高分子量美容组合物的制作方法

高分子量美容组合物
1.相关申请的交叉引用
2.本技术要求于2019年12月2日提交的美国申请第62/942,624号的优先权，该申请在此以全文引用的方式并入。
技术领域
3.本公开涉及高分子量美容组合物领域，例如含有交联多糖的水凝胶，以及此类水凝胶在医疗和/或化妆品应用中的使用，例如用于皮下或皮内注射的植入物，所述植入物可用于人类的修复或整形手术和美容皮肤病学中。更具体地，本公开涉及包含交联的高分子量糖胺聚糖(gag)，特别是交联的透明质酸、软骨素或硫酸软骨素的水凝胶。


背景技术：

4.水凝胶广泛用于医学——通过化学交联聚合物制备以形成大型聚合网络。虽然单体多糖和最低程度聚合的多糖都吸水至饱和点，但多糖在饱和点溶解，而包含相同多糖的水凝胶虽然是交联的，但通常可以吸水而不溶解，导致水凝胶溶胀。
5.所有糖胺聚糖(gag)都是带负电荷的长线性杂多糖，其具有吸收大量水的能力。透明质酸、软骨素和硫酸软骨素是公知的用于医学和整容应用的生物相容性gag。用于医学用途的使用最广泛的生物相容性聚合物之一是透明质酸及其衍生物。通过交联和其它方式修改透明质酸分子对于提高体内透明质酸的持续时间是必需的，例如交联透明质酸以形成透明质酸水凝胶。
6.由例如透明质酸的高分子量gag生产水凝胶，可为多种医疗或整容应用提供合适的填充剂；然而，水凝胶可能在储存期间或在降解条件——例如热灭菌或加速稳定性研究——期间降解或水解。增加水凝胶稳定性的方法包括增加水凝胶中的交联数，但增加高分子量gag的交联数可以生产在降解条件下稳定的水凝胶，但会导致水凝胶的相分离。这给随后在不进行相分离的情况下稀释水凝胶带来了问题。
7.本公开的目的是克服由高分子量gag制备水凝胶的相关问题，所述高分子量gag表现出上升的稳定性并且能够在降解条件——例如热灭菌——期间维持水凝胶的完整性，同时维持将水凝胶稀释至所需gag浓度的能力，以用于例如用水凝胶填充注射器等应用。


技术实现要素：

8.本公开一般涉及由交联的高分子量糖胺聚糖(gag)生产水凝胶的方法，所述gag能够在原本会使水凝胶水解或导致水凝胶的相分离的条件下保持结构完整性。本公开进一步涉及通过所述方法生产的水凝胶组合物。
9.在一些方面，本公开一般涉及制备包含交联的糖胺聚糖(gag)分子的水凝胶的方法，所述方法包含(a)用交联剂交联分子量为至少1.5mda的gag，其中gag的浓度在2％至10％(w/w)之间，并且交联剂与gag的摩尔比小于或等于2％，以获得通过酰胺键交联的糖胺聚糖水凝胶。
10.在一些方面，如果(a)中的gag浓度在1％至4.5％(w/w)之间，那么交联剂的浓度在0.8至2mol％/gag二糖之间；并且如果(a)中的gag浓度在4.6％至5.9％(w/w)之间，则交联剂的浓度在0.5至0.8mol％/gag二糖之间；并且如果(a)中的gag浓度在6％至12％(w/w)之间，则交联剂的浓度在0.3至0.5mol％/gag二糖之间。
11.在一些方面，(a)中的交联剂是双亲核或多亲核官能交联剂。在一些方面，双亲核或多亲核官能交联剂是脂族或芳族二氨基衍生物、肽或肽序列。在一些方面，双亲核或多亲核官能交联剂包含间隔基团，所述间隔基团选自由以下组成的组：二糖、三糖、四糖和低聚糖。在一些方面，双亲核或多亲核官能交联剂是二氨基海藻糖(dath)。
12.在一些方面，(a)的交联包含：a1)提供或获得糖胺聚糖(gag)分子的溶液；a2)用偶联剂活化糖胺聚糖分子上的羧基以形成活化的糖胺聚糖分子；以及a3)使用双亲核或多亲核官能交联剂经由其活化的羧基来交联活化的糖胺聚糖(gag)分子，以获得通过酰胺键交联的糖胺聚糖水凝胶。在一些方面，在a2)中使用的偶联剂是三嗪类偶联剂，例如4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉氯化物(dmtmm)。
13.在一些方面，(a)中的交联在5.0至9.0的ph值下进行，优选地在6.0至8.0的ph值下进行。在一些方面，所述方法进一步包含将从(a)获得的交联水凝胶配制成10mg/ml至30mg/ml的最终糖胺聚糖(gag)浓度。在一些方面，所述方法进一步包含(b)对由(a)获得的交联水凝胶进行灭菌。
14.在一些方面，糖胺聚糖(gag)是透明质酸(ha)。在一些方面，(a)中的gag的分子量为2.0mda至10mda，优选地为2.5mda至3.5mda。在一些方面，gag的浓度在3％至5％(w/w)之间。在一些方面，交联剂与gag的摩尔比在0.9％至1.1％之间。在一些方面，gag是分子量为2.5mda至3.5mda的透明质酸(ha)，并且交联剂是二氨基海藻糖(dath)，并且进一步地，其中，ha的浓度在3％至5％(w/w)之间，并且dath与ha的摩尔比在0.9％至1.1％之间。
15.在一些方面，本公开一般涉及通过本文中所描述的任何一种方法获得的水凝胶产品。在一些方面，本公开一般涉及包含糖胺聚糖(gag)分子作为可溶胀聚合物的水凝胶产品，其中糖胺聚糖分子通过酰胺键交联，并且其中，交联的糖胺聚糖分子的表观分子量(mwapp)高于1.0mda；并且其中，可溶胀聚合物的热稳定性(normgelc)在24小时后高于80％。
16.在一些方面，糖胺聚糖分子通过包含间隔基团的交联进行共价交联，所述间隔基团选自由以下组成的组：二糖、三糖、四糖和低聚糖。在一些方面，间隔基团是海藻糖。在一些方面，糖胺聚糖(gag)是透明质酸(ha)。在一些方面，水凝胶产品已进行灭菌。
17.根据前述方面中的任一个或多个，gag的分子量不小于1.5mda，或任选地小于1.4mda、1.3mda、1.2mda、1.1mda、1.0mda、0.9mda、0.8mda或0.7mda。
18.根据上述方面中的任一个或多个，水凝胶不经受糖胺聚糖的后交联降解。根据上述方面中的任一个或多个，水凝胶经受环境降解后交联；然而，水凝胶没有表现出低于c
最终
/2的c
最小
值。根据上述方面中的任一个或多个，水凝胶表现出大于水凝胶的c
最终
/2的c
最小
值。
19.在一些方面，(a)和(b)从(a)至(b)逐步进行。在一些方面，a1)、a2)和a3)从a1)至a2)至a3)逐步进行。在一些方面，(a)和(b)不从(a)至(b)逐步进行。在一些方面，a1)、a2)和a3)不从a1)至a2)至a3)逐步进行。
20.在一些方面，本公开一般涉及整容治疗皮肤的方法，其包含向皮肤施用根据本文
中所描述的水凝胶组合物中的任一种的水凝胶产品。
21.以下具体实施方式是示范性和解释性的，并且旨在提供对本发明的进一步解释。
附图说明
22.图1描绘了在90℃下在大约70小时的时间段内表现出不同ha(mw)和ha交联的四种凝胶样品的标准化凝胶含量(normgelc(％))。
23.图2描绘了在将凝胶在90℃下温育24小时或48小时之后对应于表2中的样品1和样品2的凝胶含量(gelc％)。
24.图3描绘了在将凝胶在90℃下温育24小时或48小时之后对应于表2中的样品3和样品4的凝胶含量(gelc％)。
25.图4描绘了在将凝胶在90℃下温育24小时或48小时之后对应于表2中的样品5和样品6的凝胶含量(gelc％)。
26.图5描绘了在将凝胶在90℃下温育24小时或48小时之后对应于表2中的样品7和样品8的凝胶含量(gelc％)。
具体实施方式
27.i.定义
28.虽然以下术语被认为是本领域普通技术人员很好理解的，但是给出以下定义以便于解释当前公开的主题。
29.术语“一个(a)”或“一个(an)”可以指该实体中的一个或多个，即可以指多个指示物。因此，术语“一个(a)”或“一个(an)”、“一个或多个”和“至少一个”在本文中可互换使用。此外，不定冠词“一个(a)”或“一个(an)”对“一个元件”的引用不排除存在多于一个元件的可能性，除非上下文清楚地要求存在一个且仅一个元件。
30.在整个说明书中对“一个实施例”、“实施例”、“一个方面”或“一方面”的引用意味着结合该实施例描述的特定特征、结构或特性被包括在本公开的至少一个实施例中。因此，在本说明书中各处出现的短语“在一个实施例中”或“在实施例中”不一定都指同一实施例。此外，特定特征、结构或特性可以在一个或多个实施例中以任何合适的方式组合。
31.如本文中所用，术语“约”或“大约”当在数值之前时表示该值加上或减去该值的10％的范围。
32.如本领域技术人员将理解的，出于任何和所有目的，特别是就提供书面描述而言，本文中公开的所有范围还涵盖任何和所有可能的子范围及其子范围的组合。任何列出的范围可以容易地被认为是充分地描述并且使得相同的范围能够被分解为至少相等的二分之一、三分之一、四分之一、五分之一、十分之一等。作为非限制性实例，本文中讨论的每个范围可以容易地分解为下三分之一、中三分之一和上三分之一等。如本领域技术人员还将理解的，例如“至多”、“至少”、“大于”、“小于”等的所有语言包括所列举的数字，并且是指后续可分解成如上所述的子范围的范围。最后，如本领域技术人员将理解的，范围包括每个单独成员。因此，例如，具有1个至3个单元的组是指具有1个、2个或3个单元的组。类似地，具有1个至5个单元的组是指具有1个、2个、3个、4个或5个单元的组，等等。
33.如本文中所用，“对照”是用于比较目的的在实验中使用的替代样品。对照可以是“阳性”或“阴性”。本文中所用的“对照样品”或“参考样品”是指用作对照以与实验样品比较的样品或参考。例如，实验样品包含小瓶中的化合物a、b和c，并且对照可以是与实验样品相同处理的相同类型的样品，但缺少化合物a、b或c中的一种或多种。
34.如本文中所用，术语“有效量”是指足以实现期望的治疗和/或预防效果的量，例如导致预防一种或多种结果或增加一种或多种结果的量。
35.如本文中所用，术语“个体”、“患者”或“受试者”可以是个体生物体、脊椎动物、哺乳动物或人类。在优选的方面，个体、患者或受试者是人类。
36.如本文中所用，短语“软组织”是指连接、支持或围绕身体的其它结构和器官的组织。软组织包括肌肉、纤维组织和脂肪。
37.如本文中所用，短语“软组织增强”是指软组织的任何类型的体积增强，包括但不限于面部塑造(例如，更显著的脸颊、下巴或嘴唇)、凹陷畸形的矫正(例如，创伤后或hiv相关的脂肪萎缩)以及深度的年龄相关的面部褶皱的矫正。因此，软组织增强可用于整容目的或用于医疗目的，例如创伤或变性疾病后的那些。软组织增强进一步指真皮填充、体形塑造和牙龈填充。
38.如本文中所用，短语“非动物来源”是指不包括动物但包括例如酵母、细菌或合成物来源的来源。
39.如本文中所用，术语“生物可吸收的”是指一种或多种降解事件——生物可吸收的物质可在一段时间内溶解、可被吞噬或可简单地降解，使得该物质在一段时间内从身体、器官、组织、部位或细胞中被清除。该物质或其降解产物可被代谢、掺入到其它分子或化合物中、或被排泄。
40.如本文中所用，术语“经消毒的”是指不含或不含病原微生物的物质。
41.如本文中所用，术语“灭菌的”是指不含活生物体、通常不含活微生物的物质。
42.如本文中所用，术语“可注射的”是指通过针注射本公开的组合物的能力。
43.如本文中所用，术语“mw”或“mw”是指质量平均分子量。
44.如本文中所用，术语“mw
app”是指表观mw，其为水凝胶中gag的分子量的模拟值。
45.如本文中所用，术语“swf”是指盐水中的溶胀因子分析，其为已溶胀至其最大值的1克凝胶的盐水体积——通常表示为ml/g)。
46.如本文中所用，“凝胶含量”或“gelc”是指以凝胶形式结合的总ha的比例的百分比——进一步描述为未通过0.22微米过滤器的样品中ha的量。gelc由滤液中收集的ha的量计算，并且报告为凝胶样品中ha总量的百分比。
47.如本文中所用，“swd”是指溶胀度，它是在0.9％盐水中完全溶胀的凝胶中凝胶形式gag的转化浓度，即每克干交联gag可形成的完全溶胀凝胶的体积或质量。swd通常描述产品的最大液体吸收(0.9％盐水)能力。swd优选地以g/g、ml/g或无量纲数表示。
[0048][0049]
swd还可表示为
[0050][0051]
如本文中所用，“crr
dath”是指用lc-sec-ms分析的有效交联比，更具体地定义为
[0052][0053]
crr为1.0表明所有交联剂已交联。
[0054]
如本文中所用，“c
最小”是最小理论gag浓度——在0.9％盐水中完全溶胀的凝胶中凝胶形式gag的浓度，通常表示为mg/g或mg/ml。
[0055]c最小-1
＝swd
[0056]
如本文中所用，“c
最终”是最终水凝胶产品中的gag的预期浓度。在一些方面，c
最终
大于2
×c最小
。
[0057]
本技术不限于本技术中描述的特定方面，这些特定方面旨在作为本技术的单个方面的单独绘示。在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以对本发明进行许多修改和变化，这对于本领域技术人员来说是显而易见的。除了在本文中列举的那些方法和设备之外，根据前面的描述，在本技术范围内的功能上等同的方法和设备对于本领域技术人员将是显而易见的。此类修改和变化旨在落入本技术的范围内。应当理解，本技术不限于特定的方法、试剂、化合物组合物或生物系统，当然，这些方法、试剂、化合物组合物或生物系统可以变化。还应理解，本文中所用的术语仅用于描述特定实施例的目的，而不旨在限制。
[0058]
ii.水凝胶和制作水凝胶的方法
[0059]
填充剂例如真皮填充剂已经用于修复、恢复或增强由于面部、身体和内部器官的老化、损伤或获得性或先天性畸形引起的身体的硬组织或软组织轮廓缺陷。填充剂可以是天然的或合成的物质，其用于减少皱纹和/或细线、恢复流失的体积、皮肤补水、软化鼻唇褶皱、增强和塑造嘴唇、改善疤痕(凹陷、肥厚性和疤痕疙瘩)、强化弱化的声带、以及提供其它软组织改善。已经使用的物质包括脂肪、石蜡、人胶原、牛胶原、硅酮、透明质酸、乳酸和乙醇酸。1981年，随着fda对牛胶原蛋白的批准，软组织填充剂出现了新时代。从那时起，出现了许多软组织填充剂。当前和研究用填充剂数量的急剧增加是由许多因素推动的，包括生物技术的改进和社会中对整容品外观的重视。随着新型填充剂的引入，一直需要评估其风险/受益概况并定义其局限性，以最大化患者的整容效果和安全性。常用的填充剂/水凝胶组合物包括gag，例如透明质酸。
[0060]
生产gag水凝胶的方法公开于以下文件中：pct公开号wo2017/114867、wo2017/114861、wo2017/114864和wo2017/114865；us特许公开号us20190023812a1、us20190016830a1、us20190023855a1、以及us20070066816a1；以及美国专利申请号8,858,999、6,831,172、8,887,243和6,703,444。
[0061]
交联透明质酸的常用途径是使用二缩水甘油醚，例如1,4-丁二醇二缩水甘油醚(bdde)。作为替代方案，使用二胺或多胺官能交联剂与偶联剂进行酰胺偶联是制备可用于水凝胶产品的交联透明质酸分子的有吸引力的途径。例如，使用4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐(dmtmm)来活化羧酸酯并在后续与二氨基结构例如二氨基海藻糖(dath)缩合已展示出是生产由交联的透明质酸构成的水凝胶的有效方法，其中生物聚合物的降解较少。
[0062]
在一些方面，交联通过包含间隔基团的交联剂进行，所述间隔基团选自由以下组成的组：二糖、三糖、四糖和低聚糖。这提供了完全基于碳水化合物结构或其衍生物的水凝胶产品，其使交联对用于生产水凝胶的gag的天然特性的干扰最小化。
[0063]
在一些方面，交联剂本身有助于水凝胶的保持或增加的特性，例如当与和透明质酸相互关联的结构(例如二氨基透明质酸四糖)进行交联时或当与具有高水保留特性的结构(例如海藻糖)进行交联时。
[0064]
在一些方面，gag是硫酸化或非硫酸化gag，例如玻尿酸、硫酸软骨素、硫酸乙酰肝素、肝素前体、肝素、硫酸皮肤素和硫酸角质素。在一些方面，gag是透明质酸、软骨素或硫酸软骨素。在一个方面，gag是透明质酸。在一些方面，gag是天然gag。在一些方面，gag是天然存在的gag。在一些方面，gag以其天然状态使用(即，gag的化学结构未通过添加官能基团等改变或修改)。使用天然状态的gag是优选的，因为这将提供更接近地类似于天然分子的交联结构，这保存了gag本身的天然特性和效用，并且当将交联的gag引入体内时可以使免疫应答最小化。
[0065]
在一些方面，gag是共价交联的。在一些方面，共价交联的gag分子由或基本上由碳水化合物型结构或其衍生物组成。在一些方面，交联的gag或水凝胶不含或基本上不含合成的非碳水化合物结构或连接剂。这可以通过将天然状态的gag与包含、由或基本上由碳水化合物型结构或其衍生物组成的交联剂一起使用来实现。在一些方面，交联剂的官能基团直接共价结合至gag的羧基。在一些方面，共价交联的gag的交联包含、由或基本上由二糖、三糖、四糖和低聚糖间隔基团组成。
[0066]
在一些方面，交联的gag包含gag分子链之间的交联，其产生通过共价交联保持在一起的gag分子的连续网络。
[0067]
在一些方面，交联的gag形成凝胶或水凝胶——其不溶于水，但在接触液体——通常为水性液体——时显著稀释了gag的交联系统。
[0068]
在一些方面，制备包含交联的糖胺聚糖分子的水凝胶产品的过程包含以下步骤、由以下步骤组成、或基本上由以下步骤组成：(a)提供糖胺聚糖分子的溶液；(b)用偶联剂活化糖胺聚糖分子上的羧基以形成活化的糖胺聚糖分子；以及(c)使用双亲核或多亲核官能交联剂经由活化的糖胺聚糖分子的活化羧基对活化的糖胺聚糖分子进行交联——所述双亲核或多亲核官能交联剂包含间隔基团，所述间隔基团选自由以下组成的组：二糖、三糖、四糖和低聚糖——以获得交联的糖胺聚糖分子。
[0069]
在一些方面，gag通过共价键例如酰胺键进行交联，通常使用gag分子主链上的羧基的活化剂和双亲核或多亲核官能交联剂，所述双亲核或多亲核官能交联剂包含间隔基团，所述间隔基团选自由以下组成的组：二糖、三糖、四糖和低聚糖。在一些方面，gag的交联可通过温和且有效的途径实现，从而以gag分子的最小降解产生高产率。
[0070]
在一些方面，双亲核或多亲核官能交联剂含有间隔基团，所述间隔基团选自由以下组成的组：二糖、三糖、四糖和低聚糖，其保留在gag分子之间的交联中。在一些方面，双亲核或多亲核官能二糖、三糖、四糖和低聚糖包含与其连接的至少两个亲核官能基团。在一些方面，该至少两个亲核官能基团由间隔基团隔开，所述间隔基团选自由以下组成的组：二糖、三糖、四糖和低聚糖。
[0071]
在一些方面，双亲核或多亲核官能交联剂包含两个或更多个能够与gag的官能羧基反应的官能基团，从而形成共价键，例如酰胺键。在一些方面，亲核官能基团能够与糖胺聚糖分子上的羧基反应以形成酰胺键。在一些方面，二糖、三糖、四糖和低聚糖的亲核官能基团选自由以下组成的组：伯胺、肼、酰肼、肼基甲酸酯、半卡巴肼、氨基硫脲、
thiocarbazate和氨氧基。在一些方面，双亲核或多亲核官能二糖、三糖、四糖和低聚糖可以衍生自亲核官能的多糖，例如衍生自壳多糖的壳二糖。在一些方面，双亲核或多亲核官能二糖、三糖、四糖和低聚糖也可以是通过引入两个或更多个亲核官能基团来修改的二糖、三糖、四糖和低聚糖。
[0072]
在一些方面，双亲核或多亲核官能交联剂包括同双或异双官能伯胺、肼、酰肼、肼基甲酸盐、半二肼羰、氨基硫脲、thiocarbazates和氨氧基。
[0073]
在一些方面，交联剂选自由以下组成的组：二氨基透明质酸四糖、二氨基透明质酸六糖、二氨基海藻糖(dath)、二氨基乳糖、二氨基麦芽糖、二氨基蔗糖、二氨基壳二糖、壳二糖或二氨基棉子糖。
[0074]
在一些方面，活化步骤和交联步骤同时发生。在一些方面，活化步骤发生在交联步骤之前并且与交联步骤分开。
[0075]
在一些方面，交联的后续步骤包含提供交联的gag分子的颗粒，平均大小为0.01mm至5mm，优选地为0.1mm至0.8mm。
[0076]
在一些方面，颗粒的尺寸在20μm至800μm之间。在一些方面，颗粒的尺寸在约100μm至约500μm之间。在一些方面，该尺寸可以是长度、直径或宽度。通常，这是指直径。在一些方面，颗粒的尺寸为20μm至800μm之间、20μm至700μm之间、20μm至600μm之间、20μm至500μm之间、20μm至400μm之间、20μm至300μm之间、20μm至200μm之间、100μm至800μm之间、100μm至700μm之间或100μm至300μm之间。
[0077]
在一些方面，偶联剂是肽偶联试剂。在一些方面，偶联试剂选自4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐(dmtmm)和2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪(cdmt)。优选的三嗪类肽偶联试剂是dmtmm。其它优选的肽偶联试剂是碳化二亚胺偶联试剂，优选地是n-(3－二甲基氨丙基)-n'-乙基碳二亚胺(edc)与n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)的组合。
[0078]
在一些方面，活化的gag分子的交联使用交联剂经由其羧基发生。在一些方面，交联剂是包含间隔基团的双亲核或多亲核官能交联剂，所述间隔基团选自由以下组成的组：二糖、三糖、四糖和低聚糖。在一些方面，交联剂通过gag主链上的羧基将gag链彼此连接。在一些方面，间隔基团可以是透明质酸四糖、透明质酸六糖、海藻糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、纤维二糖或棉子糖残基。术语“残基”在此是指化合物的结构分别与母体化合物透明质酸四糖、透明质酸六糖、海藻糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、纤维二糖或棉子糖相似但不相同。残基的结构可能与母体化合物的结构不同，因为其具有两个或更多个亲核官能基团，并且任选地通过所述亲核官能基团共价连接gag主链上的羧基。
[0079]
根据相关方面，本发明还提供了水凝胶产品作为药物的用途，例如用于治疗软组织疾病。本发明提供了一种通过向患者施用治疗有效量的水凝胶产品来治疗患有软组织疾病的患者的方法。还提供了通过向患者施用治疗有效量的水凝胶产品来向患者提供矫正或美容治疗的方法。
[0080]
在一些方面，水凝胶按重量计主要含有液体，并且可含有90％至99.9％的水，但由于液体内的三维交联gag分子网络，其表现类似于固体。由于其显著的液体含量，水凝胶在结构上具有灵活性并且类似于天然组织，这使得其作为组织工程中的支架和用于组织增强非常有用。它还可用于治疗软组织疾病和用于矫正或美容治疗。在一些方面，水凝胶用作可注射制剂。
[0081]
本文中公开的方法是将可注射组合物用于修复或整形手术、美容皮肤病学、面部塑造、体形塑造和牙龈增强的方法。在一些方面，组合物是冷冻干燥的或冻干的。在一些方面，组合物包含水凝胶，所述水凝胶包含水溶液。
[0082]
在一些方面，使用酰胺交联由高分子量(hmw)糖胺聚糖生产交联的糖胺聚糖产品，例如透明质酸产品。
[0083]
在一些方面，使用dath/dmtmm化学配制来自hmw透明质酸的交联的透明质酸产品以产生适合使用的gag浓度(c
最终
为10mg/ml至45mg/ml)。在一些方面，gag是透明质酸。在一些方面，适合的gag浓度用于皮肤病学用途、牙科用途、医学用途或重建外科用途。
[0084]
在一些方面，适合的gag浓度为10mg/ml至50mg/ml、10mg/ml至45mg/ml、10mg/ml至40mg/ml、10mg/ml至35mg/ml、10mg/ml至30mg/ml、10mg/ml至25mg/ml、10mg/ml至20mg/ml、10mg/ml至15mg/ml、15mg/ml至40mg/ml、15mg/ml至40mg/ml、15mg/ml至35mg/ml、15mg/ml至30mg/ml、15mg/ml至25mg/ml、15mg/ml至20mg/ml、20mg/ml至50mg/ml、20mg/ml至45mg/ml、20mg/ml至40mg/ml、20mg/ml至35mg/ml、20mg/ml至30mg/ml、20mg/ml至25mg/ml、25mg/ml至50mg/ml、25mg/ml至45mg/ml、25mg/ml至40mg/ml、25mg/ml至35mg/ml、25mg/ml至30mg/ml、30mg/ml至50mg/ml、30mg/ml至45mg/ml、30mg/ml至40mg/ml、30mg/ml至35mg/ml、35mg/ml至50mg/ml、35mg/ml至45mg/ml、35mg/ml至40mg/ml、40mg/ml至50mg/ml、或40mg/ml至45mg/ml。
[0085]
在一些方面，适合的gag浓度为约10mg/ml至约50mg/ml、约10mg/ml至约45mg/ml、约10mg/ml至约40mg/ml、约10mg/ml至约35mg/ml、约10mg/ml至约30mg/ml、约10mg/ml至约25mg/ml、约10mg/ml至约20mg/ml、约10mg/ml至约15mg/ml、约15mg/ml至约40mg/ml、约15mg/ml至约40mg/ml、约15mg/ml至约35mg/ml、约15mg/ml至约30mg/ml、约15mg/ml至约25mg/ml、约15mg/ml至约20mg/ml、约20mg/ml至约50mg/ml、约20mg/ml至约45mg/ml、约20mg/ml至约40mg/ml、约20mg/ml至约35mg/ml、约20mg/ml至约30mg/ml、约20mg/ml至约25mg/ml、约25mg/ml至约50mg/ml、约25mg/ml至约45mg/ml、约25mg/ml至约40mg/ml、约25mg/ml至约35mg/ml、约25mg/ml至约30mg/ml、约30mg/ml至约50mg/ml、约30mg/ml至约45mg/ml、约30mg/ml至约40mg/ml、约30mg/ml至约35mg/ml、约35mg/ml至约50mg/ml、约35mg/ml至约45mg/ml、约35mg/ml至约40mg/ml、约40mg/ml至约50mg/ml、或约40mg/ml至约45mg/ml。
[0086]
在一些方面，透明质酸涵盖各种链长和电荷状态以及各种化学修改——包括交联——的透明质酸、透明质酸盐或透明质酸(hyaluonan)的所有变体和变体的组合。
[0087]
在一些方面，透明质酸涵盖透明质酸的各种透明质酸盐，所述透明质酸具有各种反离子，例如透明质酸钠。在一些方面，透明质酸的各种修改还涵盖透明质酸的列举，例如氧化，例如
–
ch2oh基团氧化成
–
cho和/或
–
cooh；邻位羟基的高碘酸盐氧化，其随后可以还原，例如
–
cho还原成
–
ch2oh或与胺偶联以形成亚胺，随后还原成仲胺；硫酸化；脱酰胺作用，其随后可用新的酸脱氨或形成酰胺；酯化；交联；用各种化合物取代，例如使用交联剂或碳二亚胺辅助偶联；包括不同分子例如蛋白质、肽和活性药物成分与透明质酸的偶联；以及脱乙酰作用。在一些方面，透明质酸可以通过异脲、酰肼、溴化氰、单环氧化物和单砜偶联进一步修改。
[0088]
在一些方面，透明质酸可以从动物和非动物来源的各种来源获得。在一些方面，非
动物来源的来源包括酵母或细菌。在一些方面，单个透明质酸分子的分子量通常在0.1mda至10mda的范围内，但其它分子量也是可能的。
[0089]
在一些方面，本公开涉及包含乙酰基的生物聚合物/水凝胶的至少部分脱乙酰化，其包含：a)提供包含乙酰基的生物聚合物；b)使该包含乙酰基的生物聚合物与羟胺或其盐在100℃或更低的温度下反应2小时至200小时，以形成至少部分脱乙酰化的生物聚合物，以及c)回收该至少部分脱乙酰化的生物聚合物。在一些方面，通过本文中所描述的方法由hmw gag制备水凝胶。
[0090]
在一些方面，本公开涉及制备包含交联的gag的水凝胶产品的方法，所述方法包含：a)提供通过酰胺键交联的gag，其中交联的gag包含残余胺基，以及b)酰化a)中提供的交联的gag的残余胺基以形成酰化的交联的gag。在一些方面，通过本文中所描述的方法由hmw gag制备水凝胶。
[0091]
在一些方面，本公开涉及制备包含交联的gag的水凝胶产品的方法，所述方法包含：a)提供通过胺键交联的gag，其中交联的gag包含在酰胺交联期间作为副产品形成的酯交联；以及b)对交联的gag进行碱处理以水解在酰胺交联期间作为副产品形成的酯交联。在一些方面，通过本文中所描述的方法由hmw gag制备水凝胶。
[0092]
当使用低dath载量的dath/dmtmm系统由高分子量(hmw)糖胺聚糖例如透明质酸生产水凝胶时，最初形成用于填充剂组合物的适合凝胶，但是水凝胶在储存时或暴露于降解条件(例如热灭菌、加速稳定性研究)期间可能水解。这表明需要更大量的交联来保持凝胶完整并防止其水解。然而，增加dath/dmtmm的量——以增加凝胶中的交联数——可能导致具有高c
最小
的凝胶在适合的gag浓度下进行相分离。换句话说，当从hmw gag生产具有足够交联的凝胶以使它们在高压灭菌期间稳定时，不可能将凝胶稀释至20mg/ml(10mg/ml至45mg/ml)而不获得相分离。这又增加了例如在注射器中填充凝胶的过程的复杂性。在一些方面，水凝胶是同质的。同质产品不发生相分离。在一些方面，将水凝胶配制成用于皮肤病学用途的合适浓度(例如10mg/ml至45mg/ml)，但在过量盐水存在下保持溶胀能力。
[0093]
在一些方面，生产水凝胶的方法不导致水凝胶的相分离。在一些方面，由本文中所公开的方法生产或衍生的水凝胶不是相分离的。在一些方面，在热灭菌后稀释水凝胶的方法不会导致水凝胶的相分离。
[0094]
在一些方面，水凝胶在pbs缓冲液中稀释。在一些方面，水凝胶在1mm、2mm、3mm、4mm、5mm、6mm、7mm、8mm、9mm、10mm、11mm、12mm、13mm、14mm、15mm、16mm、17mm、18mm、19mm或20mm磷酸盐缓冲液中稀释。在一些方面，水凝胶在约1mm、约2mm、约3mm、约4mm、约5mm、约6mm、约7mm、约8mm、约9mm、约10mm、约11mm、约12mm、约13mm、约14mm、约15mm、约16mm、约17mm、约18mm、约19mm或约20mm磷酸盐缓冲液中稀释。在一些方面，将水凝胶稀释至1mm至20mm、1mm至15mm、1mm至10mm、1mm至5mm、5mm至20mm、5mm至15mm、5mm至10mm、10mm至20mm、10mm至15mm或15mm至20mm之间的磷酸盐缓冲液。在一些方面，将水凝胶稀释至约1mm至约20mm、约1mm至约15mm、约1mm至约10mm、约1mm至约5mm、约5mm至约20mm、约5mm至约15mm、约5mm至约10mm、约10mm至约20mm、约10mm至约15mm、或约15mm至约20mm之间的磷酸盐缓冲液。
[0095]
在一些方面，水凝胶在ph值为约6.0、约6.2、约6.4、约6.6、约6.8、约7.0、约7.2、约7.4、约7.6、约7.8或约8.0的溶液中稀释。在一些方面，水凝胶在ph值为6.0、6.2、6.4、6.6、6.8、7.0、7.2、7.4、7.6、7.8或8.0的溶液中稀释。在一些方面，水凝胶在ph值为6.0至8.0之
间、6.0至7.0之间、7.0与8.0之间、6与7.5之间、7.0与7.5之间或6.5与7.5之间的溶液中稀释。
[0096]
在一些方面，交联反应的ha浓度为约1％、约1.5％、约2％、约2.5％、约3％、约3.5％、约4％、约4.5％、约5％、约5.5％、约6％、约6.5％、约7％、约7.5％、约8％、约8.5％、约9％、约9.5％、约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、约15％、约16％、约17％、约18％、约19％、或约20％。在一些方面，交联反应的ha浓度为1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、5.5％、6％、6.5％、7％、7.5％、8％、8.5％、9％、9.5％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或20％。在某些方面，交联反应的ha浓度在1％至3％、2％至5％、3％至5％、4％至5％、2％至3％、2％至4％、3％至5％、3％至4％、1％至20％、1％至15％、1％至10％、1％至5％、1％至2％、2％至5％、2％至10％、2％至15％、2％至20％、5％至20％、5％至15％、5％至10％、10％至20％、10％至15％、或15％至20％之间。
[0097]
在一些方面，交联反应的ha浓度不大于10％。在一些方面，交联反应的ha浓度不大于9％。在一些方面，交联反应的ha浓度不大于8％。在一些方面，交联反应的ha浓度不大于7％。在一些方面，交联反应的ha浓度不大于6％。在一些方面，交联反应的ha浓度不大于5％。在一些方面，交联反应的ha浓度不大于4％。在一些方面，交联反应的ha浓度不大于3％。
[0098]
在一些方面，交联反应中dath的mol-％为0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％或2％。在一些方面，交联反应中dath的mol-％为约0.1％、约0.2％、约0.3％、约0.4％、约0.5％、约0.6％、约0.7％、约0.8％、约0.9％、约1％、约1.1％、约1.2％、约1.3％、约1.4％、约1.5％、约1.6％、约1.7％、约1.8％、约1.9％或约2％。在一些方面，交联反应中dath的mol-％为0.1％至2％、0.1％至1.5％、0.1％至1％、0.1％至0.5％、0.2％至1％、0.2％至0.5％、0.2％至0.3％、0.5％至1％、0.5％至1.5％、0.5％至2％、1％至2％、或1％至1.5％。
[0099]
在一些方面，gag的分子量高于700kda、800kda、900kda、1000kda、1100kda、1200kda、1300kda、1400kda、1500kda、1600kda、1700kda、1800kda、1900kda、2000kda、2500kda、3000kda、3500kda、4000kda、4500kda、5000kda、5500kda、6000kda、6500kda、7000kda、7500kda、8000kda、8500kda、9000kda、9500kda或10000kda。
[0100]
在一些方面，gag的分子量高于约700kda、约800kda、约900kda、约1000kda、约1100kda、约1200kda、约1300kda、约1400kda、约1500kda、约1600kda、约1700kda、约1800kda、约1900kda、约2000kda、约2500kda、约3000kda、约3500kda、约4000kda、约4500kda、约5000kda、约5500kda、约6000kda、约6500kda、约7000kda、约7500kda、约8000kda、约8500kda、约9000kda、约9500kda、或约10000kda。
[0101]
在一些方面，水凝胶的热稳定性(normgelc或gelc)在24小时后为至少80％。在一些方面，水凝胶的热稳定性(normgelc或gelc)在48小时后为至少80％。在一些方面，水凝胶的热稳定性(normgelc或gelc)在约90℃下24小时后为至少80％。在一些方面，水凝胶的热稳定性(normgelc或gelc)在至少70℃的温度下24小时或48小时后为至少80％。在一些方面，水凝胶的热稳定性(normgelc或gelc)在至少90℃的温度下24小时或48小时后为至少80％。
[0102]
在一些方面，水凝胶的热稳定性(normgelc或gelc)在24小时或48小时后为至少70％、75％、80％、85％、90％或95％。在一些方面，水凝胶的热稳定性(normgelc或gelc)在至少70℃或至少90℃的温度下24小时或48小时后为至少70％、75％、80％、85％、90％或95％。
[0103]
在一些方面，水凝胶的热稳定性(normgelc或gelc)在24小时或48小时后为至少约70％、约75％、约80％、约85％、约90％或约95％。在一些方面，水凝胶的热稳定性(normgelc或gelc)在至少70℃或至少90℃的温度下24小时或48小时后为至少70％、75％、80％、85％、90％或95％。
[0104]
在一些方面，水凝胶的热稳定性(normgelc或gelc)在至少70℃或至少90℃的温度下24小时或48小时后降低小于5％、10％、15％、20％、25％或30％。在一些方面，水凝胶的热稳定性(normgelc或gelc)在至少70℃或至少90℃的温度下24小时或48小时后降低小于约5％、约10％、约15％、约20％、约25％或30％。
[0105]
在一些方面，测定热稳定性的温度为至少70℃、72℃、74℃、76℃、78℃、80℃、82℃、84℃、86℃、88℃、90℃、92℃、94℃、96℃、98℃、100℃、102℃、104℃、106℃、108℃或110℃。在一些方面，测定热稳定性的温度为至少约70℃、约72℃、约74℃、约76℃、约78℃、约80℃、约82℃、约84℃、约86℃、约88℃、约90℃、约92℃、约94℃、约96℃、约98℃、约100℃、约102℃、约104℃、约106℃、约108℃或约110℃。
[0106]
在一些方面，测定热稳定性的制造后时间段为至少24小时、26小时、28小时、30小时、32小时、34小时、36小时、38小时、40小时、42小时、44小时、46小时、48小时、50小时、52小时、54小时、56小时、58小时、60小时、62小时、64小时、66小时、68小时、70小时、72小时、74小时、76小时、78小时或80小时。在一些方面，测定热稳定性的制造后时间段为至少约24小时、约26小时、约28小时、约30小时、约32小时、约34小时、约36小时、约38小时、约40小时、约42小时、约44小时、约46小时、约48小时、约50小时、约52小时、约54小时、约56小时、约58小时、约60小时、约62小时、约64小时、约66小时、约68小时、约70小时、约72小时、约74小时、约76小时、约78小时或约80小时。
[0107]
在一些方面，组合物是生物可吸收的。在一些方面，水凝胶是生物可吸收的。在一些方面，组合物在约1年至约3年的时间段内被生物吸收。在一些方面，组合物在1年至3年的时间段内被生物吸收。在一些方面，水凝胶在约1年至约3年的时间段内被生物吸收。在一些方面，水凝胶在1年至3年的时间段内被生物吸收。
[0108]
在一些方面，组合物进一步包含局部麻醉剂。在一些方面，组合物包含至少一种局部麻醉剂。在一些方面，局部麻醉剂是酰胺型局部麻醉剂。在一些方面，局部麻醉剂是酯型局部麻醉剂。
[0109]
在一些方面，局部麻醉剂选自由以下组成的组：布比卡因、布坦卡因、卡替卡因、辛可卡因(狄布卡因)、氯丁卡因、对哌啶乙酰氨基苯甲酸乙酯、依替卡因、利多卡因(利度卡因)、甲哌卡因、奥昔卡因、丙胺卡因、罗哌卡因、托利卡因、三甲卡因、伐多卡因、阿替卡因、左布比卡因、阿米洛卡因、可卡因、普鲁派奴卡因、氯美卡因、环美卡因、丙美卡因、地卡因(丁卡因)、苯坐卡因、布他卡因、丁托西卡因、氨基苯甲酸丁酯、氯普鲁卡因、二甲卡因(拉罗卡因)、奥布卡因、哌罗卡因、对乙氧卡因、普鲁卡因(奴佛卡因)、丙氧卡因、和三卡因；或其组合。
[0110]
在一些方面，组合物中的局部麻醉剂浓度在1mg/ml至5mg/ml之间。在一些方面，组合物中的局部麻醉剂浓度在约1mg/ml至约5mg/ml之间。在一些方面，组合物中的局部麻醉剂浓度在2mg/ml至4mg/ml之间。在一些方面，组合物中的局部麻醉剂浓度在约2mg/ml至约4mg/ml之间。在一些方面，组合物中的局部麻醉剂浓度为0.5mg/ml、1mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml、2.5mg/ml、3mg/ml、3.5mg/ml、4mg/ml、4.5mg/ml或5mg/ml。在一些方面，组合物中的局部麻醉剂浓度为约0.5mg/ml、约1mg/ml、约1.5mg/ml、约2mg/ml、约2.5mg/ml、约3mg/ml、约3.5mg/ml、约4mg/ml、约4.5mg/ml、或约5mg/ml。
[0111]
在某些方面，组合物是可注射的。在一些方面，可注射组合物是可注射植入物。在一些方面，本公开涉及包含本文中公开的组合物中的任一种的可注射植入物。在一些方面，可注射植入物用于真皮下、皮内、皮下、肌内、肌下、龈内注射。
[0112]
在一些方面，本公开涉及包含本文中公开的组合物中的任一种的预填充注射器。在一些方面，本公开涉及包含本文中公开的组合物中的任一种的预填充小瓶。
[0113]
在一些方面，试剂盒包含预填充注射器，所述预填充注射器包含本文中公开的组合物中的任一种。在一些方面，试剂盒包含预填充小瓶、注射器和一个或多个皮下注射针，所述预填充小瓶包含本文中公开的组合物中的任一种。在一些情况下，试剂盒包含用于施用至注射部位的抗微生物组合物。
[0114]
在一些方面，设想了用于实践本文中所描述的方法的试剂盒。在一些方面，试剂盒包含足以进行本文中所描述的方法的所有溶液、缓冲液、化合物、容器和/或说明。
[0115]
在一些方面，组合物进一步包含氯化钠。在一些方面，组合物表现出0.9％w/v的氯化钠浓度。在一些方面，组合物进一步包含磷酸盐缓冲液。在一些方面，组合物进一步包含药学上可接受的载体。在一些方面，组合物进一步包含氯化钠、磷酸盐缓冲液和药学上可接受的载体。
[0116]
在一些方面，组合物包含一种或多种密度增强剂。在一些方面，密度增强剂可选自山梨醇、甘露醇和果糖。
[0117]
在一些方面，组合物包含缓冲剂。缓冲剂是添加到溶液中以允许该溶液抵抗由于稀释或少量添加酸或碱而引起的ph变化的一种化合物或多种化合物。有效的缓冲系统使用含有大量且大约相等浓度的共轭酸碱对(或缓冲剂)的溶液。本文中所用的缓冲剂可以是药学上可接受的任何此类化合物，包括但不限于磷酸盐和柠檬酸盐的盐(共轭酸和/或碱)。在一些方面，缓冲剂包含磷酸盐缓冲盐水(pbs)或替代的磷酸盐缓冲液。
[0118]
在一些方面，组合物是经消毒的。在一些方面，组合物是灭菌的。在一些方面，组合物通过过滤灭菌、热灭菌或辐射灭菌来灭菌。在一些方面，组合物的成分在混合或形成整个组合物之前进行灭菌，从而产生包含两种或更多种成分的组合物，所述两种或更多种成分在形成组合物之前进行灭菌。
[0119]
在一些方面，gag的分子量不小于1.5mda。在一些方面，gag的分子量不小于1.4mda。在一些方面，gag的分子量不小于1.3mda。在一些方面，gag的分子量不小于1.2mda。在一些方面，gag的分子量不小于1.1mda。在一些方面，gag的分子量不小于1.0mda。在一些方面，gag的分子量不小于0.9mda。在一些方面，gag的分子量不小于0.8mda。在一些方面，gag的分子量不小于0.7mda。
[0120]
在一些方面，水凝胶不经受糖胺聚糖的后交联降解。在一些方面，水凝胶经受环境
降解后交联；然而，水凝胶没有表现出低于c
最终
/2的c
最小
值。在一些方面，水凝胶表现出大于水凝胶的c
最终
/2的c
最小
值。
[0121]
本发明的其它方面和优选实施例将从本发明的以下详细公开和所附权利要求中变得明显。
[0122]
ii.使用水凝胶的方法
[0123]
在一些方面，本公开包含进行修复或美容皮肤病学治疗的方法。在一些方面，修复或美容皮肤病学治疗包含向受试者注射本文中公开的组合物。在一些方面，注射是真皮下、皮内、皮下、肌内、肌下或龈内注射。
[0124]
在一些方面，本公开的方法涉及由于牙龈后缩而进行龈内注射以填充牙龈。在一些方面，方法涉及将组合物注射到口腔的一个或多个组织中。
[0125]
在一些方面，注射用于真皮填充、体形塑造、面部塑造和牙龈填充。
[0126]
在一些方面，本文中公开的组合物的注射是用于真皮填充。在一些方面，真皮填充的方法包括注射组合物以填充皮肤裂纹。在一些方面，真皮填充的方法包括注射组合物以填充面部、颈部、手部、脚部、膝部和肘部中的细线。在一些方面，真皮填充的方法包括注射组合物以填充面部、颈部、手部、脚部、膝部和肘部中的细皱纹。在一些方面，真皮填充的方法包括注射组合物以填充面部、颈部、手部、脚部、膝部和肘部中的细线。
[0127]
在一些方面，真皮填充的方法包括注射组合物以填充疤痕。在一些方面，真皮填充的方法包括注射组合物以填充凹陷疤痕。在一些方面，真皮填充的方法包括注射组合物以填充肥厚性疤痕。在一些方面，真皮填充的方法包括注射组合物以填充疤痕疙瘩。
[0128]
在一些方面，真皮填充的方法包括注射组合物以恢复和/或矫正人体免疫缺损病毒(hiv)患者的面部脂肪减少(脂肪萎缩)的迹象。
[0129]
在一些方面，真皮填充的方法包括将组合物注射到手背或脚顶。
[0130]
在一些方面，真皮填充的方法包括注射组合物以强化弱化的声带。
[0131]
在一些方面，真皮填充的方法包括注射组合物以恢复由于年龄、疾病或损伤导致的身体部分的体积损失。
[0132]
在一些方面，面部塑造的方法包括将组合物注射到面部以修改面部轮廓。在一些方面，面部塑造的方法包括将组合物注射到唇部以增强唇部的尺寸和/或形状。
[0133]
在一些方面，面部塑造的方法包括将组合物注射到面部以增加面部对称性。在一些方面，面部塑造的方法包括注射组合物以将面部的形状改变为卵形、圆形、正方形、三角形、倒三角形、矩形或长方形。在一些方面，面部塑造的方法包括注射组合物以增加面部的总宽度。在一些方面，面部塑造的方法包括注射组合物以增加面部的总长度。
[0134]
在一些方面，面部塑造的方法包括将组合物注射到面部以增加前额和/或颧骨的宽度。在一些方面，面部塑造的方法包括将组合物注射到面部以增加颌线的长度。
[0135]
在一些方面，面部塑造的方法包括将组合物注射到面部以改变下巴的尺寸和/或形状。在一些方面，面部塑造的方法包括将组合物注射到面部以改变前额的尺寸和/或形状。在一些方面，面部塑造的方法包括将组合物注射到面部以改变脸颊的尺寸和/或形状。在一些方面，面部塑造的方法包括将组合物注射到面部以改变眉毛的尺寸和/或形状。
[0136]
在一些方面，面部塑造的方法包括将组合物注射到面部以修改与下颌后缩相关的外观。在一些方面，面部塑造的方法包括将组合物注射到面部以修改与下颌前突相关的外
观。
[0137]
在一些方面，体形塑造的方法包括将组合物注射到身体以修改身体各个方面的尺寸和形状。在一些方面，体形塑造的方法包括将组合物注射到身体以修改身体各个方面的尺寸和形状以增加对称性。
[0138]
在一些方面，体形塑造的方法包括将组合物注射到身体以修改乳房、臀部、骶骨、腹股沟、髋部、腹部、胸部、足部、腿部、膝部、腘肌、大腿、手臂、手部、肘部和/或肘前部的尺寸和形状。
[0139]
在一些方面，体形塑造的方法包括将组合物注射到身体以填充凹陷畸形。在一些方面，凹陷畸形是年龄、疾病、损伤或体质的结果。在一些方面，体形塑造的方法包括将组合物注射到身体以降低脂肪团的外观。
[0140]
实例
[0141]
实例1
[0142]
高分子量水凝胶生产
[0143]
实例1提供了用于制作本文中所描述的高分子量gag水凝胶的一般过程。
[0144]
将透明质酸(ha)和二氨基海藻糖(dath)与4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐(dmtmm)的溶液进行混合以交联。在交联过程之后，将凝胶分开并稀释至设定浓度。此后，将凝胶加热至大约70℃，持续大约24小时。然后凝胶经历粒度减小(psr)和沉淀，并且然后清洗并干燥成粉末。然后将凝胶粉末混合到合适的缓冲液中并使凝胶溶胀；然后将凝胶高压灭菌。
[0145]
表1：对应于图1的水凝胶组合物。
[0146][0147]
nd＝未确定
[0148]
在90℃的热降解条件下分析凝胶含量，并在刚刚超过70小时的进程中进行评估(图1)。为了便于比较，将凝胶含量值标准化，其在图1的y轴上被描绘为“normgelc(％)”。数据指出，与由较低分子量ha制作的凝胶相比，高分子量ha提供了在热降解条件下保持较高程度的凝胶含量的凝胶。
[0149]
实例2
[0150]
制备和评估高分子量(hmw)和低分子量(lmw)透明质酸(ha)水凝胶
[0151]
交联hmw和lmw ha的一般程序
[0152]
dmtmm和dath交联剂中的每一者的储备溶液均在水中新鲜制备。通过将所需体积的dmtmm(mol％dath
×
8.5)和dath(参见表1)储备溶液分别添加到水中来制备反应溶液。将反应溶液混合并直接添加到反应容器中的预称重的ha(0.4mda或2.1mda)中。将混合物充分混合3分钟并进行温育。24
±
2小时后，将所得材料挤压通过1mm钢网。将材料在70℃下同质化24
±
2小时，然后使用3
×
315μm过滤器对凝胶进行粒度减小(psr)，然后通过添加etoh进行沉淀。所得粉末在真空下干燥过夜并在中性ph下在7mm磷酸盐、0.7％nacl和3mg/g lido-hcl中复原。将凝胶填充在注射器中，并在后续高压灭菌。
[0153]
表2：反应条件和所得凝胶特性。
[0154][0155][0156]
将凝胶在密封的玻璃小瓶中于90℃在水浴中温育24小时或48小时。在给定时间，将样品冷却至室温并分析凝胶。参见附图2至4
[0157]
图2描绘了对应于表2中样品2-1和样品2-2的凝胶含量(gelc％)。图3描述了对应于表2中样品2-3和样品2-4的凝胶含量(gelc％)。图4描述了对应于表2中样品2-5和样品2-6的凝胶含量(gelc％)。图5描述了对应于表2中样品2-7和样品2-8的凝胶含量(gelc％)。
[0158]
测定hmw凝胶中的mw
app
的一般程序
[0159]
在反应容器中将预称重的ha(2.1mda)与水混合。将混合物充分混合3分钟并在环境温度下温育。24小时后，将溶液用水稀释，添加nacl(最终浓度0.9％)，并将所得材料在70
℃下温育。温育24小时后，将溶液填充进注射器中。样品2-10的注射器在后续进行高压灭菌，而样品2-9的注射器不进行高压灭菌。通过sec-malls测定溶液的mw。
[0160]
表3：反应条件和所得凝胶特性。
[0161][0162]
*****
[0163]
本文中绘示性描述的方法可在不存在本文中未具体公开的任何一个或多个要素、一个或多个限制的情况下适当地实践。因此，例如，术语“包含”、“包括”、“含有”等应被扩展地理解并且没有限制。此外，本文中所采用的术语和表达已被用作描述而非限制的术语，并且在使用此类术语和表达时无意排除所示出和描述的特征或其部分的任何等同物。应当认识到，在所要求保护的公开的范围内，各种修改都是可能的。因此，应当理解，尽管已经通过优选实施例和任选特征具体公开了本公开，但是本领域技术人员可以采用在本文中公开的其中实施的本公开的修改和变化，并且此类修改和变化被认为在本公开的范围内。
[0164]
在本文中已广泛且一般性地描述了本公开。落入一般公开内的较窄种类和次种类组中的每一个也形成方法的一部分。这包括对方法的一般描述，具有从该属中去除任何主题的附带条件或负面限制，而不管所切除的材料是否在本文中具体叙述。本技术不限于本技术中所描述的特定实施例，这些特定实施例旨在作为本技术的单个方面的单独绘示。在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以对本发明进行许多修改和变化，这对于本领域技术人员来说是显而易见的。除了在本文中列举的那些方法和设备之外，根据前面的描述，在本技术范围内的功能上等同的方法和设备对于本领域技术人员将是显而易见的。此类修改和变化旨在落入本技术的范围内。应当理解，本技术不限于特定的方法、试剂、化合物组合物或生物系统，当然，这些方法、试剂、化合物组合物或生物系统可以变化。还应理解，本文中所用的术语仅用于描述特定实施例的目的，而不旨在限制。
[0165]
本领域技术人员容易理解，本公开很好地适于实现所述目标并获得所述目的和优点，以及其中固有的那些目的和优点。本领域技术人员将想到其中的修改和其它用途。这些修改涵盖在本公开的精神内并且由权利要求的范围限定，权利要求阐述了本公开的非限制性实施例。
[0166]
此外，在根据马库什组描述本公开的特征或方面的情况下，本领域技术人员将认识到本公开也由此根据马库什组的任何单个成员或成员亚组来描述。
[0167]
本文中所引用的所有参考、文章、出版物、专利、专利出版物和专利申请出于所有目的以全文引用的方式并入。
[0168]
然而，对本文中所引用的任何参考、文章、出版物、专利、专利出版物和专利申请的提及不是且不应被视为承认或任何形式的暗示它们构成有效的现有技术或形成世界上任何国家的公知常识的一分。