包含修饰的IL-2多肽的多肽及其用途的制作方法

本发明涉及具有降低的对cd25和cd122的亲和力的修饰的il-2以及与靶向部分融合的这种修饰的il-2。本发明还涉及使用修饰的il-2和包含修饰的il-2的多肽的方法，包括但不限于治疗癌症的方法。

背景技术：

1、il-2是一种有力的细胞因子，可通过由cd25、cd122和cd132构成的异三聚体il-2受体(il-2r)或仅由cd122和cd132构成的异二聚体il-2受体刺激t和nk细胞增殖。两种形式的il-2r都是t细胞存活、增殖和整体激活状态的有力介导物。il-2通常由t细胞和nk细胞在激活后产生，并在局部微环境中以顺式和反式介导信号传导。il-2r信号传导可以诱导幼稚t细胞分化为效应t细胞和记忆t细胞，并且还可以刺激抑制性调节性t细胞。尽管三聚体形式的il-2r对il-2的亲和力高于二聚体形式，但两者都具有相当高的亲和力并导致受体介导的快速内化和降解，从而导致极短的半衰期。重组人il-2(rhil-2，阿地白介素(proleukin))在临床上用于治疗肾细胞癌和恶性黑色素瘤；然而，它与严重的毒性相关。由于il-2信号传导对表达高亲和力il-2r的内皮细胞的效应，血管渗漏综合征是接受阿地白介素治疗的癌症患者的主要毒性问题。

2、t细胞通过其tcr与呈递结合了互补肽的mhc的相邻细胞的连接而被激活，从而导致tcr复合物聚集并通过nfat传导信号。通过cd28对t细胞的共刺激由cd80和cd86驱动，从而增强t细胞激活。在初始激活后，t细胞上调多种蛋白质，包括细胞因子受体以及许多用于调节t细胞应答的共刺激和检查点受体。

3、最近报道了针对检查点受体(如ctla-4、pd-1和pd-l1)的拮抗剂抗体具有持久的抗肿瘤临床反应。然而，即使在最具反应性的适应证中，反应率也仅限于约30％的患者。因此，需要改进的t细胞调节疗法。

技术实现思路

1、本文提供了包含修饰的il-2的多肽，所述修饰的il-2在至少一个氨基酸位置处包含至少一个取代。在一些实施方案中，相对于野生型il-2，所述修饰的il-2具有降低的对cd25、cd122和/或il-2r的结合亲和力。在一些实施方案中，相对于野生型il-2，所述修饰的il-2具有降低的对静息或激活t细胞的活性。

2、在本文中提供以下实施方案：

3、实施方案1.一种包含修饰的il-2的多肽，其中所述修饰的il-2包含d84y取代。

4、实施方案2.根据实施方案1所述的多肽，其中相比于野生型il-2，所述修饰的il-2具有降低的对cd122的亲和力。

5、实施方案3.根据实施方案1-2中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在选自h16、l19、m23、n88和e95的至少一个氨基酸位置处包含至少一个取代。

6、实施方案4.根据实施方案3所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置h16处包含取代。

7、实施方案5.根据实施方案4所述的多肽，其中所述取代选自h16a、h16n、h16v和h16t。

8、实施方案6.根据实施方案1-5中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置l19处包含取代。

9、实施方案7.根据实施方案6所述的多肽，其中所述取代选自l19a、l19p、l19q、l19y、l19n、l19s、l19t、l19v。

10、实施方案8.根据实施方案1-7中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置m23处包含取代。

11、实施方案9.根据实施方案8所述的多肽，其中所述取代选自m23a、m23g、m23s、m23t、m23v、m23d、m23e、m23i、m23k、m23l、m23n、m23q、m23r和m23y。

12、实施方案10.根据实施方案1-9中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置n88处包含取代。

13、实施方案11.根据实施方案10所述的多肽，其中所述取代选自n88t、n88a和n88s。

14、实施方案12.根据实施方案1-11中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置e95处包含取代。

15、实施方案13.根据实施方案12所述的多肽，其中所述取代选自e95q、e95g、e95t、e95v、e95p、e95h、e95n和e95y。

16、实施方案14.根据实施方案1-13中任一项所述的多肽，其中相比于野生型il-2，所述修饰的il-2包含至少一个降低对cd132的亲和力的取代。

17、实施方案15.根据实施方案1-14中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在选自q22、r120、t123、q126、s127、i129和s130的至少一个氨基酸位置处包含至少一个取代。

18、实施方案16.根据实施方案15所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置q22处包含取代。

19、实施方案17.根据实施方案16所述的多肽，其中所述取代选自q22a、q22d、q22g、q22h、q22k、q22n、q22r、q22s、q22t、q22v和q22y。

20、实施方案18.根据实施方案15-17中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置r120处包含取代。

21、实施方案19.根据实施方案18所述的多肽，其中所述取代选自r120a、r120d、r120e、r120f、r120g、r120h、r120k、r120n、r120q、r120s、r120v和r120y。

22、实施方案20.根据实施方案15-19中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置t123处包含取代。

23、实施方案21.根据实施方案20所述的多肽，其中所述取代选自t123d、t123e、t123h、t123k、t123n、t123q和t123r。

24、实施方案22.根据实施方案15-21中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置q126处包含取代。

25、实施方案23.根据实施方案22所述的多肽，其中所述取代选自q126n、q126a和q126y。

26、实施方案24.根据实施方案15-23中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置s127处包含取代。

27、实施方案25.根据实施方案24所述的多肽，其中所述取代选自s127d、s127e、s127h、s127k、s127n、s127p和s127r。

28、实施方案26.根据实施方案15-25中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置i129处包含取代。

29、实施方案27.根据实施方案26所述的多肽，其中所述取代选自i129a、i129h、i129r和i129s。

30、实施方案28.根据实施方案15-27中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置s130处包含取代。

31、实施方案29.根据实施方案28所述的多肽，其中所述取代选自s130e、s130k、s130n、s130p、s130q和s130r。

32、实施方案30.一种包含修饰的il-2的多肽，其中所述修饰的il-2在选自q22、r120、t123、s127和s130的至少一个氨基酸位置处包含至少一个取代。

33、实施方案31.根据实施方案30所述的多肽，其中相比于野生型il-2，所述修饰的il-2具有降低的对cd132的亲和力。

34、实施方案32.根据实施方案30-31中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置q22处包含取代。

35、实施方案33.根据实施方案32所述的多肽，其中所述取代选自q22a、q22d、q22e、q22g、q22h、q22k、q22n、q22p、q22r、q22s、q22t、q22v和q22y。

36、实施方案34.根据实施方案30-33中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置r120处包含取代。

37、实施方案35.根据实施方案34所述的多肽，其中所述取代选自r120a、r120d、r120e、r120f、r120g、r120h、r120k、r120n、r120p、r120q、r120s、r120v和r120y。

38、实施方案36.根据实施方案30-35所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置t123处包含取代。

39、实施方案37.根据实施方案36所述的多肽，其中所述取代选自t123d、t123e、t123h、t123k、t123n、t123q和t123r。

40、实施方案38.根据实施方案30-37中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置s127处包含取代。

41、实施方案39.根据实施方案38所述的多肽，其中所述取代选自s127d、s127e、s127h、s127k、s127n、s127p、s127q和s127r。

42、实施方案40.根据实施方案30-39中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置s130处包含取代。

43、实施方案41.根据实施方案40所述的多肽，其中所述取代选自s130d、s130e、s130h、s130k、s130n、s130p、s130q和s130r。

44、实施方案42.根据实施方案30-41中任一项所述的多肽，其中相比于野生型il-2，所述修饰的il-2包含至少一个降低对cd122的亲和力的取代。

45、实施方案43.根据实施方案42所述的多肽，其中所述修饰的il-2在选自h16、l19、m23、d84、n88和e95的至少一个氨基酸位置处包含至少一个取代。

46、实施方案44.根据实施方案43所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置h16处包含取代。

47、实施方案45.根据实施方案44所述的多肽，其中所述取代选自h16a、h16t、h16v和h16n。

48、实施方案46.根据实施方案43-45中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置l19处包含取代。

49、实施方案47.根据实施方案46所述的多肽，其中所述取代选自l19a、l19p、l19q、l19y、l19n、l19s、l19t、l19v。

50、实施方案48.根据实施方案43-47中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置m23处包含取代。

51、实施方案49.根据实施方案48所述的多肽，其中所述取代选自m23a、m23g、m23s、m23t、m23v、m23d、m23e、m23i、m23k、m23l、m23n、m23q、m23r和m23y。

52、实施方案50.根据实施方案43-49中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置d84处包含取代。

53、实施方案51.根据实施方案50所述的多肽，其中所述取代选自d84s、d84g、d84a、d84t、d84v、d84y和d84n。

54、实施方案52.根据实施方案43-51中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置n88处包含取代。

55、实施方案53.根据实施方案52所述的多肽，其中所述取代选自n88t、n88a和n88s。

56、实施方案54.根据实施方案43-53中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置e95处包含取代。

57、实施方案55.根据实施方案54所述的多肽，其中所述取代选自e95q、e95g、e95t、e95v、e95p、e95h、e95n和e95y。

58、实施方案56.根据实施方案1-55中任一项所述的多肽，其中相比于野生型il-2，所述修饰的il-2包含至少一个降低对cd25的亲和力的取代。

59、实施方案57.根据实施方案1-56中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在至少一个选自k43、y45、e61、i114、p65、f42、r38和l72的氨基酸位置处包含至少一个取代，和/或其中所述修饰的il-2包含氨基酸f42的缺失。

60、实施方案58.根据实施方案57所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸f42处包含取代或包含氨基酸f42的缺失。

61、实施方案59.根据实施方案58所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置f42处包含选自f42k、f42a、f42r、f42g、f42s和f42t的取代。

62、实施方案60.根据实施方案58所述的多肽，其中所述修饰的il-2包含氨基酸f42的缺失。

63、实施方案61.根据实施方案57-60中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置k43处包含取代。

64、实施方案62.根据实施方案61所述的多肽，其中所述取代选自k43e和k43d。

65、实施方案63.根据实施方案57-62中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置y45处包含取代。

66、实施方案64.根据实施方案63所述的多肽，其中所述取代选自y45r和y45k。

67、实施方案65.根据实施方案57-64中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置e61处包含取代。

68、实施方案66.根据实施方案65所述的多肽，其中所述取代选自e61r、e61g、e61h、e61n、e61p、e61s、e61t、e61y、e61a、e61q和e61k。

69、实施方案67.根据实施方案57-66中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置i114处包含取代。

70、实施方案68.根据实施方案67所述的多肽，其中所述取代是i114f、i114y或i114w。

71、实施方案69.根据实施方案57-68中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置p65处包含取代。

72、实施方案70.根据实施方案69所述的多肽，其中所述取代选自p65r、p65e、p65k、p65h、p65y、p65q、p65d和p65n。

73、实施方案71.根据实施方案57-70中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置r38处包含取代。

74、实施方案72.根据实施方案71所述的多肽，其中所述在r38处的取代选自r38a和r38g。

75、实施方案73.根据实施方案57-72中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置l72处包含取代。

76、实施方案74.根据实施方案73所述的多肽，其中所述在l72处的取代是l72g。

77、实施方案75.根据实施方案1-74中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2包含取代q22a或取代r120a、或取代q22a和r120a。

78、实施方案76.根据实施方案1-75中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2包含取代p65r和r38a或取代p65r和e61r。

79、实施方案77.根据实施方案1-76中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2包含至少一个选自h16a、l19a、l19n、m23a、d84s或d84y、n88s和e95q的取代。

80、实施方案78.根据实施方案1-77中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在氨基酸位置p65、h16和d84处包含取代。

81、实施方案79.根据实施方案78所述的多肽，其中所述修饰的il-2包含取代p65r、h16a和d84s或取代p65r、h16a和d84y。

82、实施方案80.根据实施方案1-79中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2在至少一个选自t3和c125的氨基酸位置处包含至少一个取代和/或包含il-2的前五个氨基酸的缺失。

83、实施方案81.根据实施方案80所述的多肽，其中所述修饰的il-2包含至少一个选自t3a、c125a、c125v和c125s的取代。

84、实施方案82.根据实施方案81所述的多肽，其中所述修饰的il-2包含t3a和c125s取代或t3a和c125v取代。

85、实施方案83.根据实施方案81所述的多肽，其中所述修饰的il-2包含il-2的前五个氨基酸的缺失和c125s取代或c125v取代。

86、实施方案84.根据前述实施方案中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2包含选自以下的取代组：[t3a、h16a、e61r、p65r、d84y、c125s]、[t3a、h16a、m23t、e61r、p65r、d84y、e95q、c125s]、[t3a、h16a、l19n、e61r、p65r、d84y、c125s]、[t3a、h16a、l19n、m23t、e61r、p65r、d84y、e95q、c125s]、[t3a、h16a、e61r、p65r、d84y、c125s、s127d]、[t3a、h16a、m23t、e61r、p65r、d84y、e95q、c125s、s127d]、[t3a、h16a、l19n、e61r、p65r、d84y、c125s、s127d]以及[t3a、h16a、l19n、m23t、e61r、p65r、d84y、e95q、c125s、s127d]。

87、实施方案85.一种包含修饰的il-2的修饰的多肽，其中所述修饰的il-2包含选自以下的取代组：[t3a、h16a、e61r、p65r、d84y、c125s]、[t3a、h16a、m23t、e61r、p65r、d84y、e95q、c125s]、[t3a、h16a、l19n、e61r、p65r、d84y、c125s]、[t3a、h16a、l19n、m23t、e61r、p65r、d84y、e95q、c125s]、[t3a、h16a、e61r、p65r、d84y、c125s、s127d]、[t3a、h16a、m23t、e61r、p65r、d84y、e95q、c125s、s127d]、[t3a、h16a、l19n、e61r、p65r、d84y、c125s、s127d]以及[t3a、h16a、l19n、m23t、e61r、p65r、d84y、e95q、c125s、s127d]。

88、实施方案86.根据前述实施方案中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2包含所指示的取代，并且不包含任何另外的取代。

89、实施方案87.根据前述实施方案中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2是修饰的人il-2。

90、实施方案88.根据前述实施方案中任一项所述的多肽，其中所述氨基酸位置对应于seq id no:1中的氨基酸位置。

91、实施方案89.根据前述实施方案中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2包含与seq id no:84至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同并且包含选自seq id no:105-290的氨基酸序列的对应取代的氨基酸序列。

92、实施方案90.根据前述实施方案中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2包含与选自seq id no:270-277的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列并且包含取代d84y。

93、实施方案91.根据前述实施方案中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2包含选自seq id no:105-290的氨基酸序列。

94、实施方案92.根据前述实施方案中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2包含选自seq id no:270-277的氨基酸序列。

95、实施方案93.根据前述实施方案中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含fc区。

96、实施方案94.根据实施方案93所述的多肽，其中所述修饰的il-2与所述fc区的n端或c端融合。

97、实施方案95.根据实施方案93或实施方案94所述的多肽，其中所述fc区在kabat氨基酸位置t366处包含取代。

98、实施方案96.根据实施方案95所述的多肽，其中所述fc区包含t366w取代。

99、实施方案97.根据实施方案93或实施方案94所述的多肽，其中所述fc区在选自t366、l368和y407的至少一个kabat氨基酸位置处包含至少一个取代。

100、实施方案98.根据实施方案108所述的多肽，其中所述fc区包含t366s、l368a和y407v突变。

101、实施方案99.根据实施方案93-98中任一项所述的多肽，其中所述fc区在选自s354和y349的kabat位置处包含取代。

102、实施方案100.根据实施方案99所述的多肽，其中所述fc区包含s354c或y349c取代。

103、实施方案101.根据实施方案93-100中任一项所述的多肽，其中所述fc区在kabat氨基酸位置h435处包含取代。

104、实施方案102.根据实施方案101所述的多肽，其中所述fc区包含选自h435r和h435k的取代。

105、实施方案103.根据实施方案93-102中任一项所述的多肽，其中所述fc区在选自m252和m428的至少一个kabat氨基酸位置处包含至少一个取代。

106、实施方案104.根据实施方案103所述的多肽，其中所述fc区包含m252y和m428v取代。

107、实施方案105.根据实施方案93-104中任一项所述的多肽，其中所述fc区包含kabat氨基酸e233、l234和l235的缺失。

108、实施方案106.根据实施方案93-104中任一项所述的多肽，其中所述fc区在选自l234、l235和p329的至少一个氨基酸位置处包含至少一个取代。

109、实施方案107.根据实施方案106所述的多肽，其中所述fc区包含l234a、l235a和p329g取代。

110、实施方案108.根据实施方案93-107中任一项所述的多肽，其中所述fc区包含与选自seq id no:47-83、292和293的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。

111、实施方案109.根据实施方案93-108中任一项所述的多肽，其中所述fc区是重链恒定区的一部分。

112、实施方案110.根据实施方案109所述的多肽，其中所述重链恒定区是igg恒定区。

113、实施方案111.根据实施方案110所述的多肽，其中所述重链恒定区是igg1、igg2、igg3或igg4恒定区。

114、实施方案112.根据实施方案93-111中任一项所述的多肽，其中所述修饰的il-2与所述fc区或重链恒定区的c端融合。

115、实施方案113.根据实施方案112所述的多肽，其中所述修饰的il-2经由包含1-20个氨基酸的接头与所述fc区或重链恒定区的c端融合。

116、实施方案114.根据实施方案113所述的多肽，其中所述接头包含甘氨酸氨基酸。

117、实施方案115.根据实施方案114所述的多肽，其中所述接头包含甘氨酸和丝氨酸氨基酸。

118、实施方案116.根据实施方案113-115中任一项所述的多肽，其中所述接头中的大部分或全部氨基酸是甘氨酸和丝氨酸。

119、实施方案117.根据实施方案93-116中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含选自seq id no:105-290的氨基酸序列以及选自seq id no:48、64、292和293的氨基酸序列。

120、实施方案118.根据前述实施方案中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含至少一个抗原结合结构域。

121、实施方案119.根据实施方案118所述的多肽，其中所述多肽包含两个、三个或四个抗原结合结构域。

122、实施方案120.根据实施方案118或实施方案119所述的多肽，其中至少一个抗原结合结构域特异性结合t细胞抗原或自然杀伤细胞抗原。

123、实施方案121.根据实施方案118-120中任一项所述的多肽，其中至少一个抗原结合结构域特异性结合cd4+t细胞抗原或cd8+t细胞抗原。

124、实施方案122.根据实施方案121所述的多肽，其中所述至少一个抗原结合结构域特异性结合激活的cd4+t细胞或激活的cd8+t细胞上的抗原。

125、实施方案123.根据实施方案118-122中任一项所述的多肽，其中至少一个抗原结合结构域是激动剂。

126、实施方案124.根据实施方案118-122中任一项所述的多肽，其中所述抗原结合结构域是拮抗剂。

127、实施方案125.根据实施方案118-124中任一项所述的多肽，其中至少一个抗原结合结构域特异性结合pd-1、ctla-4、lag3、tim3、4-1bb、ox40、gitr、cd8a、cd8b、cd4、nkp30、nkg2a、tigit、tgfβr1、tgfβr2、fas、nkg2d、nkp46、pd-l1、cd107a、icos、tnfr2、cd16a或γδtcr。

128、实施方案126.根据实施方案118-124中任一项所述的多肽，其中至少一个抗原结合结构域特异性结合pd-1。

129、实施方案127.根据实施方案118-126中任一项所述的多肽，其中至少一个抗原结合结构域是人或人源化抗原结合结构域。

130、实施方案128.根据实施方案127所述的多肽，其中每个抗原结合结构域独立地是人或人源化抗原结合结构域。

131、实施方案129.根据实施方案118-128中任一项所述的多肽，其中至少一个抗原结合结构域包含vhh结构域。

132、实施方案130.根据实施方案129所述的多肽，其中每个抗原结合结构域包含vhh结构域。

133、实施方案131.根据实施方案118-128中任一项所述的多肽，其中至少一个抗原结合结构域包含vh结构域和vl结构域。

134、实施方案132.根据实施方案131所述的多肽，其中至少一个抗原结合结构域包含选自以下的抗体的vh结构域和vl结构域：派姆单抗、纳武单抗、amp-514、tsr-042、sti-a1110、伊匹单抗、曲美目单抗、乌瑞鲁单抗、乌托鲁单抗、阿特珠单抗和度伐鲁单抗。

135、实施方案133.根据实施方案131或132所述的多肽，其中所述至少一个抗原结合结构域包含单链fv(scfv)。

136、实施方案134.根据实施方案131或132所述的多肽，其中所述多肽包含重链恒定区，其中所述vh结构域与所述重链恒定区融合，并且其中所述vl结构域与所述vh结构域缔合。

137、实施方案135.根据实施方案134所述的多肽，其中所述vl结构域与轻链恒定区融合。

138、实施方案136.根据实施方案135所述的多肽，其中所述轻链恒定区选自κ和λ。

139、实施方案137.根据实施方案118-136中任一项所述的多肽，其中每个所述抗原结合结构域是相同的。

140、实施方案138.根据实施方案118-137所述的多肽，其中每个所述抗原结合结构域特异性结合相同的抗原。

141、实施方案139.根据实施方案118-136所述的多肽，其中至少一个所述抗原结合结构域与至少一个其他抗原结合结构域特异性结合不同的抗原。

142、实施方案140.根据实施方案139所述的多肽，其中至少一个抗原结合结构域特异性结合pd-1，并且至少一个其他抗原结合结构域特异性结合除pd-1之外的t细胞抗原或自然杀伤细胞抗原。

143、实施方案141.根据实施方案118-140中任一项所述的多肽，其中至少一个抗原结合结构域结合pd-1、ctla-4、lag3、tim3、4-1bb、ox40、gitr、cd8a、cd8b、cd4、nkp30、nkg2a、tigit、tgfβr1、tgfβr2、fas、nkg2d、nkp46、pd-l1、cd107a、icos、tnfr2、cd16a、dnam1或γδtcr(vγ9、vγ2、vδ1)。

144、实施方案142.根据实施方案93-141中任一项所述的多肽，其中所述多肽在生理条件下形成同二聚体。

145、实施方案143.根据前述实施方案中任一项所述的多肽，其中与人野生型il-2对于il-2r的亲和力相比，所述修饰的il-2以低至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、至少10倍、至少20倍、至少30倍、至少50倍或至少100倍的亲和力结合人il-2r。

146、实施方案144.一种包含第一多肽和第二多肽的复合物，其中所述第一多肽是根据前述实施方案中任一项所述的多肽。

147、实施方案145.根据实施方案144所述的复合物，其中所述第一多肽包含第一fc区并且所述第二多肽包含第二fc区。

148、实施方案146.根据实施方案144或实施方案145所述的复合物，其中每个fc区是选自人igg1、igg2、igg3、igg4的同种型的。

149、实施方案147.根据实施方案146所述的复合物，其中每个fc区是人igg1。

150、实施方案148.根据实施方案144-147中任一项所述的复合物，其中每个fc区包含氨基酸e233、l234和l235的缺失。

151、实施方案149.根据实施方案144-148中任一项所述的复合物，其中每个fc区包含h435r或h435k突变。

152、实施方案150.根据实施方案155-160中任一项所述的复合物，其中所述fc区包含突变m252y和m428l或突变m252y和m428v。

153、实施方案151.根据实施方案144-150中任一项所述的复合物，其中所述第一fc区或所述第二fc区包含t366w突变，并且另一个fc区包含突变t366s、l368a和y407v。

154、实施方案152.根据实施方案151所述的复合物，其中所述第一fc区或所述第二fc区包含s354c突变。

155、实施方案153.根据实施方案144-152中任一项所述的复合物，其中每个fc区独立地包含与选自seq id no:47-83、292和293的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。

156、实施方案154.根据实施方案144-153中任一项所述的复合物，其中所述第二多肽不包含修饰的il-2。

157、实施方案155.根据实施方案144-154中任一项所述的复合物，其中所述第一多肽包含至少一个抗原结合结构域。

158、实施方案156.根据实施方案144-155中任一项所述的复合物，其中所述第二多肽包含至少一个抗原结合结构域。

159、实施方案157.根据实施方案144-156中任一项所述的复合物，其中所述第一多肽包含第一抗原结合结构域、fc区和修饰的il-2。

160、实施方案158.根据实施方案157所述的复合物，其中所述第一抗原结合结构域与所述fc区的n端融合，并且所述修饰的il-2与所述fc区的c端融合。

161、实施方案159.根据实施方案157或实施方案158所述的复合物，其中所述第二多肽包含第二抗原结合结构域和fc区。

162、实施方案160.根据实施方案159所述的复合物，其中所述第一抗原结合结构域和所述第二抗原结合结构域是相同或不同的。

163、实施方案161.根据实施方案160所述的复合物，其中：

164、a.所述第一抗原结合结构域和所述第二抗原结合结构域均结合pd-1；

165、b.所述第一抗原结合结构域结合pd-1，并且所述第二抗原结合结构域结合lag3；

166、c.所述第一抗原结合结构域结合pd-1，并且所述第二抗原结合结构域结合ctla-4；

167、d.所述第一抗原结合结构域结合pd-1，并且所述第二抗原结合结构域结合4-1bb；

168、e.所述第一抗原结合结构域结合pd-1，并且所述第二抗原结合结构域结合ox40；

169、f.所述第一抗原结合结构域结合pd-1，并且所述第二抗原结合结构域结合gitr；

170、g.所述第一抗原结合结构域结合pd-1，并且所述第二抗原结合结构域结合cd8a；

171、h.所述第一抗原结合结构域结合pd-1，并且所述第二抗原结合结构域结合cd8b；

172、i.所述第一抗原结合结构域结合pd-1，并且所述第二抗原结合结构域结合cd4；

173、j.所述第一抗原结合结构域结合pd-1，并且所述第二抗原结合结构域结合nkp30；

174、k.所述第一抗原结合结构域结合pd-1，并且所述第二抗原结合结构域结合nkg2a；

175、l.所述第一抗原结合结构域结合pd-1，并且所述第二抗原结合结构域结合tigit；

176、m.所述第一抗原结合结构域结合pd-1，并且所述第二抗原结合结构域结合nkg2d；

177、n.所述第一抗原结合结构域结合pd-1，并且所述第二抗原结合结构域结合tgfbr2；o.所述第一抗原结合结构域结合pd-1，并且所述第二抗原结合结构域结合fas；

178、p.所述第一抗原结合结构域结合pd-1，并且所述第二抗原结合结构域结合cd107a；

179、q.所述第一抗原结合结构域结合pd-1，并且所述第二抗原结合结构域结合nkp46；

180、r.所述第一抗原结合结构域结合cd8a，并且所述第二抗原结合结构域结合tgfrβr2；s.所述第一抗原结合结构域结合cd8a，并且所述第二抗原结合结构域结合fas；

181、t.所述第一抗原结合结构域结合nkg2d，并且所述第二抗原结合结构域结合tgfrβr2；

182、u.所述第一抗原结合结构域结合nkg2d，并且所述第二抗原结合结构域结合fas；

183、v.所述第一抗原结合结构域结合nkg2a，并且所述第二抗原结合结构域结合tgfrβr2；

184、w.所述第一抗原结合结构域结合nkg2a，并且所述第二抗原结合结构域结合fas；

185、x.所述第一抗原结合结构域结合nkp46，并且所述第二抗原结合结构域结合tgfrβr2；y.所述第一抗原结合结构域结合nkp46，并且所述第二抗原结合结构域结合fas；

186、z.所述第一抗原结合结构域结合ctla-4，并且所述第二抗原结合结构域结合lag3；aa.所述第一抗原结合结构域结合ctla-4，并且所述第二抗原结合结构域结合tim3；

187、bb.所述第一抗原结合结构域结合ctla-4，并且所述第二抗原结合结构域结合ox40；cc.所述第一抗原结合结构域结合ctla-4，并且所述第二抗原结合结构域结合gitr；dd.所述第一抗原结合结构域结合ctla-4，并且所述第二抗原结合结构域结合cd107a；ee.所述第一抗原结合结构域结合ctla-4，并且所述第二抗原结合结构域结合nkp46；ff.所述第一抗原结合结构域结合icos，并且所述第二抗原结合结构域结合tnfr2；

188、gg.所述第一抗原结合结构域结合γδtcr，并且所述第二抗原结合结构域结合nkg2d；hh.所述第一抗原结合结构域结合γδtcr，并且所述第二抗原结合结构域结合dnam1；ii.所述第一抗原结合结构域结合γδtcr，并且所述第二抗原结合结构域结合tigit；

189、jj.所述第一抗原结合结构域结合γδtcr，并且所述第二抗原结合结构域结合4-1bb；

190、kk.所述第一抗原结合结构域结合γδtcr，并且所述第二抗原结合结构域结合fas；

191、ll.所述第一抗原结合结构域结合γδtcr，并且所述第二抗原结合结构域结合nkg2a；或

192、mm.所述第一抗原结合结构域结合γδtcr，并且所述第二抗原结合结构域结合cd16a。

193、实施方案162.根据实施方案144-161中任一项所述的复合物，其中与人野生型il-2对于il-2r的亲和力相比，所述修饰的il-2以低至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、至少10倍、至少20倍、至少30倍、至少50倍或至少100倍的亲和力结合人il-2r。

194、实施方案163.一种药物组合物，其包含根据实施方案1-154中任一项所述的多肽或根据实施方案144-162中任一项所述的复合物和药学上可接受的载体。

195、实施方案164.一种分离的核酸，其编码根据实施方案1-143中任一项所述的多肽或根据实施方案144-162中任一项所述的复合物。

196、实施方案165.一种表达载体，其包含根据实施方案164所述的核酸。

197、实施方案166.一种分离的宿主细胞，其包含根据实施方案164所述的核酸或根据实施方案165所述的表达载体。

198、实施方案167.一种分离的宿主细胞，其表达根据实施方案1-143中任一项所述的多肽或根据实施方案144-162中任一项所述的复合物。

199、实施方案168.一种产生根据实施方案1-143中任一项所述的多肽或根据实施方案144-162中任一项所述的复合物的方法，其包括在适合表达所述多肽或复合物的条件下孵育根据实施方案166或实施方案167所述的宿主细胞。

200、实施方案169.根据实施方案168所述的方法，其还包括分离所述多肽或复合物。

201、实施方案170.一种增加cd4+和/或cd8+t细胞增殖的方法，其包括使t细胞与根据实施方案1-154中任一项所述的多肽或根据实施方案144-162中任一项所述的复合物接触。

202、实施方案171.根据实施方案170所述的方法，其中所述cd4+和/或cd8+t细胞在体外。

203、实施方案172.根据实施方案170所述的方法，其中所述cd4+和/或cd8+t细胞在体内。

204、实施方案173.根据实施方案170-172中任一项所述的方法，其中所述增加为至少1.5倍、至少2倍、至少3倍或至少5倍。

205、实施方案174.一种增加nk细胞增殖的方法，其包括使nk细胞与根据实施方案1-143中任一项所述的多肽或根据实施方案144-162中任一项所述的复合物接触。

206、实施方案175.根据实施方案174所述的方法，其中所述增加为至少1.5倍、至少2倍、至少3倍或至少5倍。

207、实施方案176.一种治疗癌症的方法，其包括向患有癌症的受试者施用药学有效量的根据实施方案1-143中任一项所述的多肽或根据实施方案144-162中任一项所述的复合物或根据实施方案163所述的药物组合物。

208、实施方案177.根据实施方案176所述的方法，其中所述癌症选自基底细胞癌；胆道癌；膀胱癌；骨癌；脑和中枢神经系统癌症；乳腺癌；腹膜癌；宫颈癌；绒毛膜癌；结直肠癌；结缔组织癌；消化系统癌症；子宫内膜癌；食道癌；眼癌；头颈癌；胃癌；胃肠癌；胶质母细胞瘤；肝癌；肝肿瘤；上皮内瘤；肾脏癌或肾癌；喉癌；肝脏癌症；肺癌；小细胞肺癌；非小细胞肺癌；肺腺癌；肺鳞癌；黑色素瘤；骨髓瘤；神经母细胞瘤；口腔癌；卵巢癌；胰腺癌；前列腺癌；视网膜母细胞瘤；横纹肌肉瘤；直肠癌；呼吸系统癌症；唾液腺癌；肉瘤；皮肤癌；鳞状细胞癌；胃癌；睾丸癌；甲状腺癌；子宫或子宫内膜癌；泌尿系统癌症；外阴癌；淋巴瘤；霍奇金淋巴瘤；非霍奇金淋巴瘤；b细胞淋巴瘤；低分级/滤泡性非霍奇金淋巴瘤(nhl)；小淋巴细胞(sl)nhl；中分级/滤泡性nhl；中分级弥漫性nhl；高分级免疫母细胞nhl；高分级淋巴母细胞nhl；高分级小非裂解细胞nhl；大肿块nhl；套细胞淋巴瘤；艾滋病相关淋巴瘤；华氏巨球蛋白血症；慢性淋巴细胞白血病(cll)；急性成淋巴细胞性白血病(all)；毛细胞白血病；和慢性成髓细胞性白血病。

209、实施方案178.根据实施方案176或177所述的方法，其还包括施用另外的治疗剂。

210、实施方案179.根据实施方案178所述的方法，其中所述另外的治疗剂是抗癌剂。

211、实施方案180.根据实施方案179所述的方法，其中所述抗癌剂选自化疗剂、抗癌生物制剂、放射疗法、car-t疗法和溶瘤病毒。

212、实施方案181.根据实施方案179或实施方案180所述的方法，其中所述另外的治疗剂是抗癌生物制剂。

213、实施方案182.根据实施方案181所述的方法，其中所述抗癌生物制剂是抑制pd-1和/或pd-l1的药剂。

214、实施方案183.根据实施方案181所述的方法，其中所述抗癌生物制剂是抑制vista、gpnmb、b7h3、b7h4、hhla2、ctla4或tigit的药剂。

215、实施方案184.根据实施方案179-183中任一项所述的方法，其中所述抗癌剂是抗体。

216、实施方案185.根据实施方案181所述的方法，其中所述抗癌生物制剂是细胞因子。

217、实施方案186.根据实施方案179所述的方法，其中所述抗癌剂是car-t疗法。

218、实施方案187.根据实施方案179所述的方法，其中所述抗癌剂是溶瘤病毒。

219、实施方案188.根据实施方案176-187中任一项所述的方法，其还包括肿瘤切除术和/或放射疗法。