技术特征：
1.一种用于扩增并分析核酸序列的方法，包括：a.使具有液体部分的系统与固体载体接触，其中所述液体部分包含核酸样品、两种或以上非固定化的扩增引物和用于核酸扩增的试剂，并且所述固体载体具有一种或以上固定化的扩增引物；b.使用所述非固定化的扩增引物进行核酸扩增反应，以产生第一非固定化的核酸扩增产物；c.使用所述一种或以上固定化的扩增引物进一步扩增所述第一非固定化的核酸扩增产物，以产生固定化的第二核酸扩增产物；d.以下两者中的一者i.实时查询在所述固定化的第二核酸扩增产物处产生的定位信号，或者ii.除去所述液体部分和第一非固定化的扩增产物，并替换为具有与所述固定化的第二核酸扩增产物杂交的引物的新液体部分，以及以下两者中的一者1.直接检测所述杂交引物，或者2.使包含至少一种核苷酸的溶液流过所述固定化的第二扩增产物以延伸所述杂交引物，以及e.检测所述第二核酸扩增产物的存在、不存在或序列。2.根据权利要求1所述的方法，其中在扩增之前从所述固相中释放所述液体部分中的所述非固定化的扩增引物。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中使用非固定化的引物的核酸扩增反应使用两对或以上非固定化的引物。4.根据权利要求1所述的方法，其中通过热循环进行所述扩增。5.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中使用所述非固定化的引物的核酸扩增反应为等温扩增。6.根据权利要求5所述的方法，其中通过进一步的等温扩增产生所述第二扩增产物。7.根据权利要求5所述的方法，其中通过热循环产生所述第二扩增产物。8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中通过实时查询产生的定位信号进行所述固定化的第二核酸扩增产物的扩增。9.根据权利要求8所述的方法，其中溶液中的两种引物以不同的浓度存在从而产生不对称扩增。10.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述与所述第二核酸扩增产物杂交的引物是经荧光标记的。11.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中通过检测核苷酸掺入时释放的质子检测所述扩增产物。12.根据权利要求11所述的方法，其中所述检测使用isfet传感器。13.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述扩增产物的检测包括荧光报告探针和随后的荧光测定。14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中使用具有相同核酸序列的扩增引物获得所述第一扩增产物和所述第二扩增产物。15.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述固定化的扩增引物扩增所述第
一扩增产物的内部段，使得所述第二扩增产物比所述第一扩增产物短。16.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一液体部分暴露于两种或以上固定化的扩增引物中，其中各引物扩增不同的序列。17.根据权利要求16所述的方法，其中所述两种或以上固定化的扩增引物相差单个碱基，从而检测所述第一核酸扩增产物中的单碱基变体。18.根据权利要求16或权利要求17所述的方法，其中所述固定化的引物位于开放微阵列。19.根据权利要求16或权利要求17所述的方法，其中所述固定化的引物位于单独的孔中。20.一种用于扩增并检测核酸序列的系统，包括与固体载体接触的液体部分，其中所述液体部分包含核酸样品、一种或以上非固定化的扩增引物和用于核酸扩增的试剂，并且所述固体载体具有一种或以上固定化的扩增引物，其中所述系统包括用于检测所述扩增产物的传感器。21.根据权利要求20所述的系统，其中所述传感器为光学传感器。22.根据权利要求20所述的系统，其中所述传感器为电传感器。23.根据权利要求20或权利要求22所述的系统，其中所述传感器为cmos传感器。24.根据权利要求23所述的系统，其中所述系统包括多个isfet传感器和两种或以上固定化的引物，其中各isfet传感器包括单个固定化的引物。
技术总结
本申请描述了用于有效扩增并检测群体中的某些核酸序列的方法。可以(例如)通过测序进一步表征所选择的群体。该方法包括组合的液相和固相扩增。和固相扩增。
技术研发人员：大卫
受保护的技术使用者：DNAE诊断有限公司
技术研发日：2020.05.07
技术公布日：2022/3/18