一种恩替卡韦手性异构体的分离方法

1.本发明涉及药物制备技术领域，具体涉及一种恩替卡韦手性异构体的分离方法。


背景技术：

2.恩替卡韦是百时美施贵宝开发的抗乙肝病毒品种，适用于病毒复制活跃，血清丙氨酸氨基转移酶(alt)持续升高或肝脏组织学显示有活动性病变的慢性成人乙型肝炎的治疗。经过长期临床检验，恩替卡韦拥有大量循证医学证据证明其长期临床疗效和安全性。
3.恩替卡韦是手性药物，临床用药为单一异构体(1s,3r,4s)，其分子结构中含3个“手性中心”，理论上可产生8种同分异构体(即一种对映异构体和6个手性非对映异构体，其中6个手性非对映异构体分别呈镜像关系)，根据2015版中国药典中药品杂质分析指导原则的相关内容规定，在单一对映体药物中，可能共存的其他对映异构体应作为杂质检査进行检测，常用于检测的3个手性非对映异构体为(1r,3s,4r)、(1r,3r,4s)和(1s,3s,4r)，因此确保恩替卡韦的手性纯度，限制其他与恩替卡韦不同手性构型的手性异构体是控制恩替卡韦药物安全性的关键。
4.2010年两种恩替卡韦仿制药被紧急召回，这一事件再次引发了人们对仿制药安全性与疗效的关注。虽然国内已有文献报告了恩替卡韦仿制药相关的研究，证实其与原研药具有生物等效，但由于药物原料，化学空间结构等方面的差异，因此在机体内的消化，吸收，代谢，排泄等过程就可能不完全一致，导致在临床疗效上可能会有一定的差异。
5.因此，研究出恩替卡韦相关手性异构体的分离方法是非常有意义的。


技术实现要素：

6.本发明目的在于为克服现有的技术缺陷，提供一种恩替卡韦手性异构体的分离方法，能够有效、快速地分离出3种恩替卡韦手性异构体，从而实现恩替卡韦的质量控制。
7.为了解决上述技术问题，本发明提供了一种恩替卡韦手性异构体的分离方法，包括以下步骤：
8.(1)将恩替卡韦粗品完全溶于n,n-二甲基甲酰胺中，采用活性炭脱色后加入乙醚，过滤，将滤液收集后浓缩蒸发至干，得到杂质粗品a；
9.(2)将杂质粗品a溶解于甲醇中，采用大孔树脂进行吸附，用丙酮/水溶液脱附，旋干后得到杂质粗品b；
10.(3)将杂质粗品b溶解于甲醇中，使用c18制备色谱柱分离纯化，浓缩后甲醇/乙醚重结晶制备得到恩替卡韦及手性异构体；
11.所述手性异构体包括(1r,3s,4r)、(1r,3r,4s)和(1s,3s,4r)。
12.进一步地，所述步骤(1)中，活性炭的用量为恩替卡韦粗品用量的5-10％。
13.进一步地，所述步骤(1)中，n,n-二甲基甲酰胺的体积为恩替卡韦粗品用量的2-10倍。
14.进一步地，所述n,n-二甲基甲酰胺的体积为恩替卡韦粗品用量的3-5倍。
15.进一步地，所述步骤(1)中，乙醚的体积为n,n-二甲基甲酰胺体积的5-10倍。
16.进一步地，所述乙醚的体积为n,n-二甲基甲酰胺体积的6-8倍。
17.进一步地，所述步骤(2)中，丙酮/水溶液中丙酮的体积百分比为20-70％。
18.进一步地，所述丙酮/水溶液中丙酮的体积百分比为35-50％。
19.与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
20.本发明通过基质沉淀、大孔树脂吸附、制备柱分离和重结晶方法分离出恩替卡韦手性异构体，通过这一技术制备的恩替卡韦，纯度高，可以用于恩替卡韦质量控制。
21.本发明附加的方面和优点将在下面的描述中部分给出，这些将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
22.此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本技术的一部分，并不构成对本发明的不当限定，在附图中：
23.图1为本发明的恩替卡韦手性异构体分离方法的流程图；
24.图2为实施例中制备得到的恩替卡韦的液相色谱图。
具体实施方式
25.为了更充分的理解本发明的技术内容，下面将结合附图以及具体实施例对本发明作进一步介绍和说明；需要说明的是，术语“上”、“下”、“前”、“后”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系未给予附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本使用信心和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。此外，术语“第一”、“第二”等描述，是用于区分不同的部件等，不代表先后顺序，也不限定“第一”和“第二”是不同的类型。
26.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例；基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
27.如图1所示，本发明提供的一种恩替卡韦手性异构体的分离方法，包括以下步骤：
28.(1)将恩替卡韦粗品溶于3-5倍(质量体积比)的n,n-二甲基甲酰胺中，活性炭脱色后加入n,n-二甲基甲酰胺体积量6-8倍的乙醚，过滤，将将滤液收集后旋转蒸发浓缩至干，得到杂质粗品a。
29.(2)将杂质粗品a溶解于甲醇中，采用大孔树脂进行吸附，用35-50％(体积比)的丙酮/水溶液脱附，旋干后得到杂质粗品b；
30.(3)将杂质粗品b溶解于甲醇中，使用c18制备色谱柱分离纯化，浓缩后用甲醇/乙醚重结晶制备得到恩替卡韦及手性异构体；
31.其中，所述手性异构体包括(1r,3s,4r)、(1r,3r,4s)和(1s,3s,4r)。
32.具体实施案例：
33.(1)将5g恩替卡韦粗品溶于20ml的dmf中，采用0.3g活性炭脱色后加入140ml的乙醚，过滤，将滤液收集后旋转蒸发浓缩至干，得到1.1g杂质粗品a。
34.(2)将1.1g杂质粗品a溶解于20ml甲醇中，加入4g大孔树脂进行吸附2小时后，用体积比为40％的丙酮/水溶液脱附，旋干后得到0.4g杂质粗品b；
35.(3)将0.4g杂质粗品b溶解于25ml甲醇中，使用c18制备色谱柱分离各杂质并收集各个组分，浓缩后得到178mg恩替卡韦，35mg异构体1(1r,3s,4r)、67mg异构体2(1r,3r,4s)和43mg异构体3(1s,3s,4r)。
36.进一步地，将上述异构体溶解在最小量的甲醇中，加入乙醚近饱和，然后放入冰箱冷却，得到纯的异构体，22mg异构体1(1r,3s,4r)，34mg异构体2(1r,3r,4s)和32mg异构体3(1s,3s,4r)。
37.本实施例制备得到的恩替卡韦的液相色谱图如图2所示，由图2可知，本实施例制备得到的恩替卡韦，纯度高，可以用于恩替卡韦质量控制。
38.本发明提供的分离方法，能够有效、快速地分离出3种恩替卡韦手性异构体，从而实现恩替卡韦的质量控制。
39.以上对本发明实施例所提供的技术方案进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明实施例的原理以及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只适用于帮助理解本发明实施例的原理；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明实施例，在具体实施方式以及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。