技术特征：
1.一种纯化肉毒杆菌毒素的方法，该方法包括：(a)预先处理含有肉毒杆菌毒素的培养基溶液；(b)使用阳离子交换色谱来纯化预先处理的肉毒杆菌毒素；(c)使用疏水色谱来纯化该肉毒杆菌毒素；以及(d)利用阳离子交换色谱来纯化该肉毒杆菌毒素。2.根据权利要求1所述的方法，其中使用sp柱进行步骤(b)中的阳离子交换色谱。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述sp柱选自由sp琼脂糖hp柱、sp琼脂糖ff柱和capto s柱组成的组。4.根据权利要求2所述的方法，其中将步骤(b)中的肉毒杆菌毒素溶于ph为4.5至5.5的10至30mm的柠檬酸钠缓冲液中，然后注入所述sp柱中。5.根据权利要求2所述的方法，其中利用ph为4.5至5.5的30至70mm的柠檬酸钠缓冲液来洗脱步骤(b)中的该肉毒杆菌毒素，其中该磷酸钠缓冲液补充有0.5至1.5m的氯化钠。6.根据权利要求1所述的方法，其中使用苯基柱来进行步骤(c)中所述疏水色谱。7.根据权利要求6所述的方法，其中该苯基柱是选自于由苯基琼脂糖hp柱、苯基琼脂糖ff(快速流动)柱和capto苯基柱组成的组。8.根据权利要求6所述的方法，其中将步骤(c)中的肉毒杆菌毒素溶于ph为5.7至6.7的30至70mm的磷酸钠缓冲液中，然后注入所述苯基柱中。9.根据权利要求6所述的方法，其中利用ph为5.7至6.7的30至70mm的磷酸钠缓冲液来洗脱步骤(c)中的该肉毒杆菌毒素。10.根据权利要求1所述的方法，其中使用q柱来进行步骤(d)中的阳离子交换色谱。11.根据权利要求10所述的方法，其中该q柱选自于由capto q impres柱、toyopearl super q650m柱、q琼脂糖ff柱和q琼脂糖hp柱组成的组。12.根据权利要求10所述的方法，其中将步骤(d)中的肉毒杆菌毒素溶于ph为5.7至6.7的40至60mm的磷酸钠缓冲液中，然后注入所述q柱中。13.根据权利要求10所述的方法，其中利用ph为5.7至6.7的40至60mm的磷酸钠缓冲液来洗脱步骤(d)中的肉毒杆菌毒素，其中该磷酸钠缓冲液补充有0.8至1.2mm氯化钠。14.根据权利要求1所述的方法，其中所述纯化的肉毒杆菌毒素是具有99％或更高纯度的a型肉毒杆菌毒素。
技术总结
本发明公开了一种纯化肉毒杆菌毒素的方法，该方法包括：(a)预先处理含有肉毒杆菌毒素的培养基溶液，(b)利用阳离子交换色谱来纯化预先处理的肉毒杆菌毒素，(c)利用疏水色谱来纯化所述肉毒杆菌毒素，以及(d)使用阴离子交换色谱来纯化所述肉毒杆菌毒素。所述方法能够纯化肉毒杆菌毒素，该肉毒杆毒素具有高纯度和高活性，因此该方法可用于肉毒杆菌毒素的生产。产。产。
技术研发人员：金在永 南桢宣 金昇昊 崔乘官 林贤泽 崔真姬
受保护的技术使用者：株式会社技特玛
技术研发日：2020.04.14
技术公布日：2022/3/25