核酸和细胞保存剂组合物以及使用方法与流程

本披露涉及组合物、方法和试剂盒以保存血液或其他生物样品的核酸和/或细胞。

背景技术：

1、许多基于核酸的测试用于分析dna和rna的序列、结构或表达的变化，以用于各种诊断目的。事实上，核酸是非侵入性生物医学研究的常见检查目标。然而，在已经采集生物样品后，该样品中的这些核酸，例如rna和dna，无论是细胞核酸/基因组核酸还是无细胞核酸，都开始降解。此外，在采集血液或其他生物样品的几分钟内就开始发生基因诱导和基因转录物的降解，这使得在采集样品时难以准确分析样品的基因表达。并且，一般而言，该血液或其他生物样品越新鲜，该样品的核酸的质量就越好。当要分析受试者血液或生物样品的核酸时，这就带来问题。通常情况下，血液和其他生物样品的采集地点和时间与它们的分析地点和时间不同。因此，血液或其他生物样品采集以后，需要在可以进行分析之前对其进行储存和运输。由于采集后的血液和其他生物样品中的核酸会迅速降解，因此需要一种方法来保存样品中存在的这些核酸，以确保这些样品的核酸在进行分析时具有高质量。

2、在血液或其他生物样品中的无细胞核酸情况下，采集和分析的不同地点和时间会导致额外的问题：细胞裂解。采集的样品中的细胞裂解可能导致无细胞核酸特征受到细胞核酸的污染，从而难以准确分析该血液或生物样品中的这些无细胞核酸。采集血液或其他生物样品后不久就会开始发生细胞裂解。当这些样品需要在进行分析之前储存较长一段时间，这就带来问题。因此，还需要保存血液和其他生物样品，使得保持其核酸的无细胞特征。

3、同样，针对基于细胞(例如生物样品中的循环肿瘤细胞)检测或分析的诊断应用，以完整的形式保存那些细胞非常重要。

技术实现思路

1、在第一方面，本披露涉及一种核酸和细胞保存剂组合物，其包含：

2、a.一种或多种渗透剂，该一种或多种渗透剂以足够产生高渗或等渗溶液的量存在；

3、b.一种或多种酶抑制剂；

4、c.任选地一种或多种代谢抑制剂；

5、d.任选地血浆扩容剂；以及

6、e.聚蔗糖；

7、其中该组合物不包括甘油或甘露糖醇。

8、在第二方面，本披露涉及一种核酸和细胞保存剂组合物，其包含：

9、a.一种或多种渗透剂，该一种或多种渗透剂以足够产生高渗溶液的量存在；

10、b.一种或多种酶抑制剂；

11、c.任选地一种或多种代谢抑制剂；

12、d.任选地血浆扩容剂；以及

13、e.一种或多种细胞表面重塑聚合物。

14、在第三方面，本披露涉及一种核酸和细胞保存剂组合物，其包含：

15、a.任选地一种或多种渗透剂；

16、b.一种或多种酶抑制剂；

17、c.任选地一种或多种代谢抑制剂；

18、d.任选地血浆扩容剂；

19、e.任选地一种或多种细胞表面重塑聚合物；

20、f.任选地一种或多种选自由以下组成的组的试剂：羟乙基淀粉、n-乙烯基吡咯烷酮(nvp)的聚合物、聚蔗糖、蛋白质胶体、非蛋白质合成胶体、乙烯二醇、丙二醇、水溶性聚合物和羧甲基纤维素或其盐；以及

21、g.任选地聚丙二醇(ppg)；

22、其中存在至少一种细胞表面重塑聚合物(e)或试剂(f)，前提是当细胞表面重塑聚合物(e)不存在时，该一种或多种任选的渗透剂如果存在的话以该组合物的按重量计约0.1％至约1％的量存在，该量足够产生等渗或高渗溶液；并且进一步前提是，当试剂(f)不存在时，该一种或多种任选的渗透剂如果存在的话以足够产生等渗溶液的量存在或是该组合物的按重量计的约0.1％至约1％，该量足够产生等渗或高渗溶液。

23、在第四方面，本披露涉及一种本披露的保存剂组合物和生物样品的组合。

24、在第五方面，本披露涉及一种用于保存生物样品中的核酸和/或细胞的方法，该方法包括将本披露的保存剂组合物与该生物样品组合的步骤。

25、在第六方面，本披露涉及一种用于保存生物样品中的核酸和/或细胞的试剂盒，该试剂盒包含：

26、a.本文披露的保存剂组合物；以及

27、b.任选地，所述保存剂组合物的使用说明。

28、在第七方面，本披露涉及一种用于保存生物样品中的核酸和/或细胞的试剂盒，该试剂盒包含：

29、a.任选地含有预定量的任选的抗凝剂的血液或其他生物样品采集管；

30、b.含有预定量的本文披露的保存剂组合物的注射器；以及

31、c.任选地，可附接到所述注射器的针头。

32、在第八方面，本披露涉及一种用于保存生物样品中的核酸和/或细胞的试剂盒，该试剂盒包含：

33、a.任选地含有预定量的抗凝剂的血液或其他生物样品采集管；以及

34、b.含有预定量的本文披露的保存剂的密封安瓿，其中所述安瓿包含可移除的封盖，并且其中所述安瓿被配置为在使用者移除封盖时接收分配装置。

35、在一些实施例中，该生物样品源自体液。在一些实施例中，该体液是血液。

36、在一些实施例中，这些核酸是无细胞(“cf”)dna。在本披露的其他实施例中，这些核酸是细胞(即，基因组的或“g”)dna。

37、在一些实施例中，这些核酸是无细胞(“cf”)rna。在本披露的其他实施例中，这些核酸是细胞(即，基因组的或“g”)rna。

38、在一些实施例中，这些细胞是干细胞、骨细胞、血细胞(例如，红细胞和/或白细胞)、肌肉细胞、脂肪细胞、皮肤细胞、神经细胞、内皮细胞、生殖细胞、胰腺细胞、癌细胞、肿瘤细胞、或循环肿瘤细胞。在一些实施例中，这些细胞是实验室衍生或经修饰的细胞。

技术特征：

1.一种保存剂组合物，该保存剂组合物包含：

2.根据权利要求1所述的保存剂组合物，其中该一种或多种渗透剂以该组合物的按重量计约0.5％至约20％的量存在于该保存剂组合物中。

3.根据权利要求1所述的保存剂组合物，其中该一种或多种渗透剂以足够产生高渗或等渗盐溶液的量存在，包括但不限于含有钠、钾、镁和钙的溶液，乳酸林格氏液，乙酸林格氏液，氨基酸，山梨糖醇，如蔗糖或葡萄糖的糖类，酒石酸，或葡糖二酸或其盐。

4.根据权利要求1所述的保存剂组合物，其中该一种或多种酶抑制剂是乙二胺四乙酸(edta)、羟乙基乙二胺三乙酸(hedta)、二硫苏糖醇(dtt)、乙二醇-双(β-氨基乙基醚)-n,n,n',n'-四乙酸(egta)、柠檬酸、草酸盐、金精三羧酸(ata)、酒石酸、葡糖二酸、或它们中的任何一种的盐。

5.根据权利要求1所述的保存剂组合物，其中酶抑制剂是乙二胺四乙酸(edta)或其盐。

6.根据权利要求1所述的保存剂组合物，其中该一种或多种任选的代谢抑制剂是叠氮化钠、硫汞撒、proclin、或双氯苯双胍已烷。

7.根据权利要求1所述的保存剂组合物，其中该任选的血浆扩容剂是淀粉、蛋白质胶体或非蛋白质胶体。

8.根据权利要求7所述的保存剂组合物，其中该蛋白质胶体是白蛋白、卵清蛋白或明胶。

9.根据权利要求7所述的保存剂组合物，其中该非蛋白质胶体是羟乙基淀粉。

10.根据权利要求1所述的保存剂组合物，其中该聚蔗糖以该组合物的按重量计约10％至约50％的量存在。

11.根据权利要求10所述的保存剂组合物，其中该聚蔗糖以该组合物的按重量计约20％至约30％的量存在。

12.根据权利要求1所述的保存剂组合物，其中该聚蔗糖是聚蔗糖400。

13.一种保存剂组合物，该保存剂组合物包含：

14.根据权利要求13所述的保存剂组合物，其中该一种或多种渗透剂以该组合物的按重量计约1％至约30％的量存在于该保存剂组合物中。

15.根据权利要求13所述的保存剂组合物，其中该一种或多种渗透剂以足够产生高渗溶液的量存在，包括但不限于含有钠、钾、镁和钙的溶液，乳酸林格氏液，乙酸林格氏液，氨基酸，山梨糖醇，甘油，甘露糖醇，蔗糖，酒石酸或其盐，或葡糖二酸或它们中的任何一种的盐。

16.根据权利要求13所述的保存剂组合物，其中该一种或多种酶抑制剂以该组合物的按重量计约1％至约30％的量存在于该保存剂组合物中。

17.根据权利要求13所述的保存剂组合物，其中该一种或多种酶抑制剂是酒石酸、或葡糖二酸。

18.根据权利要求13所述的保存剂组合物，其中该一种或多种任选的代谢抑制剂是硫汞撒、proclin、或双氯苯双胍已烷。

19.根据权利要求13所述的保存剂组合物，其中该任选的血浆扩容剂是淀粉、蛋白质胶体或非蛋白质胶体。

20.根据权利要求13所述的保存剂组合物，其中该一种或多种细胞表面重塑聚合物以该组合物的按重量计约10％至约50％的量存在于该保存剂组合物中。

21.根据权利要求13所述的保存剂组合物，其中该一种或多种细胞表面重塑聚合物选自由以下组成的组：n-乙烯基吡咯烷酮(nvp)和硼酸的共聚物、精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸(rgd)三肽聚合物衍生物、绿豆植物血球凝集素、和具有甘露糖-6-磷酸受体的重复配体的合成糖肽。

22.根据权利要求13所述的保存剂组合物，其中该细胞表面重塑聚合物是泊咯沙姆。

23.根据权利要求22所述的保存剂组合物，其中该泊咯沙姆是泊咯沙姆p188。

24.根据权利要求22所述的保存剂组合物，其中该泊咯沙姆是泊咯沙姆p407。

25.一种保存剂组合物，该保存剂组合物包含：

26.根据权利要求25所述的保存剂组合物，其中该一种或多种任选的渗透剂以该组合物的按重量计约0.1％至约30％的量存在于该保存剂组合物中。

27.根据权利要求26所述的保存剂组合物，其中该一种或多种任选的渗透剂以该组合物的按重量计约0.1％至约1％的量存在于该保存剂组合物中。

28.根据权利要求25所述的保存剂组合物，其中不存在渗透剂。

29.根据权利要求25所述的保存剂组合物，其中该一种或多种任选的渗透剂以足够产生等渗或高渗溶液的量存在，如所列举的，包括但不限于含有钠、钾、镁或钙的溶液，乳酸林格氏液，乙酸林格氏液，氨基酸，山梨糖醇，甘露糖醇，如蔗糖或葡萄糖的糖类，酒石酸，葡糖二酸或它们中的任何一种的盐。

30.根据权利要求25所述的保存剂组合物，其中该一种或多种酶抑制剂以该组合物的按重量计约0.5％至约30％的量存在于该保存剂组合物中。

31.根据权利要求25所述的保存剂组合物，其中该一种或多种酶抑制剂是乙二胺四乙酸(edta)、羟乙基乙二胺三乙酸(hedta)、二硫苏糖醇(dtt)、乙二醇-双(β-氨基乙基醚)-n,n,n',n'-四乙酸(egta)、柠檬酸、草酸盐、金精三羧酸(ata)、酒石酸、或葡糖二酸、或它们中的任何一种的盐。

32.根据权利要求31所述的保存剂组合物，其中该酶抑制剂是乙二胺四乙酸(edta)及其盐。

33.根据权利要求25所述的保存剂组合物，其中该一种或多种任选的代谢抑制剂是叠氮化钠、硫汞撒、proclin、或双氯苯双胍已烷。

34.根据权利要求25所述的保存剂组合物，其中该任选的血浆扩容剂是甘油、淀粉、蛋白质胶体或非蛋白质胶体。

35.根据权利要求34所述的保存剂组合物，其中该蛋白质胶体是白蛋白、卵清蛋白或明胶。

36.根据权利要求34所述的保存剂组合物，其中该非蛋白质胶体是羟乙基淀粉。

37.根据权利要求25所述的保存剂组合物，其中该一种或多种任选的细胞表面重塑聚合物选自由以下组成的组：n-乙烯基吡咯烷酮(nvp)和硼酸的共聚物、精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸(rgd)三肽聚合物衍生物、绿豆植物血球凝集素、和具有甘露糖-6-磷酸受体的重复配体的合成糖肽。

38.根据权利要求25所述的保存剂组合物，其中该任选的细胞表面重塑聚合物是泊咯沙姆。

39.根据权利要求38所述的保存剂组合物，其中该泊咯沙姆是泊咯沙姆p188。

40.根据权利要求38所述的保存剂组合物，其中该泊咯沙姆是泊咯沙姆p407。

41.根据权利要求25所述的保存剂组合物，其中该一种或多种任选的试剂以所述组合物的按重量计约10％至约50％的量存在。

42.根据权利要求25所述的保存剂组合物，其中该任选的试剂是羟乙基淀粉。

43.根据权利要求25所述的保存剂组合物，其中该一种或多种任选的试剂是聚蔗糖。

44.根据权利要求43所述的保存剂组合物，其中该聚蔗糖是聚蔗糖400。

45.根据权利要求25所述的保存剂组合物，其中存在一种或多种细胞表面重塑聚合物并且不存在一种或多种试剂。

46.根据权利要求25所述的保存剂组合物，其中存在一种或多种试剂并且不存在一种或多种细胞表面重塑聚合物。

47.根据权利要求25所述的保存剂组合物，其中存在一种或多种试剂并且也存在一种或多种细胞表面重塑聚合物。

48.根据权利要求25所述的保存剂组合物，其中该任选的聚丙二醇(ppg)以该组合物的按重量计约0.1％至约10％的量存在。

49.一种根据权利要求1-48中任一项所述的保存剂组合物和生物样品的组合。

50.根据权利要求49所述的组合，其中该生物样品是细胞样品或组织样品。

51.根据权利要求49所述的组合，其中该生物样品源自体液。

52.根据权利要求51所述的组合，其中该体液是血液(例如，全血或其部分)。

53.根据权利要求49所述的组合，其中该生物样品包含干细胞、骨细胞、血细胞、肌肉细胞、脂肪细胞、皮肤细胞、神经细胞、内皮细胞、生殖细胞、胰腺细胞、癌细胞、肿瘤细胞、或循环肿瘤细胞。

54.根据权利要求49所述的组合，其中该生物样品包含核酸，该核酸选自rna、dna或其组合。

55.根据权利要求54所述的组合，其中该核酸为无细胞rna、无细胞dna或其组合。

56.根据权利要求54所述的组合，其中该核酸为细胞rna、细胞dna或其组合。

57.根据权利要求49-56中任一项所述的组合，其中该保存剂组合物与该生物样品的比率为约1:10v/v至约1:1v/v。

58.根据权利要求57所述的组合，其中该保存剂组合物与该生物样品的比率为约1:5v/v至约1:4v/v。

59.根据权利要求49-58中任一项所述的组合，其中该组合物能够在环境温度下将生物样品中的这些核酸和/或细胞保存至少2周。

60.一种用于保存生物样品中的核酸和/或细胞的方法，该方法包括将根据权利要求1-48中任一项所述的保存剂组合物与该生物样品组合的步骤。

61.根据权利要求60所述的方法，其中该生物样品是细胞样品或组织样品。

62.根据权利要求60所述的方法，其中该生物样品源自体液。

63.根据权利要求62所述的方法，其中该体液是血液(例如，全血或其部分)。

64.根据权利要求60所述的方法，其中该生物样品包含干细胞、骨细胞、血细胞、肌肉细胞、脂肪细胞、皮肤细胞、神经细胞、内皮细胞、生殖细胞、胰腺细胞、癌细胞、肿瘤细胞、或循环肿瘤细胞。

65.根据权利要求60所述的方法，其中该生物样品包含核酸，该核酸选自rna、dna或其组合。

66.根据权利要求65所述的方法，其中该核酸为无细胞rna、无细胞dna或其组合。

67.根据权利要求65所述的方法，其中该核酸为细胞rna、细胞dna或其组合。

68.根据权利要求60-67中任一项所述的方法，其中该保存剂组合物与该生物样品的比率为约1:10v/v至约1:1v/v。

69.根据权利要求68所述的方法，其中该保存剂组合物与该生物样品的比率为约1:5v/v至约1:4v/v。

70.一种用于保存生物样品中的核酸和/或细胞的试剂盒，该试剂盒包含：

71.根据权利要求70所述的试剂盒，其中该生物样品是细胞样品或组织样品。

72.根据权利要求70所述的试剂盒，其中该生物样品源自体液。

73.根据权利要求70所述的试剂盒，其中该体液是血液(例如，全血或其部分)。

74.根据权利要求70所述的试剂盒，其中该生物样品包含干细胞、骨细胞、血细胞、肌肉细胞、脂肪细胞、皮肤细胞、神经细胞、内皮细胞、生殖细胞、胰腺细胞、癌细胞、肿瘤细胞、循环肿瘤细胞、或其组合。

75.根据权利要求70所述的试剂盒，其中该生物样品包含核酸，该核酸选自rna、dna或其组合。

76.根据权利要求75所述的试剂盒，其中该核酸为无细胞rna、无细胞dna或其组合。

77.根据权利要求75所述的试剂盒，其中该核酸为细胞rna、细胞dna或其组合。

78.一种用于保存生物样品中的核酸和/或细胞的试剂盒，该试剂盒包含：

79.根据权利要求78所述的试剂盒，其中该生物样品是细胞样品或组织样品。

80.根据权利要求78所述的试剂盒，其中该生物样品源自体液。

81.根据权利要求78所述的试剂盒，其中该体液是血液(例如，全血或其部分)。

82.根据权利要求78所述的试剂盒，其中该生物样品包含干细胞、骨细胞、血细胞、肌肉细胞、脂肪细胞、皮肤细胞、神经细胞、内皮细胞、生殖细胞、胰腺细胞、癌细胞、肿瘤细胞、循环肿瘤细胞、或其组合。

83.根据权利要求78所述的试剂盒，其中该生物样品包含核酸，该核酸选自rna、dna或其组合。

84.根据权利要求83所述的试剂盒，其中该核酸为无细胞rna、无细胞dna或其组合。

85.根据权利要求83所述的试剂盒，其中该核酸为细胞rna、细胞dna或其组合。

86.一种用于保存生物样品中的核酸和/或细胞的试剂盒，该试剂盒包含：

87.根据权利要求86所述的试剂盒，其中该生物样品是细胞样品或组织样品。

88.根据权利要求86所述的试剂盒，其中该生物样品源自体液。

89.根据权利要求88所述的试剂盒，其中该体液是血液(例如，全血或其部分)。

90.根据权利要求86所述的试剂盒，其中该生物样品包含干细胞、骨细胞、血细胞、肌肉细胞、脂肪细胞、皮肤细胞、神经细胞、内皮细胞、生殖细胞、胰腺细胞、癌细胞、肿瘤细胞、循环肿瘤细胞、或其组合。

91.根据权利要求86所述的试剂盒，其中该生物样品包含核酸，该核酸选自rna、dna或其组合。

92.根据权利要求91所述的试剂盒，其中该核酸为无细胞rna、无细胞dna或其组合。

93.根据权利要求91所述的试剂盒，其中该核酸为细胞rna、细胞dna或其组合。

技术总结
本披露涉及核酸和细胞保存剂组合物。还描述了保存血液或其他生物样品中的核酸和/或细胞的方法，以及用于保存血液或其他生物样品中的核酸和/或细胞的试剂盒。

技术研发人员：约瑟夫·皮奇里利,克里斯托弗·魏卡特,亚历山大·M·克利巴诺夫,蒂亚·海克斯姆,布朗迪·努涅斯
受保护的技术使用者：SIO2医药产品公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13