一种具有抗肿瘤功效的高纯度鲨鱼硫酸软骨素的制备工艺的制作方法

1.本发明属于海洋生物制品领域，尤其涉及一种具有抗肿瘤功效的高纯度鲨鱼硫酸软骨素的制备工艺。


背景技术：

2.鲨鱼是世界上最古老、最长寿的深海海洋生物之一，在地球上已生存了四亿年之久，它具有完善免疫系统，生命力极强，几乎不被疾病感染，即使受到外伤，伤口也能很快复原，鲨鱼患癌症的几率约为1/百万。
3.鲨鱼属于软骨鱼科，全身骨骼主要几乎全部为软骨，而且鲨鱼软骨中富含双硫酸基软骨素，即硫酸软骨素d，具有极高的电荷密度，从而使其具有更强的生理活性，特别是其特有的抑制肿瘤细胞生长的活性。
4.鲨鱼软骨素中除了具有含量丰富的硫酸软骨素d以外，其所含的杂质也较多，特别是硫酸角质素，硫酸角质素是糖胺聚糖的一类，其分子量较小，是与硫酸软骨素共生的一种物质，在硫酸软骨素的提取过程中如果处理不当就会被提取到主产品中，一旦进入主产品就很难进行去除，有研究表明常规工艺提取的鲨鱼软骨素中所含的硫酸角质素达到16％左右，目前对硫酸软骨素和硫酸角质素的分离均采用离子交换色谱法，但该方法由于操作复杂，收得率低，不利于实现工业化，还没有工业化去分离鲨鱼软骨素中硫酸角质素和硫酸软骨素的方法。
5.鲨鱼软骨素除含有较高水平的硫酸角质素以外，由于鲨鱼处于食物链的顶端，体内富集的重金属量较多，特别是砷元素含量较高，有报道鲨鱼骨的砷含量远高于国标要求。由鲨鱼软骨提取的产品砷含量普遍都是超标的，一般都在2.5ppm以上，有些甚至达到5ppm，远高于国内和国际标准限值，该指标给鲨鱼软骨素的应用造成较大的阻碍，对砷元素的去除显得尤为重要。
6.中国专利cn109503733a“一种鲨鱼硫酸软骨素的提取方法”，公开了一种本发明涉及一种鲨鱼硫酸软骨素的提取方法，包括以下步骤：(1)预处理；(2)酶解：于步骤(1)获得的滤液中加入软骨投料重量2-3％的第一酶，于ph值为5.5-6.5且温度为40-60℃的条件下酶解3-4h；然后调整ph值至6-6.3，此时加入软骨投料重量1-2％的第二酶，于50-60℃的条件下酶解1-2h；所述第一酶为木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶中的至少一种；所述第二酶为胰蛋白酶和胃蛋白酶中的至少一种；(3)超滤；(4)后处理。该技术产品收率达25-30％，但纯度达90-92％，纯度较低。且该技术中未涉及鲨鱼软骨素中硫酸角质素的检测和分离的操作，且未按照国际药典标准全面评估软骨素的综合指标，特别是鲨鱼软骨素的重金属指标，如砷。
7.中国专利cn111471738a“一种鲨鱼硫酸软骨素的提取方法”本发明公开了一种鲨鱼硫酸软骨素的提取方法，属于海洋生物技术领域。本技术以鲨鱼软骨粉为原料，集成生物酶解技术、混菌微生物发酵技术、现代生物分离技术，研制开发出高抗氧化能力的鲨鱼硫酸软骨素，其中生物酶解技术采用的复合酶系为木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶和风味蛋白酶中的一种或几种的混合物，混菌微生物发酵的发酵菌种主要包括米曲霉、
冷加糖芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌。利用本发明工艺制备硫酸软骨素产品得率高，具有较高的抗氧化能力和显著的抗肿瘤功效，可广泛应用于预防肿瘤等医疗保健食品中。该技术所得产品的chs含量为＞95％，含氮量＜2％，该技术未表明含量检测所使用的标准，所以无法判断95％含量是由何种方法进行检测评定的，因为硫酸软骨含量检测方法有cpc法、高效液相法和酶解液相法，其中cpc法最为常用，而高效液相法测定的含量往往偏高，酶解液相是从二糖水平计算硫酸软骨素的绝对含量，同时，含氮量不同于杂蛋白残留量，杂蛋白含量需要用含氮量乘以蛋白的转换系数，如胶原蛋白是5.79，含氮量2％所对应的蛋白含量为2％*5.79＝11.58％。同时，该技术中未涉及鲨鱼软骨素中硫酸角质素的检测和分离的操作，也未全面评估软骨素的综合指标，特别是鲨鱼软骨素的重金属指标，如砷。同时该技术的提取率为10％-16％,提取率较低，工业化生产成本较高，不利于大生产。
8.中国专利cn113150185a“一种鲨鱼软骨素的提取工艺”本发明涉及一种鲨鱼软骨素的提取工艺，所述提取工艺包括以下步骤：(1)鲨鱼软骨前处理：将鲨鱼软骨放入清水煮中3-4h，煮过的鲨鱼软骨冷却后用清水洗去表面的蛋白质和油脂，清洗后的鲨鱼软骨放入鼓风干燥机中烘干至恒重，烘干后的鲨鱼软骨先用粉碎机粉碎，再使用超微粉碎机中进一步粉碎获得鲨鱼软骨超微粉；(2)碱提：称取鲨鱼软骨超微粉，按照固液比1:30加入氢氧化钠溶液浸泡，置于摇床中振荡；(3)离心：震荡水解后的混合液置于离心机内进行离心，离心后保留上清液备用。该技术中未涉及鲨鱼软骨素中硫酸角质素的检测和分离的操作，且未按照国际药典标准全面评估软骨素的综合指标，特别是鲨鱼软骨素的纯度、重金属指标，如砷等。
9.中国专利cn105777938a“一种从硫酸软骨素粗提物中去除硫酸角质素的方法”涉及一种从硫酸软骨素粗提物中去除硫酸角质素的方法。本发明在硫酸软骨素粗提物溶液中加入氢氧化钠溶液反应后，加入盐酸调节ph值，过滤得滤液，在滤液中加入氯化钠调节溶液电导率为45-48ms/cm，然后加入乙醇溶液，控制乙醇溶液流速为10-15ml/(l
·
min)，使硫酸软骨素沉淀,过滤得沉淀物，沉淀物经脱水后干燥得硫酸软骨素成品。该技术提供了一种工业化去除硫酸角质素的方法，但发明中涉及的硫酸软骨素中所含的硫酸角质素含量仅为2.0-4.0％,非鲨鱼来源，对于鲨鱼软骨素这种含特殊结构和高含量(16％左右)硫酸角质素的原料无法通过该方法进行有效硫酸角质素的有效去除。而且该技术是采用粗品回溶精制的方式进行提纯，增加了产品的工艺步骤和过程损失，造成制造费用的身高。该技术中未涉及鲨鱼软骨素中硫酸角质素的检测和分离的操作，且未按照国际药典标准全面评估软骨素的综合指标，特别是鲨鱼软骨素的纯度、重金属指标，如砷等。
10.因此，现有技术中存在如下缺点：
11.1.现有技术中对没有专门去除鲨鱼硫酸软骨素中所含的特殊结构和高含量的硫酸角质素的方法(硫酸角质素含量为16％左右)，只有针对硫酸角质素含量为2.0-4.0％时的简单处理工艺，且通过验证，该方法无法脱去鲨鱼软骨素中的硫酸角质素。且该技术需要对粗品进行回溶处理，无法一次性制备。
12.2.现有技术中鲨鱼软骨素的提取纯度较低，同时，未对鲨鱼软骨素中的杂质进行系统分析，如硫酸盐、氯化物、杂蛋白残留、重金属含量，特别是砷元素的检测和去除。
13.3.现有技术中未涉及鲨鱼软骨素中砷元素检测和分离的操作，且未全面评估软骨素的综合指标，特别是鲨鱼软骨素的纯度、重金属指标。
3m/h，将经过树脂吸附的料液输送至超滤工序。
27.进一步的，上述一种具有抗肿瘤功效的高纯度鲨鱼硫酸软骨素的制备工艺，所述除砷树脂型号为lsc-400。
28.进一步的，上述一种具有抗肿瘤功效的高纯度鲨鱼硫酸软骨素的制备工艺，所述步骤5)超滤具体包括以下步骤：采用截留分子量为10-20kda的膜芯对料液进行超滤浓缩，将料液浓缩3-4倍。
29.进一步的，上述一种具有抗肿瘤功效的高纯度鲨鱼硫酸软骨素的制备工艺，所述步骤7)真空薄膜蒸发具体包括以下步骤：将料液输送至真空薄膜蒸发进行蒸发，蒸发温度控制在50-60℃，真空度为-0.095～-0.1mpa，将料液浓缩至料液干物浓度达到20-25％。
30.进一步的，上述具有抗肿瘤功效的高纯度鲨鱼硫酸软骨素的制备工艺制备获得的鲨鱼硫酸软骨素。
31.进一步的，上述鲨鱼硫酸软骨素按cpc法含量大于108％；硫酸角质素含量低于1.5％；不含乙醇残留；砷的含量小于0.5ppm。
32.优选的，上述一种具有抗肿瘤功效的高纯度鲨鱼硫酸软骨素的制备工艺，包括以下具体步骤：
33.1)鲨鱼软骨粉碎：将鲨鱼软骨粉碎至10-16mm颗粒，通过16mm筛板，将粉碎后的骨粒投入20倍体积的纯化水，开启并保持搅拌均匀状态。
34.2)降温及碱提：使用管式换热器对物料体系进行循环降温至10-15℃，向料液中添加少量氢氧化钠，添加浓度为料液量的0.0005％-0.005％，搅拌均匀，碱提12-14h。
35.3)温和酶解及灭活：反应结束后，使用碟式离心机将混合液进行离心分离(5000r/min)，得到骨粒和浑浊液，调节料液ph至6.0-7.0，添加中性蛋白酶酶解30-40min，酶添加量为料液量0.001％-0.01％，反应结束后，将料液升温至75-80℃，保持10min，将料液降温至30-35℃，启动高速碟式离心机(10000r/min)对料液进行离心，得到澄清料液。
36.4)树脂吸附：将料液通过专用除砷的阴树脂(型号：lsc-400)，料液流经树脂的速度控制在2m/h，将经过树脂吸附的料液输送至超滤工序。
37.5)超滤：采用分子量为15kda的膜芯对料液进行超滤浓缩，将料液浓缩3-4倍。
38.6)料液洗涤：向料液中添加纯化水，纯化水添加量为料液量的4-4.5倍，分2次进行添加，将料液体积浓缩至加水前的体积。
39.7)真空薄膜蒸发：将料液输送至真空薄膜蒸发进行蒸发，蒸发温度控制在50-60℃，真空度为-0.095～-0.1mpa，将料液浓缩至料液干物浓度达到20-25％。
40.8)超高温灭菌：将物料输送给至超高温灭菌，灭菌温度为130-132℃，灭菌时间为6-7秒。
41.9)雾化干燥：灭菌后料液输送至喷雾干燥塔进行喷雾干燥，进风温度170-175℃，进行雾化干燥、干燥时间为10-12秒，产品干燥后进行过筛、过磁、包装。
42.与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
43.1.本方法提供一种一次性制备出硫酸角质素含量低于1％的高纯度鲨鱼硫酸软骨素同时通过本技术所生产的鲨鱼软骨素按照国际药典标准进行综合检测后，均能够复合国际药典标准，本方法可不通过粗品精制的方法进行生产，具有生产制费低，收率高，产品质量一次性实现高标准的特点，具有很高的商业价值。
44.2.本方法涉及到一种低温、弱碱的提取工艺，该条件大大降低了碱性条件下对糖苷键的切割作用，从而能够有效保护硫酸软骨素的分子结构，从而能提升硫酸软骨素的收得率，同时，该条件对硫酸角质素与核心蛋白之间的糖肽键也起到有效保护作用，是绝大多数的硫酸角质素都保留在软骨当中不被提取出来，从而大大降低了初始料液中硫酸角质素的含量。
45.3.本方法提供一种降低鲨鱼软骨素中砷含量的方法，能够有效降低鲨鱼软骨素产品中砷的含量达到0.5ppm的水平，远低于市售鲨鱼软骨素2.5ppm-5.0ppm的高砷情况。
46.4.本方法所生产鲨鱼硫酸软骨素按美国药典cpc法含量能够达到106-108％,纯度超过usp标准品及sigma标准品的含量。
47.5.本方法提供一种无乙醇生产鲨鱼硫酸软骨素的方法，生产过程中不再使用乙醇作为沉淀溶剂，从而大大减少了生产过程中的安全隐患问题，更加符合国家生产安全方面的要求。
48.6.本方法提供一种瞬时的灭菌方法，一方面保证了产品的色泽无明显变化，保持产品的成分在灭菌过程中无变化，同时保证了所生产的产品各项微生物指标均能够符合药典要求，为非辐照产品。
49.7.本技术提供了一种节能高效的高纯度鲨鱼软骨素生产方式，本方法中不使用硅藻土和乙醇，大大节约了硫酸软骨素生产过程中的辅料制费，同时，本方法中使用的氢氧化钠及生物酶制剂的量极少，生产过程中的需要处理的酸碱、生化污水废水产生量极少，本方法无论在企业安全改进方面还是环保的改进方面都提供了极为先进的技术方案。从而大大降低了企业的生产成本，为安全生产提供了技术上的支持，也进一步促进了企业的环保减排工作质量。
附图说明
50.附图1为本发明所述高纯度鲨鱼硫酸软骨素的制备工艺的流程图。
具体实施方式
51.下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
52.本发明实施例中使用的试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市场渠道购买获得的常规试剂产品。
53.实施例1
54.对比例zs21041004
55.zs21041004(粗品精制前)
56.按照中国专利cn109503733a中的条件，取1000kg鲨鱼骨，按专利中(1)预处理；(2)酶解：于步骤(1)获得的滤液中加入软骨投料重量2-3％的第一酶，于ph值为5.5-6.5且温度为40-60℃的条件下酶解3-4h；然后调整ph值至6-6.3，此时加入软骨投料重量1-2％的第二酶，于50-60℃的条件下酶解1-2h；所述第一酶为木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶中的至少一种；所述第二酶为胰蛋白酶和胃蛋白酶中的至少一种；(3)超滤；(4)后处理。得到硫酸软骨粗
品，出粉252.31kg，检测cpc含量为90.58％，酶解液相含量为74.75％，硫酸角质素含量为15.83％，检测砷含量为4.81ppm，检测乙醇残留为54388ppm，检测综合指标均超标，微生物指标均超标。
57.zs21041104(粗品精制后)
58.将以上粗品按照中国专利cn105777938a中的方法，将硫酸软骨素粗品溶液中加如去离子水，入氢氧化钠溶液反应后，加入盐酸调节ph值，过滤得滤液，在滤液中加入氯化钠调节溶液电导率为45-48ms/cm，然后加入乙醇溶液，控制乙醇溶液流速为10-15ml/(l
·
min)，使硫酸软骨素沉淀,过滤得沉淀物，沉淀物经脱水后干燥得硫酸软骨素成品。检测成品cpc为94.21％,酶解液相含量为81.22％，硫酸角质素含量为12.99％，检测重金属指标砷为4.23ppm，乙醇残留41200ppm，微生物指标均超标。
59.实施例2
60.制备例1zs21041405
61.1)鲨鱼软骨粉碎：取鲨鱼软骨素1000kg，将鲨鱼软骨粉碎至10-16mm颗粒，通过16mm筛板，将粉碎后的骨粒投入20倍体积的纯化水，开启并保持搅拌均匀状态。
62.2)降温及碱提：使用管式换热器对物料体系进行循环降温至13℃，向料液中添加少量氢氧化钠，添加浓度为料液量的0.005％，搅拌均匀，碱提12h。
63.3)温和酶解及灭活：反应结束后，使用碟式离心机将混合液进行离心分离(5000r/min)，得到骨粒和浑浊液，调节料液ph至6.5，添加中性蛋白酶酶解35min，酶添加量为料液量0.005％，反应结束后，将料液升温至77℃，保持10min，将料液降温至33℃，启动高速碟式离心机(10000r/min)对料液进行离心，得到澄清料液。
64.4)树脂吸附：将料液通过专用除砷的树脂lsc-400，料液流经树脂的速度控制在2m/h，将经过树脂吸附的料液输送至超滤工序。
65.5)超滤：采用分子量为15kda的膜芯对料液进行超滤浓缩，将料液浓缩3.5倍。
66.6)料液洗涤：向料液中添加纯化水，纯化水添加量为料液量的4倍，分2次进行添加，将料液体积浓缩至加水前的体积。
67.7)真空薄膜蒸发：将料液输送至真空薄膜蒸发进行蒸发，蒸发温度控制在55℃，真空度为-0.098mpa，将料液浓缩至料液干物浓度达到24％。
68.8)超高温灭菌：将物料输送给至超高温灭菌，灭菌温度为131℃，灭菌时间为6-7秒。
69.9)雾化干燥：灭菌后料液输送至喷雾干燥塔进行喷雾干燥，进风温度175℃，进行雾化干燥、干燥时间为10-12秒，产品干燥后进行过筛、过磁、包装，质量304.52kg。
70.检测产品cpc法含量为108.11％，酶解液相含量为106.79％,检测硫酸角质素含量为1.32％，检测砷含量0.43ppm,检测乙醇残留为0ppm，检测其他理化指标均复合美国药典要求，产品微生物指标均符合药典要求。
71.本批次产品的理化指标如表1所示；产品的微生物指标如表2所示；通过不同碱提条件下，硫酸角质素的含量及鲨鱼硫酸软骨素的收得率情况如表3所示。
72.表1产品理化指标
[0073][0074]
表2产品微生物指标
[0075][0076]
表3通过不同碱提条件下，硫酸角质素的含量及鲨鱼硫酸软骨素的收得率情况
[0077][0078]
实施例3
[0079]
制备例2
[0080]
1)鲨鱼软骨粉碎：取鲨鱼软骨素1000kg，将鲨鱼软骨粉碎至10-16mm颗粒，通过16mm筛板，将粉碎后的骨粒投入20倍体积的纯化水，开启并保持搅拌均匀状态。
[0081]
2)降温及碱提：使用管式换热器对物料体系进行循环降温至10℃，向料液中添加少量氢氧化钠，添加浓度为料液量的0.0005％，搅拌均匀，碱提13h。
[0082]
3)温和酶解及灭活：反应结束后，使用碟式离心机将混合液进行离心分离(5000r/min)，得到骨粒和浑浊液，调节料液ph至6.0，添加中性蛋白酶酶解30min，酶添加量为料液
量0.001％，反应结束后，将料液升温至75℃，保持5min，将料液降温至30℃，启动高速碟式离心机(10000r/min)对料液进行离心，得到澄清料液。
[0083]
4)树脂吸附：将料液通过专用除砷的树脂lsc-400，料液流经树脂的速度控制在1m/h，将经过树脂吸附的料液输送至超滤工序。
[0084]
5)超滤：采用分子量为10kda的膜芯对料液进行超滤浓缩，将料液浓缩3倍。
[0085]
6)料液洗涤：向料液中添加纯化水，纯化水添加量为料液量的4.5倍，分2次进行添加，将料液体积浓缩至加水前的体积。
[0086]
7)真空薄膜蒸发：将料液输送至真空薄膜蒸发进行蒸发，蒸发温度控制在50℃，真空度为-0.095mpa，将料液浓缩至料液干物浓度达到20％。
[0087]
8)超高温灭菌：将物料输送给至超高温灭菌，灭菌温度为130℃，灭菌时间为6-7秒。
[0088]
9)雾化干燥：灭菌后料液输送至喷雾干燥塔进行喷雾干燥，进风温度170℃，进行雾化干燥、干燥时间为10-12秒，产品干燥后进行过筛、过磁、包装，质量301.32kg。
[0089]
实施例4
[0090]
制备例3
[0091]
1)鲨鱼软骨粉碎：取鲨鱼软骨素1000kg，将鲨鱼软骨粉碎至10-16mm颗粒，通过16mm筛板，将粉碎后的骨粒投入20倍体积的纯化水，开启并保持搅拌均匀状态。
[0092]
2)降温及碱提：使用管式换热器对物料体系进行循环降温至15℃，向料液中添加少量氢氧化钠，添加浓度为料液量的0.002％，搅拌均匀，碱提14h。
[0093]
3)温和酶解及灭活：反应结束后，使用碟式离心机将混合液进行离心分离(5000r/min)，得到骨粒和浑浊液，调节料液ph至7.0，添加中性蛋白酶酶解40min，酶添加量为料液量0.005％，反应结束后，将料液升温至80℃，保持10min，将料液降温至30℃，启动高速碟式离心机(10000r/min)对料液进行离心，得到澄清料液。
[0094]
4)树脂吸附：将料液通过专用除砷的树脂lsc-400，料液流经树脂的速度控制在3m/h，将经过树脂吸附的料液输送至超滤工序。
[0095]
5)超滤：采用分子量为20kda的膜芯对料液进行超滤浓缩，将料液浓缩4倍。
[0096]
6)料液洗涤：向料液中添加纯化水，纯化水添加量为料液量的4.2倍，分2次进行添加，将料液体积浓缩至加水前的体积。
[0097]
7)真空薄膜蒸发：将料液输送至真空薄膜蒸发进行蒸发，蒸发温度控制在60℃，真空度为-0.1mpa，将料液浓缩至料液干物浓度达到25％。
[0098]
8)超高温灭菌：将物料输送给至超高温灭菌，灭菌温度为132℃，灭菌时间为6-7秒。
[0099]
9)雾化干燥：灭菌后料液输送至喷雾干燥塔进行喷雾干燥，进风温度172℃，进行雾化干燥、干燥时间为10-12秒，产品干燥后进行过筛、过磁、包装，质量307.22kg。
[0100]
实施例5
[0101]
抗肿瘤活性实验
[0102]
1选取雄性icr小鼠60只,体重20～23g,动物随机分为正常对照组(给予生理盐水)、药物组(给予环磷酰胺)及鲨鱼软骨素(实施例2zs21041405)低、中、高剂量组，分别为66mg/kg.bw/d、133mg/kg.bw/d、234mg/kg.bw/d3个剂量组(硫酸软骨素的推荐使用量为
400mg-1200mg/d,对应的剂量为6.7mg/kg.bw-20mg/kg.bw,小鼠采用10倍剂量即66mg/kg.bw-200mg/kg.bw)。鲨鱼硫酸软骨素均用生理盐水配制成溶液。所有试验动物给予食用全价颗粒饲料,自由摄食饮水。
[0103]
2各组动物给予受试的灌胃体积数为0.02ml/g.bw,1次/d,灌胃至第20d时,每鼠右前肢皮下无菌接种s-180肉瘤细胞悬液[25％(体积分数),用生理盐水稀释]0.2ml。接种后继续灌胃10d后停止灌胃,3d后,颈椎脱臼处死小鼠,每鼠剥离肿瘤,肿瘤表面血污用滤纸吸干后称重。
[0104]
3鲨鱼硫酸软骨素抑制s-180肉瘤试验结果见表4所示
[0105]
表4鲨鱼硫酸软骨素抑制s-180肉瘤试验结果
[0106]
剂量组别(mg/kg)动物数(只)瘤重(g)模型对照101.78
±
0.48药物组100.70
±
0.13*66101.10
±
0.19*133100.98
±
0.38*234100.72
±
0.30*
[0107]
注意:*表示与模型对照组比较有显著性,p《0.05。
[0108]
经灌胃给予小鼠66mg/kg.bw/d、133mg/kg.bw/d、234mg/kg.bw/d(相当于人体推荐摄入量400mg/d,800mg/d,1200mg/d)的鲨鱼硫酸软骨素。该试验表明,以上三种剂量对具有抑制小鼠s-180肉瘤生长的作用。
[0109]
综合以上实施例可知，本发明公开的一种具有抗肿瘤功效的高纯度鲨鱼硫酸软骨素的制备工艺所制得的鲨鱼硫酸软骨素的cpc法含量高，砷含量低，纯度超出usp标准品的含量，同时在本发明制备过程的弱碱和低温的条件下，对硫酸软骨素中存在的糖苷键也不会产生明显的切割作用，从而能够使硫酸软骨素保持完整的分子结构，从而使产品收率得到有效提高，同时经过以上的温和条件操作能够保持产品更好的生物活性和颜色。
[0110]
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
[0111]
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。