抗人CD38双特异性抗体及其用途的制作方法

发明领域本发明通常涉及基因工程和抗体药物领域；具体而言，本技术涉及抗人cd38的双特异性抗体及其用途。

背景技术：

0、发明背景

1、cd38是一种分子量大小为46kd的ii型跨膜蛋白，包括一个长的c端胞外区(258个氨基酸)、一个跨膜区(21个氨基酸)和一个短的n端(21个氨基酸)。cd38的功能体现在两方面，首先，cd38胞外区是具有adp-核糖环化酶、环adp-核糖水解酶、nad多糖水解酶活性的一种胞外酶，涉及cadpr的形成和水解。当cd38作为一种adp核糖基环化酶存在时，可以将烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad+)转化为烟酰胺、腺苷二磷酸核糖(adpr)，还可以将nad+环化为环腺苷二磷酸核糖(cadpr)[1]。cd38的这个活性对维持体内nad、烟酰胺等物质的动态平衡非常重要。cd38的底物主要为β-nad以及β-nad的衍生物(如β-nmn)，而对α-nad、nadh等物质没有催化活性。催化反应的产物adpr、cadpr等物质作为细胞中重要的第二信使，可以通过调控细胞钙离子的方式来影响细胞生长、胰岛素释放、t细胞激活等功能[2]。cd38催化生成的adpr/cadpr可以继续被cd203、cd73等酶的作用下生成腺苷，而腺苷则是发挥免疫抑制功能的小分子代谢物。

2、另外，cd38介导跨膜信号传递。cd38与配体作用诱导白细胞介素1(il-1)、肿瘤坏死因子α(tnfα)和粒-巨噬细胞集落刺激因子(gmcsf)的转录，其表达水平与刺激t细胞受体cd3的效应相似。在jurkat细胞系中cd38启动信号传递导致一系列离散的蛋白的磷酸化，原癌基因p120c-cbl的产物是主要的蛋白，在这条信号通路中其酪氨酸被磷酸化。cd38还可以通过t细胞受体(tcr)传导信号并参与细胞应答，启动免疫蛋白的转换分泌[3]。cd38与配体结合可抑制在骨髓微环境培养的未成熟b淋巴细胞的生长。

3、cd38的表达和多种疾病有关，如hiv感染[4]、系统红斑狼疮[5]和肿瘤。cd38在多种血液肿瘤中的表达量上调，如多发性骨髓瘤(mm)[6]、急性淋巴性白血病(all)[7]、慢性淋巴性白血病(cll)[8]等。目前对cd38与肿瘤的研究基本可以确定cd38在促进肿瘤细胞生长及免疫逃逸方面具有重要的功能。cd38与肿瘤的关系基本可以概括为两点:

4、cd38在非实体瘤，尤其是多发性骨髓瘤(multiple myeloma，mm)中表达量很高，且与多发性骨髓瘤预后负相关，这使得cd38成为了多发性骨髓瘤、cll等非实体瘤靶向治疗的良好靶点之一。多发性骨髓瘤是一种浆细胞异常增生导致的恶性血液肿瘤，在血液肿瘤中占比约为10％，在所有肿瘤中的比率约为1％[9]。统计显示：在2012年，全球共有114,252例新增病例和80,119例死亡病例[10]。多发性骨髓瘤的发病率有一定的人种差异性，具体来说东亚地区的发病率要低于欧美，globocan 2012的统计数据显示美国的发病率为3.6/10万，中国的发病率为0.6/10万[11]。

5、此外，cd38在某些实体瘤中也存在较高的表达。由于cd38及后续的cd203、cd73等酶共同作用生成腺苷这个具有免疫抑制活性的分子，cd38在实体瘤的肿瘤微环境中发挥了重要的免疫抑制功能，因此靶向cd38的实体瘤治疗将有望解除cd38对免疫细胞的抑制作用，使免疫治疗更好发挥作用。

6、2015年底，fda批准强生靶向cd38的抗体药物darzalex上市，用于既已接受至少3种疗法治疗的多发性骨髓瘤患者(四线疗法)。darzalex是全球首个获批治疗多发性骨髓瘤的cd38单克隆抗体。darzalex可以通过抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(adcc)、补体依赖的细胞毒性(cdc)、抗体依赖的细胞介导的吞噬作用(adcp)等机制杀死cd38+骨髓瘤细胞[12]。2020年3月，美国fda宣布批准赛诺菲(sanofi)公司开发的cd38抗体sarclisa(isatuximab-irfc)上市，与泊马度胺(pomalidomide)和地塞米松(dexamethasone)联用，治疗成年多发性骨髓瘤患者。这些患者至少接受过两种前期疗法，包括来那度胺(lenalidomide)和蛋白酶体抑制剂。

7、双特异性抗体(bispecific antibody，bsab)是一类人工抗体，其包含两个不同的抗原结合位点，可以桥接两种细胞类型，或者结合一个细胞的两个分子以及结合一个分子的两个表位，产生不同于单抗的或者较单抗更强的功能，现已成为抗体工程领域的研究热点，在疾病的免疫治疗中具有广阔的应用前景。

8、新的抗人cd38双特异性抗体的开发和应用是本领域所需要的。因此，鉴于抗人cd38双特异性抗体具有广泛的适用性，基于临床需求，探索和研发新的抗人cd38双特异性抗体具有重要的生物学和医学意义。

技术实现思路

0、发明概述

1、第一方面，本技术提供了双特异性抗体，其包含结合人cd38不同表位的第一抗原结合片段和第二抗原结合片段。

2、在第一方面的一些实施方案中，所述第一抗原结合片段包含:

3、如seq id no:23所示的hcdr1，

4、如seq id no:24所示的hcdr2，

5、如seq id no:25所示的hcdr3，

6、如seq id no:26所示的lcdr1，

7、如seq id no:27所示的lcdr2，和

8、如seq id no:28所示的lcdr3；

9、其中hcdr和lcdr的氨基酸序列根据kabat定义。

10、在第一方面的一些实施方案中，所述第二抗原结合片段包含:

11、如seq id no:29所示的hcdr1，

12、如seq id no:30所示的hcdr2，

13、如seq id no:31所示的hcdr3，

14、如seq id no:32所示的lcdr1，

15、如seq id no:33所示的lcdr2，和

16、如seq id no:34所示的lcdr3；

17、其中hcdr和lcdr的氨基酸序列根据kabat定义。

18、在第一方面的一些实施方案中，所述第一抗原结合片段的重链可变区的氨基酸序列如seq id no:10所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:11所示。

19、在第一方面的一些实施方案中，所述第二抗原结合片段的重链可变区的氨基酸序列如seq id no:12所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:13所示。

20、在第一方面的一些实施方案中，所述第一抗原结合片段和所述第二抗原结合片段的形式独立地选自单链抗体(scfv)或者fab片段。

21、在第一方面的一些实施方案中，所述第一抗原结合片段为单链抗体(scfv)，所述第二抗原结合片段为fab片段。

22、在第一方面的一些实施方案中，所述第一抗原结合片段为fab片段,所述第二抗原结合片段为ch1cl置换的fab片段。

23、第二方面，本技术提供了核酸分子，其编码第一方面所述的双特异性抗体。

24、第三方面，本技术提供了药物组合物，其包含第一方面所述的双特异性抗体以及药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。

25、第四方面，本技术提供了第一方面所述的双特异性抗体、第二方面所述的核酸分子或第三方面所述的药物组合物在制备用于预防或治疗cd38介导的疾病的药物中的用途。