从茶籽粕中提取得到降血糖肽的方法与流程

文档序号:24417984发布日期:2021-03-26 21:31阅读:来源:国知局

技术特征:
1.一种从茶籽粕中提取得到降血糖肽的方法,其特征在于:包括下列步骤:步骤1:将茶籽粕粉碎后得到茶籽粕粉末;步骤2:将茶籽粕粉末与正己烷按照1:4

6的质量比混合,然后对混合液进行搅拌,接着抽滤除去正己烷,得到的粉末室温干燥后得到脱脂茶籽粕粉末;步骤3:将脱脂茶籽粕粉末与水按1:7

15的质量比混合,然后后调节ph值到9.5

10.5,将混合物加热到45

60℃,然后搅拌1

2,接着以7000

9000r/min离心10

20min,得到的上清液调节ph值到4.0

4.5,1

2h后以7000

9000r/min离心14

20min,得到的沉淀用去离子水再悬浮,经冷冻干燥后得到茶籽粕蛋白;步骤4:将茶籽粕蛋白分散于水中制得质量分数为2

4%的茶籽粕蛋白溶液,然后向所述茶籽粕蛋白溶液中添加碱性蛋白酶,在温度为50

60℃、ph值为9.0~11.0的条件下进行酶解,酶解结束后将反应体系的ph值调到7.0,并在沸水浴中加热10~15min进行灭酶;灭酶后的溶液以7000~12000r/min离心10~20min,得到的上清液即为茶籽粕多肽粗样;步骤5:将茶籽粕多肽粗样,在工作压力0.1~0.2mpa,工作温度 0~40℃条件下,依次通过10kda、5kda和3kda的超滤膜后收集到4个样品,经冷冻干燥后即得到>10kda的多肽组分、5

10kda的多肽组分、3

5kda的多肽组分和<3kda的多肽组分;步骤6:分别测定>10kda的多肽组分、5

10kda的多肽组分、3

5kda的多肽组分和<3kda的多肽组分抑制α

葡萄糖苷酶的活性进行测定;步骤7:对最高抑制率的多肽组分进行细分级分离;细分级分离分离方法包括:使用制备高效液相色谱法或半制备高效液相色谱法对步骤6筛选得到的最高抑制率的多肽组分进行分离,将含有0.1%tfa的乙腈用作洗脱液,流速设置为1l/min,在220 nm处检测洗脱峰;然后浓缩挥发有机溶剂后冷冻干燥,对每个冻干组分的抑制α

葡萄糖苷酶的活性进行测定,筛选出抑制率最高的多肽组分;步骤8:将步骤7筛选的抑制率最高的多肽组分配制成浓度大于或等于3mg/ml的多肽溶液,然后以10000

14000r/min离心8

12min,取上清用10kda超滤管过滤,取过滤液用c18柱进行除盐处理,除盐后的肽段溶液经离心浓缩仪抽干;肽段样品通过自动进样器吸入后结合至c18捕获柱,接着被洗脱至分析柱进行分离;利用两个流动相建立30分钟的分析梯度;液相的流速设置为300 nl/min;质谱ida模式分析时,每个扫描循环中包含一个ms全扫描,以及随后跟着的40个ms/ms扫描;ms/ms采集的条件设置为母离子信号大于120 cps,电荷数为+2~+5;离子重复采集的排除时间设置为18s;两个流动相中流动相a: h2o,0.1% formic acid;流动相b: can,0.1% formic acid。2.根据权利要求1所述的从茶籽粕中提取得到降血糖肽的方法,其特征在于:步骤1中茶籽粕的含油量为3

4%,蛋白含量为29

32%。3.根据权利要求1所述的从茶籽粕中提取得到降血糖肽的方法,其特征在于:步骤2和步骤3中搅拌的速度为200

400r/min。4. 根据权利要求1所述的从茶籽粕中提取得到降血糖肽的方法,其特征在于:步骤3、步骤5和步骤7的冷冻干燥的条件为:真空度50pa,冷阱温度为
ꢀ‑
50℃,物料温度为
ꢀ‑
20℃。
当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1