtaagcagttcctgccccggctcagggcc180aagaacagatggtccccagatgcggtcccgccctcagcagtttctagagaaccatcagat240gtttccagggtgccccaaggacctgaaatgaccctgtgccttatttgaactaaccaatca300gttcgcttctcgcttctgttcgcgcgcttctgctccccgagctcaataaaagagcccaca360acccctcactcggcgcgccagtccgaattcggcttccaccatggctctgcctgtgactgc420cctgctgctgcccctggccctgctgctgcacgctgctagacccgccgcatacaaggacat480tcagatgactcagactacatccagcctgtcagcttccctgggcgatcgagtgactatcag540ctgttcagcaagccaggggatcagcaattacctgaactggtaccagcagaagcccgacgg600aactgtcaagctgctgatctactatacttccagtctgcatagcggggtccctagccgatt660ctctgggagtggaagcggcaccgactatagcctgaccatttccaacctggaaccagagga720cattgccacctattactgtcagcagtattcaaagctgccctatacctttggcggagggac780taagctggagatcaagcgaggagggggaggatcagggggaggggggagcggaggcggggg840gagtggcggcggagggtcagaagtccagctggtcgagagtgggggcggactggtgaaacc900tgggggctctctgaaactgagctgtgcagccagtggcctgacattctcctcatatgctat960gtcttgggtgcggcagaccccagaaaagagactggagtgggtggcttcaatctcttccgg1020gggcttcacttactatcctgacagcgtgaaaggcagattcactatctccagggataacgc1080acggaatatcctgtatctgcagatgagctcactgagatccgaggacaccgcaatgtacta1140ctgcgcaagagacgaagtgcgggggtatctggacgtgtggggagcaggcactaccgtcac1200cgtgtctagcaccactacacctgcaccaaggcctcccacacccgctcccactatcgcttc1260ccagccactgtccctgaggcccgaggcctgcaggccagcagctggcggagccgtgcatac1320tagggggctggacttcgcttgcgacatctacatctgggccccactggcagggacatgcgg1380agtcctgctgctgtccctggtcatcacactgtactgcaagcgggggcgcaaaaaactgct1440gtatatctttaagcagcctttcatgagaccagtgcagacaacccaggaggaagatgggtg1500ctcatgccggtttcccgaggaggaggaaggcggctgcgagctgagggtgaagttttcccg1560ctcagcagatgctcctgcctaccagcagggccagaaccagctgtataatgagctgaacct1620gggcagacgcgaagagtatgatgtgctggacaaaaggcggggaagagaccccgaaatggg1680agggaagccaaggcggaaaaacccccaggagggcctgtacaatgagctgcagaaggacaa1740aatggcagaggcttacagtgagattgggatgaagggagagagacggaggggaaaagggca1800cgatggcctgtaccaggggctgagcacagcaaccaaagatacttatgacgcactgcacat1860gcaggcactgccacccagatgagtcgacgggcagagcgcacatcgcccacagtccccgag1920aagttggggggaggggtcggcaattgaaccggtgcctagagaaggtggcgcggggtaaac1980tgggaaagtgatgtcgtgtactggctccgcctttttcccgagggtgggggagaaccgtat2040ataagtgcagtagtcgccgtgaacgttctttttcgcaacgggtttgccgccagaacacag2100gtgtcgtgaccgcgggtctagaggatccggtactcgaggaactgaaaaaccagaaagtta2160actggtaagtttagtctttttgtcttttatttcaggtcccggatccggtggtggtgcaaa2220tcaaagaactgctcctcagtggatgttgcctttacttctagcccgggggcttccaccatg2280gctctgcctgtgaccgcactgctgctgcccctggctctgctgctgcacgccgcaagacct2340gccgcatacaaggatattcagatgactcagaccacaagctccctgagcgcctccctggga2400gaccgagtgacaatctcttgcagtgcatcacagggaattagcaactacctgaattggtat2460cagcagaagccagatggcactgtgaaactgctgatctactatacctctagtctgcacagt2520ggggtcccctcacgattcagcggatccggctctgggacagactacagcctgactatctcc2580aacctggagcccgaagatattgccacctactattgccagcagtactccaagctgccttat2640acctttggcgggggaacaaagctggagattaaaaggggaggaggaggaagcggaggagga2700ggatccggaggcgggggatctggaggaggaggaagtgaggtgcagctggtcgaatctgga2760ggaggactggtgaagccaggaggatctctgaaactgagttgtgccgcttcaggcctgacc2820ttctcaagctacgccatgagctgggtgcgacagacacctgagaagcggctggaatgggtc2880gctagcatctcctctggcgggttcacatactatccagactccgtgaaaggcagatttact2940atctctcgggataacgcaagaaatattctgtacctgcagatgagttcactgaggagcgag3000gacaccgcaatgtactattgtgccagggacgaagtgcgcggctatctggatgtctgggga3060gctggcactaccgtcaccgtctccagcgagcagaaactgattagcgaagaggacctgaaa3120gatgaactgtaa3132<210>20<211>4057<212>dna<213>人工序列<220><223>pgk启动子-抗人cd7car的合成多核苷酸（3a1f）-ef1a启动子-抗人cd7（th69）pebl<400>20attctaccgggtaggggaggcgcttttcccaaggcagtctggagcatgcgctttagcagc60cccgctgggcacttggcgctacacaagtggcctctggcctcgcacacattccacatccac120cggtaggcgccaaccggctccgttctttggtggccccttcgcgccaccttctactcctcc180cctagtcaggaagttcccccccgccccgcagctcgcgtcgtgcaggacgtgacaaatgga240agtagcacgtctcactagtctcgtgcagatggacagcaccgctgagcaatggaagcgggt300aggcctttggggcagcggccaatagcagctttgctccttcgctttctgggctcagaggct360gggaaggggtgggtccgggggcgggctcaggggcgggctcaggggcggggcgggcgcccg420aaggtcctccggaggcccggcattctgcacgcttcaaaagcgcacgtctgccgcgctgtt480ctcctcttcctcatctccgggcctttcgagaattcggcttccaccatggctctgcccgtc540accgctctgctgctgcctctggctctgctgctgcacgctgctcgaccacaggtccagctg600caggagtcaggagctgagctggtgaagccaggggcaagcgtcaaactgtcctgcaaggcc660tctggatatacattcactagctactggatgcactgggtgaaacagagacccggacagggc720ctggagtggatcggaaagattaaccctagcaatggcaggaccaactacaacgaaaagttt780aaatccaaggcaaccctgacagtggacaagagctcctctacagcctacatgcagctgagt840tcactgacttcagaggatagcgcagtgtactattgcgccagaggcggggtctactatgac900ctgtactattacgccctggattattgggggcagggaaccacagtgactgtcagctccgga960ggaggaggaagcggaggaggaggatccggaggaggaggatctgacatcgagctgacccag1020agtcctgctacactgagcgtgactccaggcgattctgtcagtctgtcatgtcgggcaagc1080cagtccatctctaacaatctgcactggtaccagcagaaatcccatgaatctccacgactg1140ctgattaagagtgcctcacagagcatctccggcattccctcccggttctctggcagtggg1200tcaggaactgactttaccctgagtattaactcagtggagacagaagatttcggcatgtat1260ttttgccagcagagcaattcctggccctacactttcggaggcgggaccaaactggagatc1320aagcggactaccacaccagctccaagaccacctacccctgcaccaacaattgctagtcag1380ccactgtcactgagaccagaagcatgtaggcctgcagctggaggagctgtgcacaccaga1440ggcctggactttgcctgcgatatctacatttgggctcctctggcaggaacctgtggcgtg1500ctgctgctgtctctggtcatcacactgtattgcaaacgagggcggaagaaactgctgtac1560attttcaagcagccctttatgaggcctgtgcagactacccaggaggaagacggctgcagc1620tgtcgcttccctgaggaagaggaagggggatgtgagctgcgcgtcaaattttctcgaagt1680gcagatgccccagcttatcagcagggccagaaccagctgtacaacgagctgaatctgggg1740cggagagaggaatatgacgtgctggataagaggcgaggaagggacccagaaatgggaggg1800aaaccacgacggaagaacccccaggagggcctgtataatgaactgcagaaagacaagatg1860gcagaggcctactctgaaatcgggatgaaaggagagagaaggcgcggcaaggggcatgat1920ggcctgtaccaggggctgagcacagcaaccaaagacacctatgacgcactgcacatgcag1980gcactgccaccacggtaatgagtcgacggctccggtgcccgtcagtgggcagagcgcaca2040tcgcccacagtccccgagaagttggggggaggggtcggcaattgaaccggtgcctagaga2100aggtggcgcggggtaaactgggaaagtgatgtcgtgtactggctccgcctttttcccgag2160ggtgggggagaaccgtatataagtgcagtagtcgccgtgaacgttctttttcgcaacggg2220tttgccgccagaacacaggtaagtgccgtgtgtggttcccgcgggcctggcctctttacg2280ggttatggcccttgcgtgccttgaattacttccacctggctgcagtacgtgattcttgat2340cccgagcttcgggttggaagtgggtgggagagttcgaggccttgcgcttaaggagcccct2400tcgcctcgtgcttgagttgaggcctggcctgggcgctggggccgccgcgtgcgaatctgg2460tggcaccttcgcgcctgtctcgctgctttcgataagtctctagccatttaaaatttttga2520tgacctgctgcgacgctttttttctggcaagatagtcttgtaaatgcgggccaagatctg2580cacactggtatttcggtttttggggccgcgggcggcgacggggcccgtgcgtcccagcgc2640acatgttcggcgaggcggggcctgcgagcgcggccaccgagaatcggacgggggtagtct2700caagctggccggcctgctctggtgcctggcctcgcgccgccgtgtatcgccccgccctgg2760gcggcaaggctggcccggtcggcaccagttgcgtgagcggaaagatggccgcttcccggc2820cctgctgcagggagctcaaaatggaggacgcggcgctcgggagagcgggcgggtgagtca2880cccacacaaaggaaaagggcctttccgtcctcagccgtcgcttcatgtgactccacggag2940taccgggcgccgtccaggcacctcgattagttctcgagcttttggagtacgtcgtcttta3000ggttggggggaggggttttatgcgatggagtttccccacactgagtgggtggagactgaa3060gttaggccagcttggcacttgatgtaattctccttggaatttgccctttttgagtttgga3120tcttggttcattctcaagcctcagacagtggttcaaagtttttttcttccatttcaggtg3180tcgtgacccgggggcttccaccatggctctgcctgtgaccgcactgctgctgcccctggc3240tctgctgctgcacgccgcaagacctgccgcatacaaggatattcagatgactcagaccac3300aagctccctgagcgcctccctgggagaccgagtgacaatctcttgcagtgcatcacaggg3360aattagcaactacctgaattggtatcagcagaagccagatggcactgtgaaactgctgat3420ctactatacctctagtctgcacagtggggtcccctcacgattcagcggatccggctctgg3480gacagactacagcctgactatctccaacctggagcccgaagatattgccacctactattg3540ccagcagtactccaagctgccttatacctttggcgggggaacaaagctggagattaaaag3600gggaggaggaggaagcggaggaggaggatccggaggcgggggatctggaggaggaggaag3660tgaggtgcagctggtcgaatctggaggaggactggtgaagccaggaggatctctgaaact3720gagttgtgccgcttcaggcctgaccttctcaagctacgccatgagctgggtgcgacagac3780acctgagaagcggctggaatgggtcgctagcatctcctctggcgggttcacatactatcc3840agactccgtgaaaggcagatttactatctctcgggataacgcaagaaatattctgtacct3900gcagatgagttcactgaggagcgaggacaccgcaatgtactattgtgccagggacgaagt3960gcgcggctatctggatgtctggggagctggcactaccgtcaccgtctccagcgagcagaa4020actgattagcgaagaggacctgaaagatgaactgtaa4057<210>21<211>4054<212>dna<213>人工序列<220><223>pgk启动子-抗人cd7car的合成多核苷酸（th69）-ef1a启动子-抗人cd7（3a1f）pebl<400>21attctaccgggtaggggaggcgcttttcccaaggcagtctggagcatgcgctttagcagc60cccgctgggcacttggcgctacacaagtggcctctggcctcgcacacattccacatccac120cggtaggcgccaaccggctccgttctttggtggccccttcgcgccaccttctactcctcc180cctagtcaggaagttcccccccgccccgcagctcgcgtcgtgcaggacgtgacaaatgga240agtagcacgtctcactagtctcgtgcagatggacagcaccgctgagcaatggaagcgggt300aggcctttggggcagcggccaatagcagctttgctccttcgctttctgggctcagaggct360gggaaggggtgggtccgggggcgggctcaggggcgggctcaggggcggggcgggcgcccg420aaggtcctccggaggcccggcattctgcacgcttcaaaagcgcacgtctgccgcgctgtt480ctcctcttcctcatctccgggcctttcgagaattcggcttccaccatggctctgcctgtg540actgccctgctgctgcccctggccctgctgctgcacgctgctagacccgccgcatacaag600gacattcagatgactcagactacatccagcctgtcagcttccctgggcgatcgagtgact660atcagctgttcagcaagccaggggatcagcaattacctgaactggtaccagcagaagccc720gacggaactgtcaagctgctgatctactatacttccagtctgcatagcggggtccctagc780cgattctctgggagtggaagcggcaccgactatagcctgaccatttccaacctggaacca840gaggacattgccacctattactgtcagcagtattcaaagctgccctatacctttggcgga900gggactaagctggagatcaagcgaggagggggaggatcagggggaggggggagcggaggc960ggggggagtggcggcggagggtcagaagtccagctggtcgagagtgggggcggactggtg1020aaacctgggggctctctgaaactgagctgtgcagccagtggcctgacattctcctcatat1080gctatgtcttgggtgcggcagaccccagaaaagagactggagtgggtggcttcaatctct1140tccgggggcttcacttactatcctgacagcgtgaaaggcagattcactatctccagggat1200aacgcacggaatatcctgtatctgcagatgagctcactgagatccgaggacaccgcaatg1260tactactgcgcaagagacgaagtgcgggggtatctggacgtgtggggagcaggcactacc1320gtcaccgtgtctagcaccactacacctgcaccaaggcctcccacacccgctcccactatc1380gcttcccagccactgtccctgaggcccgaggcctgcaggccagcagctggcggagccgtg1440catactagggggctggacttcgcttgcgacatctacatctgggccccactggcagggaca1500tgcggagtcctgctgctgtccctggtcatcacactgtactgcaagcgggggcgcaaaaaa1560ctgctgtatatctttaagcagcctttcatgagaccagtgcagacaacccaggaggaagat1620gggtgctcatgccggtttcccgaggaggaggaaggcggctgcgagctgagggtgaagttt1680tcccgctcagcagatgctcctgcctaccagcagggccagaaccagctgtataatgagctg1740aacctgggcagacgcgaagagtatgatgtgctggacaaaaggcggggaagagaccccgaa1800atgggagggaagccaaggcggaaaaacccccaggagggcctgtacaatgagctgcagaag1860gacaaaatggcagaggcttacagtgagattgggatgaagggagagagacggaggggaaaa1920gggcacgatggcctgtaccaggggctgagcacagcaaccaaagatacttatgacgcactg1980cacatgcaggcactgccacccagatgagtcgacggctccggtgcccgtcagtgggcagag2040cgcacatcgcccacagtccccgagaagttggggggaggggtcggcaattgaaccggtgcc2100tagagaaggtggcgcggggtaaactgggaaagtgatgtcgtgtactggctccgccttttt2160cccgagggtgggggagaaccgtatataagtgcagtagtcgccgtgaacgttctttttcgc2220aacgggtttgccgccagaacacaggtaagtgccgtgtgtggttcccgcgggcctggcctc2280tttacgggttatggcccttgcgtgccttgaattacttccacctggctgcagtacgtgatt2340cttgatcccgagcttcgggttggaagtgggtgggagagttcgaggccttgcgcttaagga2400gccccttcgcctcgtgcttgagttgaggcctggcctgggcgctggggccgccgcgtgcga2460atctggtggcaccttcgcgcctgtctcgctgctttcgataagtctctagccatttaaaat2520ttttgatgacctgctgcgacgctttttttctggcaagatagtcttgtaaatgcgggccaa2580gatctgcacactggtatttcggtttttggggccgcgggcggcgacggggcccgtgcgtcc2640cagcgcacatgttcggcgaggcggggcctgcgagcgcggccaccgagaatcggacggggg2700tagtctcaagctggccggcctgctctggtgcctggcctcgcgccgccgtgtatcgccccg2760ccctgggcggcaaggctggcccggtcggcaccagttgcgtgagcggaaagatggccgctt2820cccggccctgctgcagggagctcaaaatggaggacgcggcgctcgggagagcgggcgggt2880gagtcacccacacaaaggaaaagggcctttccgtcctcagccgtcgcttcatgtgactcc2940acggagtaccgggcgccgtccaggcacctcgattagttctcgagcttttggagtacgtcg3000tctttaggttggggggaggggttttatgcgatggagtttccccacactgagtgggtggag3060actgaagttaggccagcttggcacttgatgtaattctccttggaatttgccctttttgag3120tttggatcttggttcattctcaagcctcagacagtggttcaaagtttttttcttccattt3180caggtgtcgtgacccgggggcttccaccatggctctgcccgtcaccgctctgctgctgcc3240tctggctctgctgctgcacgccgcaagaccccaggtccagctgcaggagtcaggggcaga3300gctggtgaaacccggagccagtgtcaaactgtcctgtaaggccagcggctatactttcac3360cagctactggatgcactgggtgaaacagaggccaggacagggcctggagtggatcggcaa3420gattaaccccagcaatgggcgcaccaactacaacgaaaagtttaaatccaaggctacact3480gactgtggacaagagctcctctaccgcatacatgcagctgagttcactgacatctgaaga3540tagtgccgtgtactattgcgccagaggcggggtctactatgacctgtactattacgcact3600ggattattgggggcagggaaccacagtgactgtcagctccggaggaggaggatccggcgg3660aggaggctctgggggaggcgggagtgacatcgagctgacacagtctccagccactctgag3720cgtgacccctggcgattctgtcagtctgtcatgtagagctagccagtccatctctaacaa3780tctgcactggtaccagcagaaatcacatgaaagccctcggctgctgattaagagtgcttc3840acagagcatctccgggattccaagcagattctctggcagtgggtcaggaaccgactttac3900actgtccattaactctgtggagaccgaagatttcggcatgtatttttgccagcagagcaa3960ttcctggccttacacattcggaggcgggactaaactggagattaagagggagcagaaact4020gattagcgaagaggacctgaaggacgaactgtga4054<210>22<211>4063<212>dna<213>人工序列<220><223>pgk启动子-抗人cd7car的合成多核苷酸（th69）-ef1a启动子-抗人cd7（th69）pebl<400>22attctaccgggtaggggaggcgcttttcccaaggcagtctggagcatgcgctttagcagc60cccgctgggcacttggcgctacacaagtggcctctggcctcgcacacattccacatccac120cggtaggcgccaaccggctccgttctttggtggccccttcgcgccaccttctactcctcc180cctagtcaggaagttcccccccgccccgcagctcgcgtcgtgcaggacgtgacaaatgga240agtagcacgtctcactagtctcgtgcagatggacagcaccgctgagcaatggaagcgggt300aggcctttggggcagcggccaatagcagctttgctccttcgctttctgggctcagaggct360gggaaggggtgggtccgggggcgggctcaggggcgggctcaggggcggggcgggcgcccg420aaggtcctccggaggcccggcattctgcacgcttcaaaagcgcacgtctgccgcgctgtt480ctcctcttcctcatctccgggcctttcgagaattcggcttccaccatggctctgcctgtg540actgccctgctgctgcccctggccctgctgctgcacgctgctagacccgccgcatacaag600gacattcagatgactcagactacatccagcctgtcagcttccctgggcgatcgagtgact660atcagctgttcagcaagccaggggatcagcaattacctgaactggtaccagcagaagccc720gacggaactgtcaagctgctgatctactatacttccagtctgcatagcggggtccctagc780cgattctctgggagtggaagcggcaccgactatagcctgaccatttccaacctggaacca840gaggacattgccacctattactgtcagcagtattcaaagctgccctatacctttggcgga900gggactaagctggagatcaagcgaggagggggaggatcagggggaggggggagcggaggc960ggggggagtggcggcggagggtcagaagtccagctggtcgagagtgggggcggactggtg1020aaacctgggggctctctgaaactgagctgtgcagccagtggcctgacattctcctcatat1080gctatgtcttgggtgcggcagaccccagaaaagagactggagtgggtggcttcaatctct1140tccgggggcttcacttactatcctgacagcgtgaaaggcagattcactatctccagggat1200aacgcacggaatatcctgtatctgcagatgagctcactgagatccgaggacaccgcaatg1260tactactgcgcaagagacgaagtgcgggggtatctggacgtgtggggagcaggcactacc1320gtcaccgtgtctagcaccactacacctgcaccaaggcctcccacacccgctcccactatc1380gcttcccagccactgtccctgaggcccgaggcctgcaggccagcagctggcggagccgtg1440catactagggggctggacttcgcttgcgacatctacatctgggccccactggcagggaca1500tgcggagtcctgctgctgtccctggtcatcacactgtactgcaagcgggggcgcaaaaaa1560ctgctgtatatctttaagcagcctttcatgagaccagtgcagacaacccaggaggaagat1620gggtgctcatgccggtttcccgaggaggaggaaggcggctgcgagctgagggtgaagttt1680tcccgctcagcagatgctcctgcctaccagcagggccagaaccagctgtataatgagctg1740aacctgggcagacgcgaagagtatgatgtgctggacaaaaggcggggaagagaccccgaa1800atgggagggaagccaaggcggaaaaacccccaggagggcctgtacaatgagctgcagaag1860gacaaaatggcagaggcttacagtgagattgggatgaagggagagagacggaggggaaaa1920gggcacgatggcctgtaccaggggctgagcacagcaaccaaagatacttatgacgcactg1980cacatgcaggcactgccacccagatgagtcgacggctccggtgcccgtcagtgggcagag2040cgcacatcgcccacagtccccgagaagttggggggaggggtcggcaattgaaccggtgcc2100tagagaaggtggcgcggggtaaactgggaaagtgatgtcgtgtactggctccgccttttt2160cccgagggtgggggagaaccgtatataagtgcagtagtcgccgtgaacgttctttttcgc2220aacgggtttgccgccagaacacaggtaagtgccgtgtgtggttcccgcgggcctggcctc2280tttacgggttatggcccttgcgtgccttgaattacttccacctggctgcagtacgtgatt2340cttgatcccgagcttcgggttggaagtgggtgggagagttcgaggccttgcgcttaagga2400gccccttcgcctcgtgcttgagttgaggcctggcctgggcgctggggccgccgcgtgcga2460atctggtggcaccttcgcgcctgtctcgctgctttcgataagtctctagccatttaaaat2520ttttgatgacctgctgcgacgctttttttctggcaagatagtcttgtaaatgcgggccaa2580gatctgcacactggtatttcggtttttggggccgcgggcggcgacggggcccgtgcgtcc2640cagcgcacatgttcggcgaggcggggcctgcgagcgcggccaccgagaatcggacggggg2700tagtctcaagctggccggcctgctctggtgcctggcctcgcgccgccgtgtatcgccccg2760ccctgggcggcaaggctggcccggtcggcaccagttgcgtgagcggaaagatggccgctt2820cccggccctgctgcagggagctcaaaatggaggacgcggcgctcgggagagcgggcgggt2880gagtcacccacacaaaggaaaagggcctttccgtcctcagccgtcgcttcatgtgactcc2940acggagtaccgggcgccgtccaggcacctcgattagttctcgagcttttggagtacgtcg3000tctttaggttggggggaggggttttatgcgatggagtttccccacactgagtgggtggag3060actgaagttaggccagcttggcacttgatgtaattctccttggaatttgccctttttgag3120tttggatcttggttcattctcaagcctcagacagtggttcaaagtttttttcttccattt3180caggtgtcgtgacccgggggcttccaccatggctctgcctgtgaccgcactgctgctgcc3240cctggctctgctgctgcacgccgcaagacctgccgcatacaaggatattcagatgactca3300gaccacaagctccctgagcgcctccctgggagaccgagtgacaatctcttgcagtgcatc3360acagggaattagcaactacctgaattggtatcagcagaagccagatggcactgtgaaact3420gctgatctactatacctctagtctgcacagtggggtcccctcacgattcagcggatccgg3480ctctgggacagactacagcctgactatctccaacctggagcccgaagatattgccaccta3540ctattgccagcagtactccaagctgccttatacctttggcgggggaacaaagctggagat3600taaaaggggaggaggaggaagcggaggaggaggatccggaggcgggggatctggaggagg3660aggaagtgaggtgcagctggtcgaatctggaggaggactggtgaagccaggaggatctct3720gaaactgagttgtgccgcttcaggcctgaccttctcaagctacgccatgagctgggtgcg3780acagacacctgagaagcggctggaatgggtcgctagcatctcctctggcgggttcacata3840ctatccagactccgtgaaaggcagatttactatctctcgggataacgcaagaaatattct3900gtacctgcagatgagttcactgaggagcgaggacaccgcaatgtactattgtgccaggga3960cgaagtgcgcggctatctggatgtctggggagctggcactaccgtcaccgtctccagcga4020gcagaaactgattagcgaagaggacctgaaagatgaactgtaa4063<210>23<211>3257<212>dna<213>人工序列<220><223>pgk启动子-抗人cd7car的合成多核苷酸（th69）-efs启动子-抗人cd7（th69）pebl<400>23attctaccgggtaggggaggcgcttttcccaaggcagtctggagcatgcgctttagcagc60cccgctgggcacttggcgctacacaagtggcctctggcctcgcacacattccacatccac120cggtaggcgccaaccggctccgttctttggtggccccttcgcgccaccttctactcctcc180cctagtcaggaagttcccccccgccccgcagctcgcgtcgtgcaggacgtgacaaatgga240agtagcacgtctcactagtctcgtgcagatggacagcaccgctgagcaatggaagcgggt300aggcctttggggcagcggccaatagcagctttgctccttcgctttctgggctcagaggct360gggaaggggtgggtccgggggcgggctcaggggcgggctcaggggcggggcgggcgcccg420aaggtcctccggaggcccggcattctgcacgcttcaaaagcgcacgtctgccgcgctgtt480ctcctcttcctcatctccgggcctttcgagaattcggcttccaccatggctctgcctgtg540actgccctgctgctgcccctggccctgctgctgcacgctgctagacccgccgcatacaag600gacattcagatgactcagactacatccagcctgtcagcttccctgggcgatcgagtgact660atcagctgttcagcaagccaggggatcagcaattacctgaactggtaccagcagaagccc720gacggaactgtcaagctgctgatctactatacttccagtctgcatagcggggtccctagc780cgattctctgggagtggaagcggcaccgactatagcctgaccatttccaacctggaacca840gaggacattgccacctattactgtcagcagtattcaaagctgccctatacctttggcgga900gggactaagctggagatcaagcgaggagggggaggatcagggggaggggggagcggaggc960ggggggagtggcggcggagggtcagaagtccagctggtcgagagtgggggcggactggtg1020aaacctgggggctctctgaaactgagctgtgcagccagtggcctgacattctcctcatat1080gctatgtcttgggtgcggcagaccccagaaaagagactggagtgggtggcttcaatctct1140tccgggggcttcacttactatcctgacagcgtgaaaggcagattcactatctccagggat1200aacgcacggaatatcctgtatctgcagatgagctcactgagatccgaggacaccgcaatg1260tactactgcgcaagagacgaagtgcgggggtatctggacgtgtggggagcaggcactacc1320gtcaccgtgtctagcaccactacacctgcaccaaggcctcccacacccgctcccactatc1380gcttcccagccactgtccctgaggcccgaggcctgcaggccagcagctggcggagccgtg1440catactagggggctggacttcgcttgcgacatctacatctgggccccactggcagggaca1500tgcggagtcctgctgctgtccctggtcatcacactgtactgcaagcgggggcgcaaaaaa1560ctgctgtatatctttaagcagcctttcatgagaccagtgcagacaacccaggaggaagat1620gggtgctcatgccggtttcccgaggaggaggaaggcggctgcgagctgagggtgaagttt1680tcccgctcagcagatgctcctgcctaccagcagggccagaaccagctgtataatgagctg1740aacctgggcagacgcgaagagtatgatgtgctggacaaaaggcggggaagagaccccgaa1800atgggagggaagccaaggcggaaaaacccccaggagggcctgtacaatgagctgcagaag1860gacaaaatggcagaggcttacagtgagattgggatgaagggagagagacggaggggaaaa1920gggcacgatggcctgtaccaggggctgagcacagcaaccaaagatacttatgacgcactg1980cacatgcaggcactgccacccagatgagtcgacgggcagagcgcacatcgcccacagtcc2040ccgagaagttggggggaggggtcggcaattgaaccggtgcctagagaaggtggcgcgggg2100taaactgggaaagtgatgtcgtgtactggctccgcctttttcccgagggtgggggagaac2160cgtatataagtgcagtagtcgccgtgaacgttctttttcgcaacgggtttgccgccagaa2220cacaggtgtcgtgaccgcgggtctagaggatccggtactcgaggaactgaaaaaccagaa2280agttaactggtaagtttagtctttttgtcttttatttcaggtcccggatccggtggtggt2340gcaaatcaaagaactgctcctcagtggatgttgcctttacttctagcccgggggcttcca2400ccatggctctgcctgtgaccgcactgctgctgcccctggctctgctgctgcacgccgcaa2460gacctgccgcatacaaggatattcagatgactcagaccacaagctccctgagcgcctccc2520tgggagaccgagtgacaatctcttgcagtgcatcacagggaattagcaactacctgaatt2580ggtatcagcagaagccagatggcactgtgaaactgctgatctactatacctctagtctgc2640acagtggggtcccctcacgattcagcggatccggctctgggacagactacagcctgacta2700tctccaacctggagcccgaagatattgccacctactattgccagcagtactccaagctgc2760cttatacctttggcgggggaacaaagctggagattaaaaggggaggaggaggaagcggag2820gaggaggatccggaggcgggggatctggaggaggaggaagtgaggtgcagctggtcgaat2880ctggaggaggactggtgaagccaggaggatctctgaaactgagttgtgccgcttcaggcc2940tgaccttctcaagctacgccatgagctgggtgcgacagacacctgagaagcggctggaat3000gggtcgctagcatctcctctggcgggttcacatactatccagactccgtgaaaggcagat3060ttactatctctcgggataacgcaagaaatattctgtacctgcagatgagttcactgagga3120gcgaggacaccgcaatgtactattgtgccagggacgaagtgcgcggctatctggatgtct3180ggggagctggcactaccgtcaccgtctccagcgagcagaaactgattagcgaagaggacc3240tgaaagatgaactgtaa3257<210>24<211>284<212>prt<213>人工序列<220><223>抗cd7（th69）pebl的合成多肽<400>24metalaleuprovalthralaleuleuleuproleualaleuleuleu151015hisalaalaargproalaalatyrlysaspileglnmetthrglnthr202530thrserserleuseralaserleuglyaspargvalthrilesercys354045seralaserglnglyileserasntyrleuasntrptyrglnglnlys505560proaspglythrvallysleuleuiletyrtyrthrserserleuhis65707580serglyvalproserargpheserglyserglyserglythrasptyr859095serleuthrileserasnleugluprogluaspilealathrtyrtyr100105110cysglnglntyrserlysleuprotyrthrpheglyglyglythrlys115120125leugluilelysargglyglyglyglyserglyglyglyglysergly130135140glyglyglyserglyglyglyglysergluvalglnleuvalgluser145150155160glyglyglyleuvallysproglyglyserleulysleusercysala165170175alaserglyleuthrphesersertyralametsertrpvalarggln180185190thrproglulysargleuglutrpvalalaserileserserglygly195200205phethrtyrtyrproaspservallysglyargphethrileserarg210215220aspasnalaargasnileleutyrleuglnmetserserleuargser225230235240gluaspthralamettyrtyrcysalaargaspgluvalargglytyr245250255leuaspvaltrpglyalaglythrthrvalthrvalserserglugln260265270lysleuileserglugluaspleulysaspgluleu275280<210>25<211>285<212>prt<213>人工序列<220><223>抗cd7（th69）pebl变体的合成多肽<400>25prometalaleuprovalthralaleuleuleuproleualaleuleu151015leuhisalaalaargproalaalatyrlysaspileglnmetthrgln202530thrthrserserleuseralaserleuglyaspargvalthrileser354045cysseralaserglnglyileserasntyrleuasntrptyrglngln505560lysproaspglythrvallysleuleuiletyrtyrthrserserleu65707580hisserglyvalproserargpheserglyserglyserglythrasp859095tyrserleuthrileserasnleugluprogluaspilealathrtyr100105110tyrcysglnglntyrserlysleuprotyrthrpheglyglyglythr115120125lysleugluilelysargglyglyglyglyserglyglyglyglyser130135140glyglyglyglyserglyglyglyglysergluvalglnleuvalglu145150155160serglyglyglyleuvallysproglyglyserleulysleusercys165170175alaalaserglyleuthrphesersertyralametsertrpvalarg180185190glnthrproglulysargleuglutrpvalalaserilesersergly195200205glyphethrtyrtyrproaspservallysglyargphethrileser210215220argaspasnalaargasnileleutyrleuglnmetserserleuarg225230235240sergluaspthralamettyrtyrcysalaargaspgluvalarggly245250255tyrleuaspvaltrpglyalaglythrthrvalthrvalserserglu260265270glnlysleuileserglugluaspleulysaspgluleu275280285<210>26<211>281<212>prt<213>人工序列<220><223>抗人cd7（3a1f）pebl的合成多肽<400>26metalaleuprovalthralaleuleuleuproleualaleuleuleu151015hisalaalaargproglnvalglnleuglngluserglyalagluleu202530vallysproglyalaservallysleusercyslysalaserglytyr354045thrphethrsertyrtrpmethistrpvallysglnargproglygln505560glyleuglutrpileglylysileasnproserasnglyargthrasn65707580tyrasnglulysphelysserlysalathrleuthrvalasplysser859095serserthralatyrmetglnleuserserleuthrsergluaspser100105110alavaltyrtyrcysalaargglyglyvaltyrtyraspleutyrtyr115120125tyralaleuasptyrtrpglyglnglythrthrvalthrvalserser130135140glyglyglyglyserglyglyglyglyserglyglyglyglyserasp145150155160ilegluleuthrglnserproalathrleuservalthrproglyasp165170175servalserleusercysargalaserglnserileserasnasnleu180185190histrptyrglnglnlysserhisgluserproargleuleuilelys195200205seralaserglnserileserglyileproserargpheserglyser210215220glyserglythraspphethrleuserileasnservalgluthrglu225230235240asppheglymettyrphecysglnglnserasnsertrpprotyrthr245250255pheglyglyglythrlysleugluilelysarggluglnlysleuile260265270serglugluaspleulysaspgluleu275280<210>27<211>282<212>prt<213>人工序列<220><223>抗人cd7（3a1f）pebl变体的合成多肽<400>27prometalaleuprovalthralaleuleuleuproleualaleuleu151015leuhisalaalaargproglnvalglnleuglngluserglyalaglu202530leuvallysproglyalaservallysleusercyslysalasergly354045tyrthrphethrsertyrtrpmethistrpvallysglnargprogly505560glnglyleuglutrpileglylysileasnproserasnglyargthr65707580asntyrasnglulysphelysserlysalathrleuthrvalasplys859095serserserthralatyrmetglnleuserserleuthrsergluasp100105110seralavaltyrtyrcysalaargglyglyvaltyrtyraspleutyr115120125tyrtyralaleuasptyrtrpglyglnglythrthrvalthrvalser130135140serglyglyglyglyserglyglyglyglyserglyglyglyglyser145150155160aspilegluleuthrglnserproalathrleuservalthrprogly165170175aspservalserleusercysargalaserglnserileserasnasn180185190leuhistrptyrglnglnlysserhisgluserproargleuleuile195200205lysseralaserglnserileserglyileproserargphesergly210215220serglyserglythraspphethrleuserileasnservalgluthr225230235240gluasppheglymettyrphecysglnglnserasnsertrpprotyr245250255thrpheglyglyglythrlysleugluilelysarggluglnlysleu260265270ileserglugluaspleulysaspgluleu275280<210>28<211>493<212>prt<213>人工序列<220><223>抗人cd7（th69）car的合成多肽<400>28metalaleuprovalthralaleuleuleuproleualaleuleuleu151015hisalaalaargproalaalatyrlysaspileglnmetthrglnthr202530thrserserleuseralaserleuglyaspargvalthrilesercys354045seralaserglnglyileserasntyrleuasntrptyrglnglnlys505560proaspglythrvallysleuleuiletyrtyrthrserserleuhis65707580serglyvalproserargpheserglyserglyserglythrasptyr859095serleuthrileserasnleugluprogluaspilealathrtyrtyr100105110cysglnglntyrserlysleuprotyrthrpheglyglyglythrlys115120125leugluilelysargglyglyglyglyserglyglyglyglysergly130135140glyglyglyserglyglyglyglysergluvalglnleuvalgluser145150155160glyglyglyleuvallysproglyglyserleulysleusercysala165170175alaserglyleuthrphesersertyralametsertrpvalarggln180185190thrproglulysargleuglutrpvalalaserileserserglygly195200205phethrtyrtyrproaspservallysglyargphethrileserarg210215220aspasnalaargasnileleutyrleuglnmetserserleuargser225230235240gluaspthralamettyrtyrcysalaargaspgluvalargglytyr245250255leuaspvaltrpglyalaglythrthrvalthrvalserserthrthr260265270thrproalaproargproprothrproalaprothrilealasergln275280285proleuserleuargproglualacysargproalaalaglyglyala290295300valhisthrargglyleuaspphealacysaspiletyriletrpala305310315320proleualaglythrcysglyvalleuleuleuserleuvalilethr325330335leutyrcyslysargglyarglyslysleuleutyrilephelysgln340345350prophemetargprovalglnthrthrglnglugluaspglycysser355360365cysargpheproglugluglugluglyglycysgluleuargvallys370375380pheserargseralaaspalaproalatyrglnglnglyglnasngln385390395400leutyrasngluleuasnleuglyargarggluglutyraspvalleu405410415asplysargargglyargaspproglumetglyglylysproargarg420425430lysasnproglngluglyleutyrasngluleuglnlysasplysmet435440445alaglualatyrsergluileglymetlysglygluargargarggly450455460lysglyhisaspglyleutyrglnglyleuserthralathrlysasp465470475480thrtyraspalaleuhismetglnalaleuproproarg485490<210>29<211>514<212>prt<213>人工序列<220><223>抗人cd7（th69）car变体的合成多肽<400>29metalaleuprovalthralaleuleuleuproleualaleuleuleu151015hisalaalaargproalaalatyrlysaspileglnmetthrglnthr202530thrserserleuseralaserleuglyaspargvalthrilesercys354045seralaserglnglyileserasntyrleuasntrptyrglnglnlys505560proaspglythrvallysleuleuiletyrtyrthrserserleuhis65707580serglyvalproserargpheserglyserglyserglythrasptyr859095serleuthrileserasnleugluprogluaspilealathrtyrtyr100105110cysglnglntyrserlysleuprotyrthrpheglyglyglythrlys115120125leugluilelysargglyglyglyglyserglyglyglyglysergly130135140glyglyglyserglyglyglyglysergluvalglnleuvalgluser145150155160glyglyglyleuvallysproglyglyserleulysleusercysala165170175alaserglyleuthrphesersertyralametsertrpvalarggln180185190thrproglulysargleuglutrpvalalaserileserserglygly195200205phethrtyrtyrproaspservallysglyargphethrileserarg210215220aspasnalaargasnileleutyrleuglnmetserserleuargser225230235240gluaspthralamettyrtyrcysalaargaspgluvalargglytyr245250255leuaspvaltrpglyalaglythrthrvalthrvalserserthrthr260265270thrproalaproargproprothrproalaprothrilealasergln275280285proleuserleuargproglualacysargproalaalaglyglyala290295300valhisthrargglyleuaspphealacysaspiletyriletrpala305310315320proleualaglythrcysglyvalleuleuleuserleuvalilethr325330335leutyrcyslysargglyarglyslysleuleutyrilephelysgln340345350prophemetargprovalglnthrthrglnglugluaspglycysser355360365cysargpheproglugluglugluglyglycysgluleuargvallys370375380pheserargseralaaspalaproalatyrglnglnglyglnasngln385390395400leutyrasngluleuasnleuglyargarggluglutyraspvalleu405410415asplysargargglyargaspproglumetglyglylysproargarg420425430lysasnproglngluglyleutyrasngluleuglnlysasplysmet435440445alaglualatyrsergluileglymetlysglygluargargarggly450455460lysglyhisaspglyleutyrglnglyleuserthralathrlysasp465470475480thrtyraspalaleuhismetglnalaleuproproargglysergly485490495alathrasnpheserleuleulysglnalaglyaspvalglugluasn500505510progly<210>30<211>490<212>prt<213>人工序列<220><223>抗人cd7（3a1f）car的合成多肽<400>30metalaleuprovalthralaleuleuleuproleualaleuleuleu151015hisalaalaargproglnvalglnleuglngluserglyalagluleu202530vallysproglyalaservallysleusercyslysalaserglytyr354045thrphethrsertyrtrpmethistrpvallysglnargproglygln505560glyleuglutrpileglylysileasnproserasnglyargthrasn65707580tyrasnglulysphelysserlysalathrleuthrvalasplysser859095serserthralatyrmetglnleuserserleuthrsergluaspser100105110alavaltyrtyrcysalaargglyglyvaltyrtyraspleutyrtyr115120125tyralaleuasptyrtrpglyglnglythrthrvalthrvalserser130135140glyglyglyglyserglyglyglyglyserglyglyglyglyserasp145150155160ilegluleuthrglnserproalathrleuservalthrproglyasp165170175servalserleusercysargalaserglnserileserasnasnleu180185190histrptyrglnglnlysserhisgluserproargleuleuilelys195200205seralaserglnserileserglyileproserargpheserglyser210215220glyserglythraspphethrleuserileasnservalgluthrglu225230235240asppheglymettyrphecysglnglnserasnsertrpprotyrthr245250255pheglyglyglythrlysleugluilelysargthrthrthrproala260265270proargproprothrproalaprothrilealaserglnproleuser275280285leuargproglualacysargproalaalaglyglyalavalhisthr290295300argglyleuaspphealacysaspiletyriletrpalaproleuala305310315320glythrcysglyvalleuleuleuserleuvalilethrleutyrcys325330335lysargglyarglyslysleuleutyrilephelysglnprophemet340345350argprovalglnthrthrglnglugluaspglycyssercysargphe355360365proglugluglugluglyglycysgluleuargvallyspheserarg370375380seralaaspalaproalatyrglnglnglyglnasnglnleutyrasn385390395400gluleuasnleuglyargarggluglutyraspvalleuasplysarg405410415argglyargaspproglumetglyglylysproargarglysasnpro420425430glngluglyleutyrasngluleuglnlysasplysmetalagluala435440445tyrsergluileglymetlysglygluargargargglylysglyhis450455460aspglyleutyrglnglyleuserthralathrlysaspthrtyrasp465470475480alaleuhismetglnalaleuproproarg485490<210>31<211>511<212>prt<213>人工序列<220><223>抗人cd7（3a1f）car变体的合成多肽<400>31metalaleuprovalthralaleuleuleuproleualaleuleuleu151015hisalaalaargproglnvalglnleuglngluserglyalagluleu202530vallysproglyalaservallysleusercyslysalaserglytyr354045thrphethrsertyrtrpmethistrpvallysglnargproglygln505560glyleuglutrpileglylysileasnproserasnglyargthrasn65707580tyrasnglulysphelysserlysalathrleuthrvalasplysser859095serserthralatyrmetglnleuserserleuthrsergluaspser100105110alavaltyrtyrcysalaargglyglyvaltyrtyraspleutyrtyr115120125tyralaleuasptyrtrpglyglnglythrthrvalthrvalserser130135140glyglyglyglyserglyglyglyglyserglyglyglyglyserasp145150155160ilegluleuthrglnserproalathrleuservalthrproglyasp165170175servalserleusercysargalaserglnserileserasnasnleu180185190histrptyrglnglnlysserhisgluserproargleuleuilelys195200205seralaserglnserileserglyileproserargpheserglyser210215220glyserglythraspphethrleuserileasnservalgluthrglu225230235240asppheglymettyrphecysglnglnserasnsertrpprotyrthr245250255pheglyglyglythrlysleugluilelysargthrthrthrproala260265270proargproprothrproalaprothrilealaserglnproleuser275280285leuargproglualacysargproalaalaglyglyalavalhisthr290295300argglyleuaspphealacysaspiletyriletrpalaproleuala305310315320glythrcysglyvalleuleuleuserleuvalilethrleutyrcys325330335lysargglyarglyslysleuleutyrilephelysglnprophemet340345350argprovalglnthrthrglnglugluaspglycyssercysargphe355360365proglugluglugluglyglycysgluleuargvallyspheserarg370375380seralaaspalaproalatyrglnglnglyglnasnglnleutyrasn385390395400gluleuasnleuglyargarggluglutyraspvalleuasplysarg405410415argglyargaspproglumetglyglylysproargarglysasnpro420425430glngluglyleutyrasngluleuglnlysasplysmetalagluala435440445tyrsergluileglymetlysglygluargargargglylysglyhis450455460aspglyleutyrglnglyleuserthralathrlysaspthrtyrasp465470475480alaleuhismetglnalaleuproproargglyserglyalathrasn485490495pheserleuleulysglnalaglyaspvalglugluasnprogly500505510<210>32<211>117<212>prt<213>人工序列<220><223>抗人cd7th69vh结构域的合成多肽<400>32gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvallysproglygly151015serleulysleusercysalaalaserglyleuthrphesersertyr202530alametsertrpvalargglnthrproglulysargleuglutrpval354045alaserileserserglyglyphethrtyrtyrproaspservallys505560glyargphethrileserargaspasnalaargasnileleutyrleu65707580glnmetserserleuargsergluaspthralamettyrtyrcysala859095argaspgluvalargglytyrleuaspvaltrpglyalaglythrthr100105110valthrvalserser115<210>33<211>112<212>prt<213>人工序列<220><223>抗人cd7th69vl结构域的合成多肽<400>33alaalatyrlysaspileglnmetthrglnthrthrserserleuser151015alaserleuglyaspargvalthrilesercysseralaserglngly202530ileserasntyrleuasntrptyrglnglnlysproaspglythrval354045lysleuleuiletyrtyrthrserserleuhisserglyvalproser505560argpheserglyserglyserglythrasptyrserleuthrileser65707580asnleugluprogluaspilealathrtyrtyrcysglnglntyrser859095lysleuprotyrthrpheglyglyglythrlysleugluilelysarg100105110<210>34<211>123<212>prt<213>人工序列<220><223>抗人cd73a1fvh结构域的合成多肽<400>34glnvalglnleuglngluserglyalagluleuvallysproglyala151015servallysleusercyslysalaserglytyrthrphethrsertyr202530trpmethistrpvallysglnargproglyglnglyleuglutrpile354045glylysileasnproserasnglyargthrasntyrasnglulysphe505560lysserlysalathrleuthrvalasplysserserserthralatyr65707580metglnleuserserleuthrsergluaspseralavaltyrtyrcys859095alaargglyglyvaltyrtyraspleutyrtyrtyralaleuasptyr100105110trpglyglnglythrthrvalthrvalserser115120<210>35<211>108<212>prt<213>人工序列<220><223>抗人cd73a1fvl结构域的合成多肽<400>35aspilegluleuthrglnserproalathrleuservalthrprogly151015aspservalserleusercysargalaserglnserileserasnasn202530leuhistrptyrglnglnlysserhisgluserproargleuleuile354045lysseralaserglnserileserglyileproserargphesergly505560serglyserglythraspphethrleuserileasnservalgluthr65707580gluasppheglymettyrphecysglnglnserasnsertrpprotyr859095thrpheglyglyglythrlysleugluilelysarg100105<210>36<211>120<212>prt<213>人工序列<220><223>抗人cd7t3-3a1vh结构域的合成多肽<400>36aspvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvalglnproglygly151015serarglysleusercysalaalaserglyphethrpheserserphe202530glymethistrpvalargglnalaproglulysglyleuglutrpval354045alatyrileserserglyserserthrleuhistyralaaspthrval505560lysglyargphethrileserargaspasnprolysasnthrleuphe65707580leuglnmetthrserleuargsergluaspthralamettyrtyrcys859095alaargtrpglyasntyrprohistyralametasptyrtrpglygln100105110glythrservalthrvalserser115120<210>37<211>111<212>prt<213>人工序列<220><223>抗人cd7t3-3a1vl结构域的合成多肽<400>37aspilevalmetthrglnserproalaserleualavalserleugly151015glnargalathrilesercysargalaserlysservalseralaser202530glytyrsertyrmethistrptyrglnglnlysproglyglnpropro354045lysleuleuiletyrleualaserasnleugluserglyvalproala505560argpheserglyserglyserglythraspphethrleuasnilehis65707580provalgluglugluaspalavalthrtyrtyrcysglnhisserarg859095gluleuprotyrthrpheglyglyglythrlysleugluilelys100105110<210>38<211>351<212>dna<213>人工序列<220><223>抗人cd7th69vh结构域的合成多核苷酸<400>38gaggtgcagctggtcgaatctggaggaggactggtgaagccaggaggatctctgaaactg60agttgtgccgcttcaggcctgaccttctcaagctacgccatgagctgggtgcgacagaca120cctgagaagcggctggaatgggtcgctagcatctcctctggcgggttcacatactatcca180gactccgtgaaaggcagatttactatctctcgggataacgcaagaaatattctgtacctg240cagatgagttcactgaggagcgaggacaccgcaatgtactattgtgccagggacgaagtg300cgcggctatctggatgtctggggagctggcactaccgtcaccgtctccagc351<210>39<211>336<212>dna<213>人工序列<220><223>抗人cd7th69vl结构域的合成多核苷酸<400>39gccgcatacaaggatattcagatgactcagaccacaagctccctgagcgcctccctggga60gaccgagtgacaatctcttgcagtgcatcacagggaattagcaactacctgaattggtat120cagcagaagccagatggcactgtgaaactgctgatctactatacctctagtctgcacagt180ggggtcccctcacgattcagcggatccggctctgggacagactacagcctgactatctcc240aacctggagcccgaagatattgccacctactattgccagcagtactccaagctgccttat300acctttggcgggggaacaaagctggagattaaaagg336<210>40<211>369<212>dna<213>人工序列<220><223>抗人cd73a1fvh结构域的合成多核苷酸<400>40caggtccagctgcaggagtcaggagctgagctggtgaagccaggggcaagcgtcaaactg60tcctgcaaggcctctggatatacattcactagctactggatgcactgggtgaaacagaga120cccggacagggcctggagtggatcggaaagattaaccctagcaatggcaggaccaactac180aacgaaaagtttaaatccaaggcaaccctgacagtggacaagagctcctctacagcctac240atgcagctgagttcactgacttcagaggatagcgcagtgtactattgcgccagaggcggg300gtctactatgacctgtactattacgccctggattattgggggcagggaaccacagtgact360gtcagctcc369<210>41<211>324<212>dna<213>人工序列<220><223>抗人cd73a1fvl结构域的合成多核苷酸<400>41gacatcgagctgacccagagtcctgctacactgagcgtgactccaggcgattctgtcagt60ctgtcatgtcgggcaagccagtccatctctaacaatctgcactggtaccagcagaaatcc120catgaatctccacgactgctgattaagagtgcctcacagagcatctccggcattccctcc180cggttctctggcagtgggtcaggaactgactttaccctgagtattaactcagtggagaca240gaagatttcggcatgtatttttgccagcagagcaattcctggccctacactttcggaggc300gggaccaaactggagatcaagcgg324<210>42<211>360<212>dna<213>人工序列<220><223>抗人cd7t3-3a1vh结构域的合成多核苷酸<400>42gatgtgcagctggtggagtctgggggaggcttagtgcagcctggagggtcccggaaactc60tcctgtgcagcctctggattcactttcagtagctttggaatgcactgggttcgtcaggct120ccagagaaggggctggagtgggtcgcatacattagtagtggcagtagtaccctccactat180gcagacacagtgaagggccgattcaccatctccagagacaatcccaagaacaccctgttc240ctgcaaatgaccagtctaaggtctgaggacacggccatgtattactgtgcaagatggggt300aactaccctcactatgctatggactactggggtcaaggaacctcagtcaccgtctcctca360<210>43<211>333<212>dna<213>人工序列<220><223>抗人cd7t3-3a1vl结构域的合成多核苷酸<400>43gacattgtgatgacccagtctcctgcttccttagctgtatctctggggcagagggccacc60atctcatgcagggccagcaaaagtgtcagtgcatctggctatagttatatgcactggtac120caacagaaaccaggacagccacccaaactcctcatctatcttgcatccaacctagaatct180ggggtccctgccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcaccctcaacatccat240cctgtggaggaggaggatgctgtaacctattactgtcagcacagtagggagcttccgtac300acgttcggaggggggaccaagctggaaataaaa333<210>44<211>11<212>prt<213>人工序列<220><223>合成多肽<400>44seralaserglnglyileserasntyrleuasn1510<210>45<211>7<212>prt<213>人工序列<220><223>合成多肽<400>45tyrthrserserleuhisser15<210>46<211>9<212>prt<213>人工序列<220><223>合成多肽<400>46glnglntyrserlysleuprotyrthr15<210>47<211>5<212>prt<213>人工序列<220><223>合成多肽<400>47sertyralametser15<210>48<211>16<212>prt<213>人工序列<220><223>合成多肽<400>48serileserserglyglyphethrtyrtyrproaspservallysgly151015<210>49<211>9<212>prt<213>人工序列<220><223>合成多肽<400>49aspgluvalargglytyrleuaspval15<210>50<211>11<212>prt<213>人工序列<220><223>合成多肽<400>50argalaserglnserileserasnasnleuhis1510<210>51<211>7<212>prt<213>人工序列<220><223>合成多肽<400>51seralaserglnserileser15<210>52<211>9<212>prt<213>人工序列<220><223>合成多肽<400>52glnglnserasnsertrpprotyrthr15<210>53<211>5<212>prt<213>人工序列<220><223>合成多肽<400>53sertyrtrpmethis15<210>54<211>17<212>prt<213>人工序列<220><223>合成多肽<400>54lysileasnproserasnglyargthrasntyrasnglulysphelys151015ser<210>55<211>14<212>prt<213>人工序列<220><223>合成多肽<400>55glyglyvaltyrtyraspleutyrtyrtyralaleuasptyr1510<210>56<211>15<212>prt<213>人工序列<220><223>合成多肽<400>56argalaserlysservalseralaserglytyrsertyrmethis151015<210>57<211>7<212>prt<213>人工序列<220><223>合成多肽<400>57leualaserasnleugluser15<210>58<211>9<212>prt<213>人工序列<220><223>合成多肽<400>58glnhisserarggluleuprotyrthr15<210>59<211>5<212>prt<213>人工序列<220><223>合成多肽<400>59serpheglymethis15<210>60<211>17<212>prt<213>人工序列<220><223>合成多肽<400>60tyrileserserglyserserthrleuhistyralaaspthrvallys151015gly<210>61<211>11<212>prt<213>人工序列<220><223>合成多肽<400>61trpglyasntyrprohistyralametasptyr1510<210>62<211>577<212>dna<213>人工序列<220><223>ires的合成多核苷酸<400>62cgggatcaattccgccccccccctaacgttactggccgaagccgcttggaataaggccgg60tgtgcgtttgtctatatgttattttccaccatattgccgtcttttggcaatgtgagggcc120cggaaacctggccctgtcttcttgacgagcattcctaggggtctttcccctctcgccaaa180ggaatgcaaggtctgttgaatgtcgtgaaggaagcagttcctctggaagcttcttgaaga240caaacaacgtctgtagcgaccctttgcaggcagcggaaccccccacctggcgacaggtgc300ctctgcggccaaaagccacgtgtataagatacacctgcaaaggcggcacaaccccagtgc360cacgttgtgagttggatagttgtggaaagagtcaaatggctctcctcaagcgtattcaac420aaggggctgaaggatgcccagaaggtaccccattgtatgggatctgatctggggcctcgg480tgcacatgctttacatgtgtttagtcgaggttaaaaaaacgtctaggccccccgaaccac540ggggacgtggttttcctttgaaaaacacgataatacc577<210>63<211>57<212>dna<213>人工序列<220><223>p2a的合成多核苷酸<400>63gccacaaacttctctctgctaaagcaagcaggtgatgttgaagaaaaccccgggcct57<210>64<211>60<212>dna<213>人工序列<220><223>e2a的合成多核苷酸<400>64cagtgtactaattatgctctcttgaaattggctggagatgttgagagcaacggaggtccc60<210>65<211>66<212>dna<213>人工序列<220><223>f2a的合成多核苷酸<400>65gtgaaacagactttgaattttgaccttctcaagttggcgggagacgtggagtccaaccct60ggacct66<210>66<211>54<212>dna<213>人工序列<220><223>t2a的合成多核苷酸<400>66gagggcaggggaagtcttctaacatgcggggacgtggaggaaaatcccggccca54<210>67<211>19<212>prt<213>人工序列<220><223>p2a的合成多肽<400>67alathrasnpheserleuleulysglnalaglyaspvalglugluasn151015proglypro<210>68<211>20<212>prt<213>人工序列<220><223>e2a的合成多肽<400>68glncysthrasntyralaleuleulysleualaglyaspvalgluser151015asnproglypro20<210>69<211>22<212>prt<213>人工序列<220><223>f2a的合成多肽<400>69vallysglnthrleuasnpheaspleuleulysleualaglyaspval151015gluserasnproglypro20<210>70<211>18<212>prt<213>人工序列<220><223>t2a的合成多肽<400>70gluglyargglyserleuleuthrcysglyaspvalglugluasnpro151015glypro<210>71<211>14<212>prt<213>人工序列<220><223>myc-kdel结构域的合成多肽<400>71gluglnlysleuileserglugluaspleulysaspgluleu1510<210>72<211>26<212>prt<213>人工序列<220><223>link（20）aekdel结构域的合成多肽<400>72glyglyglyglyserglyglyglyglyserglyglyglyglysergly151015glyglyglyseralaglulysaspgluleu2025<210>73<211>4<212>prt<213>人工序列<220><223>kdel结构域的合成多肽<400>73lysaspgluleu1<210>74<211>4<212>prt<213>人工序列<220><223>kxd/e结构域的合成多肽<220><221>misc_feature<222>(3)..(3)<223>其中xaa是任意氨基酸<220><221>misc_feature<222>(4)..(4)<223>其中xaa是任意氨基酸<400>74lyslysxaaxaa1<210>75<211>4<212>prt<213>人工序列<220><223>yqrl结构域的合成多肽<400>75tyrglnargleu1<210>76<211>4<212>prt<213>人工序列<220><223>pest基序的合成多肽<400>76progluserthr1<210>77<211>83<212>prt<213>人工序列<220><223>mb-dekkmp结构域的合成多肽<400>77thrthrthrproalaproargproprothrproalaprothrileala151015serglnproleuserleuargproglualacysargproalaalagly202530glyalavalhisthrargglyleuaspphealacysaspiletyrile354045trpalaproleualaglythrcysglyvalleuleuleuserleuval505560ilethrleutyrlystyrlysserargargserpheileaspglulys65707580lysmetpro<210>78<211>68<212>prt<213>人工序列<220><223>cd8α铰链和跨膜结构域的合成多肽<400>78thrthrthrproalaproargproprothrproalaprothrileala151015serglnproleuserleuargproglualacysargproalaalagly202530glyalavalhisthrargglyleuaspphealacysaspiletyrile354045trpalaproleualaglythrcysglyvalleuleuleuserleuval505560ilethrleutyr65<210>79<211>20<212>prt<213>人工序列<220><223>vh-vl接头的合成多肽<400>79glyglyglyglyserglyglyglyglyserglyglyglyglysergly151015glyglyglyser20<210>80<211>21<212>prt<213>人工序列<220><223>cd8α信号肽的合成多肽<400>80metalaleuprovalthralaleuleuleuproleualaleuleuleu151015hisalaalaargpro20<210>81<211>63<212>dna<213>人工序列<220><223>cd8α信号肽的合成多核苷酸<400>81atggctctgcctgtgaccgcactgctgctgcccctggctctgctgctgcacgccgcaaga60cct63<210>82<211>60<212>dna<213>人工序列<220><223>vh-vl接头的合成多核苷酸<400>82ggaggaggaggaagcggaggaggaggatccggaggcgggggatctggaggaggaggaagt60<210>83<211>42<212>dna<213>人工序列<220><223>myc-kdel结构域的合成多核苷酸<400>83gagcagaaactgattagcgaagaggacctgaaagatgaactg42<210>84<211>68<212>prt<213>人工序列<220><223>cd8α铰链和跨膜结构域的合成多肽<400>84thrthrthrproalaproargproprothrproalaprothrileala151015serglnproleuserleuargproglualacysargproalaalagly202530glyalavalhisthrargglyleuaspphealacysaspiletyrile354045trpalaproleualaglythrcysglyvalleuleuleuserleuval505560ilethrleutyr65<210>85<211>42<212>prt<213>人工序列<220><223>4-1bb的细胞内信号传导域的合成多肽<400>85lysargglyarglyslysleuleutyrilephelysglnprophemet151015argprovalglnthrthrglnglugluaspglycyssercysargphe202530proglugluglugluglyglycysgluleu3540<210>86<211>112<212>prt<213>人工序列<220><223>cd3ζ的细胞内信号传导域的合成多肽<400>86argvallyspheserargseralaaspalaproalatyrglnglngly151015glnasnglnleutyrasngluleuasnleuglyargarggluglutyr202530aspvalleuasplysargargglyargaspproglumetglyglylys354045proargarglysasnproglngluglyleutyrasngluleuglnlys505560asplysmetalaglualatyrsergluileglymetlysglygluarg65707580argargglylysglyhisaspglyleutyrglnglyleuserthrala859095thrlysaspthrtyraspalaleuhismetglnalaleuproproarg100105110<210>87<211>20<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>87gagggaagctcatcagtggg20<210>88<211>20<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>88catctcctgcccagtctgac20<210>89<211>21<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>89cctttccgggactttcgcttt21<210>90<211>20<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>90gcagaatccaggtggcaaca20<210>91<211>20<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>91gcagcctttcatgagaccag20<210>92<211>20<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>92tgcccaggttcagctcatta20<210>93<211>20<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>93acctgccgcatacaaggata20<210>94<211>20<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>94ccactgtgcagactagaggt20<210>95<211>799<212>prt<213>人工序列<220><223>抗人cd7（th69）car-p2a-的合成多肽抗人cd7（th69）pebl<400>95metalaleuprovalthralaleuleuleuproleualaleuleuleu151015hisalaalaargproalaalatyrlysaspileglnmetthrglnthr202530thrserserleuseralaserleuglyaspargvalthrilesercys354045seralaserglnglyileserasntyrleuasntrptyrglnglnlys505560proaspglythrvallysleuleuiletyrtyrthrserserleuhis65707580serglyvalproserargpheserglyserglyserglythrasptyr859095serleuthrileserasnleugluprogluaspilealathrtyrtyr100105110cysglnglntyrserlysleuprotyrthrpheglyglyglythrlys115120125leugluilelysargglyglyglyglyserglyglyglyglysergly130135140glyglyglyserglyglyglyglysergluvalglnleuvalgluser145150155160glyglyglyleuvallysproglyglyserleulysleusercysala165170175alaserglyleuthrphesersertyralametsertrpvalarggln180185190thrproglulysargleuglutrpvalalaserileserserglygly195200205phethrtyrtyrproaspservallysglyargphethrileserarg210215220aspasnalaargasnileleutyrleuglnmetserserleuargser225230235240gluaspthralamettyrtyrcysalaargaspgluvalargglytyr245250255leuaspvaltrpglyalaglythrthrvalthrvalserserthrthr260265270thrproalaproargproprothrproalaprothrilealasergln275280285proleuserleuargproglualacysargproalaalaglyglyala290295300valhisthrargglyleuaspphealacysaspiletyriletrpala305310315320proleualaglythrcysglyvalleuleuleuserleuvalilethr325330335leutyrcyslysargglyarglyslysleuleutyrilephelysgln340345350prophemetargprovalglnthrthrglnglugluaspglycysser355360365cysargpheproglugluglugluglyglycysgluleuargvallys370375380pheserargseralaaspalaproalatyrglnglnglyglnasngln385390395400leutyrasngluleuasnleuglyargarggluglutyraspvalleu405410415asplysargargglyargaspproglumetglyglylysproargarg420425430lysasnproglngluglyleutyrasngluleuglnlysasplysmet435440445alaglualatyrsergluileglymetlysglygluargargarggly450455460lysglyhisaspglyleutyrglnglyleuserthralathrlysasp465470475480thrtyraspalaleuhismetglnalaleuproproargglysergly485490495alathrasnpheserleuleulysglnalaglyaspvalglugluasn500505510proglyprometalaleuprovalthralaleuleuleuproleuala515520525leuleuleuhisalaalaargproalaalatyrlysaspileglnmet530535540thrglnthrthrserserleuseralaserleuglyaspargvalthr545550555560ilesercysseralaserglnglyileserasntyrleuasntrptyr565570575glnglnlysproaspglythrvallysleuleuiletyrtyrthrser580585590serleuhisserglyvalproserargpheserglyserglysergly595600605thrasptyrserleuthrileserasnleugluprogluaspileala610615620thrtyrtyrcysglnglntyrserlysleuprotyrthrpheglygly625630635640glythrlysleugluilelysargglyglyglyglyserglyglygly645650655glyserglyglyglyglyserglyglyglyglysergluvalglnleu660665670valgluserglyglyglyleuvallysproglyglyserleulysleu675680685sercysalaalaserglyleuthrphesersertyralametsertrp690695700valargglnthrproglulysargleuglutrpvalalaserileser705710715720serglyglyphethrtyrtyrproaspservallysglyargphethr725730735ileserargaspasnalaargasnileleutyrleuglnmetserser740745750leuargsergluaspthralamettyrtyrcysalaargaspgluval755760765argglytyrleuaspvaltrpglyalaglythrthrvalthrvalser770775780sergluglnlysleuileserglugluaspleulysaspgluleu785790795<210>96<211>207<212>dna<213>人工序列<220><223>cd8α铰链和跨膜结构域的合成多肽<400>96accactacacctgcaccaaggcctcccacacccgctcccactatcgcttcccagccactg60tccctgaggcccgaggcctgcaggccagcagctggcggagccgtgcatactagggggctg120gacttcgcttgcgacatctacatctgggccccactggcagggacatgcggagtcctgctg180ctgtccctggtcatcacactgtactgc207<210>97<211>126<212>dna<213>人工序列<220><223>4-1bb的细胞内信号传导域的合成多肽<400>97aagcgggggcgcaaaaaactgctgtatatctttaagcagcctttcatgagaccagtgcag60acaacccaggaggaagatgggtgctcatgccggtttcccgaggaggaggaaggcggctgc120gagctg126<210>98<211>335<212>dna<213>人工序列<220><223>cd3ζ的细胞内信号传导域的合成多肽<400>98gggtgaagttttcccgctcagcagatgctcctgcctaccagcagggccagaaccagctgt60ataatgagctgaacctgggcagacgcgaagagtatgatgtgctggacaaaaggcggggaa120gagaccccgaaatgggagggaagccaaggcggaaaaacccccaggagggcctgtacaatg180agctgcagaaggacaaaatggcagaggcttacagtgagattgggatgaagggagagagac240ggaggggaaaagggcacgatggcctgtaccaggggctgagcacagcaaccaaagatactt300atgacgcactgcacatgcaggcactgccacccaga335当前第1页12