一种高效促进细胞外泌体分泌技术应用于骨修复材料制备的制作方法

本发明属构建hfob1.19-rab27a细胞进行的基础研究领域,更具体地说，本发明涉及脂质体介导rab27a-pcdna3.1-3xflag-c重组质粒转染hfob1.19细胞,能够分泌具有促成骨分化作用的外泌体。

背景技术：

1、外泌体为细胞分泌的微小囊泡，其中含有蛋白、核酸、脂质成分，外泌体具有介导细胞间通讯的作用。近年来，通过外泌体作为药物递送体系，或使用间充质干细胞外泌体进行组织缺损修复治疗受到广泛的关注。间充质干细胞在特定诱导分化条件下进行培养，其分泌的外泌体同样具有促进细胞定向分化的功能，有研究对于成骨前体细胞 hfob1.19、干细胞bmscs进行成骨诱导培养并分别提取其外泌体，该外泌体对细胞成骨分化有促进作用。在骨组织工程中，虽然bmscs作为常用的种子细胞，但是细胞系hfob1.19较原代提取的bmscs性质更加标准、稳定，减少了因为供体差异引起的细胞品质差异，适合用于外泌体的标准化提取方案及成分分析研究。

2、在外泌体的发生和分泌过程中，rab27a基因调控在外泌体分泌过时mvb与质膜的锚定对接，促进mvb与质膜融合释放外泌体，研究显示敲低rab27a基因明显降低了外泌体的分泌水平，造成胞内alix标记的mvb积聚，但rab27a表达水平的变化不会引起外泌体成分的改变。

技术实现思路

1、本发明通过脂质体介导rab27a-pcdna3.1-3xflag-c重组质粒转染 hfob1.19细胞，构建了hfob1.19-rab27a细胞。

技术特征：

1.本发明公开了通过脂质体介导rab27a-pcdna3.1-3xflag-c重组质粒转染hfob1.19细胞，构建hfob1.19-rab27a细胞，高效分泌促成骨分化作用的外泌体。

2.权利要求1中的hfob1.19-rab27a细胞构建过程概况为：大肠杆菌dh5α菌种制成感受态细胞后转化rab27a-pcdna3.1-3xflag-c重组质粒，使用脂质体转染试剂盒对hfob1.19细胞进行重组质粒转染即制成hfob1.19-rab27a细胞。

3.权利要求1中的hfob1.19细胞，其特征在于：是一种人成骨细胞系，能够迁移到损伤部位参与组织修复，快速地向成骨细胞分化。

4.权利要求1中的rab27a基因，其特征在于：有效提高了hfob1.19细胞分泌促成骨分化作用的外泌体水平。

5.权利要求1中的外泌体，其特征在于：hfob1.19-rab27a细胞分泌的外泌体，具有成骨分化作用，能够促进组织损伤修复，在骨缺损的修复治疗中显示出优异的治疗效果。

6.权利要求1中的hfob1.19-rab27a细胞，其特征在于：在骨缺损的修复治疗中的应用,包括骨科植入耗材、神经外科颅骨修补、口腔和整型外科等骨缺损的填充和再生修复。

技术总结
本发明通过脂质体介导Rab27a‑pcDNA3.1‑3xFlag‑C重组质粒转染hFOB1.19细胞，构建了hFOB1.19‑Rab27a细胞，转染后细胞稳定表达Rab27a基因与蛋白，能够分泌促成骨分化作用的外泌体。差速离心法提取的样品Western Blot、TEM、NTA结果符合外泌体特征。BCA、NTA检测证明，hFOB1.19‑Rab27a细胞单位时间内分泌外泌体的产量和效率显著提高。本发明为一种高效促进细胞分泌促成骨分化作用的外泌体的技术策略。

技术研发人员：孙晗笑,利时雨,耿承旭
受保护的技术使用者：艾威亚（广州）医药科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/11