本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种粗品肝素钠的氧化精制方法。
技术背景
肝素钠是一种高度硫酸化的黏多糖硫酸酯钠盐，是临床上大量应用的抗凝血药。肝素钠是心脑血管疾病和血液透析治疗中必不可少的药物之一，到目前为止，还没有发现一种药物能够完全替代肝素钠在医学界的存在。由于肝素钠属于粘多糖类，在体内与蛋白质结合形成复合物，这种复合物无抗凝血活性。因此，对肝素钠的精制主要是除蛋白和脱色。目前，肝素钠的精制一般采用高锰酸钾和过氧化氢氧化法。第一种方法存在产品活性损失大、色泽差等缺点，而且生成的二氧化锰较难滤除以及吸附肝素钠使得产品的回收率降低。第二种方法得到的产品色泽较好而被广泛采用，但过氧化氢的多次氧化对产品结构可能造成破坏，降低肝素钠的效价。因此，很多新的方法被用于肝素钠的精制研究，包括酶解、层析法和膜技术等。但都存在不同程度的弊端，如工艺流程复杂、精制除杂不彻底、产生“三废”问题等。因此，发展优化肝素钠精制工艺具有重要的研究价值。
技术实现要素：
本发明提供了一种粗品肝素钠精制新方法，通过利用高铁酸钾的氧化性和反应生成fe(ⅲ)离子的絮凝作用，实现粗品肝素钠的进一步精制提纯。同时该方法具有单元操作简单，生产周期短，产品回收率和质量高等优点。
为了实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案予以实现：
一种粗品肝素钠精制新方法，包括以下步骤：
(1)溶解：将粗品肝素钠溶于1-3％的氯化钠溶液中；
(2)氧化：加入质量分数为1-5％的高铁酸盐，调节ph值为5-10，置于温度为20-40℃的恒温油浴锅内，搅拌反应10-18h；
(3)沉淀：将步骤(2)中的反应混合物离心分离，取上清液，边搅拌边加入与液体体积等量的无水乙醇，置于-5℃的冰箱中冷冻0.25-1h。将冷冻后的混合物离心分离，固体用无水乙醇洗涤3次；
(4)干燥：洗涤后的固体至于真空干燥箱中干燥3h，得肝素钠精品。
进一步的，步骤(1)粗品肝素钠与氯化钠溶液的料液比(m/v)为1:5-1:10。
进一步的，步骤(2)中所述的高铁酸盐为高铁酸锂、高铁酸钠和高铁酸钾中的一种或者多种。
进一步的，步骤(2)中所述的调节ph值可以用的试剂为hcl、h2so4、hno3、naoh和koh中的一种或者多种。
综上所述，采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
(1)本发明提供的粗品肝素钠精制新方法，利用高铁酸盐的氧化性和絮凝作用，实现了肝素钠粗品中蛋白的氧化和絮凝沉淀，一步完成对蛋白的去除和脱色。
(2)最后得到的精制肝素钠精品色泽较白，效价可以达到180u/mg，回收率达到70％。
具体实施方法
以下结合具体实施例对本发明的技术方案做进一步详细的说明。
实施例1
本发明提供一种粗品肝素钠精制新方法，包括以下步骤：
(1)溶解：将粗品肝素钠按料液比(m/v)1:10溶于3％的氯化钠溶液中；
(2)氧化：加入质量分数为2％的高铁酸钾，调节ph值为8.5，置于温度为30℃的恒温油浴锅内，搅拌反应16h；
(3)沉淀：将步骤(2)中的反应混合物离心分离，取上清液，边搅拌边加入与液体体积等量的无水乙醇，置于-5℃的冰箱中冷冻0.5h。将冷冻后的混合物离心分离，固体用无水乙醇洗涤3次；
(4)干燥：洗涤后的固体至于真空干燥箱中干燥3h，得肝素钠精品，效价为180u/mg。
实施例2
本发明提供一种粗品肝素钠精制新方法，包括以下步骤：
(1)溶解：将粗品肝素钠按料液比(m/v)1:5溶于2％的氯化钠溶液中；
(2)氧化：加入质量分数为3％的高铁酸钠，调节ph值为9，置于温度为25℃的恒温油浴锅内，搅拌反应16h；
(3)沉淀：将步骤(2)中的反应混合物离心分离，取上清液，边搅拌边加入与液体体积等量的无水乙醇，置于-5℃的冰箱中冷冻0.5h。将冷冻后的混合物离心分离，固体用无水乙醇洗涤3次；
(4)干燥：洗涤后的固体至于真空干燥箱中干燥3h，得肝素钠精品，效价为173u/mg。
实施例3
本发明提供一种粗品肝素钠精制新方法，包括以下步骤：
(1)溶解：将粗品肝素钠按料液比(m/v)1:8溶于1％的氯化钠溶液中；
(2)氧化：加入质量分数为3％的高铁酸钾，调节ph值为7，置于温度为35℃的恒温油浴锅内，搅拌反应12h；
(3)沉淀：将步骤(2)中的反应混合物离心分离，取上清液，边搅拌边加入与液体体积等量的无水乙醇，置于-5℃的冰箱中冷冻0.5h。将冷冻后的混合物离心分离，固体用无水乙醇洗涤3次；
(4)干燥：洗涤后的固体至于真空干燥箱中干燥3h，得肝素钠精品，效价为165u/mg。
实施例4
本发明提供一种粗品肝素钠精制新方法，包括以下步骤：
(1)溶解：将粗品肝素钠按料液比(m/v)1:6溶于3％的氯化钠溶液中；
(2)氧化：加入质量分数为5％的高铁酸锂，调节ph值为6，置于温度为30℃的恒温油浴锅内，搅拌反应18h；
(3)沉淀：将步骤(2)中的反应混合物离心分离，取上清液，边搅拌边加入与液体体积等量的无水乙醇，置于-5℃的冰箱中冷冻1h。将冷冻后的混合物离心分离，固体用无水乙醇洗涤3次；
(4)干燥：洗涤后的固体至于真空干燥箱中干燥3h，得肝素钠精品，效价为150u/mg。
实施例5
本发明提供一种粗品肝素钠精制新方法，包括以下步骤：
(1)溶解：将粗品肝素钠按料液比(m/v)1:5溶于3％的氯化钠溶液中；
(2)氧化：加入质量分数为2％的高铁酸钠，调节ph值为8，置于温度为30℃的恒温油浴锅内，搅拌反应14h；
(3)沉淀：将步骤(2)中的反应混合物离心分离，取上清液，边搅拌边加入与液体体积等量的无水乙醇，置于-5℃的冰箱中冷冻0.25h。将冷冻后的混合物离心分离，固体用无水乙醇洗涤3次；
(4)干燥：洗涤后的固体至于真空干燥箱中干燥3h，得肝素钠精品，效价为152u/mg。
实施例6
本发明提供一种粗品肝素钠精制新方法，包括以下步骤：
(1)溶解：将粗品肝素钠按料液比(m/v)1:10溶于2％的氯化钠溶液中；
(2)氧化：加入质量分数为4％的高铁酸钾，调节ph值为5，置于温度为25℃的恒温油浴锅内，搅拌反应10h；
(3)沉淀：将步骤(2)中的反应混合物离心分离，取上清液，边搅拌边加入与液体体积等量的无水乙醇，置于-5℃的冰箱中冷冻0.75h。将冷冻后的混合物离心分离，固体用无水乙醇洗涤3次；
(4)干燥：洗涤后的固体至于真空干燥箱中干燥3h，得肝素钠精品，效价为163u/mg。
实施例7
本发明提供一种粗品肝素钠精制新方法，包括以下步骤：
(1)溶解：将粗品肝素钠按料液比(m/v)1:8溶于1％的氯化钠溶液中；
(2)氧化：加入质量分数为5％的高铁酸钠，调节ph值为8.5，置于温度为30℃的恒温油浴锅内，搅拌反应18h；
(3)沉淀：将步骤(2)中的反应混合物离心分离，取上清液，边搅拌边加入与液体体积等量的无水乙醇，置于-5℃的冰箱中冷冻0.5h。将冷冻后的混合物离心分离，固体用无水乙醇洗涤3次；
(4)干燥：洗涤后的固体至于真空干燥箱中干燥3h，得肝素钠精品，效价为155u/mg。
实施例8
本发明提供一种粗品肝素钠精制新方法，包括以下步骤：
(1)溶解：将粗品肝素钠按料液比(m/v)1:7溶于3％的氯化钠溶液中；
(2)氧化：加入质量分数为1％的高铁酸锂，调节ph值为6，置于温度为40℃的恒温油浴锅内，搅拌反应13h；
(3)沉淀：将步骤(2)中的反应混合物离心分离，取上清液，边搅拌边加入与液体体积等量的无水乙醇，置于-5℃的冰箱中冷冻0.25h。将冷冻后的混合物离心分离，固体用无水乙醇洗涤3次；
(4)干燥：洗涤后的固体至于真空干燥箱中干燥3h，得肝素钠精品，效价为162u/mg。
实施例9
本发明提供一种粗品肝素钠精制新方法，包括以下步骤：
(1)溶解：将粗品肝素钠按料液比(m/v)1:9溶于2％的氯化钠溶液中；
(2)氧化：加入质量分数为3％的高铁酸锂，调节ph值为7，置于温度为20℃的恒温油浴锅内，搅拌反应15h；
(3)沉淀：将步骤(2)中的反应混合物离心分离，取上清液，边搅拌边加入与液体体积等量的无水乙醇，置于-5℃的冰箱中冷冻0.75h。将冷冻后的混合物离心分离，固体用无水乙醇洗涤3次；
(4)干燥：洗涤后的固体至于真空干燥箱中干燥3h，得肝素钠精品，效价为175u/mg。
实施例10
本发明提供一种粗品肝素钠精制新方法，包括以下步骤：
(1)溶解：将粗品肝素钠按料液比(m/v)1:6溶于3％的氯化钠溶液中；
(2)氧化：加入质量分数为5％的高铁酸锂，调节ph值为10，置于温度为30℃的恒温油浴锅内，搅拌反应18h；
(3)沉淀：将步骤(2)中的反应混合物离心分离，取上清液，边搅拌边加入与液体体积等量的无水乙醇，置于-5℃的冰箱中冷冻1h。将冷冻后的混合物离心分离，固体用无水乙醇洗涤3次；
(4)干燥：洗涤后的固体至于真空干燥箱中干燥3h，得肝素钠精品，效价为155u/mg。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。