一种基于玻纤滤纸的病毒核酸提取方法与流程

文档序号:20916409发布日期:2020-05-29 13:34阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基于玻纤滤纸的核酸提取方法,其特征在于:包括以下几个步骤:

步骤一,在待提取核酸的生物样本中加入蛋白酶k,快速混匀,得混合溶液;

步骤二,在步骤一所得混合溶液中加入结合缓冲液和carrierrna;

步骤三,将步骤二所得混合液滴加在玻纤滤纸上,玻纤滤纸以双圈滤纸为支撑物固定,过滤的废液用吸水纸吸去;

步骤四,用洗涤缓冲液清洗,再用吸水纸吸去废液;

步骤五,在玻纤滤纸上滴加洗脱缓冲液,收集过滤的洗脱液即获得所需核酸溶液。

2.如权利要求1所述的基于玻纤滤纸的核酸提取方法,其特征在于:所述步骤三中,玻纤滤纸为圆形,直径为6-10mm,用pet单面透明胶带固定在双圈滤纸的亲水区域中。

3.如权利要求1或2所述的基于玻纤滤纸的核酸提取方法,其特征在于:所述步骤三中,双圈滤纸包含喷蜡疏水区和亲水区,亲水区域为圆形,直径为8-12mm。

4.如权利要求1或2所述的基于玻纤滤纸的核酸提取方法,其特征在于:所述步骤一中,蛋白酶k浓度为20-100ug/ml。

5.如权利要求1或2所述的基于玻纤滤纸的核酸提取方法,其特征在于:所述步骤二中,carrierrna浓度为1-8ug/ml。

6.如权利要求1或2所述的基于玻纤滤纸的核酸提取方法,其特征在于:所述步骤二中,结合缓冲液主要包括1-8m盐酸胍、10-200mmtris-hcl、10-100mmedta、100-800mmnacl、0.5%-2%sds。

7.如权利要求6所述的基于玻纤滤纸的核酸提取方法,其特征在于:所述结合缓冲液中tris-hcl的ph值为6.0-7.0。

8.如权利要求1或2所述的基于玻纤滤纸的核酸提取方法,其特征在于:所述步骤四中,洗涤缓冲液主要包括1-10mmedta、10-100mmtris-hcl、10-100mmnacl和55%-75%乙醇。

9.如权利要求1或2所述的基于玻纤滤纸的核酸提取方法,其特征在于:所述步骤四中,洗脱缓冲液主要包括10-100mmtris-hcl、1-10mmedta;优选的,所述tris-hcl的ph值为7.0-8.5。

10.如权利要求1或2所述的基于玻纤滤纸的核酸提取方法,其特征在于:所述步骤一中,生物样本包括血清、血浆和组织液。


技术总结
本发明公开了一种基于玻纤滤纸的病毒核酸提取方法,包括以下几个步骤:步骤一,在生物样本中加入蛋白酶K,快速混匀,得混合溶液;步骤二,加入结合缓冲液和Carrier RNA,上下颠倒充分混匀;步骤三,将混合液滴加在玻纤滤纸上,玻纤滤纸以双圈滤纸为支撑物固定,过滤的废液用吸水纸吸去;步骤四,用洗涤缓冲液清洗,再用吸水纸吸去废液;步骤五,在玻纤滤纸上滴加洗脱缓冲液,收集洗脱液即获得所需核酸。本方法将玻纤滤纸引入核酸抽提方法中,可以用于生物样本中核酸的富集和提取。该方法简化了核酸抽提的步骤和所需仪器设备,节省了操作时间,降低了提取成本,同时保证了高效的核酸回收率。

技术研发人员:刘斐;李嘉豪;单衍可;李悦
受保护的技术使用者:南京农业大学
技术研发日:2020.02.18
技术公布日:2020.05.29
当前第2页1 2 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1