制造双官能团化合物的方法、双官能团化合物的超纯形式以及包括所述双官能团化合物的剂型与流程

本技术涉及一种双官能团化合物，其已被证明是靶蛋白泛素化和通过泛素蛋白酶体系统进行降解的有用调节剂。具体地说，本技术涉及一种用于制造双官能团化合物的工艺。本技术进一步涉及双官能团化合物的结晶形式、无定形形式、超纯形式和稳定形式。本技术还涉及包括所述双官能团化合物的口服剂型(例如，片剂)及其制备方法，以及治疗癌症(例如，前列腺癌)的方法，所述包括向需要这种治疗的受试者施用治疗有效量的本发明剂型。关于联邦政府资助研究的声明本发明是在由美国国家癌症研究所授予的授权号1r44ca203199-01下由政府支持进行的。政府对本发明拥有某些权利。

背景技术：

1、大多数小分子药物在紧密且明确限定的口袋中与酶或受体结合。相比之下，众所周知，蛋白质-蛋白质相互作用很难使用小分子进行靶向，因为它们的接触面很大，并且通常涉及浅凹槽或平坦的界面。e3泛素连接酶(其中数百种在人体中是已知的)赋予针对泛素化的底物特异性，并且由于其对某些蛋白质底物的特异性而成为有吸引力的治疗靶标。e3连接酶配体的开发已被证明具有挑战性，部分原因是它们必须破坏蛋白质-蛋白质相互作用。然而，最近的开发已经提供了与这些连接酶结合的特异性配体。例如，自从发现第一个小分子e3连接酶抑制剂努特林(nutlin)以来，已经报道了靶向e3连接酶的另外的化合物，尽管该领域尚未开发。

2、一种具有特殊治疗潜力的e3连接酶是小脑蛋白(cereblon)，其是一种在人体中由crbn基因编码的蛋白质。crbn直系同源物从植物到人类都是高度保守的，这表明了其生理重要性。小脑蛋白与受损的dna结合型蛋白1(ddb1)、cullin-4a(cul4a)和cullin调节剂1(roc1)形成e3泛素连接酶复合物。此复合物使几种其它蛋白质泛素化。通过尚未完全阐明的机制，靶蛋白的小脑蛋白泛素化导致成纤维细胞生长因子8(fgf8)和成纤维细胞生长因子10(fgf10)的水平升高。fgf8进而调节几个发育过程，如肢体和听觉囊泡的形成。最终结果是，此泛素连接酶复合物对于胚胎中的肢体生长是重要的。在不存在小脑蛋白的情况下，ddb1与ddb2形成充当dna损伤结合型蛋白的复合物。

3、已被批准用于治疗许多免疫学适应症的沙利度胺(thalidomide)还已被批准用于治疗某些赘生性疾病，包含多发性骨髓瘤。此外，沙利度胺及其几种类似物目前正在研究用于治疗各种其它类型的癌症。虽然沙利度胺抗肿瘤活性的确切机制仍在仍探明，但已知其抑制血管生成。论述酰亚胺生物学的近期文献包含lu等人《科学(science)》343,305(2014)和等人《科学》343,301(2014)。

4、值得注意的是，已知沙利度胺及其类似物(例如泊马度胺和来那度胺)结合小脑蛋白，并改变复合物的特异性，以诱导ikaros(ikzf1)和aiolos(ikzf3)——多发性骨髓瘤生长所必需的转录因子——的泛素化和降解。事实上，小脑蛋白的较高表达与酰亚胺药物治疗多发性骨髓瘤的功效增加提高有关。

5、雄激素受体(ar)属于核激素受体家族，其被如睾酮和二氢睾酮等雄激素活化(《药理学评论(pharmacol.rev.)》2006,58(4),782-97；《维生素和激素(vitam.horm.)》1999,55:309-52.)。缺乏雄激素时，ar被细胞溶质中的热休克蛋白90(hsp90)结合。当雄激素结合ar时，其构形发生变化，从hsp90释放ar并且暴露核定位信号(nls)。nls使得ar能够易位到细胞核中，其中ar充当转录因子以促进负责雄性性特征的基因表达(《内分泌学评论(endocr.rev.)》1987,8(1):1-28；《分子内分泌学(mol.endocrinol.)》2002,16(10),2181-7)。ar缺乏导致雄激素不敏感综合征，以前称为睾丸女性化症。

6、虽然ar负责雄性性特征的发育，但它也是某些癌症(包含前列腺癌)中有充分记录的致癌基因(《内分泌学评论》2004,25(2),276-308)。ar活性的常用测量靶标是分泌型前列腺特异性抗原(psa)蛋白。前列腺癌的当前治疗方案涉及利用两种方法之一抑制雄激素-ar轴。第一种方法依赖于雄激素的减少，而第二种旨在抑制ar功能(《自然评论：药物发现(nat.rev.drug discovery)》,2013,12,823–824)。尽管开发了有效的靶向疗法，但大多数患者产生耐药性并且疾病进展。治疗前列腺癌的替代方法涉及消除ar蛋白。由于ar是多种形式的前列腺癌中肿瘤发生的关键驱动因素，因此消除它可能会产生治疗上有益的响应。

7、本发明制备和使用的双官能团化合物是化合物a，其分子式为c41h43clfn9o6并且具有以下结构式：

8、

9、化合物a作为蛋白降解剂正在开发中，其靶向ar以对患有转移性、去势抵抗性前列腺癌(mcrpc)的男性治疗进行潜在治疗。

技术实现思路

1、本公开提供了n-[(1r,4r)-4-(3-氯-4-氰基苯氧基)环己基]-6-[4-({4-[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基]哌嗪-1-基}甲基)哌啶-1-基]哒嗪-3-甲酰胺的超纯形式、结晶形式、无定形形式和调配物，其在本文中被称为化合物a，以及用于制造化合物a的方法：

2、

3、在一方面，本技术涉及一种在有需要的受试者中治疗前列腺癌的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的化合物a化合物。在一个实施例中，所述方法进一步包括施用另外的抗癌剂。

4、在一方面，本公开提供了一种化合物a的结晶形式，其具有包括7.6°±0.2°2θ、11.5°±0.2°2θ和17.6°±0.2°2θ处的峰的粉末x射线衍射图，其中所述粉末x射线衍射图是使用cu kα辐射在的x射线波长处获得的。这种结晶形式被指定为“形式2”。

5、另一方面，本公开提供了一种化合物a的结晶形式，其具有包括11.0°±0.2°2θ、16.1°±0.2°2θ和17.9°±0.2°2θ处的峰的粉末x射线衍射图，其中所述粉末x射线衍射图是使用cu kα辐射在的x射线波长处获得的。这种结晶形式被指定为“晶型4”。

6、另一方面，本公开提供了用于制造化合物a的工艺，其中所述工艺包括使n-((1r,4r)-4-(3-氯-4-氰基苯氧基)环己基)-6-(4-甲酰基哌啶-1-基)哒嗪-3-甲酰胺(中间体3)与2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮盐酸盐(中间体5)和还原剂发生还原胺化，以提供化合物a：

7、

8、另一方面，本公开提供了一种可用于合成化合物a的中间体，所述中间体是6-氯-n-((1r,4r)-4-(3-氯-4-氰基苯氧基)环己基)哒嗪-3-甲酰胺(中间体4)，

9、

10、另一方面，本公开提供了一种化合物a的超纯形式，具纯度大于约95wt％。

11、另一方面，本公开提供了用于制造化合物a的无定形形式的工艺，其中所述工艺包括以下步骤：

12、(1)将结晶化合物a溶解在溶剂中，得到化合物a的溶液；

13、(2)将来自步骤(1)的所述化合物a的溶液引入喷雾干燥机中，以产生化合物a的无定形形式；以及

14、(3)干燥所述化合物a的无定形形式以除去残留溶剂。

15、制备化合物a的无定形形式的替代方法可以包含冻干、热熔挤出、研磨或高剪切混合。

16、另一方面，本公开提供了一种口服剂型，其包括一种或多种药学上可接受的赋形剂和化合物a，其中所述口服剂型选自由片剂、小袋或胶囊组成的组。

17、在优选的方面，所述口服剂型包括一种或多种药学上可接受的赋形剂和化合物a的超纯形式。

18、另一方面，本公开提供了制造片剂化合物a的工艺，所述工艺包括以下步骤：

19、(1)将一种形式的化合物a与至少一种药学上可接受的赋形剂共混以产生粉末；

20、(2)将来自步骤(1)的所述粉末脱块，加入至少一种药学上可接受的赋形剂，并共混以产生第一共混物；

21、(3)将来自步骤(2)的所述共混物造粒，并使所得粉末通过筛网以产生多个颗粒；

22、(4)向来自步骤(3)的所述至少一个颗粒中加入至少一种药用赋形剂，并共混以产生第二共混物；以及

23、(5)将来自步骤(4)的所述第二共混物压缩成一个或多个片剂。

24、另一方面，本公开提供了在受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向需要这种治疗的受试者施用本公开的一种或多种单位剂型(例如，片剂)。在一个实施例中，所述方法进一步包括施用另外的抗癌剂。

25、前述通用应用领域仅以实例的方式给出并且不旨在限制本公开或所附权利要求的范围。根据本发明的权利要求、说明书和实例，本领域的普通技术人员将理解与本公开的组合物、方法和工艺相关的另外的目的和优点。例如，可以以多种组合利用本发明的各个方面和实施例，所有这些组合都由本说明书明确地加以考虑。这些另外的优点、目的和实施例明确地包含在本公开的范围内。通过引用并入用于阐明本发明的背景并且在特定情况下提供有关实践的另外的细节的本文所使用的出版物和其它材料。

26、在适用或未特别声明的情况下，考虑本文描述的任何一个实施例都能够与任何其它一个或多个实施例组合，即使实施例在本公开的不同方面下进行描述。