一种采用酶法的1,5-脱水-D-山梨醇检测试剂生产工艺的制作方法

一种采用酶法的1,5-脱水-d-山梨醇检测试剂生产工艺
技术领域
1.本发明涉及检测试剂生产工艺技术领域，具体为一种采用酶法的1,5-脱水-d-山梨醇检测试剂生产工艺。


背景技术：

2.1,5-脱水山梨醇(1,5-ag) 又称为1,5
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脱水葡萄糖醇，是一种具有吡喃环结构的六碳单糖。人体血液中1,5-脱水山梨醇的含量与现有的糖尿病指标（如葡萄糖、糖化血红蛋白、糖化白蛋白）均呈现出显著的负相关，可以精准反应患者几天至一周的平均血糖水平，是糖尿病诊断和治疗效果确认的重要指标。此外，1,5-ag 还有其它多种临床应用价值，例如，可作为非糖尿病人群监测餐后高血糖相关的心血管危险发生率的指标；还能很好的反映慢性肾功能衰竭病人的肾小管重吸收功能等。
3.现有的1, 5-脱水-d-山梨醇检测试剂生产工艺的生产效率不高，次品率高，检测精度较低且提高了生产成本，具有进一步改进空间。


技术实现要素：

4.（一）解决的技术问题针对现有技术的不足，本发明提供了一种采用酶法的1,5-脱水-d-山梨醇检测试剂生产工艺，解决了次品率高，检测精度较低且提高了生产成本的问题。
5.（二）技术方案为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种采用酶法的1,5-脱水-d-山梨醇检测试剂生产工艺，具体工艺流程为：s1.根据订单需要计算下达生产指令，并根据生产指令向生产部下发生产指令单；s2.根据生产指令单，分别进行试剂r1和试剂r 2的配制；s3.在试剂r1和试剂r 2进行配制时，同时进行校准品和质控品的配制、分装与赋值；s4. 试剂r1和试剂r 2完成配制后，将配制完成的溶液存放在半成品罐中，进行标识，并通过质量部检验人员进行半成品检验；s5.检验合格后，按照生产指令单的产品规格，以移液器分别分装试剂r1和试剂r2；s6.分装后，按照产品生产指令单上的规格要求对r1、r2、校准品和质控品进行贴签和组装工作，并通过质量部检验人员进行成品检验抽查；s7. 经质量部通过成品检验合格的试剂盒，作为合格品入库。
6.优选的，所述试剂r1的配制流程为：a1.按照生产指令单上的试剂r1生产量v1(l)和工艺配方表的浓度，计算得到需要称量的物料的量；a2.准备好已标识的配液罐，在配液罐中先放入配制量70%的纯化水，准确称取三
羟甲基氨基甲烷、葡萄糖激酶、丙酮酸激酶、磷酸烯醇式丙酮酸钾、三磷酸腺苷和proclin 950投入配液罐中，放到磁力搅拌器上；a3.打开磁力搅拌器电源开关，调节搅拌子至 400 r/min，使溶液保持转动状态，搅拌10 min；a4.待物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，用6 mol/l hcl调节ph值到7.30-7.50之间。调节ph完成的溶液加纯化水至配制量。
7.优选的，所述试剂r2的配制流程为：b1.按照生产指令单上的试剂r2生产量v2(l)和工艺配方表的浓度，计算得到需要称量的物料的量；b2.准备好已标识的配液罐，在配液罐中先放入配制量70%的纯化水，准确称取三羟甲基氨基甲烷、4-氨基安替比林、3-羟基-2,4,6-三碘苯甲酸、吡喃糖氧化酶、过氧化物酶和proclin 950投入配液罐中，放到磁力搅拌器上；b3.打开磁力搅拌器电源开关，调节搅拌子至 400 r/min，使溶液保持转动状态，搅拌10 min；b4.待物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，用6 mol/l hcl调节ph值到7.30-7.50之间。调节ph完成的溶液加纯化水至配制量。
8.优选的，所述校准品的配制流程为：c1.根据校准品的目标浓度和校准品计划生产量v
3 (l)，计算1,5-脱水-d-山梨醇的用量v
1,5-脱水-d-山梨醇 (l)，根据生产指令单上校准品的生产量v
3 (l)乘1.2倍得到稀释液的配置量v
稀释液
(l)；c2.称量计算所得物料进行稀释液配制，配制完毕后，按照计算数据，将体积为v3(l)
ꢀ‑ꢀv1,5-脱水-d-山梨醇
(l)的稀释液和体积为v
1,5-脱水-d-山梨醇
(l)的1,5-脱水-d-山梨醇进行混匀，放到磁力搅拌器上，打开磁力搅拌器电源开关，调节搅拌子至400 r/min，使溶液保持中速转动状态，搅拌10 min；c3.调配完毕后，用工作校准品定标，试剂用同生产批配制的半成品试剂，取0.3 ml配制的校准品上机检测，检测三次，计算三次检测结果的平均值；c4.若检测结果超出配制浓度范围，按照结果与目标浓度的差值，计算并添加1,5-脱水-d-山梨醇或稀释液，提高或降低溶液中的1,5-脱水-d-山梨醇浓度。充分混匀后，执行上述步骤，直至校准品在规定浓度范围内；c5.配制好的校准品溶液存放在半成品罐中，进行标识，然后根据规格用移液器进行分装，分装完成后，进行赋值；c6.赋值完成后，通过质量部进行半成品抽样检验。
9.优选的，所述稀释液的配制流程为：d1.按稀释液工艺配方表的浓度，计算得到配制稀释液需要称量的物料的量；d2.准备好已标识的配液罐，在配液罐中先放入配制量70%的纯化水，准确称取三羟甲基氨基甲烷、牛白蛋白和proclin 950投入配液罐中，放到磁力搅拌器上；d3.打开磁力搅拌器电源开关，调节搅拌子至 400 r/min，使溶液保持转动状态，搅拌10 min；d4.待物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，用6 mol/l hcl调节ph值
到7.30-7.50之间。调节ph完成的溶液加纯化水至配制量。
10.优选的，所述质控品的配制流程与校准品的配制流程相同，且所述质控品稀释液搅拌时的磁力搅拌器搅拌子转速为 250 r/min。
11.优选的，所述校准品的目标浓度为30.0μg/ml，产品误差为
±
9.0μg/ml。
12.优选的，所述质控品的目标浓度为20.0μg/ml，产品误差为
±
6.0μg/ml。
13.（三）有益效果本发明提供了一种采用酶法的1,5-脱水-d-山梨醇检测试剂生产工艺。具备以下有益效果：1、本发明通过标明关键工序和检测控制点，规范每个操作步骤，保证产品生产的可靠性和一致性，提高了生产效率降低了次品率，提高了本工艺的实用性。
14.2、本发明生产的试剂盒利用试剂内部的生物酶进行催化作用，检测效率更快，也提高了检测精度，加强了本发明的实用性。
附图说明
15.图1为本发明的工艺流程图。
具体实施方式
16.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
17.实施例一：如图1所示，本发明实施例提供一种采用酶法的1,5-脱水-d-山梨醇检测试剂生产工艺，具体工艺流程为：s1.根据订单需要计算下达生产指令，并根据生产指令向生产部下发生产指令单；s2.根据生产指令单，分别进行试剂r1和试剂r 2的配制；s3.在试剂r1和试剂r 2进行配制时，同时进行校准品和质控品的配制、分装与赋值；s4. 试剂r1和试剂r 2完成配制后，将配制完成的溶液存放在半成品罐中，进行标识，并通过质量部检验人员进行半成品检验；s5.检验合格后，按照生产指令单的产品规格，以移液器分别分装试剂r1和试剂r2；s6.分装后，按照产品生产指令单上的规格要求对r1、r2、校准品和质控品进行贴签和组装工作，并通过质量部检验人员进行成品检验抽查；s7. 经质量部通过成品检验合格的试剂盒，作为合格品入库。
18.试剂r1的工艺配方表为：
试剂r1的配制流程为：a1.按照生产指令单上的试剂r1生产量v1(l)和工艺配方表的浓度，计算得到需要称量的物料的量；a2.准备好已标识的配液罐，在配液罐中先放入配制量70%的纯化水，准确称取三羟甲基氨基甲烷、葡萄糖激酶、丙酮酸激酶、磷酸烯醇式丙酮酸钾、三磷酸腺苷和proclin 950投入配液罐中，放到磁力搅拌器上；a3.打开磁力搅拌器电源开关，调节搅拌子至 400 r/min，使溶液保持转动状态，搅拌10 min；a4.待物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，用6 mol/l hcl调节ph值到7.30-7.50之间。调节ph完成的溶液加纯化水至配制量；试剂r2
试剂r2的配制流程为：b1.按照生产指令单上的试剂r2生产量v2(l)和工艺配方表的浓度，计算得到需要称量的物料的量；b2.准备好已标识的配液罐，在配液罐中先放入配制量70%的纯化水，准确称取三羟甲基氨基甲烷、4-氨基安替比林、3-羟基-2,4,6-三碘苯甲酸、吡喃糖氧化酶、过氧化物酶和proclin 950投入配液罐中，放到磁力搅拌器上；b3.打开磁力搅拌器电源开关，调节搅拌子至 400 r/min，使溶液保持转动状态，搅拌10 min；b4.待物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，用6 mol/l hcl调节ph值到7.30-7.50之间。调节ph完成的溶液加纯化水至配制量。
19.校准品的配制流程为：c1.根据校准品的目标浓度和校准品计划生产量v
3 (l)，计算1,5-脱水-d-山梨醇的用量v
1,5-脱水-d-山梨醇 (l)，根据生产指令单上校准品的生产量v
3 (l)乘1.2倍得到稀释液的配置量v
稀释液
(l)；c2.称量计算所得物料进行稀释液配制，配制完毕后，按照计算数据，将体积为v3(l)
ꢀ‑ꢀv1,5-脱水-d-山梨醇
(l)的稀释液和体积为v
1,5-脱水-d-山梨醇
(l)的1,5-脱水-d-山梨醇进行混匀，放到磁力搅拌器上，打开磁力搅拌器电源开关，调节搅拌子至400 r/min，使溶液保持中速转动状态，搅拌10 min；c3.调配完毕后，用工作校准品定标，试剂用同生产批配制的半成品试剂，取0.3 ml配制的校准品上机检测，检测三次，计算三次检测结果的平均值；c4.若检测结果超出配制浓度范围，按照结果与目标浓度的差值，计算并添加1,5-脱水-d-山梨醇或稀释液，提高或降低溶液中的1,5-脱水-d-山梨醇浓度。充分混匀后，执行上述步骤，直至校准品在规定浓度范围内；c5.配制好的校准品溶液存放在半成品罐中，进行标识，然后根据规格用移液器进
行分装，分装完成后，进行赋值；c6.赋值完成后，通过质量部进行半成品抽样检验；稀释液工艺配方表为：稀释液的配制流程为：d1.按稀释液工艺配方表的浓度，计算得到配制稀释液需要称量的物料的量；d2.准备好已标识的配液罐，在配液罐中先放入配制量70%的纯化水，准确称取三羟甲基氨基甲烷、牛白蛋白和proclin 950投入配液罐中，放到磁力搅拌器上；d3.打开磁力搅拌器电源开关，调节搅拌子至 400 r/min，使溶液保持转动状态，搅拌10 min；d4.待物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，用6 mol/l hcl调节ph值到7.30-7.50之间。调节ph完成的溶液加纯化水至配制量；质控品的配制流程与校准品的配制流程相同，且质控品稀释液搅拌时的磁力搅拌器搅拌子转速为 250 r/min，校准品的目标浓度为30.0μg/ml，产品误差为
±
9.0μg/ml，质控品的目标浓度为20.0μg/ml，产品误差为
±
6.0μg/ml。
20.尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。