用于抑制HSD17B13表达的RNAI构建体及其使用方法与流程

本发明涉及用于调节17β-羟基类固醇脱氢酶13型(hsd17b13)的肝脏表达的组合物和方法，特别是，本发明涉及用于经由rna干扰降低hsd17b13表达的基于核酸的治疗剂，以及使用此类基于核酸的治疗剂来治疗或预防肝病，例如非酒精性脂肪性肝病(nafld)的方法。

背景技术：

1、非酒精性脂肪性肝病(nafld)构成一系列肝脏病变，为世界上最常见的慢性肝病，其患病率在过去20年中翻倍，且如今据估计影响了约20％世界人口(sattar等人(2014)bmj[英国医学杂志]349:g4596；loomba和sanyal(2013)nature reviews gastroenterology&hepatology[自然评论，胃肠病学和肝病学]10(11):686-690；kim和kim(2017)clingastroenterol hepatol[临床胃肠病学和肝病学]15(4):474-485；petta等人(2016)digliver dis[消化病和肝病]48(3):333-342)。nafld开始于肝脏中的甘油三酯积累，且定义为个体中超过5％肝细胞中存在细胞质脂滴，该个体1)无明显饮酒史且2)其中其他类型肝病的诊断已被排除在外(zhu等人(2016)world jgastroenterol[世界胃肠病学杂志]22(36):8226-33；rinella(2015)jama[美国医学会杂志]313(22):2263-73；yki-jarvinen(2016)diabetologia[糖尿病学]59(6):1104-11)。在一些个体中，肝脏中异位脂肪的积累(称为脂肪变性)引发炎症和肝细胞损伤，导致更晚期疾病，称为非酒精性脂肪性肝炎(nash)(rinella,同上)。截至2015年，预计有7500万至1亿美国人患有nafld；nash约占nafld诊断的10％-30％(rinella,同上；younossi等人(2016)hepatology[肝脏学]64(5):1577-1586)。

2、17β-羟基类固醇脱氢酶13型(hsd17b13)，也称为17β-hsd 13型，是17β-羟基类固醇脱氢酶(hsd17b)家族的成员，所述家族包括催化17-酮-和17-羟基类固醇之间转化的酶家族(su等人(2019)molecular and cellular endocrinology[分子和细胞内分泌学]；489:119-125)。hsd17b13最初命名为scdr9，在2007年首次从人肝脏cdna文库中克隆(liu等人(2007)acta biochim[生物化学学报]54:213-218)。在2008年，horiguchi将hsd17b13鉴定为一种新的ld相关蛋白，其表达主要局限于肝脏(horiguchhi等人(2008)biochembiophys res commun[生物化学与生物物理研究通讯]370:235-238)。hsd17b13的肝脏过表达促进肝脏中的脂质积累。hsd17b13表达在患有非酒精性脂肪性肝病(nafld)的患者和小鼠中显著上调(su等人(2014)pnas 111:11437-11442)。因此，靶向hsd17b13的新疗法代表了用来降低hsd17b13水平和治疗肝病(例如非酒精性脂肪性肝病)的新方法。

技术实现思路

1、本发明部分基于靶向hsd17b13 mrna并且降低肝脏细胞中hsd17b13表达的rnai构建体的设计和产生。hsd17b13表达的序列特异性抑制可用于治疗或预防与hsd17b13表达相关的病症，例如肝脏相关疾病，例如像单纯性脂肪肝(脂肪变性)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、肝硬化(肝脏的不可逆的、晚期瘢痕化)、或hsd17b13相关的肥胖症。因此，在一个实施例中，本发明提供了包含有义链和反义链的rnai构建体，其中该反义链包含具有与hsd17b13 mrna序列互补的序列的区域。在某些实施例中，反义链包含具有来自表1或表2中列出的反义序列的至少15个连续核苷酸的区域。

2、在一些实施例中，本文所述的rnai构建体的有义链包含与反义链的序列充分互补以形成长度为约15至约30个碱基对的双链体区的序列。在这些和其他实施例中，有义链和反义链的长度各自为约15至约30个核苷酸。在一些实施例中，rnai构建体包含至少一个钝端。在其他实施例中，rnai构建体包含至少一个核苷酸突出端。此类核苷酸突出端可包含至少1至6个未配对核苷酸，且可位于有义链3'端、反义链3'端、或有义链和反义链两者的3'端。在某些实施例中，rnai构建体在有义链3'端和反义链3'端处包含两个未配对核苷酸的突出端。在其他实施例中，rnai构建体包含在反义链3'端处的两个未配对核苷酸突出端和有义链3'端/反义链5'端的钝端。

3、本发明的rnai构建体可包含一种或多种经修饰的核苷酸，包括对核糖环、核碱基或磷酸二酯主链具有经修饰的核苷酸。在一些实施例中，rnai构建体包含一种或多种经2'-修饰的核苷酸。此类经2'-修饰的核苷酸可以包括经2'-氟修饰的核苷酸、经2'-o-甲基修饰的核苷酸、经2'-脱氧修饰的核苷酸、经2'-o-甲氧基乙基修饰的核苷酸、经2'-o-烯丙基修饰的核苷酸、双环核酸(bna)、二醇核酸(gna)、反向碱基(例如反向腺苷)或其组合。在一个特定实施例中，rnai构建体包含一个或多个经2'-氟修饰的核苷酸、经2'-o-甲基修饰的核苷酸或其组合。在一些实施例中，rnai构建体的有义链和反义链中的所有核苷酸均为经修饰的核苷酸。

4、在一些实施例中，rnai构建体包含至少一个主链修饰，例如经修饰的核苷酸间或核苷间键。在某些实施例中，本文所述的rnai构建体包含至少一个硫代磷酸酯核苷酸间键。在特定实施例中，硫代磷酸酯核苷酸间键可位于有义链和/或反义链的3'或5'端。

5、在一些实施例中，本发明的rnai构建体的反义链和/或有义链可包含来自表1或2中列出的反义和有义序列的序列或由其组成。在某些实施例中，rnai构建体可为表1至2中任一个中列出的任一种双链体化合物。

技术特征：

1.一种包含有义链和反义链的rnai构建体，其中该反义链包含具有与在表1或表2中所列出的反义序列差异不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸的区域，并且其中该rnai构建体抑制17β-羟基类固醇脱氢酶13型(hsd17b13)的表达。

2.如权利要求1所述的rnai构建体，其中该反义链包含与hsd17b13mrna序列互补的区域。

3.如上述权利要求中任一项所述的rnai构建体，其中该有义链包含具有与在表1或表2中所列出的反义序列差异不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸的区域。

4.如上述权利要求中任一项所述的rnai构建体，其中该有义链包含与该反义链的序列充分地互补以形成长度为约15至约30个碱基对的双链体区的序列。

5.如权利要求4所述的rnai构建体，其中该双链体区的长度为约17至约24个碱基对。

6.如权利要求4所述的rnai构建体，其中该双链体区的长度为约19至约21个碱基对。

7.如权利要求6所述的rnai构建体，其中该双链体区的长度为19个碱基对。

8.如权利要求6所述的rnai构建体，其中该双链体区的长度为20个碱基对。

9.如权利要求6所述的rnai构建体，其中该双链体区的长度为21个碱基对。

10.如权利要求4至9中任一项所述的rnai构建体，其中该有义链和该反义链的长度各自为约15至约30个核苷酸。

11.如权利要求10所述的rnai构建体，其中该有义链和该反义链的长度各自为约19至约27个核苷酸。

12.如权利要求10所述的rnai构建体，其中该有义链和该反义链的长度各自为约21至约25个核苷酸。

13.如权利要求10所述的rnai构建体，其中该有义链和该反义链的长度各自为约21至约23个核苷酸。

14.如权利要求1至13中任一项所述的rnai构建体，其中该rnai构建体包含至少一个钝端。

15.如权利要求1至13中任一项所述的rnai构建体，其中该rnai构建体包含至少一个具有1至4个未配对核苷酸的核苷酸突出端。

16.如权利要求15所述的rnai构建体，其中该核苷酸突出端具有2个未配对的核苷酸。

17.如权利要求15或16所述的rnai构建体，其中该rnai构建体在该有义链的3'端、该反义链的3'端、或者该有义链和该反义链两者的3'端包含核苷酸突出端。

18.如权利要求15至17中任一项所述的rnai构建体，其中该核苷酸突出端包含5'-uu-3'二核苷酸或5'-dtdt-3'二核苷酸。

19.如权利要求1至18中任一项所述的rnai构建体，其中该rnai构建体包含至少一个经修饰的核苷酸。

20.如权利要求19所述的rnai构建体，其中该经修饰的核苷酸是2'-修饰的核苷酸。

21.如权利要求19所述的rnai构建体，其中该经修饰的核苷酸是经2'-氟修饰的核苷酸、经2'-o-甲基修饰的核苷酸、经2'-o-甲氧基乙基修饰的核苷酸、经2'-o-烯丙基修饰的核苷酸、双环核酸(bna)、二醇核酸、反向碱基、或其组合。

22.如权利要求21所述的rnai构建体，其中该经修饰的核苷酸是经2'-o-甲基修饰的核苷酸、经2'-o-甲氧基乙基修饰的核苷酸、经2'-氟修饰的核苷酸、或其组合。

23.如权利要求19所述的rnai构建体，其中该有义链和该反义链中的所有核苷酸均为经修饰的核苷酸。

24.如权利要求23所述的rnai构建体，其中这些经修饰的核苷酸是经2'-o-甲基修饰的核苷酸、经2'-氟修饰的核苷酸、或其组合。

25.如权利要求1至24中任一项所述的rnai构建体，其中该rnai构建体包含至少一个硫代磷酸酯核苷酸间键。

26.如权利要求25所述的rnai构建体，其中该rnai构建体在该反义链的3'端处包含两个连续硫代磷酸酯核苷酸间键。

27.如权利要求25所述的rnai构建体，其中该rnai构建体在该反义链的3'端和5'端处包含两个连续硫代磷酸酯核苷酸间键，且在该有义链的5'端处包含两个连续硫代磷酸酯核苷酸间键。

28.如权利要求1至27中任一项所述的rnai构建体，其中该反义链包含选自表1或表2中列出的反义序列的序列。

29.如权利要求28所述的rnai构建体，其中该有义链包含选自在表1或表2中所列出的有义序列的序列。

30.如权利要求1至29中任一项所述的rnai构建体，其中该rnai构建体为表1至2中任一个列出的双链体化合物中的任一个。

31.如权利要求1至30中任一项所述的rnai构建体，其中与已经与对照rnai构建体一起温育的肝脏细胞中的hsd17b13表达水平相比，在与该rnai构建体一起温育之后，该rnai构建体降低肝脏细胞中的hsd17b13表达水平。

32.如权利要求25所述的rnai构建体，其中该肝脏细胞是原代肝细胞。

33.如权利要求1至32中任一项所述的rnai构建体，其中该rnai构建体以小于约40nm的ic50抑制hsd17b13在原代肝细胞中的表达。

34.如权利要求1至32中任一项所述的rnai构建体，其中该rnai构建体以小于约30nm的ic50抑制hsd17b13在原代肝细胞中的表达。

35.一种药物组合物，其包含如权利要求1至34中任一项所述的rnai构建体和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。

36.一种用于降低有需要的患者中的hsd17b13表达的方法，该方法包括向该患者施用如权利要求1至35中任一项所述的rnai构建体。

37.如权利要求36所述的方法，其中与hsd17b13在不接受该rnai构建体的患者中的表达水平相比，在施用该rnai构建体后的患者中该hsd17b13在肝细胞中的表达水平降低。

技术总结
本发明涉及用于降低HSD17B13基因的表达的RNAi构建体。还描述了使用此类RNAi构建体治疗或预防肝病、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的方法。

技术研发人员：D·C·H·林,M·奥尔曼,J·K·默里,B·J·赫伯里希,A·达斯,P·柯林斯,O·霍曼
受保护的技术使用者：美国安进公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13