一种治疗高尿酸血症的化合物及其组合物、制备方法和医药用途与流程

1.本发明具体涉及公开了一种治疗高尿酸血症的化合物及其组合物、制备方法、医药用途和质量控制方法，所述化合物具有式i所示结构，其医药用途的特征为用于治疗高尿酸血症所引起的各种疾病。


背景技术：

2.非布司他，为黄嘌呤氧化酶(xo)抑制剂，适用于具有痛风症状的高尿酸血症的长期治疗，其化学名为2
‑
[(3
‑
氰基
‑4‑
异丁氧基)苯基]
‑4‑
甲基
‑5‑
噻唑羧酸，结构式如下：
[0003][0004]
熊去氧胆酸，为一种可增加胆汁酸分泌的药物，可降低胆汁中胆固醇及胆固醇脂，有利于胆结石中的胆固醇逐渐溶解，用于不宜手术治疗的胆固醇结石，对胆囊炎，胆道炎及消化不良也有一定疗效，其结构式如下：
[0005][0006]
高尿酸血症是指在正常嘌呤饮食状态下，非同日两次空腹血尿酸水平男性高于420μmol/l，女性高于360μmol/l，即称为高尿酸血症，尿酸常由嘌呤代谢合成，通过肾脏及肠道排泄，因此常常由于排泄障碍或者尿酸生成过多所致。高尿酸血症是嘌呤代谢障碍所致，嘌呤是核酸的主要组成成分，主要为内源性核酸分解代谢而产生，小部分由外源性富有核酸的食物分解而来，因人类缺乏尿酸氧化酶，故尿酸是人类嘌呤代谢的最终产物；高尿酸血症也与体内尿酸产生过多或排泄过少有关。
[0007]
我们通过建立高尿酸血症动物模型，系统筛选了实验室化合物库，意外发现非布司他酰熊去氧胆酸聚乙二醇酯类衍生物具有显著地改善高尿酸血症的作用。进一步通过合成工艺研究、组合物和活性评价研究，建立了非布司他酰熊去氧胆酸聚乙二醇酯类衍生物的化学合成工艺，并对其改善高尿酸血症的作用进行了系统评价。


技术实现要素：

[0008]
本发明所要解决的技术问题是，发明治疗高尿酸血症的有效成分，建立其合成工
艺，进而评价其预防和治疗高尿酸血症的作用，建立其质量控制方法。
[0009]
建立高尿酸血症动物模型，系统筛选了实验室化合物库，意外发现了非布司他酰熊去氧胆酸聚乙二醇酯类衍生物具有显著地改善高尿酸血症的作用。进一步通过合成工艺研究、组合物和活性评价研究，建立了非布司他酰熊去氧胆酸聚乙二醇酯类衍生物的化学合成工艺，对其合成反应参数进行了系统考察，优化了反应条件，并对其改善高尿酸血症的作用进行了系统评价。
[0010]
本发明提供一种式i结构的化合物或其药学上可接受的盐，
[0011][0012]
其中，n＝1
‑
50
[0013]
优选的，其中，n＝1
‑
10
[0014]
优选的，其中，n＝1
‑5[0015]
优选的，其中，n＝1
‑2[0016]
本发明优选的具体化合物为，n＝1的化合物，命名为：非布司他酰熊去氧胆酸乙氧乙酯
[0017]
本发明所述药学上可接受的盐包括和酸形成的盐，或和碱形成的盐，如和有机酸或无机酸形成的盐，或和碱金属或碱土金属形成的盐。
[0018]
本发明进一步提供含有式i结构的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，所述药物组合物，优选为可以服用的任何一种药物制剂形式，所述药物制剂形式选自：片剂、胶囊剂、丸剂、栓剂、气雾剂、口服液体制剂、颗粒剂、散剂、注射剂、糖浆剂、酒剂、酊剂、露剂、膜剂。
[0019]
本发明进一步提供式i结构的化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，所述方法包括将熊去氧胆酸聚乙二醇酯化，再和非布司他反应。
[0020]
或者，先将熊去氧胆酸化和非布司他反应，再对反应产物进行聚乙二醇酯化。
[0021]
优选的，本发明所述制备方法，包括以下步骤：
[0022]
1)熊去氧胆酸聚乙二醇酯的制备
[0023]
取去熊氧胆酸溶于聚乙二醇乙醚中，室温下加入无机酸或者有机酸，搅拌。反应结束后减压除去大部分溶剂，加入有机溶剂，用纯净水洗涤，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干
燥，除去溶剂得油状物，硅胶柱色谱纯化得熊去氧胆酸聚乙二醇酯。
[0024]
其中，催化用无机酸钠包括碳酸、碳酸氢钠、硫酸、磷酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠等，优化为硫酸；催化用有机酸包括酒石酸、邻苯二甲酸、枸橼酸、甲酸、乙酸等；反应温度为室温反应或者加热反应，优化温度为室温
‑
80℃，最优条件为室温；反应温度为室温反应或者加热反应，优化温度为室温
‑
80℃，最优条件为室温；反应时间10min
‑
2天，优化为8
‑
18小时，最优为14
‑
16小时；反应结束后加入的有机溶剂包括二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮等，优化为二氯甲烷、氯仿；纯化色谱有机溶剂流动相为石油醚
‑
乙酸乙酯、石油醚
‑
丙酮、石油醚
‑
二氯甲烷、二氯甲烷
‑
乙酸乙酯、二氯甲烷
‑
甲醇、石油醚
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮、石油醚
‑
乙酸乙酯
‑
甲醇、二氯甲烷
‑
乙酸乙酯、石油醚
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮、石油醚
‑
乙酸乙酯
‑
甲醇洗脱，优化为二氯甲烷
‑
甲醇、石油醚
‑
乙酸乙酯、石油醚
‑
二氯甲烷、石油醚
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮，最优为二氯甲烷
‑
甲醇、二氯甲烷
‑
乙酸乙酯
‑
甲醇。
[0025]
2)非布司他酰基化反应
[0026]
非布司他溶于有机溶剂中，依次加入熊去氧胆酸聚乙二醇酯、diea，搅拌一定时间后，再加入hbtu，搅拌，反应完成后加入有机溶剂，用纯净水洗涤，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，除去溶剂得油状物，硅胶柱色谱纯化得非布司他酰熊去氧胆酸聚乙二醇酯。
[0027]
其中，反应用有机溶剂包括二氯甲烷、氯仿，二甲基甲酰胺(dmf)、二甲基亚砜(dmso)、四氢呋喃(tmf)、乙酸乙酯、丙酮等，优化为二甲基甲酰胺(dmf)、二甲基亚砜(dmso)、四氢呋喃(tmf)；加入diea后反应时间10min
‑
2天，优化为0.1
‑
8小时，最优为0.1
‑
0.5小时；加入hbtu后反应时间10min
‑
2天，优化为18
‑
32小时，最优为18
‑
24小时；反应结束后加入的有机溶剂包括二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮等，优化为二氯甲烷、氯仿；纯化色谱有机溶剂流动相为石油醚
‑
乙酸乙酯、石油醚
‑
丙酮、石油醚
‑
二氯甲烷、二氯甲烷
‑
乙酸乙酯、二氯甲烷
‑
甲醇、石油醚
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮、石油醚
‑
乙酸乙酯
‑
甲醇、二氯甲烷
‑
乙酸乙酯、石油醚
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮、石油醚
‑
乙酸乙酯
‑
甲醇洗脱，优化为二氯甲烷
‑
甲醇、石油醚
‑
乙酸乙酯、石油醚
‑
二氯甲烷、石油醚
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮，最优为二氯甲烷
‑
甲醇、二氯甲烷
‑
乙酸乙酯
‑
甲醇。
[0028][0029]
本发明人研究了式i结构的化合物或其药学上可接受的盐的片剂、胶囊剂和颗粒剂的处方和工艺，并意外地发现了vc和偏弱酸性条件可以保护制剂中式i结构的化合物或其药学上可接受的盐的稳定性。
[0030]
本发明对式i结构的化合物或其药学上可接受的盐开展了系统地药理学评价，发现其可以预防和治疗高尿酸血症，并进一步发现，其在疗效上优于母体化合物，且具有降低副作用，提高生物利用度等意外效果，。
[0031]
本发明的发现，对于目前缺少医药治疗的高尿酸血症患者提供了希望，具有深远社会意义和应用价值。
附图说明
[0032]
图1、式i结构的化合物的化学结构式图
[0033]
图2、合成工艺路线图
[0034]
图3、高尿酸小鼠血清生化指标检测和he染色结果
[0035]
a：尿酸(uric acid)、b：肌酐(cr)、c：尿素氮(bun)、d：he染色(magnification 200
×
,scale bar 20μm)
[0036]
*p<0.05与对照组(ctrl),#p<0.05与模型组(po)
[0037]
图4、非布司他酰熊去氧胆酸乙氧乙酯(实施例1所得化合物，化学通式中n＝1)的1hnmr核磁图谱
[0038]
图5、非布司他酰熊去氧胆酸乙氧乙酯(实施例1所得化合物，化学通式中n＝1)的13cnmr核磁图谱
具体实施方式
[0039]
以下实施例表示本发明的实用性，本发明不受此限制。
[0040]
实施例1：非布司他酰熊去氧胆酸乙氧乙酯的制备
[0041]
取去熊氧胆酸1.0g(2.54mmol)溶于8ml乙二醇乙醚中，室温下加入1滴浓硫酸，搅拌15小时。反应结束后减压除去大部分溶剂，加入50ml二氯甲烷，用纯净水洗涤3次，饱和食盐水洗涤2次，无水硫酸钠干燥，除去溶剂得油状物，硅胶柱层析二氯甲烷：甲醇＝100:5纯化得熊去氧胆酸单乙二醇乙酯958mg，收率81％。
[0042]
再取非布司他652mg(2.06mmol)溶于10ml dmf中，再加入熊去氧胆酸乙二醇乙酯958mg(2.06mmol)，diea 681μl(4.12mmol)，室温搅拌10min后，再加入hbtu 782mg(2.06mmol)，室温反应20小时后，加入二氯甲烷50ml，用纯净水洗涤4次，饱和食盐水洗涤2次，无水硫酸钠干燥，除去溶剂得油状物，硅胶柱层析二氯甲烷：甲醇＝100:8纯化得非布司他熊去氧胆酸乙二醇乙酯1.02g，收率65％。
[0043]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.17(1h,d,j＝2.0hz),8.09(1h,dd,j＝8.8,2.0hz),7.01(1h,d,j＝8.8hz),4.88(1h,m),4.22(2h,t,j＝46hz),3.90(2h,d,j＝6.4hz),3.63(2h,t,j＝4.8hz),3.60(1h,m),3.54(2h,q,j＝7.0hz),2.76(3h,s),2.39(1h,m),2.28
‑
2.19(2h,m),2.03(1h,d,j＝12.0hz),1.90
–
1.76(8h,m),1.73
–
1.61(4h,m),1.52
–
1.42(7h,m),1.36
–
1.31(4h,m),1.22(6h,t,j＝6.5hz),1.09(8h,d,j＝6.8hz),0.99(3h,s),0.94(3h,d,j＝6.4hz),0.69(3h,s)。
13
c nmr(100mhz,cdcl3)174.2,167.0,162.4,161.5,161.0,132.4,132.0,126.1,122.2,115.3,112.6,103.0,75.7,75.2,71.2,68.3,66.6,63.5,55.7,55.0,43.7,43.7,42.4,40.1,39.2,36.6,35.2,34.6,34.1,33.3,31.1,30.9,28.6,28.1,26.8,26.7,23.3,21.2,19.0,19.0,18.4,17.5,15.1,12.1。
[0044]
实施例2：非布司他酰熊去氧胆酸二聚乙二醇酯(通式n＝2)的制备
[0045]
取去熊氧胆酸1.0g(2.54mmol)溶于16ml 2
‑
溴乙氧乙基乙醚中，室温下加入1滴浓硫酸，搅拌20小时。反应结束后减压除去大部分溶剂，加入100ml二氯甲烷，用纯净水洗涤3次，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥，除去溶剂得油状物，硅胶柱层析二氯甲烷：甲醇＝100:6纯化得熊去氧胆酸二聚乙二醇酯1.09g，收率84.5％。
[0046]
再取非布司他680mg(2.15mmol)溶于20ml dmf中，再加入熊去氧胆酸二聚乙二醇酯1.09g(2.15mmol)，diea 711μl(4.30mmol)，室温搅拌10min后，再加入hbtu 816mg(2.15mmol)，室温反应24小时后，加入二氯甲烷200ml，用纯净水洗涤4次，饱和食盐水洗涤2次，无水硫酸钠干燥，除去溶剂得油状物，硅胶柱层析二氯甲烷：甲醇＝100:9纯化得非布司他熊去氧胆酸二聚乙二醇酯重1.18g，收率71.2％。
[0047]
实施例3：非布司他酰熊去氧胆酸聚乙二醇酯
‑
5(通式n＝5)的制备
[0048]
取去熊氧胆酸1.0g(2.54mmol)溶于30ml 2
‑
溴聚乙氧基乙基乙醚(n＝5)中，室温下加入1滴浓硫酸，搅拌20小时。反应结束后减压除去大部分溶剂，加入100ml二氯甲烷，用纯净水洗涤3次，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥，除去溶剂得油状物，硅胶柱层析二氯甲烷：甲醇＝100:6纯化得熊去氧胆酸聚乙二醇酯
‑
5，重1.43g，收率80.4％。
[0049]
再取非布司他645mg(2.04mmol)溶于30ml dmf中，再加入1.43g(2.04mmol)熊去氧胆酸聚乙二醇酯
‑
5，diea 675μl(4.08mmol)，室温搅拌20min后，再加入hbtu 775mg(2.15mmol)，室温反应28小时后，加入二氯甲烷300ml，用纯净水洗涤4次，饱和食盐水洗涤2次，无水硫酸钠干燥，除去溶剂得油状物，硅胶柱层析二氯甲烷：甲醇＝100:10纯化得非布司他熊去氧胆酸聚乙二醇酯
‑
5，重1.21g，收率62.9％。
[0050]
实施例4：非布司他酰熊去氧胆酸聚乙二醇酯
‑
50(通式n＝50)的制备
[0051]
取去熊氧胆酸1.0g(2.54mmol)溶于200ml 2
‑
溴聚乙氧基乙基乙醚(n＝50)中，室温下加入1滴浓硫酸，搅拌24小时。反应结束后减压除去大部分溶剂，加入500ml二氯甲烷，用纯净水洗涤3次，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥，除去溶剂得油状物，硅胶柱层析二氯甲烷：甲醇＝100:7纯化得熊去氧胆二聚乙二醇酯
‑
50，重3.58g，收率81.6％。
[0052]
再取非布司他655mg(2.07mmol)溶于50ml dmf中，再加入3.58g(2.07mmol)熊去氧胆酸聚乙二醇酯
‑
50，diea 684μl(4.14mmol)，室温搅拌10min后，再加入hbtu 785mg(2.07mmol)，室温反应24小时后，加入二氯甲烷500ml，用纯净水洗涤4次，饱和食盐水洗涤2次，无水硫酸钠干燥，除去溶剂得油状物，硅胶柱层析二氯甲烷：甲醇＝100:10纯化得非布司他熊去氧胆酸聚乙二醇酯
‑
50，重3.35g，收率55.8％。
[0053]
实施例5：非布司他酰熊去氧胆酸乙氧乙酯片的制备
[0054]
取实施例1得到的非布司他酰熊去氧胆酸乙氧乙酯粉末与淀粉、微晶纤维素等辅料分别过100目筛后，按各处方比例称取混匀，加入适量80％乙醇制软材，16目筛制粒，50℃热风干燥90min。14目筛整粒后，加入适量滑石粉和硬脂酸镁，打片，即得。
[0055]
处方组成：每片300mg，含非布司他酰熊去氧胆酸乙氧乙酯30mg。
[0056]
处方如下：
[0057][0058]
实施例6：非布司他酰熊去氧胆酸聚乙二醇酯
‑
5胶囊的制备
[0059]
取实施例3得到的非布司他酰熊去氧胆酸聚乙二醇酯
‑
5粉末与淀粉、微晶纤维素等辅料分别过100目筛后，按各处方比例称取混匀，加入适量80％乙醇制软材，16目筛制粒，50℃热风干燥90min。14目筛整粒后，加入适量滑石粉和硬脂酸镁，填充胶囊，即得。
[0060]
处方组成：每粒250mg，非布司他酰熊去氧胆酸聚乙二醇酯
‑
5含量40mg。
[0061]
处方如下：
[0062]
[0063][0064]
实施例7：非布司他酰熊去氧胆酸二聚乙二醇酯(通式n＝2)颗粒剂的制备
[0065]
取实施例2得到的非布司他酰熊去氧胆酸二聚乙二醇酯(通式n＝2)粉末与淀粉、微晶纤维素等辅料分别过100目筛后，按各处方比例称取混匀，加入适量80％乙醇制软材，16目筛制粒，50℃热风干燥90min。14目筛整粒后，加入适量滑石粉和硬脂酸镁，装袋，即得。
[0066]
处方组成：每袋1g，含非布司他酰熊去氧胆酸二聚乙二醇酯(通式n＝2)30mg。
[0067]
处方如下：
[0068][0069]
实施例8：非布司他酰熊去氧胆酸聚乙二醇酯
‑
50(通式n＝50)颗粒剂的制备
[0070]
取实施例4得到的非布司他酰熊去氧胆酸聚乙二醇酯
‑
50(通式n＝50)粉末与淀粉、微晶纤维素等辅料分别过100目筛后，按各处方比例称取混匀，加入适量80％乙醇制软材，16目筛制粒，50℃热风干燥90min。14目筛整粒后，加入适量滑石粉和硬脂酸镁，装袋，即得。
[0071]
处方组成：每袋1g，含非布司他酰熊去氧胆酸聚乙二醇酯
‑
50(通式n＝50)120mg。
[0072]
处方如下：
[0073]
[0074][0075]
实施例9：非布司他酰熊去氧胆酸乙氧乙酯治疗高尿酸血症
[0076]
实验步骤：
[0077]
将60只icr雄鼠随机分为6组，在实验前禁食1小时并自由饮水，除对照组外的其它各组小鼠灌胃给予po，以增加血清尿酸水平。1小时后在胃内施用非布司他和测试化合物非布司他酰熊去氧胆酸乙氧乙酯，非布司他和非布司他酰熊去氧胆酸乙氧乙酯溶于0.5％cmc
‑
na溶液中，其中非布司他用作阳性对照药物。连续给药7天。
[0078]
第七天给药结束后取材。取每组编号为1
‑
4的小鼠左肾放入4％多聚甲醛中固定，右肾在液氮中速冻之后放入
‑
80冰箱中保存。
[0079]
结果表明：
[0080]
1)尿酸(uric acid)、肌酐(cr)、尿素氮(bun)检测结果：如下图所示，非布司他在给药量为5mg/kg时，能够降低由po诱发的尿酸(uric acid)、肌酐(cr)、尿素氮(bun)升高；非布司他酰熊去氧胆酸乙氧乙酯对血清中尿酸(uric acid)、肌酐(cr)、尿素氮(bun)的降低作用呈浓度依赖性，在高剂量时的降尿酸作用最好。
[0081]
2)he染色结果(肾组织)：如下图所示，对照组的肾脏显示正常的肾小球和肾小管结构，模型组的肾脏的肾小管细胞边界不明显及肿胀。阳性药组肾脏用非布司他治疗的肾小管组织学正常。非布司他酰熊去氧胆酸乙氧乙酯治疗组的肾脏显示肾小管组织学有恢复。