一种含小分子活性肽羊栖菜提取物的制备方法与流程

1.本发明涉及羊栖菜提取领域，特别是涉及一种含小分子活性肽羊栖菜提取物的制备方法。


背景技术：

2.海洋藻类羊栖菜，属褐藻门马尾藻属，是一种多年生海藻，又称海大麦，是传统的食用海藻。羊栖菜在我国沿海北自辽东半岛，南至广东雷州半岛都有生长，其中在温州洞头有我国最大的人工养殖基地。羊栖菜营养丰富，含有多种活性物质，具有较高的开发和利用价值。已有研究表明羊栖菜具有抗肿瘤、降血糖、降血脂、增强机体免疫力等功效，是一种高蛋白、低脂肪、富含多种活性成分的药食同源海藻。羊栖菜富含的多酚类物质、多糖和蛋白质是其生物活性成分的主要来源。其褐藻多酚和羊栖菜多糖具有抗氧化、抗菌、抗病毒以及抗肿瘤活性。羊栖菜含有十八种氨基酸，包含8种人体必需氨基酸，且氨基酸比例合理，其蛋白含量基本处在10% ~ 16%之间，是一种优良的植物蛋白源。
3.然而，专利申请号为cn200810060550.7的专利公开了一种羊栖菜活性多糖提取工艺，提高了羊栖菜多糖的提取率。专利申请号为cn202110247188.x的专利公开了一种具有显著益生活性羊栖菜多糖及其制备方法与应用，可用于羊栖菜功能食品的开发。专利申请号为cn202110498160.3的专利公开了一种羊栖菜多糖及寡糖的制备方法，提高羊栖菜多糖的提取率。从已有文献可以看出，关于羊栖菜的研究开发现多集中在其褐藻多糖和甾醇类化合物成分的提取及功能应用方面，但是对羊栖菜蛋白质转化利用并没有涉及，传统的羊栖菜蛋白质转化利用的效率低下。


技术实现要素：

4.基于此，有必要针对传统的羊栖菜蛋白质转化利用的效率低下的技术问题，提供一种含小分子活性肽羊栖菜提取物的制备方法。
5.一种含小分子活性肽羊栖菜提取物的制备方法，所述方法包括以下步骤：羊栖菜清洗步骤：取新鲜的羊栖菜水洗干净，沥水后做烘干处理；羊栖菜粉碎步骤：将烘干处理后的羊栖菜进行粉碎处理；羊栖菜水浴步骤：将粉碎后的羊栖菜和水进行混合搅拌均匀形成混合液，对所述混合液进行水浴处理；蛋白酶添加步骤：将蛋白酶添加至经过水浴处理的所述混合液中进行充分酶解形成酶解液；灭活处理步骤：将所述酶解液进行灭活处理；离心处理步骤：将灭活处理后的所述酶解液进行离心处理，取得上清液；提取处理步骤：将所述上清液减压浓缩后冷冻干燥制得提取物干粉。
6.在其中一个实施例中，在所述羊栖菜清洗步骤中，在75摄氏度至85摄氏度的温度下对沥水后的羊栖菜进行烘干处理。
7.在其中一个实施例中，在所述羊栖菜粉碎步骤中，使得粉碎后的羊栖菜过50目至70目筛。
8.在其中一个实施例中，在所述羊栖菜水浴步骤中，水浴处理的温度为45摄氏度至55摄氏度。
9.在其中一个实施例中，在所述羊栖菜水浴步骤中，将粉碎后的羊栖菜和水的按照1:10至1:20的质量体积比进行混合搅拌均匀形成混合液。
10.在其中一个实施例中，在所述蛋白酶添加步骤中，酶解的时间为2小时至5小时，蛋白酶的添加量与烘干处理后的羊栖菜的质量比为2%~ 6%。
11.在其中一个实施例中，在所述蛋白酶添加步骤之前还包括，ph值调节步骤：将水浴处理后的混合液的ph值调节至6.5至8.5。
12.在其中一个实施例中，在所述ph值调节步骤之前还包括，纤维素酶添加步骤：将纤维素酶添加至经过水浴处理的所述混合液中进行充分酶解。
13.在其中一个实施例中，在所述纤维素酶添加步骤中，将果胶酶和纤维素酶添加至经过水浴处理的所述混合液中进行充分酶解。
14.在其中一个实施例中，在所述离心处理步骤中，将上清液放置于离心机中，以8000 r/min的离心速度，离心30分钟。
15.上述含小分子活性肽羊栖菜提取物的制备方法步骤简练精妙、容易操控，每个步骤都认真细微，可以将羊栖菜中的蛋白质充分且高效地提取出来。
附图说明
16.图1为一个实施例中含小分子活性肽羊栖菜提取物的制备方法的流程示意图；图2为另一个实施例中含小分子活性肽羊栖菜提取物的制备方法的流程示意图；图3为一个实施例中酶解过程中的多肽及可溶性固含物含量变化图。
具体实施方式
17.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
18.请参阅图1，本发明提供了一种含小分子活性肽羊栖菜提取物的制备方法，所述方法包括以下步骤：步骤110：羊栖菜清洗步骤：取新鲜的羊栖菜水洗干净，沥水后做烘干处理。
19.其中，新鲜的羊栖菜指的是健壮的、无枯萎、无烂叶的在两天内采下的羊栖菜。
20.具体的，取新鲜的羊栖菜水洗三遍以上将羊栖菜上的杂质、泥土、枯叶、烂叶清除干净。将清洗干净的羊栖菜进行沥水操作，去除羊栖菜表层上的水滴，沥水处理后，在其中一个实施例中，在75摄氏度至85摄氏度的温度下对沥水后的羊栖菜进行烘干处理。进一步地，在78摄氏度至82摄氏度的温度下对沥水后的羊栖菜进行烘干处理。具体的，在80摄氏度的温度下对沥水后的羊栖菜进行烘干处理。恰当的烘干温度一方面可以保证较高的烘干效率，另一方面可以避免羊栖菜中的蛋白质因为高温变质。烘干处理以去除羊栖菜内部的水分。
21.步骤120：羊栖菜粉碎步骤：将烘干处理后的羊栖菜进行粉碎处理。
22.其中，烘干处理后的羊栖菜因为内部的水分已经被去除掉，所以属于干硬易碎的状态。
23.具体的，将烘干处理后的羊栖菜进行粉碎处理，以便于进行后续的提取操作。在其中一个实施例中，使得粉碎后的羊栖菜过50目至70目筛。进一步地，在本实施例中，使得粉碎后的羊栖菜过55目至65目筛。具体的，使得粉碎后的羊栖菜过60目筛。过60目筛的羊栖菜碎片大小适宜，既便于提取过程中收集整理又可以保证与水进行充分接触，便于蛋白质的提取作业。
24.步骤130：羊栖菜水浴步骤：将粉碎后的羊栖菜和水进行混合搅拌均匀形成混合液，对所述混合液进行水浴处理。
25.其中，水浴处理的优点就是可以保证混合液受热均匀且保证受热温度稳定，避免温度大幅度变动的影响。
26.具体的，将粉碎后的羊栖菜和水进行混合搅拌均匀形成混合液，对所述混合液进行水浴处理。在其中一个实施例中，水浴处理的温度为45摄氏度至55摄氏度。进一步地，在本实施例中，水浴处理的温度为48摄氏度至52摄氏度。具体的，水浴处理的温度为50摄氏度。50摄氏度的水浴温度，既可以保证生物酶具有较高的活性，以增加酶解速度，又可以避免将生物酶灭活，是本发明的一个核心发明点之一。在本实施例中，将粉碎后的羊栖菜和水的按照1:10至1:20的质量体积比进行混合搅拌均匀形成混合液。粉碎后的羊栖菜和水恰当的质量体积比可以在保证提取效率的同时可以降低提取难度。
27.步骤140：蛋白酶添加步骤：将蛋白酶添加至经过水浴处理的所述混合液中进行充分酶解形成酶解液。
28.其中，蛋白酶为碱性蛋白酶，在其中一个实施例中，蛋白酶为专利申请号202110869761.0，专利名称为：一株产碱性蛋白酶菌株、所产碱性蛋白酶及方法的发明专利中提及的碱性蛋白酶，该碱性蛋白酶活范围5000 u/g 至10000u/g。在另一实施例中，蛋白酶为中性蛋白酶。
29.具体的，将蛋白酶添加至经过水浴处理的所述混合液中进行充分酶解形成酶解液，其中一个实施例中，酶解的时间为2小时至5小时，蛋白酶的添加量与烘干处理后的羊栖菜的质量比为2%至6%。蛋白酶恰当的添加量一方面可以保证酶解过程的充分且快速进行，另一方面可以避免蛋白酶的浪费。
30.步骤150：灭活处理步骤：将所述酶解液进行灭活处理。
31.具体的，将所述酶解液在90摄氏度下加热10分钟，使得所述酶解液中的生物酶灭活。需要说明的是，90摄氏度下加热10分钟，一方面可以在较短时间内快速将所述酶解液中的生物酶灭活，另一方面，可以避免酶解出来的多肽在高温下变质。
32.步骤160：离心处理步骤：将灭活处理后的所述酶解液进行离心处理，取得上清液。
33.具体的，在其中一个实施例中，将上清液放置于离心机中，以7000 r/min至9000 r/min的离心速度，离心25分钟至35分钟。进一步地，以7500 r/min至8500 r/min的离心速度，离心28分钟至32分钟。具体的，以8000r/min的离心速度，离心30分钟。
34.步骤170：提取处理步骤：将所述上清液减压浓缩后冷冻干燥制得提取物干粉。
35.请参阅图2，为了增加上述含小分子活性肽羊栖菜提取物的制备方法的提取效率，
在其中一个实施例中，在步骤160：所述蛋白酶添加步骤之前还包括，步骤132：ph值调节步骤：将水浴处理后的混合液的ph值调节至6.5至8.5。
36.具体的，将水浴处理后的混合液的ph值调节至6.8至8。进一步地，在一个实施例中，将水浴处理后的混合液的ph值调节至7。将水浴处理后的混合液的ph值调节至7适配碱性蛋白酶。需要说明的是，不同ph值的混合液所适配的蛋白酶的种类也不同。不同ph值的混合液适配种类不同的蛋白酶可以提高提取效率、改善提取效果。
37.进一步地，为了进一步地增加羊栖菜的利用效率，增加一种含小分子活性肽羊栖菜提取物的制备方法的效率，在其中一个实施例中，在步骤132：所述ph值调节步骤之前还包括，步骤131：纤维素酶添加步骤：将纤维素酶添加至经过水浴处理的所述混合液中进行充分酶解。
38.具体的，将纤维素酶添加至经过水浴处理的所述混合液中进行充分酶解，纤维素酶对羊栖菜中的纤维素进行酶解，使得羊栖菜内部的蛋白质充分与蛋白酶接触，从而提高了提取效果，增加了羊栖菜的利用率。进一步地，纤维素酶的添加量与烘干处理后的羊栖菜的质量比为3%至 6%。在另一个实施例中，纤维素酶的添加量与烘干处理后的羊栖菜的质量比为5%至 6%。纤维素酶恰当的添加量一方面可以保证纤维素酶解过程的充分且快速进行，另一方面可以避免纤维素酶的浪费。
39.特别的，在本实施例中，在步骤131：所述纤维素酶添加步骤中，将果胶酶和纤维素酶添加至经过水浴处理的所述混合液中进行充分酶解。果胶酶可以将羊栖菜中的果胶进行酶解，使得羊栖菜内部的蛋白质充分与蛋白酶接触，从而提高了提取效果，增加了羊栖菜的利用率。进一步地，果胶酶的添加量与烘干处理后的羊栖菜的质量比为0.5%至 1%。在另一个实施例中，果胶酶的添加量与烘干处理后的羊栖菜的质量比为0.8%至 1%。胶酶恰当的添加量一方面可以保证果胶酶解过程的充分且快速进行，另一方面可以避免果胶酶的浪费。
40.上述含小分子活性肽羊栖菜提取物的制备方法步骤简练精妙、容易操控，每个步骤都认真细微，可以将羊栖菜中的蛋白质充分且高效地提取出来。在提取过程中对提取出来的上清液以及提取物干粉进行测量。具体的，利用福林酚法测量上清液中多肽的含量，利用ph-stat法测定上清液中蛋白质的水解度。利用高效凝胶过滤色谱法测定提取物干粉中小分子多肽相对分子质量分布。测得的结果为：按照上述含小分子活性肽羊栖菜提取物的制备方法得到的上清液中，可溶性固含物含量为3.8 %至3.9%，多肽含量为5.5 mg/ml 至 5.7 mg/ml，蛋白水解度为43 %至 45%。酶解过程中的可溶性固含物和多肽含量变化见图3所示。反应开始30至60分钟内，多肽和可溶性固含物含量都快速增加；多肽在提取物中含量在前30分钟内快速提升，在120分钟时达到最高17%。
41.表1. 多肽在羊栖菜提取物中的占比
上清液减压浓缩后冷冻干燥得酶解提取物干粉，其中羊栖菜小分子多肽相对分子质量分布情况如表2所示，表2. 羊栖菜小分子多肽相对分子质量分布表制备的羊栖菜多肽以相对分子质量低于1000 u的小分子肽为主，占比约为75%，同时游离氨基酸含量也达到约23%。
42.以上实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
43.以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。