1.本发明属于发酵技术技术领域，具体涉及一种复合发酵提取剑麻皂素的方法。
背景技术：
2.麻皂素也称替可吉宁，剑麻皂甙元等，是合成甾体激素类药物的基本原料，素有"医药黄金"和"激素之母"之称，利用剑麻皂素生产出来的下游产品单烯，可合成倍他米松等120多种激素类药物，还可应用于食品、化妆品及畜牧业等行业，剑麻皂素在剑麻中以甾体皂苷配基的形式存在，是生物医药化工领域最普遍、最主要的基础原料，剑麻皂素可人工合成，成本较高。利用剑麻渣提取剑麻皂素是较为普遍采用的制备剑麻皂素的有效途径。
技术实现要素：
3.为解决上述背景技术中提出的问题。本发明提供了一种复合发酵提取剑麻皂素的方法，具有提取效率高、防止对环境进行污染的特点。
4.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种复合发酵提取剑麻皂素的方法，该发酵制备方法包括以下步骤：
5.步骤一：将哈茨木霉与黑曲霉分别接种于液体培养基中进行发酵，得发酵液；
6.步骤二：将上述两种发酵液混合后添加到剑麻渣水培养基中再次进行发酵，发酵完成后收集发酵液中的沉淀；
7.步骤三：提取所述沉淀中的剑麻皂素。
8.优选的，所述液体培养基为马铃薯液体培养基。
9.优选的，所述马铃薯液体培养基包括ms基础培养基和添加在所述培养基中的添加剂，所述添加剂的成分以终浓度计。
10.优选的，所述添加剂成分包括：吲哚乙酸0.05～0.5mg/l，蔗糖10～40g/l，6-苄氨基腺嘌呤0.5～1.0mg/l，萘乙酸0.3～1.0mg/l，椰汁20～30ml/l，abt生根粉1～3mg/l，n-二甲氨基琥珀酰胺酸10～20mg/l，多效唑1.0～2.0mg/l；。
11.优选的，所述添加剂还包括活性炭和琼脂，所述活性炭质量分数为0.05～0.2％，所述琼脂质量分数为0.1～1％。
12.优选的，包括ms基础培养基和添加在所述培养基中的添加剂，包括吲哚乙酸0.3mg/l，蔗糖30g/l，6-苄氨基腺嘌呤0.8mg/l，萘乙酸0.5mg/l，椰汁25ml/l，abt生根粉2mg/l，n-二甲氨基琥珀酰胺酸15mg/l，多效唑1.5mg/l；还包括质量分数为0.1％的活性炭和质量分数为0.5％的琼脂。
13.优选的，所述马铃薯液体培养基培育方法为，
14.步骤一：称取相应质量的吲哚乙酸、蔗糖、6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、椰汁、abt生根粉、n-二甲氨基琥珀酰胺酸、多效唑、活性炭、琼脂依次加入到基础培养基中，搅拌均匀；
15.步骤二：将ph调整至5.8，120℃灭菌20min即得。
16.优选的，包括如下步骤；
17.步骤一：将哈茨木霉接种于马玲薯培养基中，在温度25℃的条件下，调节培养基ph为5，摇床转速为140～160rpm，发酵6～7d，得发酵液；将黑曲霉接种于马玲薯培养基中，在温度30℃的条件下，调节培养基ph为4，摇床转速为140～160rpm，发酵6～7d，得发酵液；
18.步骤二：将哈茨木霉发酵液和黑曲霉发酵液按体积比1：1～2混合，按接种量10％，接种于剑麻渣水培养基中，在温度28℃的条件下，摇床转速为140～160rpm，发酵3～4d，离心提取沉淀；所述剑麻渣水培养基的ph为5，所述剑麻渣水培养基的组成为每升所述剑麻渣水基质中添加kno32g、k2hpo41g、kcl0.5g、mgso4.7h2o0.5g和feso4.7h2o0.01g；所述剑麻渣水基质为剑麻刮麻机对成熟期的剑麻进行脱纤维处理后的剩余物；
19.步骤三：将沉淀在65℃-75℃的条件下烘干2h-3h；每克干物料用18～22ml的甲醇进行溶解，超声浸提80-90min，得溶有剑麻皂素的上清液。
20.与现有技术相比，本发明的有益效果是：
21.本发明，通过设置该方法，现有的提取剑麻皂素的方法产品收率和纯度低，需要用到强酸、强碱或者有机溶剂不仅污染环境而且毒性大，工艺复杂，成本高，本发明所用的为生物菌种发酵法，节能环保，产量高。
具体实施方式
22.下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
23.实施例
24.本发明提供以下技术方案：一种复合发酵提取剑麻皂素的方法，该发酵制备方法包括以下步骤：
25.步骤一：将哈茨木霉与黑曲霉分别接种于液体培养基中进行发酵，得发酵液；
26.步骤二：将上述两种发酵液混合后添加到剑麻渣水培养基中再次进行发酵，发酵完成后收集发酵液中的沉淀；
27.步骤三：提取所述沉淀中的剑麻皂素。
28.具体的，所述液体培养基为马铃薯液体培养基。
29.具体的，所述马铃薯液体培养基包括ms基础培养基和添加在所述培养基中的添加剂，所述添加剂的成分以终浓度计。
30.具体的，所述添加剂成分包括：吲哚乙酸0.05～0.5mg/l，蔗糖10～40g/l，6-苄氨基腺嘌呤0.5～1.0mg/l，萘乙酸0.3～1.0mg/l，椰汁20～30ml/l，abt生根粉1～3mg/l，n-二甲氨基琥珀酰胺酸10～20mg/l，多效唑1.0～2.0mg/l；。
31.具体的，所述添加剂还包括活性炭和琼脂，所述活性炭质量分数为0.05～0.2％，所述琼脂质量分数为0.1～1％。
32.具体的，包括ms基础培养基和添加在所述培养基中的添加剂，包括吲哚乙酸0.3mg/l，蔗糖30g/l，6-苄氨基腺嘌呤0.8mg/l，萘乙酸0.5mg/l，椰汁25ml/l，abt生根粉2mg/l，n-二甲氨基琥珀酰胺酸15mg/l，多效唑1.5mg/l；还包括质量分数为0.1％的活性炭和质量分数为0.5％的琼脂。
33.具体的，所述马铃薯液体培养基培育方法为，
34.步骤一：称取相应质量的吲哚乙酸、蔗糖、6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、椰汁、abt生根粉、n-二甲氨基琥珀酰胺酸、多效唑、活性炭、琼脂依次加入到基础培养基中，搅拌均匀；
35.步骤二：将ph调整至5.8，120℃灭菌20min即得。
36.具体的，包括如下步骤；
37.步骤一：将哈茨木霉接种于马玲薯培养基中，在温度25℃的条件下，调节培养基ph为5，摇床转速为140～160rpm，发酵6～7d，得发酵液；将黑曲霉接种于马玲薯培养基中，在温度30℃的条件下，调节培养基ph为4，摇床转速为140～160rpm，发酵6～7d，得发酵液；
38.步骤二：将哈茨木霉发酵液和黑曲霉发酵液按体积比1：1～2混合，按接种量10％，接种于剑麻渣水培养基中，在温度28℃的条件下，摇床转速为140～160rpm，发酵3～4d，离心提取沉淀；所述剑麻渣水培养基的ph为5，所述剑麻渣水培养基的组成为每升所述剑麻渣水基质中添加kno32g、k2hpo41g、kcl0.5g、mgso4.7h2o0.5g和feso4.7h2o0.01g；所述剑麻渣水基质为剑麻刮麻机对成熟期的剑麻进行脱纤维处理后的剩余物；
39.步骤三：将沉淀在65℃-75℃的条件下烘干2h-3h；每克干物料用18～22ml的甲醇进行溶解，超声浸提80-90min，得溶有剑麻皂素的上清液，通过设置该方法，现有的提取剑麻皂素的方法产品收率和纯度低，需要用到强酸、强碱或者有机溶剂不仅污染环境而且毒性大，工艺复杂，成本高，本发明所用的为生物菌种发酵法，节能环保，产量高。
40.最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。