一种固相合成索马鲁肽的方法与流程

上。在这个连接侧链的过程中，所有剩余的亲核基团仍处于活性状态。
24.其中，侧链结构式为
[0025][0026]
作为优选的技术方案，包括以下步骤，
[0027]
步骤一，将fmoc
‑
arg(pbf)
‑
gly
‑
oh的羧基锚定在固相载体上，固相载体为王树脂、ctc树脂、phb树脂、hmpa树脂、hmpb树脂、rinkacid树脂、tentageltga树脂、tentagelsphb树脂中的任一种或其组合；
[0028]
步骤二，待第一个氨基酸，即fmoc
‑
arg(pbf)
‑
gly
‑
oh锚定后，使用10
‑
30％哌啶溶液(溶剂为dmf、dmso、n,n
‑
二乙基乙酰胺、nmp或任何其他合适的非质子溶剂)来切割fmoc保护基团；
[0029]
步骤三，在切割fmoc保护基团后，游离氨基与序列中的下一个氨基酸偶联，就是溶于dmf、dmso、n,n
‑
二乙基乙酰胺、nmp或任何其他合适的非质子溶剂中的fmoc
‑
arg(pbf)
‑
gly
‑
oh，其中，对于所有氨基酸或肽片段，除含有opfp酯的以外，多肽偶联试剂为dic、hbtu、tbtu、pybop、hatu、hctu和叔碱中的任一种或其组合，比如diea、n
‑
甲基吗啉等，且c末端含有opfp酯的二肽片段不使用偶联试剂；
[0030]
步骤四，在第二个肽片段即fmoc
‑
arg(pbf)
‑
gly
‑
oh偶联后，所连接的fmoc基团被裂解，并且类似地，序列中的其它氨基酸按照以下序列进行偶联和裂解：
[0031]
fmoc
‑
leu
‑
val
‑
opfp,fmoc
‑
trp(boc)
‑
oh,fmoc
‑
ile
‑
ala
‑
oh,
[0032]
fmoc
‑
glu(otbu)
‑
phe
‑
opfp,fmoc
‑
lys(boc)
‑
oh,fmoc
‑
ala
‑
oh,
[0033]
fmoc
‑
gln(trt)
‑
ala
‑
opfp,fmoc
‑
glu(otbu)
‑
(dmb)gly
‑
oh,
[0034]
fmoc
‑
tyr(tbu)
‑
leu
‑
oh,fmoc
‑
ser(tbu)
‑
oh,fmoc
‑
ser(tbu)
‑
oh,
[0035]
fmoc
‑
asp(otbu)
‑
val
‑
oh,fmoc
‑
ser(tbu)
‑
oh,fmoc
‑
thr(tbu)
‑
oh,
[0036]
fmoc
‑
thr(tbu)
‑
phe
‑
opfp,fmoc
‑
glu(otbu)
‑
(dmb)gly
‑
oh,
[0037]
boc
‑
his(boc)
‑
aib
‑
opfp；
[0038]
步骤五、在完成所有氨基酸的连接后，通过使用混合裂解试剂(包含tfa、苯甲醚、tis、吲哚和h2o的不同比例溶液)从树脂中切割肽链；
[0039]
步骤六，用合适的溶剂(如乙醚、异丙醚或甲基叔丁基醚)处理溶于tfa中的裂解肽，并在5
‑
10℃下放置1
‑
2小时使产品沉淀，然后将沉淀产物过滤，并用乙醚洗涤3
‑
5次并干燥；
[0040]
步骤七、在赖氨酸20位上连接侧链
[0041]
octadecanedioicacid(otbu)
‑
glu(otbu)
‑
aeea
‑
aeea
‑
osu；
[0042]
步骤八，使用hcl溶液或tfa溶液来裂解叔丁基保护基，得到索马鲁肽粗品；
[0043]
步骤九，对索马鲁肽粗品的水溶液进行反相高效液相色谱纯化，并将所需纯组分
冻干，以获得>99.4％的纯索马鲁肽。
[0044]
作为优选的技术方案，所述固相载体为王树脂或ctc树脂。
[0045]
作为优选的技术方案，步骤三和步骤四中，可通过kaiser检测、四氯苯醌检测和定量hplc分析来监控偶联和去偶联。
[0046]
作为优选的技术方案，步骤五的tfa介导的裂解反应过程中，发生了dmb 基团的去除和甘氨酸残基的再生。
[0047]
作为优选的技术方案，步骤五中，混合裂解试剂混合比例为tfa：苯甲醚： tis：吲哚：h2o为90.0：2.5：2.5：2.5：2.5，并在0
‑
40℃下搅拌2
‑
5小时。
[0048]
作为优选的技术方案，步骤六中，用乙醚、异丙醚或甲基叔丁基醚来处理溶于tfa中的裂解肽。
[0049]
作为优选的技术方案，步骤七的反应中，使用的碱为dipea、n
‑
甲基吗啉或三乙胺。
[0050]
作为优选的技术方案，步骤九中，纯化过程中所使用到的缓冲液为磷酸盐缓冲液。例如磷酸二氢铵、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾溶液。
[0051]
进一步的，dipea在连接侧链的反应中使用，并控制ph值在9
‑
11。dipea 碱在反应中的使用和控制ph值在9
‑
11，是这种选择性偶联反应能够发生的两个重要条件。也就是说，这种发生在特定位置上的特殊偶联是由于其反应发生在特定的ph值条件下。
[0052]
采用以上技术方案后与现有技术相比，本发明具有以下优点：首先由于选择使用了以下的二肽片段，如fmoc
‑
arg(pbf)
‑
gly
‑
oh,fmoc
‑
leu
‑
val
‑
opfp, fmoc
‑
ile
‑
ala
‑
oh,fmoc
‑
glu(otbu)
‑
phe
‑
opfp,fmoc
‑
gln(trt)
‑
ala
‑
opfp, fmoc
‑
glu(otbu)
‑
(dmb)gly
‑
oh,fmoc
‑
tyr(tbu)
‑
leu
‑
oh, fmoc
‑
asp(otbu)
‑
val
‑
oh,fmoc
‑
thr(tbu)
‑
phe
‑
opfp,boc
‑
his(boc)
‑
aib
‑
opfp，使得合成索马鲁肽过程中，几乎没有产生链聚集和外消旋杂质，缺失杂质的含量也极低；其次，在本发明中，在赖氨酸位置插入 fmoc
‑
lys(octadecanedioicacid(otbu)
‑
glu(otbu)
‑
aeea
‑
aeea)
‑
oh, fmoc
‑
lys(mmt)
‑
oh,fmoc
‑
lys(dde)
‑
oh以及fmoc
‑
lys(alloc)
‑
oh的那些方法所产生的缺陷和问题，都可以被现有的合成路线所解决。这种合成路线就是在特定ph条件下，在肽链骨架的lys20位置上连接侧链 octadecanedioicacid(otbu)
‑
glu(otbu)
‑
aeea
‑
aeea
‑
osu，该方法的优点在于，在同时含有两个或更多活性亲核官能团的情况下，选择性地酰化了多肽中的一个氨基。另外，在固相多肽合成中使用opfp酯，可以避免dic、hbtu、tbtu、 pybop、hatu、hctu等偶联试剂的使用。使用了opfp酯后，偶联效率也更高，还有效地阻止了固相多肽合成中的β折叠。并且，本发明通过使用 boc
‑
his(boc)
‑
aib
‑
opfp，类似d
‑
his等可能出现的外消旋杂质被大大减少。而且，本发明利用fmoc
‑
glu(otbu)
‑
(dmb)gly
‑
oh片段，可以在很大程度上抑制聚集，偶联和脱保护反应也能很平顺的进行。最后，本发明利用这些二肽片段进行固相多肽合成，由于偶联和脱保护步骤较少，提高了含量和纯度，进而提高了多肽的产率。
附图说明：
[0053]
图1为本发明的合成路线图。
[0054]
图2为本发明涉及的索马鲁肽示意图。
[0055]
图3为索马鲁肽肽树脂的合成路线图。
fmoc
‑
arg(pbf)
‑
gly
‑
王树脂，其取代度为0.9mmol/g。
[0062]
索马鲁肽肽树脂的制备
[0063]
称取70g取代度为0.9mmol/g的fmoc
‑
arg(pbf)
‑
gly
‑
王树脂，并加入到多肽合成仪中。随后，用dmf洗涤fmoc
‑
arg(pbf)
‑
gly
‑
王树脂两次，在dmf中溶胀30分钟，用20％的哌啶dmf溶液除去fmoc保护，然后用dmf洗涤树脂5次。采用茚三酮法对树脂进行检测，树脂颜色的出现表明fmoc基团已经去除完全。
[0064]
将95.28g fmoc
‑
arg(pbf)
‑
gly
‑
oh，18.2g hobt溶解于dmf中，并装入固相反应合成仪中，再加入21.3g dic，在室温下反应3
‑
4小时。采用茚三酮法确定反应终点。根据索马鲁肽的骨架序列，重复上述fmoc去保护步骤和相应的氨基酸偶联步骤，以下氨基酸fmoc
‑
leu
‑
val
‑
opfp,fmoc
‑
trp(boc)
‑
oh, fmoc
‑
ile
‑
ala
‑
oh,fmoc
‑
glu(otbu)
‑
phe
‑
opfp,fmoc
‑
lys(boc)
‑
oh, fmoc
‑
ala
‑
oh,fmoc
‑
gln(trt)
‑
ala
‑
opfp,fmoc
‑
glu(otbu)
‑
(dmb)gly
‑
oh, fmoc
‑
tyr(tbu)
‑
leu
‑
oh,fmoc
‑
ser(tbu)
‑
oh,fmoc
‑
ser(tbu)
‑
oh, fmoc
‑
asp(otbu)
‑
val
‑
oh,fmoc
‑
ser(tbu)
‑
oh,fmoc
‑
thr(tbu)
‑
oh, fmoc
‑
thr(tbu)
‑
phe
‑
opfp,fmoc
‑
glu(otbu)
‑
gly
‑
opfp, boc
‑
his(boc)
‑
aib
‑
opfp被依次偶联。
[0065]
在反应过程中，c末端含羧基的氨基酸采用hobt/dic体系，反应溶剂为dmf，而c末端含opfp酯的氨基酸不需要偶联试剂和hobt体系。
[0066]
在所有氨基酸偶联后，用甲醇收缩树脂，并将树脂抽干，以获得300g索马鲁肽王树脂的粗品。
[0067]
索马鲁肽肽树脂的裂解
[0068]
1.5l裂解试剂按体积比(90.0:2.5:2.5:2.5:2.5)tfa:苯甲醚:tis:吲哚:h2o配制，装入三颈烧瓶中。裂解试剂冷却至15
±
2℃，加入300.0g上个步骤中制备的索马鲁肽肽树脂，并在15
±
2℃下进行反应3
‑
4小时。反应结束后，过滤树脂并收集滤液。用少量tfa清洗树脂。将合并的滤液加入到甲苯(5000ml) 和异丙醚(7000ml)混合液中，以获得湿固体。将所得固体用异丙醚(2x 1500 ml)进行两次打浆洗涤。过滤、真空干燥后，得到200.0g索马鲁肽骨架肽。
[0069]
裂解反应如下所示：
[0070][0071]
fmoc
‑
gln(trt)
‑
ala
‑
opfp的合成
[0072]
a)fmoc
‑
gln(trt)
‑
osu的合成
[0073]
称取fmoc
‑
gln(trt)
‑
oh(61.07g，100mmol)并加入到含有500ml四氢呋喃的三颈烧瓶中。该混合物在25
±
2℃下搅拌5分钟，然后加入13.81g(120mmol) n
‑
羟基丁二酰亚胺，并搅拌5
‑
10分钟。在另一个单独的圆底烧瓶中，将24.76g dcc(120mmol)溶于300ml四氢呋喃中，然后将此溶液滴加到上述的 fmoc
‑
gln(trt)
‑
oh四氢呋喃溶液中，控温在10
±
2℃，并在30
‑
45分钟内滴加完成。滴加结束后，将系统升温至室温并再反应3小时。用薄层色谱法(tlc) 监控，直至原料反应完全。将反应液过滤除去尿素，用旋转蒸发仪将四氢呋喃完全除去，得到粘稠状固体产物。向上述固体产物中加入300ml乙酸乙酯/石油醚，搅拌30min。经过滤、真空干燥，得到白色固体66.0g，产率93％。
[0074]
b)fmoc
‑
gln(trt)
‑
ala
‑
oh的合成
[0075]
称取l
‑
丙氨酸(9.44g，105.9mmol)并加入到装有600ml四氢呋喃和水 (1:1)的三颈瓶中。该混合物在25
±
2℃下搅拌5分钟。然后加入11.23g(105.9 mmol)na2co3并搅拌5
‑
10分钟。在另一个单独的圆底烧瓶中，取50.0g fmoc
‑
gln(trt)
‑
osu(70.64mmol)溶于500ml四氢呋喃中，然后将此溶液滴加到上述溶液中，控温25
±
2℃并在30
‑
45分钟时间内加完。滴加结束后，将系统升温至室温并再反应3小时。用薄层色谱法(tlc)监控，直至原料反应完全。
反应完成后，使用旋转蒸发仪完全去除四氢呋喃，向水相中加入600ml乙酸乙酯，并用10％柠檬酸溶液将ph值调节至3.5
±
0.5。分离水层，用乙酸乙酯进一步萃取，减压去除溶剂，得到白色固体。然后用乙酸乙酯和丙酮重结晶纯化，得到干燥的白色固体fmoc
‑
gln(trt)
‑
ala
‑
oh(47.0g，产率97.5％)
[0076]
c)fmoc
‑
gln(trt)
‑
ala
‑
opfp
[0077]
称取fmoc
‑
gln(trt)
‑
ala
‑
oh(40.0g，58.66mmol)并加入到装有280ml 四氢呋喃的三颈烧瓶中。该混合物在25
±
2℃下搅拌5分钟，然后加入已溶于 40.0ml四氢呋喃的五氟苯酚12.95g(70.40mmol)中，并搅拌5
‑
10分钟。在另一个单独的圆底烧瓶中，将15.73g dcc(76.26mmol)溶于80ml四氢呋喃中。然后将此溶液滴加到上述fmoc
‑
gln(trt)
‑
ala
‑
oh的四氢呋喃溶液中，控温 25
±
2℃并在30
‑
45分钟时间内加完。滴加结束后，在相同温度下再搅拌3
‑
4小时。用薄层色谱法(tlc)监控，直至原料反应完全。反应液经过滤除去尿素，溶剂四氢呋喃经旋转蒸发仪完全除去，得到粘稠状固体产物。向上述固体产物中加入甲醇(800ml)，搅拌90分钟。经过滤、真空干燥，得到白色固体46.5g，产率93.5％。
[0078]
类似地，所有带羧基或opfp酯基的二肽片段都按照上述步骤来制备。
[0079]
反应如下所示：
[0080][0081]
octadecanedioicacid(otbu)
‑
glu(otbu)
‑
aeea
‑
aeea
‑
osu的合成
[0082]
a)octadecanedioicacid(otbu)
‑
osu的合成
[0083]
称取octadecanedioicacid
‑
otbu(25.0g，67.4mmol)加入到装有200mlnmp的三颈
烧瓶中。该混合物在25
±
2℃下搅拌5分钟，再加入9.3g(80.95mmol) n
‑
羟基丁二酰亚胺，并搅拌5
‑
10分钟。在另一个单独的圆底烧瓶中，将16.7g dcc (80.95mmol)溶于50ml nmp，然后将此溶液滴加到上述 octadecanedioicacid
‑
otbu的nmp溶液中，控温27
±
2℃并在30
‑
45分钟时间内加完。滴加结束后，将系统升温至60
±
3℃，再反应4
‑
5小时。用薄层色谱法 (tlc)监控，直至原料反应完全。过滤反应液以除去尿素，并将所得滤液加入到1000ml冰水中以得到粗品。粗品用ipa(500ml)重结晶，得到29g纯度为99％的固体，产率为92.0％。
[0084]
b)octadecanedioicacid(otbu)
‑
glu
‑
otbu的合成
[0085]
称取h
‑
glu
‑
otbu(13.0g，64.14mmol)，并加入到含有100ml四氢呋喃和水(1:1)的三颈烧瓶中。该混合物在25
±
2℃下搅拌5分钟，然后加入8.5g na2co
3 (80.18mmol)并搅拌5
‑
10分钟。在另一个单独的圆底烧瓶中，将25.0g(53.45 mmol)的octadecanedioicacid(otbu)
‑
osu溶于100ml四氢呋喃，然后将此溶液慢慢滴加到上述溶液中，控温25
±
2℃并在30
‑
45分钟时间内加完。滴加结束后，将系统升温至室温并再反应3小时。用薄层色谱法(tlc)监控，直至原料反应完全。反应完成后，使用旋转蒸发仪完全去除四氢呋喃，并向水相中加入 1000ml乙酸乙酯，并用10％柠檬酸溶液将ph值调节至3.5
±
0.5。分离水层，用乙酸乙酯进一步萃取，减压去除溶剂，得到白色固体。然后用甲醇重结晶纯化，得到白色固体的octadecanedioicacid(otbu)
‑
glu(oh)
‑
otbu(27.0g，产率 91.0％)。
[0086]
c)octadecanedioicacid(otbu)
‑
glu(osu)
‑
otbu的合成
[0087]
称取octadecanedioicacid(otbu)
‑
glu(oh)
‑
otbu(25.0g，44.98mmol)并加入到装有200ml nmp的三颈烧瓶中。该混合物在25
±
2℃下搅拌5分钟，然后加入6.21g(53.97mmol)n
‑
羟基丁二酰亚胺并搅拌5
‑
10分钟。在另一个单独的圆底烧瓶中，将11.13g dcc(53.97mmol)溶于50ml nmp，然后将此溶液慢慢滴加到上述octadecanedioicacid(otbu)
‑
glu(oh)
‑
otbu的nmp溶液中，控温27
±
2℃并在30
‑
45分钟时间内加完。滴加结束后，将系统升温至27
±
3℃，再反应4
‑
5小时。用薄层色谱法(tlc)监控，直至原料反应完全。将反应液过滤除去尿素，用旋转蒸发仪将溶剂完全除去，得到粘稠状固体产物。向上述固体产物中加入400ml乙酸乙酯，搅拌30分钟。经过滤、真空干燥，得到白色固体25.0g，产率85.1％。
[0088]
d)boc
‑
aeea
‑
osu的合成
[0089]
称取boc
‑
aeea
‑
oh(25.0g，94.95mmol)，并加入到装有200ml nmp的三颈烧瓶中。该混合物在25
±
2℃下搅拌5分钟，然后加入13.11g(113.9mmol) n
‑
羟基丁二酰亚胺并搅拌5
‑
10分钟。在另一个单独的圆底烧瓶中，将23.5g dcc (113.9mmol)溶于50ml nmp，然后将此溶液慢慢滴加到上述boc
‑
aeea
‑
oh的 nmp溶液中，控温27
±
2℃并在30
‑
45分钟时间内加完。滴加结束后，将系统升温至27
±
3℃，再反应4
‑
5小时。用薄层色谱法(tlc)监控，直至原料反应完全。将反应液过滤除去尿素，用旋转蒸发仪将溶剂完全除去，得到粘稠状的固体产物。向上述固体产物中加入100ml异丙醚，搅拌30分钟。经过滤、真空干燥，得到白色固体28.0g，产率81.8％。
[0090]
e)boc
‑
aeea
‑
aeea
‑
oh的合成
[0091]
称取h
‑
aeea
‑
oh(27.16g，166.5mmol)并加入到含有500ml四氢呋喃和水(1:1)的三颈烧瓶中。该混合物在25
±
2℃下搅拌5分钟，然后加入17.66g (166.5mmol)na2co3并搅拌5
‑
10分钟。在另一个单独的圆底烧瓶中，将50.0g 的boc
‑
aeea
‑
osu(138.73mmol)溶于250ml四氢呋喃，然后将此溶液慢慢滴加到上述溶液中，控温25
±
2℃并在30
‑
45分钟时间内加完。滴
加完成后，将系统升温至室温，再反应3小时。用薄层色谱法(tlc)监控，直至原料反应完全。反应完成后，用浓盐酸将反应液的ph值调整为7
±
0.2。反应物分为了两层，向水层中加入500ml dcm，用10％的浓盐酸溶液将水层的ph调节至3
±
0.2。分离有机层和水层，并用dcm进一步萃取水层，合并所有有机层，并在减压下去除溶剂，得到白色固体。然后用乙酸乙酯重结晶纯化，得到干燥的白色固体 boc
‑
aeea
‑
aeea
‑
oh(49.0g，产率86.4％)。
[0092]
f)h
‑
aeea
‑
aeea
‑
oh的合成
[0093]
向烧瓶中加入boc
‑
aeea
‑
oh(20.0g，48.96mmol)、40ml dcm和40ml tfa，室温下搅拌60
‑
120分钟，用薄层色谱法(tlc)监控，直至原料反应完全。反应完成后，用旋转蒸发仪完全去除溶剂，得到粘稠状化合物。用正己烷重结晶，得到干燥的白色固体(13.0g，产率86.6％)。
[0094]
g)octadecanedioicacid(otbu)
‑
glu(otbu)
‑
aeea
‑
aeea
‑
oh的合成
[0095]
称取h
‑
aeea
‑
aeea
‑
oh(17.0g，55.14mmol)并加入到装有250ml四氢呋喃和水 (1:1)的三颈烧瓶中。该混合物在25
±
2℃下搅拌5分钟，然后加入5.84g(55.14 mmol)na2co3并搅拌5
‑
10分钟。在另一个单独的圆底烧瓶中，将30.0g的 octadecanedioicacid(otbu)
‑
glu(osu)
‑
otbu(45.95mmol)溶于250ml四氢呋喃中，然后将此溶液慢慢滴加到上述溶液中，控温25
±
2℃并在30
‑
45分钟时间内加完。滴加结束后，将系统升温至室温并再反应3小时。用薄层色谱法(tlc) 监控，直至原料反应完全。反应完成后，用10％浓盐酸将反应液的ph值调整为 7
±
0.2。然后反应物分为了两层，向水层中加入500ml dcm，并用10％浓盐酸溶液将水层的ph调节至3
±
0.2。分离有机层和水层，并用dcm进一步萃取水层，合并所有有机层，并在减压下去除溶剂，得到白色固体。然后用异丙醇重结晶纯化，得到octadecanedioicacid(otbu)
‑
glu(otbu)
‑
aeea
‑
aeea
‑
oh的干燥白色固体(34.0g，产率87.4％)。
[0096]
h)octadecanedioicacid(otbu)
‑
glu(otbu)
‑
aeea
‑
aeea
‑
osu的合成
[0097]
称取octadecanedioicacid(otbu)
‑
glu(otbu)
‑
aeea
‑
aeea
‑
oh(25.0g，29.54 mmol)并加入到装有250ml nmp的三颈烧瓶中。该混合物在25
±
2℃下搅拌5 分钟，然后加入4.08g(35.45mmol)n
‑
羟基丁二酰亚胺并搅拌5
‑
10分钟。在另一个单独的圆底烧瓶中，将7.3g dcc(35.45mmol)溶于50ml nmp，将此溶液慢慢滴加到上述octadecanedioicacid(otbu)
‑
glu(otbu)
‑
aeea
‑
aeea
‑
oh的nmp 溶液中，控温27
±
2℃并在30
‑
45分钟时间内加完。滴加结束后，将系统升温至 27
±
3℃，再反应4
‑
5小时。用薄层色谱法(tlc)监控，直至原料反应完全。将反应液过滤除去尿素，用旋转蒸发仪将溶剂完全除去，得到粘稠状固体产物。向上述固体产物中加入100ml正己烷，搅拌30分钟。经过滤、真空干燥，得到白色固体25.0g，产率89.0％。
[0098]
反应如下所示：
[0099]
[0100][0101]
侧链octadecanedioicacid(otbu)
‑
glu(otbu)
‑
aeea
‑
aeea
‑
osu连接在索马鲁肽骨架的第20位赖氨酸的ε
‑
nh2上
[0102]
将本实施例上述所制备的索马鲁肽骨架肽(100g，29.43mmol)、乙腈(2500 ml)和水(2500ml)都加入到三颈烧瓶中，并在25
±
3℃搅拌5分钟。在25
ꢀ±
3℃条件下，通过加入dipea(79.8g，618.0mmol)将反应液的ph值调到>11.0。在另一个单独的圆底烧瓶中，将侧链octadecanedioicacid(otbu)
‑
glu(otbu)
‑
aeea
‑
aeea
‑
osu(33.31g，35.31mmol) 溶于乙腈(1000ml)。所配的侧链溶液慢慢滴加到上述制备的溶液中，控温 25
±
3℃并在120
‑
150分钟内加完。所得的混合物继续搅拌反应2
‑
3小时。反应完成后，将溶于(50ml)的甘氨酸(4.86g，
64.74mmol)水溶液，用于淬灭反应混合物，并搅拌10
‑
15分钟。用三氟乙酸在25
±
3℃下调节反应液ph值至 4.5
±
0.5，并搅拌30
‑
45分钟。减压条件下将乙腈完全去除，搅拌剩余溶液30
‑
45 分钟，过滤产物。将所得固体用水(500ml)和乙酸乙酯(500ml)进行打浆洗涤，然后干燥，得到产物115.0g，产率92.4％。
[0103]
反应如下所示：
[0104][0105]
裂解叔丁基以得到索马鲁肽的粗品
[0106]
将500ml裂解试剂tfa:tis:h2o(按9.5:0.25:0.25的体积比配制)和500 ml dcm装入三颈烧瓶中。将所得混合物冷却至25
±
2℃，然后加入上个步骤所制备的已连上侧链的多肽100.0g，并在25
±
2℃下搅拌反应3
‑
4小时。反应完成后，加入异丙醚(2000ml)并在25
±
2℃下搅拌60
‑
90分钟。过滤沉淀物并用异丙醚(2x 1000ml)进行两次打浆洗涤。经过滤和真空干燥，得到纯度为 65％的索马鲁肽粗品98.0g。
[0107]
反应如下所示：
nh4hco3，b:acn)，并根据纯度和单个杂质含量对组分进行收集，也就是说将纯度>99.0％，并且前延和拖尾杂质<0.15％的组分合并。然后通过冻干法来分离获得纯的固体产物(纯度99.7％)。
[0116]
以上仅就本发明较佳的实施例作了说明，但不能理解为是对权利要求的限制。凡是利用本发明说明书及附图内容所做的等效结构或等效流程变换，均包括在本发明的专利保护范围之内。