治疗阿尔茨海默病之多表位疫苗的制作方法

本发明涉及免疫学及医学之，且尤其涉及阿尔茨海默病(alzheimer’sdisease)及蛋白错误折叠之其他疾病之治疗。

背景技术：

1、阿尔茨海默病(ad)为引起老年痴呆症之进行性疾病。一般而言，该疾病分为两种类别：晚发型疾病，其在老年期(65岁以上)发生；及早发型疾病，其在老年期之前，即，在35岁与60岁之间已发展至某种程度。在两种类型之疾病中，病理是相同的，但在较年轻时开始之情况下倾向于产生更严重及更广泛之异常。该疾病之特征在于脑部中之至少两种类型的病变，即神经原纤维缠结及老化斑块。老化斑块(即，淀粉样蛋白斑块)为在中心交叉有细胞外淀粉样蛋白沉积物之长达150μm的混乱神经纤维网之区域，其可由脑部组织切片之显微镜分析发现。中枢神经系统内之淀粉样蛋白斑块之积累亦与唐氏综合征(down’ssyndrome)及其他认知病症(大脑淀粉样血管病(caa))及眼部疾病(年龄相关之黄斑部变性)相关。

2、斑块之主要成分是称为aβ或β-淀粉样蛋白肽之肽。aβ肽为称为淀粉样前体蛋白(app)之大型跨膜糖蛋白之38至43个氨基酸的4-kda内部片段。作为由不同分泌酶进行之app之蛋白水解处理之结果，aβ主要以短形式(长度为40个氨基酸)及长形式(长度范围为42至43个氨基酸)存在。app之疏水性跨膜域之一部分存在于aβ之羧基端，且可解释aβ聚集成斑块之能力(尤其在长形式之情况下)。脑部中淀粉样蛋白斑块之积累最终引起神经元细胞死亡。与此类型之神经退化相关之认知及身体症状表征阿尔茨海默病。

3、α-突触核蛋白为存在于神经元及其他细胞中之蛋白，其为表征若干种神经变性病症之病理学主要组分，共同被称为突触核蛋白病之该等病症包括帕金森病(parkinson’sdisease)、路易氏体痴呆症(dementia with lewy body)及多系统萎缩症。对α-突触核蛋白之正常生理功能之了解有限，但有证据表明蛋白之可溶性形式可与其他蛋白及某些细胞内膜相互作用。在突触核蛋白病中，α-突触核蛋白似乎异常聚集于细胞内，此为疾病之病理。越来越多证据表明，某些聚集形式之α-突触核蛋白可自神经元传输至神经元，引起使得神经元功能异常及损失之病理扩散。在一些神经变性疾病中，α-突触核蛋白(snca)之错误折叠及聚集通常可伴随有β-淀粉样蛋白沉积，且α-突触核蛋白及aβ聚集物共存于若干神经变性病症中，包括阿尔茨海默病及帕金森病。

4、因此，需要用于预防或治疗阿尔茨海默病之新颖疗法及试剂，尤其能够引起针对患者中存在之aβ及α-突触核蛋白之免疫应答的疗法及试剂。

技术实现思路

1、在一些实施例中，本发明涉及包括连接至第二肽之第一肽的多肽，该第一肽包含来自seq id no:01之残基1至10的3至10个氨基酸，该第二肽包括来自seq id no:02之残基81至140的3至10个氨基酸。举例而言，第二肽可来自α-突触核蛋白之c端(seq id no:02之残基111至140)。第一肽可位于第二肽之n端，或第一肽可位于第二肽之c端。此外，第一肽可包括seq id no:3至38或121至176中之一者的氨基酸序列，及第二肽可包括seq id no:39至109中之一者的氨基酸序列。举例而言，第一多肽可为daefrhd(seq id no:06)、daefr(seq id no:08)或efrhd(seq id no:21)，及第二多肽可为5至10个氨基酸，例如pdneaye(seq id no:55)或dpdneaye(seq id no:48)。

2、在其他实施例中，第一肽及第二肽可通过可裂解接头连接，该可裂解接头可为氨基酸序列。可裂解肽接头(若存在)之长度可为1至10个氨基酸。在一些实施例中，接头包含约1至10个氨基酸、约1至9个氨基酸、约1至8个氨基酸、约1至7个氨基酸、约1至6个氨基酸、约1至5个氨基酸、约1至4个氨基酸、约1至3个氨基酸、约2个氨基酸或一个(1个)氨基酸。在一些实施例中，可裂解肽接头为1个氨基酸、2个氨基酸、3个氨基酸、4个氨基酸、5个氨基酸、6个氨基酸、7个氨基酸、8个氨基酸、9个氨基酸或10个氨基酸。举例而言，接头可为精氨酸-精氨酸(arg-arg)、精氨酸-缬氨酸-精氨酸-精氨酸(arg-val-arg-arg(seq id no:113))、缬氨酸-瓜氨酸(val-cit)、缬氨酸-精氨酸(val-arg)、缬氨酸-赖氨酸(val-lys)、缬氨酸-丙氨酸(val-ala)、苯丙氨酸-赖氨酸(phe-lys)、甘氨酸-丙氨酸-甘氨酸-丙氨酸(gly-ala-gly-ala；seq id no:114)、ala-gly-ala-gly(seq id no:115)或lys-gly-lys-gly(seq idno:116)。在特定实施例中，多肽可为daefrhdrrpdneayeggc(seq id no:110)或daefrhdrrdpdneayeggc(seq id no:111)。

3、在其他实施例中，多肽可包括于多肽之c端部分或多肽之n端部分连接至载剂的接头。接头(若存在)之长度可为1至10个氨基酸。在一些实施例中，接头包含约1至10个氨基酸、约1至9个氨基酸、约1至8个氨基酸、约1至7个氨基酸、约1至6个氨基酸、约1至5个氨基酸、约1至4个氨基酸、约1至3个氨基酸、约2个氨基酸或一个(1个)氨基酸。在一些实施例中，接头为1个氨基酸、2个氨基酸、3个氨基酸、4个氨基酸、5个氨基酸、6个氨基酸、7个氨基酸、8个氨基酸、9个氨基酸或10个氨基酸。举例而言，接头可包括gg、ggg、aa、aaa、kk、kkk、ss及sss之氨基酸序列。此外，若存在于c端，则连接至载剂之接头可包括c端半胱氨酸(c)。或者，若存在于n端，则连接至载剂之接头可包括n端半胱氨酸(c)。举例而言，多肽可包括daefrhdrrx1pdneayexxc(seq id no:112)之氨基酸序列，其中x1为任选的，且若存在，则x1为d，且其中xx及c独立地为任选的，且若存在，则xx可为gg、aa、kk、ss、gaga(seq id no:114)、agag(seq id no:115)或kgkg(seq id no:116)。

4、在其他实施例中，本发明涉及一种包括本发明的多肽的免疫疗法组合物，其中该多肽可连接至载剂。载剂可包括血清白蛋白、免疫球蛋白分子、甲状腺球蛋白、卵白蛋白、破伤风类毒素(tt)、白喉类毒素(dt)、白喉毒素的经遗传修饰的交叉反应物质(crm)、crm197、脑膜炎球菌外膜蛋白复合物(ompc)及流感嗜血杆菌蛋白d(h.influenzae protein d；hid)、repa(铜绿假单胞菌外毒素a(pseudomonas aeruginosa exotoxin a))、klh(钥孔(keyhole limpet)血蓝蛋白)及鞭毛蛋白。

5、此外，本发明之实施例涉及一种包括本发明的多肽或免疫疗法组合物且包括至少一种佐剂的药物配制剂。佐剂可为氢氧化铝、磷酸铝、硫酸铝、3-脱-o-酰化单磷酰基脂质a(mpl)、qs-21、qs-18、qs-17、qs-7、tql1055、完全弗氏佐剂(complete freund’s adjuvant；cfa)、不完全弗氏佐剂(ifa)、水包油乳液(诸如角鲨烯或花生油)、cpg、聚谷氨酸、聚赖氨酸、addavaxtm、及其组合。此外，配制剂可包括脂质体配制剂、稀释剂或多重抗原呈递系统(map)。map可包括基于lys之树突状架构、辅助型t细胞表位、免疫刺激亲脂性部分、细胞穿透肽、自由基诱导之聚合、自组装纳米粒子(作为抗原呈递平台)及金纳米粒子中之一者或多者。

6、此外，本发明之实施例涉及包括第一肽序列及第二肽序列之免疫疗法组合物，该第一肽序列包含来自seq id no:01之前十个n端残基的3至10个氨基酸残基，及该第二肽序列包含来自seq id no:02之残基81至140的3-8个氨基酸。第一肽可包括seq id no:3至38或121至176中之一者的氨基酸序列，及第二肽可包括seq id no:39-109中之一者的氨基酸序列。第一肽及第二肽中之每一者可包括于多肽之c端部分连接至载剂之接头。接头(若存在)可包括选自以下之氨基酸序列：gg、aa、kk、ss、gaga(seq id no:114)、agag(seq id no:115)及kgkg(seq id no:116)，且可包括c端半胱氨酸(c)。载剂可包括血清白蛋白、免疫球蛋白分子、甲状腺球蛋白、卵白蛋白、破伤风类毒素(tt)、白喉类毒素(dt)、白喉毒素的经遗传修饰的交叉反应物质(crm)、crm197、脑膜炎球菌外膜蛋白复合物(ompc)及流感嗜血杆菌蛋白d(hid)、repa(铜绿假单胞菌外毒素a)、klh(钥孔血蓝蛋白)及鞭毛蛋白。

7、此外，免疫疗法组合物可包括至少一种药学上可接受的稀释剂和/或多重抗原呈递系统(map)。map可包括基于lys之树突状架构、辅助型t细胞表位、免疫刺激亲脂性部分、细胞穿透肽、自由基诱导之聚合、自组装纳米粒子(作为抗原呈递平台)及金纳米粒子中之一者或多者。

8、免疫疗法组合物可包括于药物组合物中，该药物组合物包括免疫疗法组合物及至少一种佐剂，诸如氢氧化铝、磷酸铝、硫酸铝、3-脱-o-酰化单磷酰基脂质a(mpl)、qs-21、tql1055、qs-18、qs-17、qs-7、完全弗氏佐剂(cfa)、不完全弗氏佐剂(ifa)、水包油乳液(诸如角鲨烯或花生油)、cpg、聚谷氨酸、聚赖氨酸、addavaxtm、及其组合。

9、本发明之实施例还涉及编码本发明的多肽及免疫疗法组合物之核酸序列。核酸可包括于包括核酸及至少一种佐剂之核酸免疫疗法组合物中。

10、此外，本发明之实施例涉及治疗或实现防治受试者之阿尔茨海默病的方法，及在患有阿尔茨海默病或具有发展阿尔茨海默病之风险之受试者中抑制或减少aβ及α-突触核蛋白中之至少一者之聚集的方法。方法包括向受试者施用本发明之免疫疗法组合物、核酸免疫疗法组合物或药物配制剂。

11、本发明的方法可包括至少两次、至少三次、至少四次、至少五次或至少六次重复施用，且可包括以约21至约28天之间隔重复施用。

12、此外，本发明的方法涉及在动物中诱导免疫应答。方法包括以有效产生免疫应答之方案向动物施用本发明的多肽、免疫疗法组合物、药物配制剂或核酸免疫疗法组合物，该免疫应答包括特异性结合于aβ、α-突触核蛋白或aβ及α-突触核蛋白两者之抗体。免疫应答可包括特异性结合于aβ之n端区和/或α-突触核蛋白之c端区的抗体。

13、在其他实施例中，本发明涉及一种免疫接种试剂盒，其包括本发明之免疫疗法组合物且可包括佐剂，其中免疫疗法组合物可在第一容器中且佐剂可在第二容器中。

14、此外，本发明涉及一种试剂盒，其包括本发明之核酸免疫疗法组合物且可包括佐剂。核酸可在第一容器中且佐剂可在第二容器中。